本发明涉及医药领域，具体涉及一种衢枳壳中治疗呼吸炎症成分的提取方法及其应用。
背景技术：
常山胡柚主产于浙江衢州地区，为我国特有的柑橘品种，是芸香科柑橘属植物柚与甜橙的杂交品种。2016年8月，常山胡柚的干燥未成熟果实以“衢枳壳”的名义被纳入2015版《浙江省中药炮制规范》，正式成为一味中药，其主要成分为挥发性成分和黄酮类化合物，主要的功效为理气宽中、行滞消胀、镇咳化痰、清热解毒、促进胃肠功能、抗氧化、降血脂、降血压等功效，目前现有技术中对于衢枳壳的提取物的用途进行了很多研究。
cn108403817a涉及衢枳壳、衢枳壳提取物以及含有衢枳壳或衢枳壳提取物的药物组合物在制备用于保护胰岛细胞、恢复胰岛细胞功能、促进胰岛素分泌或提高胰岛细胞数量的药物中的应用，其提取物为衢枳壳的醇提取物或衢枳壳的水提取物，提取方法如下：(1)将衢枳壳粉碎，并将粉碎产物用醇溶剂进行回流提取，得到提取液；(2)将所述提取液固液分离，并回收醇溶剂，得到浓缩液；(3)将浓缩液干燥，得到所述衢枳壳提取物。
cn107714805a一种衢枳壳提取物在制备中药制剂或功能性食品中的应用，所述中药制剂或功能性食品用于预防和治疗呼吸道炎症。所述衢枳壳提取物的制备方法如下：1)取衢枳壳粉碎颗粒，加去离子水浸泡，浸泡液蒸馏收集馏分备用；2)将药渣加热回流两次，两次均过滤，并将两次的滤液合并，减压浓缩，得到浓缩液；3)将浓缩液与馏分合并，即得衢枳壳提取物，其主要成分为生物碱类和黄酮类成分，通过该方法得到的提取物成分复杂，无法获知何种成分为预防和治疗呼吸道炎症的有效成分。
技术实现要素：
本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种衢枳壳中治疗呼吸炎症成分的提取方法及其应用，通过该提取方法得到的提取物含量高，抗炎效果好。
为解决上述问题，本发明所采取的技术方案是：
一种衢枳壳中治疗呼吸炎症成分的提取方法，具体包括如下步骤：
(1)衢枳壳处理：将衢枳壳切片，加入到粉碎机中进行粉碎，加入乙酸乙酯，搅拌过滤，-5~-15℃条件下，进行冷冻干燥，然后在40~60℃条件下，进行超声破壁处理；
(2)粉末浸润：向步骤(1)得到的粉末中喷洒30~70%的乙醇，浸润充分；
(3)微波辐照：将步骤(2)得到的浸润物进行微波辐照；
(4)负压干燥：将步骤(3)微波处理后的浸润物进行负压干燥，得到干燥粉末；
(5)提取过滤：将步骤(4)得到的干燥粉末用惰性气体输送，8~10倍量的30~70%的乙醇的液体进行高压对向喷洒，混合后的，搅拌20-40min，过滤，得到提取液；
(6)纯化：将步骤(5)得到的提取液经过大孔树脂层析分离，依次进行以下洗脱：先用蒸馏水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，最后用60-80%的乙醇洗脱，收集60-80%的乙醇洗脱液；
(7)减压干燥：对步骤(6)得到的洗脱液进行减压浓缩、干燥，得到提取物。
作为本发明进一步的改进，所述步骤(1)中乙酸乙酯的加入量为衢枳壳重量的4~8倍量。
作为本发明进一步的改进，所述步骤(1)中超声破壁，超声波频率为30~50kh，惰性气体压力为150~200mpa，气体流速为500~700m/s，进料速度为4~6g/s，进料压力为0.4~0.6mpa。
作为本发明进一步的改进，所述步骤(1)的微波辐照参数如下：功率500-800w，温度50-70℃，时间1-2min。
作为本发明进一步的改进，所述步骤(5)中惰性气体输送压力为101kpa，
作为本发明进一步的改进，所述步骤(6)中的大孔树脂为d101或ab-8大孔树脂。
作为本发明进一步的改进，所述步骤(6)中先用蒸馏水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，最后用75%的乙醇洗脱，收集75%的乙醇洗脱液。
作为本发明优选的方案，具体如下：
具体包括如下步骤：
(1)衢枳壳处理：将衢枳壳切片，加入到粉碎机中进行粉碎，加入6倍的乙酸乙酯，搅拌过滤-10℃条件下，对滤渣进行冷冻干燥，然后在50℃条件下，进行超声破壁处理，超声波频率为40kh，惰性气体压力为170mpa，气体流速为600m/s，进料速度为5g/s，进料压力为0.5mpa。
(2)粉末浸润：向步骤(1)得到的粉末中喷洒70%的乙醇，浸润充分；
(3)微波辐照：将步骤(2)得到的浸润物进行微波辐照，微波功率为600w，温度60℃，时间1.5min。
(4)负压干燥：将步骤(3)微波处理后的浸润物进行负压干燥，得到干燥粉末；
(5)提取过滤：将步骤(4)得到的干燥粉末用惰性气体输送，惰性气体输送压力为101kpa，进行粉末喷洒，用9倍量的70%的乙醇的液体进行高压对向喷洒，高压充分碰撞配合，调节粉末和乙醇的喷洒速度，使适配保持喷洒同步，混合后的，搅拌30min，过滤，得到提取液；
(6)纯化：将步骤(5)得到的提取液经过d101大孔树脂层析分离，依次进行以下洗脱：先用蒸馏水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，后用75%的乙醇洗脱，收集75%的乙醇洗脱液。
(7)减压干燥：对步骤(6)得到的洗脱液进行减压浓缩、干燥，得到提取物。
本发明另一方面提供了一种上述方法得到的提取物在制备治疗呼吸炎症的药物中的应用。
进一步的，所述的治疗呼吸炎症为呼吸道炎症。
采用上述技术方案所产生的有益效果在于：
本发明所提供的提取方法，先通过乙醇浸润粉末，经过微波辐射后，减压干燥，将有效成分迁移在粉末之间，然后利用高压喷洒乙醇溶液，在惰性气氛下，使乙醇和粉末高速撞击，促进有效成分的溶解，最后搅拌20-40min，完成萃取全过程，有效降低了粉末和乙醇溶液的接触时间，减少了氧化，富集了治疗呼吸炎症的有效成分柚皮苷和新橙皮苷。
通过本发明所提供的提取方法得到的提取物，可以有效治疗呼吸炎症，安全可靠。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合具体实施例对发明进行清楚、完整的描述。
实施例1
一种衢枳壳中治疗呼吸炎症成分的提取方法，具体包括如下步骤：
(1)衢枳壳处理：将500g衢枳壳切片，加入到粉碎机中进行粉碎，过60目筛，加入6倍的乙酸乙酯，搅拌过滤-10℃条件下，对滤渣进行冷冻干燥，然后在50℃条件下，进行超声破壁处理，超声波频率为40kh，惰性气体压力为170mpa，气体流速为600m/s，进料速度为5g/s，进料压力为0.5mpa，得到的粉末均通过600目筛。
(2)粉末浸润：向步骤(1)得到的粉末中喷洒70%的乙醇，浸润充分；
(3)微波辐照：将步骤(2)得到的浸润物进行微波辐照，微波功率为600w，温度60℃，时间1.5min。
(4)负压干燥：将步骤(3)微波处理后的浸润物进行负压干燥，得到干燥粉末；
(5)提取过滤：将步骤(4)得到的干燥粉末用惰性气体输送，惰性气体输送压力为101kpa，进行粉末喷洒，用9倍量70%的乙醇的液体进行高压对向喷洒，高压充分碰撞配合，混合后的，搅拌30min，过滤，得到提取液；
(6)纯化：将步骤(5)得到的提取液经过d101大孔树脂层析分离，依次进行以下洗脱：先用蒸馏水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，后用75%的乙醇洗脱，收集75%的乙醇洗脱液。
(7)减压干燥：对步骤(6)得到的洗脱液进行减压浓缩、干燥，得到提取物。
实施例2
一种衢枳壳中治疗呼吸炎症成分的提取方法，具体包括如下步骤：
(1)衢枳壳处理：将500g衢枳壳切片，加入到粉碎机中进行粉碎，过60目筛，加入4倍的乙酸乙酯，搅拌过滤-5℃条件下，对滤渣进行冷冻干燥，然后在50℃条件下，进行超声破壁处理，超声波频率为40kh，惰性气体压力为170mpa，气体流速为600m/s，进料速度为5g/s，进料压力为0.5mpa，得到的粉末均通过600目筛。
(2)粉末浸润：向步骤(1)得到的粉末中喷洒60%的乙醇，浸润充分；
(3)微波辐照：将步骤(2)得到的浸润物进行微波辐照，微波功率为800w，温度60℃，时间1min。
(4)负压干燥：将步骤(3)微波处理后的浸润物进行负压干燥，得到干燥粉末；
(5)提取过滤：将步骤(4)得到的干燥粉末用惰性气体输送，惰性气体输送压力为101kpa，进行粉末喷洒，用8倍量的60%的乙醇的液体进行高压对向喷洒，高压充分碰撞配合，混合后的，搅拌40min，过滤，得到提取液；
(6)纯化：将步骤(5)得到的提取液经过d101大孔树脂层析分离，依次进行以下洗脱：先用蒸馏水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，后用80%的乙醇洗脱，收集80%的乙醇洗脱液。
(7)减压干燥：对步骤(6)得到的洗脱液进行减压浓缩、干燥，得到提取物。
实施例3
一种衢枳壳中治疗呼吸炎症成分的提取方法，具体包括如下步骤：
(1)衢枳壳处理：将500g衢枳壳切片，加入到粉碎机中进行粉碎，过60目筛，加入4倍的乙酸乙酯，搅拌过滤-10℃条件下，对滤渣进行冷冻干燥，然后在50℃条件下，进行超声破壁处理，超声波频率为40kh，惰性气体压力为170mpa，气体流速为600m/s，进料速度为5g/s，进料压力为0.5mpa，得到的粉末均通过600目筛。
(2)粉末浸润：向步骤(1)得到的粉末中喷洒80%的乙醇，浸润充分；
(3)微波辐照：将步骤(2)得到的浸润物进行微波辐照，微波功率为500w，温度70℃，时间1.5min。
(4)负压干燥：将步骤(3)微波处理后的浸润物进行负压干燥，得到干燥粉末；
(5)提取过滤：将步骤(4)得到的干燥粉末用惰性气体输送，惰性气体输送压力为101kpa，进行粉末喷洒，用8倍量的80%的乙醇的液体进行高压对向喷洒，高压充分碰撞配合，混合后的，搅拌20min，过滤，得到提取液；
(6)纯化：将步骤(5)得到的提取液经过d101大孔树脂层析分离，依次进行以下洗脱：先用蒸馏水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，后用70%的乙醇洗脱，收集70%的乙醇洗脱液。
(7)减压干燥：对步骤(6)得到的洗脱液进行减压浓缩、干燥，得到提取物。
对比例1
(1)枳壳处理：将500g衢枳壳切片，加入到粉碎机中进行粉碎，过60目筛，加入6倍的乙酸乙酯，搅拌过滤-10℃条件下，对滤渣进行冷冻干燥，然后在50℃条件下，进行超声破壁处理，超声波频率为40kh，惰性气体压力为170mpa，气体流速为600m/s，进料速度为5g/s，进料压力为0.5mpa，得到的粉末均通过600目筛。
(2)提取过滤：向步骤(1)得到的粉末中加入9倍量70%的乙醇的回流提取3h，得到提取液；
(3)纯化：将步骤(5)得到的提取液经过d101大孔树脂层析分离，依次进行以下洗脱：先用蒸馏水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，后用75%的乙醇洗脱，收集75%的乙醇洗脱液。
(4)减压干燥：对步骤(6)得到的洗脱液进行减压浓缩、干燥，得到提取物。
对比例2
一种衢枳壳中治疗呼吸炎症成分的提取方法，具体包括如下步骤：
(1)衢枳壳处理：将500g衢枳壳切片，加入到粉碎机中进行粉碎，加入6倍的乙酸乙酯，搅拌过滤-10℃条件下，对滤渣进行冷冻干燥，然后在50℃条件下，进行超声破壁处理，超声波频率为40kh，惰性气体压力为170mpa，气体流速为600m/s，进料速度为5g/s，进料压力为0.5mpa，得到的粉末均通过600目筛。
(2)提取过滤：将步骤(1)得到的粉末用惰性气体输送，惰性气体输送压力为101kpa，进行粉末喷洒，用9倍量70%的乙醇的液体进行高压对向喷洒，高压充分碰撞配合，混合后的，搅拌30min，过滤，得到提取液；
(6)纯化：将步骤(5)得到的提取液经过d101大孔树脂层析分离，依次进行以下洗脱：先用蒸馏水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，后用75%的乙醇洗脱，收集75%的乙醇洗脱液。
(7)减压干燥：对步骤(6)得到的洗脱液进行减压浓缩、干燥，得到提取物。
对比例3
一种衢枳壳中治疗呼吸炎症成分的提取方法，具体包括如下步骤：
(1)衢枳壳处理：将500g衢枳壳切片，加入到粉碎机中进行粉碎，加入6倍的乙酸乙酯，搅拌过滤-10℃条件下，对滤渣进行冷冻干燥，然后在50℃条件下，进行超声破壁处理，超声波频率为40kh，惰性气体压力为170mpa，气体流速为600m/s，进料速度为5g/s，进料压力为0.5mpa，得到的粉末均通过600目筛。
(2)粉末浸润：向步骤(1)得到的粉末中喷洒70%的乙醇，浸润充分；
(3)微波辐照：将步骤(2)得到的浸润物进行微波辐照，微波功率为600w，温度60℃，时间1.5min。
(4)负压干燥：将步骤(3)微波处理后的浸润物进行负压干燥，得到干燥粉末；
(5)提取过滤：将步骤(4)得到的干燥粉末用9倍量70%的乙醇的浸泡，搅拌30min，过滤，得到提取液；
(6)纯化：将步骤(5)得到的提取液经过d101大孔树脂层析分离，依次进行以下洗脱：先用蒸馏水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，后用75%的乙醇洗脱，收集75%的乙醇洗脱液。
(7)减压干燥：对步骤(6)得到的洗脱液进行减压浓缩、干燥，得到提取物。
对比例4
一种衢枳壳中治疗呼吸炎症成分的提取方法，具体包括如下步骤：
(1)衢枳壳处理：将500g衢枳壳切片，加入到粉碎机中进行粉碎，过60目筛，然后在50℃条件下，进行超声破壁处理，超声波频率为40kh，惰性气体压力为170mpa，气体流速为600m/s，进料速度为5g/s，进料压力为0.5mpa，得到的粉末均通过600目筛。
(2)粉末浸润：向步骤(1)得到的粉末中喷洒70%的乙醇，浸润充分；
(3)微波辐照：将步骤(2)得到的浸润物进行微波辐照，微波功率为600w，温度60℃，时间1.5min。
(4)负压干燥：将步骤(3)微波处理后的浸润物进行负压干燥，得到干燥粉末；
(5)提取过滤：将步骤(4)得到的干燥粉末用惰性气体输送，惰性气体输送压力为101kpa，进行粉末喷洒，用9倍量70%的乙醇的液体进行高压对向喷洒，高压充分碰撞配合，混合后的，搅拌30min，过滤，得到提取液；
(6)纯化：将步骤(5)得到的提取液经过d101大孔树脂层析分离，依次进行以下洗脱：先用蒸馏水洗脱，再用20%的乙醇洗脱，后用75%的乙醇洗脱，收集75%的乙醇洗脱液。
(7)减压干燥：对步骤(6)得到的洗脱液进行减压浓缩、干燥，得到提取物。
效果例
对实施例1-3和对比例1-4得到的提取物进行干燥恒重后，称量，记录提取物质量。以色谱条件：agilentzorbaxsbc18柱(250mm×4.6mm,5μm)；流动相为乙腈-0.02%磷酸水溶液(20︰80),流速为1.0ml·min-1,进样体积25μl,检测波长280nm,柱温35℃，外标法测定橘皮苷和新橙皮苷的含量，具体见表1。
表1提取物的成分检测和质量测定
应用例本发明对支气管炎症抑制作用
实验动物：60只质量18～22g的健康昆明小鼠，随机分成三组各20只，分别为阴性对照组、试验组和阳性对照组。
干涉方案：
阴性对照组：分别在上午、下午每天两次给予生理盐水。
试验组：分别在上午、下午每天两次给予1g/kg的实施例1得到的提取物。
阳性对照组：分别在上午、下午每天两次rolipram10mg/kg。
试验方法：腹腔注射雌性小鼠10μg卵清蛋白与氢氧化铝1：1混合液0.2ml进行敏化，给药时间分别为第0、7及14日。在敏化8天及10天后，将1.0％卵蛋白制作成气雾剂，喷射50min，诱发气道炎症。从初次敏化后21天后起到23天为止，经口给予干涉，最后一次炎症诱发24小时后，利用1.5ml磷酸缓冲溶液(ph7.2)，洗涤支气管肺泡后，收集支气管肺泡洗涤液，用血液分析仪检测洗涤液中的白血球细胞数量。以阴性对照组(生理盐水)的白血球细胞数为准，计算支气管炎症抑制率(％)。采用rolipram作为对照药，结果见表2
表2对支气管炎症抑制率的影响(
由此可见，本申请所提供的提取物具有显著的气道炎症抑制活性。
临床例
1一般资料：
选2018年1月-2018年10月河南省中医院的门诊呼吸道炎症患者64例，随机分成治疗组和对照组各32例。治疗组：男14例，女18例，平均病程24.6±5.7h，平均年龄32.04±6.48岁。对照组：男16例，女16例，平均病程25.9±3.9h，平均年龄33.51±5.65岁。两组病例在病程、年龄、呼吸、脉搏体温、身高等差异无统计学意义（p＞0.05）。
2治疗方法
治疗组：本发明实施例1提供的提取物，一天两次，每次1g。
对照组：头孢克肟，按说明书服用。
3观察指标和方法
3.1疾病临床疗效评价标准
显效：治疗5d内，咳嗽、发热和咽痛等临床表现消失；
有效：治疗5d后，咳嗽、咽痛及流涕现象均改善，发热好转；
无效：治疗5d后，咳嗽、咽痛及流涕现象无改善，发热现象存在。
3.2炎症因子检测
患者空腹于治疗前和治疗后分别取外周血5ml，分离血清，采用双抗体夹心abc-elisa法测定il-2(白细胞介素-2)、il-6(白细胞介素-6)、il-8(白细胞介素-8)、tnf-α(肿瘤坏死因子-α)含量。抗人il-2、il-6、il-8、tnf-α单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的il-2、il-6、il-8、tnf-α与单抗结合，分别加入生物素标记的抗人il-2、il-6、il-8、tnf-α抗体，形成免疫复合物连接在板上，过氧化物酶标记的亲和素与生物素结合，加入酶底物tmb，出现颜色，加tmb终止液，颜色改变。在不同波长处测定od值，通过绘制标准曲线求出标本中的物质浓度。
4统计分析
采用spss18.0统计学软件进行结果分析，计量资料用“
5结果分析
5.1两组患者临床疗效比较
治疗5天后，治疗组患者总有效率为96.9%，显著高于对照组84.4%，有统计学意义，具体见表3。
表3两组患者的疗效比较
5.2两组治疗前后炎症反应指标比较
对于治疗前后的炎症反应指标进行统计，具体见表4。
表4两组治疗前后炎症反应指标比较（
有结果可以看出，治疗组的il-2、il-6、il-8、tnf-α的治疗前后相比有差异，对照组和治疗组治疗后的il-2、il-6、il-8、tnf-α指标也存在差异。证明本申请实施例1得到的提取物可以明显降低患者血清炎症因子il-2、il-6、il-8、tnf-α的水平。
最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。