一种治疗肾间质纤维化的中药复方制剂及其制备方法与流程

本发明涉及一种治疗肾间质纤维化的中药复方制剂及其制备方法。
背景技术：
：肾间质纤维化是一种病理生理改变，是肾脏的功能由健康到损伤，再到损坏，直至功能丧失的渐进过程。肾脏由于受到创伤、感染、炎症、血循环障碍，以及免疫反应等多种致病因素刺激，其固有细胞受损，发展到后期出现大量胶原沉积和积聚，造成肾实质逐渐硬化，形成瘢痕，直至肾脏完全丧失脏器功能。肾脏内固有细胞纤维化、硬化的过程也就是肾脏纤维化的过程，其病理特点包括细胞外基质增多、肾小管扩张或萎缩、细胞凋亡等。肾间质纤维化的范围和程度与肾功能减退具有高度相关性，肾间质纤维化的程度对慢性肾脏病患者的预后有决定性影响。目前现代医学的治疗只能控制肾间质纤维化的危险因素，还不能从根本上逆转肾纤维化。临床实践表明，中医药在改善患者临床症状、改善贫血、保护残余肾功能、推迟必须透析和肾移植时间等方面有重要优势。技术实现要素：本发明的目的在于提供一种药物组分少、疗效显著、副作用小的治疗肾间质纤维化中药复方制剂。为实现上述目的，本发明提供一种治疗肾间质纤维化的中药复方制剂，由以下重量份的原料药组成：黄芪30份，杜仲20份，大黄10份，红花10份。本发明还提供上述中药复方制剂的制备方法，包括如下步骤：1）醇提：将30重量份黄芪、20重量份杜仲、10重量份大黄、10重量份红花投入490重量份乙醇中进行提取并过滤，提取3次，每次1小时，提取温度为80℃，合并各次醇提的提取液，浓缩得到药材醇提物；过滤所得药渣挥尽乙醇，待水提用；2）水提：药渣按料液比1:10进行提取并过滤，提取3次，每次1小时，提取温度100℃，合并各次水提的提取液，浓缩得到药材水提物；3）合并药材醇提物和药材水提物，加入40重量份麦芽糊精，混合均匀，于42℃烘箱干燥至水分5%以下，得到药材提取物；4）制粒：将药材提取物投入高效粉碎机中进行粉碎，过80目筛，得粉料；将粉料投入槽型混合机中，均匀加入湿润剂乙醇制得软材，湿润剂乙醇与粉料的重量比为1：3；将软材投入摇摆制粒机中，用18目筛制粒；将湿颗粒投入高效沸腾干燥机中干燥，进风温度控制在75～82℃，干燥60分钟，颗粒水分控制在≤3%；干燥结束后，通过18目筛进行整粒，称重后通过胶囊自动填充机填充，0.40g/粒，制得胶囊剂。本发明的优点和有益效果在于：提供一种药物组分少、疗效显著、副作用小的治疗肾间质纤维化中药复方制剂。本发明中药复方制剂能显著延缓肾间质纤维化的病理发展进程，对于肾间质纤维化有良好的治疗结果。附图说明图1是各组大鼠he染色情况示图；图2是各组大鼠masson染色情况示图；图3为各组大鼠肾组织中α-sma表达情况示图；图4为各组大鼠肾组织中ctgf表达情况示图；图5为各组大鼠肾组织中col-i的表达情况示图。具体实施方式下面结合附图和实施例，对本发明的具体实施方式作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。本发明具体实施的技术方案是：药效实验试验方法（1）动物模型及动物实验实验动物:spf级sd雄性大白鼠，体重180～220克，实验期间所有动物均在spf级动物房饲养，室温保持在20～24℃，相对湿度70%，自由饮水，标准饮食，普通饲料。动物模型制作：采用单侧输尿管梗阻(uuo)建立sd大鼠肾间质纤维化动物模型。假手术组处理：30只大鼠，随机分为5组；输尿管不结扎，术前收集大鼠尿液与血液（眼眶取血）；术后第3、7、14、28天分别处死一组取肾，并于处死前收集该组动物血液，尿液每3天取一次。模型组处理：30只大鼠，随机分为5组；输尿管结扎，术前收集大鼠尿液与血液；术后第3、7、14、28天分别处死一组取肾，并于处死前收集该组动物血液，尿液每3天取一次。给药组处理：造模前一天以20g/kg·day经口灌服药物提取物，连续给药8周，于给药后第4、8周收集动物血液并处死一组取肾，尿液每周取一次。对照组处理：以血管紧张素转化酶抑制剂(acei)卡托普利，(4mg/kg·day)；血管紧张素ii受体拮抗剂(arb)氯沙坦，(10mg/kg·day)；羟甲基戊二酰辅酶a还原酶抑制剂辛伐他汀，阿托伐他汀(8mg/kg·day)以及噻唑烷二酮(tzds)类药物罗格列酮(5mg/kg·day)为对照药物，造模前一天给药，连续给药8周，每一种对照药物取6只大鼠，尿液每周取一次，第8周取血处死取肾。样品的采集与处理:每批大鼠处死前一天将大鼠置于代谢笼中(禁食，不禁水)，收集24h尿液测尿量，大鼠24h尿经离心，去除沉渣；水合氯醛麻醉后，眼眶取血，血液收集后经离心分离出血清；尿液和血清均保存于-70℃冻存；取左肾组织用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，用于he、masson染色；剩余肾组织分装后，迅速放入液氮中，随后-70℃冰箱冻存。（2）常规生化分析检测肾组织血清尿素氮(bun)、肌酐(scr)等生化指标；数据资料以均数加减标准差(mean±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析。（3）免疫组化及组织切片开展col-i、ctgf和α-sma等生化指标的检测；病理组织切片he、masson染色观察给药前后的形态学变化；数据资料以均数加减标准差(mean±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析。实验结果：（1）scr和bun含量测定血清肌酐(scr)和尿素氮(bun)是判断肾组织损伤的重要参考指标。scr和bun含量按生化试剂盒方法检测，结果见表1。从表中可以看出随着梗阻时间的延长，大鼠uuo组scr和bun的含量明显逐渐升高。相比于假手术组，uuo+中药复方给药组（ff）大鼠scr和bun含量略有升高，低于uuo7d组，其含量位于uuo3d～uuo7d，显示本中药复方能够延缓肾间质纤维化的进程。表1各组大鼠血清肌酐和尿素氮含量(，n=8)组别肌酐(μmol/l)尿素氮(mmol/l)假手术组106.35±4.28b6.00±0.52buuo3d110.71±4.33b7.52±0.86a，buuo7d119.42±4.52b7.98±0.49a，buuo14d128.67±4.60a，b8.49±0.39auuo21d158.67±4.93a8.90±0.37auuo+ff111.39±5.62b7.66±0.48a，b与假手术组相比，a：p<0.05；与uuo21d组相比，b：p<0.05。（2）he和masson染色he和masson染色是判断肾组织损伤程度的金指标。光镜下观察到sham组大鼠肾小球、肾小管结构正常。随梗阻时间延长，模型组大鼠肾组织病理变化逐渐加重。uuo3d组可观察到肾小管明显扩张。uuo7d组部分小管上皮细胞肿胀、空泡变性，间质炎性细胞浸润增多。uuo14d肾小管结构严重破坏，管腔塌陷，部分小管坏死、萎缩、消失。间质可见大量炎细胞浸润及纤维细胞增生。uuo21d肾实质明显变薄，间质弥漫性炎细胞浸润及胶原形成，间质纤维化明显。uuo+ff组大鼠肾组织病理变化较uuo21d组大鼠明显减轻，可见肾间质少量炎症细胞浸润及纤维组织增生，肾小管扩张、萎缩及肾间质纤维化程度均得到改善。各组大鼠he染色情况见图1，图1中a：假手术组；b：uuo3d；c：uuo7d；d：uuo14d；e：uuo21d；f：uuo+ff。光镜下观察masson染色切片，sham组胶原染色主要位于小管基底膜及其周围。与sham组相比，模型组大鼠随着梗阻时间延长，肾间质逐渐增宽，胶原纤维逐渐增多。uuo+ff组相对于uuo21d组，肾间质胶原沉积明显减少。各组大鼠masson染色情况见图2，图2中a：假手术组；b：uuo3d；c：uuo7d；d：uuo14d；e：uuo21d；f：uuo+ff。对masson染色切片进行胶原半定量分析，发现uuo组大鼠随着梗阻时间延长，肾间质相对容积逐渐增大。而uuo+ff组大鼠肾间质相对容积高于sham组，但显著低于uuo21d组，略低于uuo7d组。各组大鼠肾间质相对容积差异显著，有统计学意义(p<0.05)，详见表2。表2各组大鼠肾间质相对容积(，n=8)组别肾间质相对容积(%)组别肾间质相对容积(%)sham0.98±0.43buuo14d19.12±2.01a，buuo3d9.13±1.78a，buuo21d33.54±3.62auuo7d13.91±1.32a，buuo+ff13.83±2.42a，b与sham组相比，a：p<0.05。与uuo21d组相比，b：p<0.05。（3）免疫组化指标变化α-sma、ctgf、col-i这3个蛋白的表达也是肾组织损伤的重要标志。各组大鼠肾组织中α-sma、ctgf、col-i的表达情况分别如图3、图4、图5所示。图3为各组大鼠肾组织中α-sma表达情况示图；图3中a：假手术组；b：uuo3d；c：uuo7d；d：uuo14d；e：uuo21d；f：uuo+ff。图4为各组大鼠肾组织中ctgf表达情况示图；图4中a：假手术组；b：uuo3d；c：uuo7d；d：uuo14d；e：uuo21d；f：uuo+ff。图5为各组大鼠肾组织中col-i的表达情况示图；图5中a：假手术组；b：uuo3d；c：uuo7d；d：uuo14d；e：uuo21d；f：uuo+ff。由图可见假手术组大鼠肾组织α-sma、ctgf、col-i仅有少量表达。与假手术组相比，uuo组大鼠随着梗阻时间延长，肾组织中α-sma、ctgf、col-i的表达逐渐增加。与uuo21d组相比，uuo+dh组肾组织中α-sma、ctgf、col-i的表达均显著减弱。免疫组化切片半定量分析结果显示uuo21d组大鼠肾组织中α-sma、ctgf、col-i的平均阳性面积表达率显著高于sham组，而uuo+dh组大鼠肾组织中α-sma、ctgf、col-i的平均阳性面积表达率虽高于sham组，但显著低于uuo21d组，介于uuo3d和7d之间。各组大鼠肾组织中α-sma、ctgf、col-i平均阳性面积表达率差异显著，有统计学意义，详见表表3。表3各组大鼠肾组织中α-sma，ctgf，col-i平均阳性面积表达率()α-smactgfcol-isham0.78±0.21b3.64±1.36b3.77±1.68buuo3d1.61±0.42a，b5.89±2.40a，b12.12±1.53a，buuo7d2.65±0.50a，b11.12±4.48a15.98±2.76a，buuo14d4.19±1.26a，b13.40±5.21a22.50±4.24auuo21d6.93±2.00a16.78±5.98a27.21±2.83auuo+dh1.73±0.38a，b6.43±2.12a，b13.38±2.90a，b与sham组相比，a：p<0.05；与uuo21d相比，b：p<0.05。从病理切片、生化指标及免疫组化指标等多角度证实了本中药复方能显著延缓肾间质纤维化的病理发展进程，显示了本药物对于肾间质纤维化良好的治疗结果。以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本
技术领域：
的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。当前第1页12