本发明涉及一种特定的组合物及其在治疗鼻窦炎中的用途。本发明还涉及一种获得这种组合物的方法。
背景技术：
：鼻窦炎(rs)是一种鼻腔和鼻旁窦炎症，其特征在于鼻阻塞/鼻充血或鼻分泌物、面部疼痛和压力、嗅觉退化或丧失和/或主要从中鼻道流出的脓性排出物、主要在中鼻道区中的水肿/粘膜阻塞。鼻窦炎分为疾病持续时间<12周的急性rs(ars)，持续时间>12周的慢性rs(crs)，伴有鼻息肉的慢性rs(crswnp)或不伴鼻息肉的慢性rs(crssnp)。在本发明中，术语“鼻窦炎”涵盖所有形式的疾病，包括急性和慢性鼻炎以及伴有或不伴鼻息肉的急性和慢性鼻窦炎。世卫组织发布的《国际疾病分类》不以术语“鼻窦炎”作为疾病单位。相反，急性(j30)和慢性(j31)鼻炎、急性(j01)和慢性(j32)鼻窦炎已单独分类(idcwho，http://apps.who.int/classifications/icd10/browse/2016/en#/j30-j39)。尽管如此，欧洲变态反应学及临床免疫学学会、欧洲鼻科学会和美国耳鼻喉科学院头颈外科基金会发布了鼻窦炎管控指南，同意使用术语“鼻窦炎”。然而，在大多数情况下，窦炎和鼻炎是总是一起并存的伴发病。“术语“鼻窦炎”(而不是“窦炎”)的广泛使用间接支持了这样一种观点，即通过气道或者也许从鼻咽引入的异物首先作用于鼻粘膜，继而直接和间接地影响窦粘膜”(europeanpositionpaperonrhinosinusitisandnasalpolyps2012(2012年欧洲鼻窦炎和鼻息肉意见书)；rhinologysupplement(《鼻科学》增刊)23:1-298,2012)。鼻窦炎是世界上最普遍的疾病之一，平均患病率超过世界人口的10％。在美国，有八分之一的人患有鼻窦炎，每年的医疗保健费用超过110亿美元(rosenfeld,rm等人,clinicalpracticeguideline(update):adultsinusitis(《临床实践指南(更新)：成人鼻窦炎》)otolaryngologyheadandnecksurgery(《耳鼻喉头颈外科杂志》)第152(2s)卷,2015,第1-39页)。在美国，crs患者的治疗总费用每年为2609美元；在欧洲，慢性鼻窦炎患者在大学医院的治疗总费用为每年1861美元。鼻窦炎是美国雇主花销最大的健康状况之一。在慢性疾病中，鼻窦炎患者的医疗保健总费用和家庭医疗保健支出较高。大部分间接费用是由旷工(缺勤)和出勤主义(工作效率降低)造成的。美国国家健康访问调查(nationalhealthinterviewsurvey)在1997年至2006年间进行了一项涵盖近315,000人的研究，研究报道，美国鼻窦炎患者平均每年缺勤5.7天(europeanpositionpaperonrhinosinusitisandnasalpolyps2012(2012年欧洲鼻窦炎和鼻息肉意见书)；rhinologysupplement(《鼻科学》增刊)23:1-298,2012)。目前，没有用于管控鼻窦炎的具体治疗方法。一些抗生素的标签指示适用于急性细菌性鼻窦炎；还建议了其他类别的药物，如皮质类固醇、抗组胺药、α肾上腺素减充血剂，但均未获得fda批准(guidanceforindustry(行业指导)sinusitis:designingclinicaldevelopmentprogramsofnonantimicrobialdrugsfortreatment(窦炎：治疗用非抗菌药物临床开发计划的设计)u.s.dhhsfdacenterfordrugevaluationandresearch(美国dhhsfda药物评估和研究中心)2006年11月)。国际专家小组(如欧洲过敏和临床免疫学会及欧洲鼻科学会)制定了鼻窦炎的治疗指南。根据这些协会制定的方案(europeanpositionpaperonrhinosinusitisandnasalpolyps2012(2012年欧洲鼻窦炎和鼻息肉意见书)；rhinologysupplement(《鼻科学》增刊)23:1-298,2012)，不同形式的鼻窦炎的管控方式如下：-急性鼻窦炎(<12周)：初步治疗是对症治疗：尽管缺乏有效性的证据，但仍可建议使用止痛药、盐水冲洗、抗组胺药、减充血药。如果7到14天没有改善，建议使用鼻内类皮质激素。对于细菌性rs并发症，建议开一线抗生素(单独使用阿莫西林或与克拉维酸联用)。必须同时进行影像学检查以确认细菌性鼻窦炎并确认无并发症。如果未观察到功效，更换抗生素(例如大环内酯类)。在治疗失败的情况下，可建议继续使用局部鼻内类皮质激素和/或进行手术干预。-慢性鼻窦炎(>12周)：无论是否存在鼻息肉，治疗方案如下：在内窥镜检查和ct扫描后，开鼻内皮质类固醇。如果3个月后仍无改善，应增加长期抗生素治疗。如果仍然没有改善，建议进行手术干预。鼻内皮质类固醇的疗效非常有限：在14名接受治疗的人中，仅对1名有效(hayward,g等人intranasalcorticosteroidsinmanagementofacutesinusitis:asystematicreviewandmeta-analysis(鼻内皮质类固醇在管控急性鼻窦炎中的应用：系统评价和元分析)annfammed(《家庭医学年鉴》)第10卷:2012,第241-249页)。强烈建议临床医生在开抗生素之前对抗生素治疗的好处与潜在的不良反应进行权衡。而且，最新的美国指南建议，由于抗生素对rs的功效低(在20名接受治疗的人中，仅对1名有效(rosenfeld,rm等人clinicalpracticeguideline(update):adultsinusitis(《临床实践指南(更新)：成人鼻窦炎》)otolaryngologyheadandnecksurgery(《耳鼻喉头颈外科杂志》)第152(2s)卷,2015,第1-39页)，即使确定了鼻窦炎的细菌来源，在开始抗生素治疗之前也应“等待观察”。可以使用局部减充血剂药进行姑息治疗，但连续给予(超过3-5天)可能会导致药物性鼻炎。用于鼻腔冲洗的等渗或高渗盐溶液广泛用于日常卫生实践中。一般，大多使用生理盐水溶液。用于鼻腔冲洗的溶液量从5ml到500ml不等。对等渗盐溶液的作用的解释是，其能够从鼻腔去除刺激性异物和炎性介质。当前，正在开发几种含有缓冲溶液的鼻用制剂。其中一种鼻腔冲洗制剂由tedkeller(us2013/0156871，tedkeller，2013年6月20日)开发，其中他发现了包含氯化钠和由抗坏血酸钠和碳酸氢钠组成的缓冲液的鼻腔溶液。在水中溶解后，该组合物可用于清洁鼻腔和窦腔。然而，像许多现有解决方案一样，这种组合物无法令人满意，而且不足以治疗鼻窦炎。技术实现要素：本发明的目的是解决现有解决方案的问题并提供用于清洁鼻腔和窦腔以有效治疗急性和慢性鼻窦炎的组合物。为此，本发明涉及一种组合物，其包含：盐；和多酚基活性剂，所述多酚基活性剂选自：槲皮素，槲皮素-4'-糖苷，2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮，原儿茶酸；并且所述组合物可以包含衍生自槲皮素的含量少于活性剂总量的5％的杂质，所述杂质包含槲皮素3'-糖苷、槲皮素-7'-糖苷、槲皮素的二糖苷和三糖苷、槲皮素二聚体。根据本发明，有必要将槲皮素与槲皮素衍生物(如槲皮素-4'-糖苷、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、原儿茶酸酸)组合。这种组合提供了增效作用，增加了所述组合物在治疗鼻窦炎中的有效性。本发明还涉及这些组合物用于预防和治疗鼻窦炎的用途。最后，本发明的另一个目的是提供一种这些组合物的制备方法。现在对本发明进行详细描述。定义本发明中的术语“活性剂”是指产生所需治疗效果的化合物或成分。本发明中的术语“杂质”指的是在药物组合物中少量存在的、伴随活性剂的、不具有治疗效果的化合物或成分。本发明中的“治疗有效量”是指可以在接受治疗的受试者中产生治疗效果的活性剂的量。本发明中的术语“患者”或“受试者”指的是可以对其应用本发明的哺乳动物，其包括动物或人。具体实施方式本发明的主题是一种用于冲洗鼻腔和窦腔以预防或治疗急性和慢性鼻炎以及急性和慢性鼻窦炎的组合物，其包含：-氯化钠和/或氯化钾；-槲皮素，和-至少一种多酚基活性剂，所述多酚基活性剂选自：槲皮素-4'-糖苷，2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮，原儿茶酸；并且其中，所述槲皮素为分子质量约为302g/mol的无水形式，或为分子质量约为320g/mol的槲皮素水合物，或为分子质量约为388g/mol的槲皮素二水合物。本发明涉及鼻用组合物，其含有功效经证明可治疗鼻窦炎的活性成分。根据本发明，可以从洋葱皮中提取所述组合物的分子。在实验诱发鼻窦炎的动物模型上对粗提物和从中提纯的化合物的功效进行了研究。本发明的结果在实施例中进行描述。这项研究的结果证明了洋葱皮提取物以及从中分离的以下化合物对于鼻窦炎的有效性：槲皮素，槲皮素-4'-糖苷，2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和原儿茶酸。这些结果也使得能够开发出含有这些药剂的制剂，并开发出治疗方法。根据提取条件和制备条件，使用的槲皮素可以为分子质量约为302g/mol的无水形式，或为分子质量约为320g/mol的槲皮素水合物的形式，或为分子质量约为388g/mol的槲皮素二水合物的形式。根据本发明，可以有几种不同的组合物。1.鼻用组合物，包含盐和槲皮素、槲皮素-4’-糖苷、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和原儿茶酸。根据一个实施方案，所述鼻用制剂包含盐和含有以下类黄酮的植物提取物：槲皮素、槲皮素-4’-糖苷、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和原儿茶酸。盐可以是数量足以产生低渗、等渗或高渗溶液的氯化钠或氯化钾，或二者。盐的量可以为干燥组合物的重量的83-99.7％。干燥组合物中的槲皮素的量可以在0.23-3重量％之间。干燥组合物中的槲皮素-4'-糖苷的量可以在0.000001重量％至3重量％之间。干燥组合物中的2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮的量可以在0.000001重量％至3重量％之间。干燥组合物中的原儿茶酸的量可以在0.000001重量％至3重量％之间。根据一个实施方案，包含槲皮素、槲皮素-4'-糖苷、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和原儿茶酸的活性剂可以通过从含有类黄酮的植物(例如洋葱皮)中进行提取的方法制备。含有活性剂的提取物的制备方法可以包括以下步骤：-将洋葱皮粉与冷水以0.1-2g/50ml(m/v)的比例混合；-将混合物煮沸，并在沸腾温度下徐沸30分钟；-冷却混合物，过滤并冻干。该方法可以得到由以下活性剂组成的粗提物：槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸。所述粗提物还可以含有衍生自槲皮素的含量不超过活性剂总重量的5％的其他杂质，例如，槲皮素-3'-糖苷、槲皮素-7'-糖苷、槲皮素的二糖苷和三糖苷、槲皮素二聚体。另一种提取方法包括使用比例为50/50至90/10(v/v)的有机溶剂，优选用水稀释的甲醇或乙醇。根据该方法，将限定量的洋葱皮粉与有机溶剂以1-10g/30ml(m/v)的比例混合，并在室温下搅拌24小时。将获得的溶液过滤，然后蒸发至干。所获得的粗提物可以通过高效液相色谱法分离。分离条件可以如下：将50mg至200mg的粗提物注入hplc装置的phenomenexc18柱(21.2mm×150mm，5μm，100a)中。可以使用以下溶剂：溶剂a：h20/tfa0.5％(1l/5ml)；溶剂b：acn。流量可以是：15ml/min。可以通过uplc-dad-ms技术(agilenttechnologies，美国)对组合物进行定性和定量分析。洗脱条件可以如下：在25℃的温度下，将1μl的溶液注入uplc的agilentc18柱(2.1mm，1.8μm)中。所使用的溶剂可以是：溶剂a：h2o/hcooh0.1％和溶剂b：acn/hcooh0.1％。流量可以是：0.4ml/min。分离出的化合物可以先通过二极管阵列检测器检测，然后再通过质谱分析仪检测。质谱分析可以以阴性模式或阳性模式进行。对于所有组合物，使用uplc-dad-ms方法进行的分离和分析技术可以是相同的。根据一个实施方案，所述组合物可以通过混合以下市售化合物来制备：槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、槲皮素-4'-糖苷、原儿茶酸和选自氯化钠或氯化钾的盐。干燥组合物可以通过以下方法之一制备：a)将槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、槲皮素-4'-糖苷、原儿茶酸和盐溶解在加热至80-100℃的水中。然后将溶液冷却至室温、冷冻并冻干。b)将槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、槲皮素-4'-糖苷、原儿茶酸溶解在加热至80-100℃的水中。然后将溶液冷却至室温，添加盐并溶解。然后将溶液冷冻并冻干。c)将槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸溶解在有机溶剂中，优选溶解在用水稀释的乙醇或甲醇中。有机溶剂/水的比率可以在50/50至90/10之间。将盐溶解在水中。然后，将两种溶液在室温下混合、冷冻并冻干。d)将槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸的粉末与氯化钠或氯化钾混合。所述组合物可以被灭菌或不被灭菌，可以以分布在单剂量或多剂量容器中的干燥形式或液体形式提供。所述组合物可以包含一种或多种与疗法一致的生物活性成分以及选自药物载体、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和精油的添加剂。生物活性成分可以选自抗生素、皮质类固醇和/或铜盐、锰盐和硫盐。精油可以选自桉树油、迷迭香油、茶树油或薄荷醇。根据一个实施方案，干燥的组合物可随后与水混合。所获得的溶液或悬浮液包含浓度为0.4-2重量％的氯化钠和/或氯化钾、浓度为0.0023-0.03重量％的槲皮素、浓度为0.00000001-0.03重量％的槲皮素-4'-糖苷、浓度为0.00000001-0.03重量％的2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、浓度为0.00000001-0.03重量％的原儿茶酸，并且可以含有衍生自槲皮素的最高为活性剂总重量的5％的其他杂质。根据另一个实施方案，可以将干燥组合物与含有碳酸氢盐的溶液混合。碳酸氢盐可以是碳酸氢钠或碳酸氢钾或二者。碳酸氢盐的浓度最高可变化为0.5重量％，优选在0.1重量％至0.5重量％之间，更优选在0.25重量％至0.5重量％之间。水或碳酸氢盐溶液的温度可以在30℃至38℃之间。在该温度下，某些化合物(例如槲皮素)可以保持悬浮状态，而其他化合物则可以完全溶解。根据一个特定变型，可以在混合前将水煮沸然后冷却至37℃。用于制备液体组合物的水可以进行蒸馏、去离子化、纯化和灭菌处理。尽管不排除在组合物中使用防腐剂和其他赋形剂，但可以生产不含防腐剂的无菌制剂。这使得能够将组合物保持在无菌条件下并限制因存在防腐剂而引起的不良反应。可以首选在无菌条件下使用单剂量塑料容器或预填充注射器的吹入-灌装-封口技术。在一个实施方案中，组合物可以如下所示：组合物由两部分构成：-a部分：含有干燥粉末，所述干燥粉末包含氯化钠或氯化钾、槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸。-b部分：含有20ml的水或碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液。2.鼻用组合物，包含盐和槲皮素、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸。根据一个实施方案，所述鼻用制剂包含盐和含有以下类黄酮的植物提取物：槲皮素、槲皮素-4’-糖苷和原儿茶酸。盐可以是数量足以产生低渗、等渗或高渗溶液的氯化钠或氯化钾，或二者。盐的量可以为干燥组合物的重量的86-99.7％。干燥组合物中的槲皮素的量可以在0.23-3重量％之间。干燥组合物中的槲皮素-4'-糖苷的量可以在0.000001重量％至3重量％之间。干燥组合物中的原儿茶酸的量可以在0.000001重量％至3重量％之间。根据一个实施方案，包含槲皮素、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸的活性剂可以通过从含有类黄酮的植物(例如洋葱皮)中进行提取的方法制备。含有活性剂的提取物的制备方法可以包括以下步骤：-将洋葱皮粉与冷水以0.1-2g/50ml(m/v)的比例混合；-将混合物煮沸，并在沸腾温度下徐沸30分钟；-冷却混合物，过滤并冻干。该方法可以得到由以下活性剂组成的粗提物：槲皮素、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸。所述粗提物还可以含有衍生自槲皮素的含量不超过活性剂总重量的5％的其他杂质，例如，槲皮素-3'-糖苷、槲皮素-7'-糖苷、槲皮素的二糖苷和三糖苷、槲皮素二聚体。另一种提取方法包括使用有机溶剂，优选以50/50至90/10(v/v)的比率用水稀释的甲醇或乙醇。根据该方法，将限定量的洋葱皮粉与有机溶剂以1-10g/30ml(m/v)的比率混合，并在室温下搅拌24小时。将所获得的溶液过滤，然后蒸发至干。所获得的粗提物可以通过高效液相色谱法分离。分离条件可以如下：将50mg至200mg的粗提物注入hplc装置的phenomenexc18柱(21.2mm×150mm，5μm，100a)中。可以使用以下溶剂：溶剂a：h2o/tfa0.5％(1l/5ml)；溶剂b：acn。流量可以是：15ml/min。可以通过uplc-dad-ms技术(agilenttechnologies，美国)对组合物进行定性和定量分析。洗脱条件可以如下：在25℃的温度下，将1μl的溶液注入uplc的agilentc18柱(2.1mm，1.8μm)中。所使用的溶剂可以是：溶剂a：h2o/hcooh0.1％和溶剂b：acn/hcooh0.1％。流量可以是：0.4ml/min。分离出的化合物可以先通过二极管阵列检测器检测，然后再通过质谱分析仪检测。质谱分析可以以阴性模式或阳性模式进行。对于所有组合物，通过uplc-dad-ms方法进行的分离和分析技术可以是相同的。根据一个实施方案，所述组合物可以通过混合以下市售化合物来制备：槲皮素、槲皮素-4'-糖苷、原儿茶酸和选自氯化钠或氯化钾的盐。干燥组合物可以通过以下方法之一制备：a)将槲皮素、槲皮素-4'-糖苷、原儿茶酸和盐溶解在加热至80-100℃的水中。然后将溶液冷却至室温、冷冻并冻干。b)将槲皮素、槲皮素-4'-糖苷、原儿茶酸溶解在加热至80-100℃的水中。然后将溶液冷却至室温，添加盐并溶解。然后将溶液冷冻并冻干。c)将槲皮素、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸溶解在有机溶剂中，优选溶解在用水稀释的乙醇或甲醇中。有机溶剂/水的比率可以在50/50至90/10(v/v)之间。将盐溶解在水中。然后，将两种溶液在室温下混合、冷冻并冻干。d)将槲皮素、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸的粉末与氯化钠或氯化钾混合。所述组合物可以被灭菌或不被灭菌，可以以分布在单剂量或多剂量容器中的干燥形式或液体形式提供。所述组合物可以包含一种或多种与疗法一致的生物活性成分以及选自药物载体、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和精油的添加剂。生物活性成分可以选自抗生素、皮质类固醇和/或铜盐、锰盐和硫盐。精油可以选自桉树油、迷迭香油、茶树油或薄荷醇。根据一个实施方案，干燥的组合物可随后与水混合。所获得的溶液或悬浮液包含浓度为0.4-2重量％的氯化钠和/或氯化钾、浓度为0.0023-0.03重量％的槲皮素、浓度为0.00000001-0.03重量％的槲皮素-4'-糖苷、浓度为0.00000001-0.03重量％的原儿茶酸，并且可以含有衍生自槲皮素的最高为活性剂总重量的0.5％的杂质。根据另一个实施方案，可以将干燥组合物与含有碳酸氢盐的溶液混合。碳酸氢盐可以是碳酸氢钠或碳酸氢钾或二者。碳酸氢盐的浓度最高可变化为0.5重量％，优选在0.1重量％至0.5重量％之间，更优选在0.25重量％至0.5重量％之间。水或碳酸氢盐溶液的温度可以在30℃至38℃之间。在该温度下，某些化合物(例如槲皮素)可以保持悬浮状态，而其他化合物则可以完全溶解。根据一个特定变型，可以在混合前将水煮沸然后冷却至37℃。用于制备液体组合物的水可以进行蒸馏、去离子化、纯化和灭菌处理。尽管不排除在组合物中使用防腐剂和其他赋形剂，但可以生产不含防腐剂的无菌制剂。这使得能够将组合物保持在无菌条件下并限制因存在防腐剂而引起的不良反应。可以首选在无菌条件下使用单剂量塑料容器或预填充注射器的吹入-灌装-封口技术。在一个实施方案中，组合物可以如下所示：组合物由两部分构成：-a部分：含有干燥粉末，所述干燥粉末包含氯化钠或氯化钾、槲皮素、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸。-b部分：含有20ml的水或碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液。3.鼻用组合物，包含盐和槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和原儿茶酸。根据一个实施方案，所述鼻用制剂包含盐、槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和原儿茶酸。盐可以是数量足以产生低渗、等渗或高渗溶液的氯化钠或氯化钾，或二者。盐的量可以为干燥组合物的重量的91-99.7％。干燥组合物中的槲皮素的量可以在0.23-3重量％之间。干燥组合物中的2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮的量可以在0.000001重量％至3重量％之间。干燥组合物中的原儿茶酸的量可以在0.000001重量％至3重量％之间。根据一个实施方案，包含槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和原儿茶酸的活性剂可以通过从含有类黄酮的植物(例如洋葱皮)中进行提取的方法制备。含有活性剂的提取物的制备方法可以包括以下步骤：-将洋葱皮粉与冷水以0.1-2g/50ml(m/v)的比例混合；-将混合物煮沸，并在沸腾温度下徐沸30分钟；-冷却混合物，过滤并冻干。该方法可以得到由以下活性剂组成的粗提物：槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸。所述粗提物还可以含有衍生自槲皮素的含量不超过活性剂总重量的5％的其他杂质，例如，槲皮素-3'-糖苷、槲皮素-7'-糖苷、槲皮素的二糖苷和三糖苷、槲皮素二聚体。另一种提取方法包括使用有机溶剂，优选以50/50至90/10(v/v)的比率用水稀释的甲醇或乙醇。根据该方法，将限定量的洋葱皮粉与有机溶剂以1-10g/30ml(m/v)的比率混合，并在室温下搅拌24小时。将获得的溶液过滤，然后蒸发至干。所获得的粗提物可以通过高效液相色谱法分离。分离条件可以如下：将50mg至200mg的粗提物注入hplc装置的phenomenexc18柱(21.2mm×150mm，5μm，100a)中。可以使用以下溶剂：溶剂a：h2o/tfa0.5％(1l/5ml)；溶剂b：acn。流量可以是：15ml/min。可以通过uplc-dad-ms技术(agilenttechnologies，美国)对组合物进行定性和定量分析。洗脱条件可以如下：在25℃的温度下，将1μl的溶液注入uplc的agilentc18柱(2.1mm，1.8μm)中。所使用的溶剂可以是：溶剂a：h2o/hcooh0.1％和溶剂b：acn/hcooh0.1％。流量可以是：0.4ml/min。分离出的化合物可以先通过二极管阵列检测器检测，然后再通过质谱分析仪检测。质谱分析可以以阴性模式或阳性模式进行。对于所有组合物，通过uplc-dad-ms方法进行的分离和分析技术可以是相同的。根据一个实施方案，所述组合物可以通过混合以下市售化合物来制备：槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、原儿茶酸和选自氯化钠或氯化钾的盐。干燥组合物可以通过以下方法之一制备：a)将槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、原儿茶酸和盐溶解在加热至80-100℃的水中。然后将溶液冷却至室温、冷冻并冻干。b)将槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、原儿茶酸溶解在加热至80-100℃的水中。然后将溶液冷却至室温，添加盐并溶解。然后将溶液冷冻并冻干。c)将槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和原儿茶酸溶解在有机溶剂中，优选溶解在用水稀释的乙醇或甲醇中。有机溶剂/水的比率可以在50/50至90/10(v/v)之间。将盐溶解在水中。然后，将两种溶液在室温下混合、冷冻并冻干。d)将槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和原儿茶酸的粉末与氯化钠或氯化钾混合。所述组合物可以被灭菌或不被灭菌，可以以分布在单剂量或多剂量容器中的干燥形式或液体形式提供。所述组合物可以包含一种或多种与疗法一致的生物活性成分以及选自药物载体、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和精油的添加剂。生物活性成分可以选自抗生素、皮质类固醇和/或铜盐、锰盐和硫盐。精油可以选自桉树油、迷迭香油、茶树油或薄荷醇。根据一个实施方案，干燥的组合物可随后与水混合。所获得的溶液或悬浮液包含浓度为0.4-2重量％的氯化钠和/或氯化钾、浓度为0.0023-0.03重量％的槲皮素、浓度为0.00000001-0.03重量％的2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、浓度为0.00000001-0.03重量％的原儿茶酸。根据另一个实施方案，可以将干燥组合物与含有碳酸氢盐的溶液混合。碳酸氢盐可以是碳酸氢钠或碳酸氢钾或二者。碳酸氢盐的浓度最高可变化为0.5重量％，优选在0.1重量％至0.5重量％之间，更优选在0.25重量％至0.5重量％之间。水或碳酸氢盐溶液的温度可以在30℃至38℃之间。在该温度下，某些化合物(例如槲皮素)可以保持悬浮状态，而其他化合物则可以完全溶解。根据一个实施方案，可以在混合前将水煮沸然后冷却至37℃。用于制备液体组合物的水可以进行蒸馏、去离子化、纯化和灭菌处理。尽管不排除在组合物中使用防腐剂和其他赋形剂，但可以生产不含防腐剂的无菌制剂。这使得能够将组合物保持在无菌条件下并限制因存在防腐剂而引起的不良反应。可以首选在无菌条件下使用单剂量塑料容器或预填充注射器的吹入-灌装-封口技术。在一个实施方案中，组合物可以如下所示：组合物由两部分构成：-a部分：含有干燥粉末，所述干燥粉末包含氯化钠或氯化钾、槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和原儿茶酸。-b部分：含有20ml的水或碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液。4.鼻用组合物，包含盐和槲皮素、槲皮素-4'-糖苷和2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮。根据一个实施方案，所述鼻用制剂包含盐和槲皮素、槲皮素-4’-糖苷、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮。盐可以是数量足以产生低渗、等渗或高渗溶液的氯化钠或氯化钾，或二者。盐的量可以为干燥组合物的重量的91-99.99％。干燥组合物中的槲皮素的量可以在0.000001-3重量％之间。干燥组合物中的槲皮素-4'-糖苷的量可以在0.000001重量％至3重量％之间。干燥组合物中的2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮的量可以在0.000001重量％至3重量％之间。根据一个实施方案，可以通过从含有类黄酮的植物(例如洋葱皮)中进行提取的方法制备包含槲皮素、槲皮素-4'-糖苷和2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮的活性剂。含有活性剂的提取物的制备方法可以包括以下步骤：-将洋葱皮粉与冷水以0.1-2g/50ml(m/v)的比例混合；-将混合物煮沸，并在沸腾温度下徐沸30分钟；-冷却混合物，过滤并冻干。该方法可以得到由以下活性剂组成的粗提物：槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸。所述粗提物还可以含有衍生自槲皮素的含量不超过活性剂总重量的5％的其他杂质，例如，槲皮素-3'-糖苷、槲皮素-7'-糖苷、槲皮素的二糖苷和三糖苷、槲皮素二聚体。另一种提取方法包括使用有机溶剂，优选以50/50至90/10(v/v)的比率用水稀释的甲醇或乙醇。根据该方法，将限定量的洋葱皮粉与有机溶剂以1-10g/30ml(m/v)的比率混合，并在室温下搅拌24小时。将获得的溶液过滤，然后蒸发至干。所获得的粗提物可以通过高效液相色谱法分离。分离条件可以如下：将50mg至200mg的粗提物注入hplc装置的phenomenexc18柱(21.2mm×150mm，5μm，100a)中。可以使用以下溶剂：溶剂a：h2o/tfa0.5％(1l/5ml)；溶剂b：acn。流量可以是：15ml/min。可以通过uplc-dad-ms技术(agilenttechnologies，美国)对组合物进行定性和定量分析。洗脱条件可以如下：在25℃的温度下，将1μl的溶液注入uplc的agilentc18柱(2.1mm，1.8μm)中。所使用的溶剂可以是：溶剂a：h2o/hcooh0.1％和溶剂b：acn/hcooh0.1％。流量可以是：0.4ml/min。分离出的化合物可以先通过二极管阵列检测器检测，然后再通过质谱分析仪检测。质谱分析可以以阴性模式或阳性模式进行。对于所有组合物，通过uplc-dad-ms方法进行的分离和分析技术可以是相同的。根据一个实施方案，所述组合物可以通过混合以下市售化合物来制备：槲皮素、槲皮素-4'-糖苷和选自氯化钠或氯化钾的盐。干燥组合物可以通过以下方法之一制备：a)将槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、槲皮素-4'-糖苷和盐溶解在加热至80-100℃的水中。然后将溶液冷却至室温、冷冻并冻干。b)将槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和槲皮素-4'-糖苷溶解在加热至80-100℃的水中。然后将溶液冷却至室温，添加盐并溶解。然后将溶液冷冻并冻干。c)将槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和槲皮素-4'-糖苷溶解在有机溶剂中，优选溶解在用水稀释的乙醇或甲醇中。有机溶剂/水的比率可以在50/50至90/10(v/v)之间。将盐溶解在水中。然后，将两种溶液在室温下混合，然后冷冻并冻干。d)将槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和槲皮素-4'-糖苷的粉末与氯化钠或氯化钾混合。所述组合物可以被灭菌或不被灭菌，可以以分布在单剂量或多剂量容器中的干燥形式或液体形式提供。所述组合物可以包含一种或多种与疗法一致的生物活性成分以及选自药物载体、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和精油的添加剂。生物活性成分可以选自抗生素、皮质类固醇和/或铜盐、锰盐和硫盐。精油可以选自桉树油、迷迭香油、茶树油或薄荷醇。根据一个实施方案，干燥的组合物可随后与水混合。所获得的溶液或悬浮液包含浓度为0.4-2重量％的氯化钠和/或氯化钾、浓度为0.00000001-0.03重量％的槲皮素、浓度为0.00000001-0.03重量％的槲皮素-4'-糖苷、浓度为0.00000001-0.03重量％的2-(-4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮。根据另一个实施方案，可以将干燥组合物与含有碳酸氢盐的溶液混合。碳酸氢盐可以是碳酸氢钠或碳酸氢钾或二者。碳酸氢盐的浓度最高可变化为0.5重量％，优选在0.1重量％至0.5重量％之间，更优选在0.25重量％至0.5重量％之间。水或碳酸氢盐溶液的温度可以在30℃至38℃之间。在该温度下，某些化合物(例如槲皮素)可以保持悬浮状态，而其他化合物则可以完全溶解。根据一个特定变型，可以在混合前将水煮沸然后冷却至37℃。用于制备液体组合物的水可以进行蒸馏、去离子化、纯化和灭菌处理。尽管不排除在组合物中使用防腐剂和其他赋形剂，但可以生产不含防腐剂的无菌制剂。这使得能够将组合物保持在无菌条件下并限制因存在防腐剂而引起的不良反应。可以首选在无菌条件下使用单剂量塑料容器或预填充注射器的吹入-灌装-封口技术。在一个实施方案中，组合物可以如下所示：组合物由两部分构成：-a部分：含有干燥粉末，所述干燥粉末包含氯化钠或氯化钾、槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和槲皮素-4'-糖苷。-b部分：含有20ml的水或碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液。5.鼻用组合物，包含盐、槲皮素和2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮。根据一个实施方案，所述鼻用制剂包含盐、槲皮素和2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮。盐可以是数量足以产生低渗、等渗或高渗溶液的氯化钠或氯化钾，或二者。盐的量可以为干燥组合物的重量的94-99.99％。干燥组合物中的槲皮素的量可以在0.000001-3重量％之间。干燥组合物中的2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮的量可以在0.000001重量％至3重量％之间。根据一个实施方案，可以通过从含有类黄酮的植物(例如洋葱皮)中进行提取的方法制备包含槲皮素和2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮的活性剂。含有活性剂的提取物的制备方法可以包括以下步骤：-将洋葱皮粉与冷水以0.1-2g/50ml(m/v)的比例混合；-将混合物煮沸，并在沸腾温度下徐沸30分钟；-冷却混合物，过滤并冻干。该方法可以得到由以下活性剂组成的粗提物：槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸。所述粗提物还可以含有衍生自槲皮素的含量不超过活性剂总重量的5％的其他杂质，例如，槲皮素-3'-糖苷、槲皮素-7'-糖苷、槲皮素的二糖苷和三糖苷、槲皮素二聚体。另一种提取方法包括使用有机溶剂，优选以50/50至90/10(v/v)的比率用水稀释的甲醇或乙醇。根据该方法，将限定量的洋葱皮粉与有机溶剂以1-10g/30ml(m/v)的比率混合，并在室温下搅拌24小时。将所获得的溶液过滤，然后蒸发至干。所获得的粗提物可以通过高效液相色谱法分离。分离条件可以如下：将50mg至200mg的粗提物注入hplc装置的phenomenexc18柱(21.2mm×150mm，5μm，100a)中。可以使用以下溶剂：溶剂a：h2o/tfa0.5％(1l/5ml)；溶剂b：acn。流量可以是：15ml/min。可以通过uplc-dad-ms技术(agilenttechnologies，美国)对组合物进行定性和定量分析。洗脱条件可以如下：在25℃的温度下，将1μl的溶液注入uplc的agilentc18柱(2.1mm，1.8μm)中。所使用的溶剂可以是：溶剂a：h2o/hcooh0.1％和溶剂b：acn/hcooh0.1％。流量可以是：0.4ml/min。分离出的化合物可以先通过二极管阵列检测器检测，然后再通过质谱分析仪检测。质谱分析可以以阴性模式或阳性模式进行。对于所有组合物，通过uplc-dad-ms方法进行的分离和分析技术可以是相同的。根据一个实施方案，所述组合物可以通过混合以下市售化合物来制备：槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和选自氯化钠或氯化钾的盐。干燥组合物可以通过以下方法之一制备：a)将槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮和盐溶解在加热至80-100℃的水中。然后将溶液冷却至室温、冷冻并冻干。b)将槲皮素和2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮溶解在加热至80-100℃的水中。然后将溶液冷却至室温，添加盐并溶解。然后将溶液冷冻并冻干。c)将槲皮素和2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮溶解在有机溶剂中，优选溶解在用水稀释的乙醇或甲醇中。有机溶剂/水的比率可以在50/50至90/10(v/v)之间。将盐溶解在水中。然后，将两种溶液在室温下混合，然后冷冻并冻干。d)将槲皮素和2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮的粉末与氯化钠或氯化钾混合。所述组合物可以被灭菌或不被灭菌，可以以分布在单剂量或多剂量容器中的干燥形式或液体形式提供。所述组合物可以包含一种或多种与疗法一致的生物活性成分以及选自药物载体、稳定剂、表面活性剂、防腐剂和精油的添加剂。生物活性成分可以选自抗生素、皮质类固醇和/或铜盐、锰盐和硫盐。精油可以选自桉树油、迷迭香油、茶树油或薄荷醇。根据一个实施方案，干燥的组合物可随后与水混合。所获得的溶液或悬浮液包含浓度为0.4-2重量％的氯化钠和/或氯化钾、浓度为0.00000001-0.03重量％的槲皮素、浓度为0.00000001-0.03重量％的2-(-4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮。根据另一个实施方案，可以将干燥组合物与含有碳酸氢盐的溶液混合。碳酸氢盐可以是碳酸氢钠或碳酸氢钾或二者。碳酸氢盐的浓度最高可变化为0.5重量％，优选在0.1重量％至0.5重量％之间，更优选在0.25重量％至0.5重量％之间。水或碳酸氢盐溶液的温度可以在30℃至38℃之间。在该温度下，某些化合物(例如槲皮素)可以保持悬浮状态，而其他化合物则可以完全溶解。根据一个特定变型，可以在混合前将水煮沸然后冷却至37℃。用于制备液体组合物的水可以进行蒸馏、去离子化、纯化和灭菌处理。尽管不排除在组合物中使用防腐剂和其他赋形剂，但可以生产不含防腐剂的无菌制剂。这使得能够将组合物保持在无菌条件下并限制因存在防腐剂而引起的不良反应。可以首选在无菌条件下使用单剂量塑料容器或预填充注射器的吹入-灌装-封口技术。在一个实施方案中，组合物可以如下所示：组合物由两部分构成：-a部分：含有干燥粉末，所述干燥粉末包含氯化钠或氯化钾、槲皮素和2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮。-b部分：含有20ml的水或碳酸氢钠或碳酸氢钾溶液。现在通过实施例和关于本发明在治疗鼻窦炎中的有效性的试验对本发明进行说明。实施例实施例1从洋葱皮中提取将40克洋葱皮研磨物与2l冷水混合，加热至沸腾，并在沸腾温度下保持徐沸30分钟。将混合物冷却、过滤并冻干。得到5.0g干提取物。乙醇提取将200克洋葱皮研磨物与6letoh/h2o(70/30；v/v)混合，并在室温下混合24小时。将所获得的溶液过滤，然后蒸发至干。得到25.5g干提取物。使用uplc-dad-ms(agilenttechnologies，美国)技术对两种提取物进行定性和定量分析。洗脱条件：在25℃的温度下，将1μl溶液注入到uplc柱agilentc18(2.1mm，1.8μm)中。使用的溶剂为：溶剂a：h2o/hcooh0.1％和溶剂b：acn/hcooh0.1％。流量：0.4ml/min。首先通过二极管阵列检测器(dad)检测分离出的化合物，然后通过质谱法进行分析。质谱分析以阳性模式和阴性模式进行。lc-ms光谱是以100至1400的总质量(m/z)在“全扫描”中获得。获得的数据通过hystar软件3.0版进行收集和分析。表1和表2给出了从洋葱皮中获得的酒精提取物和水提取物的定性和定量分析结果。表1洋葱皮水提取物的定性和定量特征。保留时间(min)mm(da)化合物含量(％)6.7302槲皮素4.85±0.055.5464槲皮素-4'-糖苷2.83±0.053.0154原儿茶酸7.22±0.174.1626槲皮素-二糖苷0.16±0.0034.3626槲皮素-二糖苷0.2±0.01表2洋葱皮醇提取物的定性和定量特征。实施例2分离纯化合物醇粗提物通过hplc技术进行分离。将50mg至200mg的粗提物注入到hplc装置的c18phenomenex柱(21.2mmx150mm，5μm，100a)中。使用的溶剂为：溶剂a：h2o/tfa0.5％(1l/5ml)；溶剂b：acn。流量：15ml/min。分离出三种主要化合物：1.原儿茶酸(98.6％纯度)，92.5mg；2.槲皮素(98.9％纯度)295mg；3.槲皮素-4’-糖苷(纯度96.5％)，143mg。组合物的制备过程。1.将40mg槲皮素和3gnacl与150ml沸水混合。然后将混合物冷却、冷冻并冻干。在无菌条件下，将197.6mg获得的粉末分布在单剂量容器中。2.将40mg槲皮素与150ml沸水混合。然后将溶液冷却，添加3gnacl并溶解。将所获得的溶液冷冻并冻干。在无菌条件下，将197.6mg获得的粉末分布在单剂量容器中。3.将50mg槲皮素溶解在50mlmeoh/h2o(50/50：v/v)中。将3.75gnacl溶解在150mlh2o中。将获得的两种溶液在室温下混合在一起，然后冷冻并冻干。在无菌条件下，将200mg获得的粉末分布在单剂量容器中。4.将40mg槲皮素与3gnacl混合。在无菌条件下，将200mg获得的粉末分布在单剂量容器中。实施例3溶剂制剂制备三种不同的溶剂：1.将0.625gnacl溶解在250ml蒸馏水中。通过孔径为0.22μm的过滤器过滤，对所获得的溶液进行灭菌，并在无菌条件下分布在单剂量容器中。2.将0.625gnahco3溶解在250ml蒸馏水中。通过孔径为0.22μm的过滤器过滤，对所获得的溶液进行灭菌，并在无菌条件下分布在单剂量容器中。3.在无菌条件下将蒸馏水分配在单剂量容器中。配制品基于实施例1和2中所述的实验结果，将从洋葱皮水中提取的20ml活性成分的初始量(单次使用量)确定为：洋葱皮提取物-10mg/20ml；槲皮素-0.485mg/20ml；槲皮素-4'-糖苷-0.283mg/20ml；原儿茶酸-0.722mg/20ml。使用水、nacl或nacl+nahco3和活性剂(洋葱皮提取物、槲皮素、2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮、槲皮素-4'-糖苷或原儿茶酸)配制不同的药物组合物。用于实验的槲皮素的定性和定量特征如下：槲皮素98％；2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮0.5％；槲皮素-4'-糖苷-0.1％。试验结果证明本发明的有效性治疗鼻窦炎材料和方法研究设计在该研究中使用了42只雄性家兔。将动物分成七组，每组包含六只家兔。第一组作为未处理的对照组，第二组用0.9％nacl溶液进行处理，五个实验组用于测试以下不同的配制品：洋葱皮提取物、槲皮素+2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮槲皮素、槲皮素-4'-糖苷和原儿茶酸。诱发鼻窦炎通过持续三天在家兔的每个鼻腔中注入100μl1％脂多糖(lps)来诱发鼻窦炎(dong-hyunkim等人，2011)。化合物对以下浓度的组合物进行测试：洋葱皮水提取物-1mg/ml；槲皮素(0.009mg/ml)和2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮(0.001mg/ml)的混合物；槲皮素-0.01mg/ml；槲皮素-4'-糖苷-0.25mg/ml；原儿茶酸-0.25mg/ml。在给予前，将化合物在0.9-1％的氯化钠溶液中或在加热至37℃的含有0.75％nacl+0.25％nahco3的溶液中稀释。除了槲皮素+2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮的混合物(其为悬浮液)外，所有配制品均为淡乳白色溶液。治疗方案在每个鼻腔中鼻内给予2ml溶液，每天一次，持续7天。为了使鼻腔与被测物质达到最大接触，在给予期间将家兔保持在“头朝下”的位置。处理后检查最后一次给予后的第二天，通过过量全身麻醉剂处死动物：zoletil(法国维克)和rometar(捷克共和国bioveta)。安乐死后，立即对动物的鼻腔进行目视检查。宏观检查后，将家兔头部的鼻部用10％甲醛固定24小时，然后在盐酸/水(25:1)溶液中脱钙14天。然后，以四个等级将动物的鼻子横向切开：a-门牙；b门牙后区域，c第二腭嵴处，d在第一磨牙前。然后用水将组织洗涤12小时，并使用常规方法包埋在石蜡中。使用切片机从这些组织中制备3-5μm的组织切片。为了检查杯状细胞及其葡糖胺的含量，在ph2.5下用阿尔新蓝对组织切片进行染色。一些组织切片用苏木精和曙红重新染色，一遍进行进一步的组织学检查。使用光学显微镜carlzeissaxioscopea1(德国)以25x、50x、100x、200x和400x的放大倍数对组织学制剂进行形态学研究。使用数码相机axiocamicc1和axiovisionrel.4.8软件(德国)拍摄样品的显微照片。使用axiovisionrel.4.8软件(德国)进行形态测量。在1mm的上皮呼吸区内对杯状细胞进行计数。通过检查各个区域(前庭、呼吸区、嗅觉区和鼻旁窦)中的炎性病变程度，评估急性卡他性鼻窦炎、急性化脓性鼻窦炎的外观、严重程度以及杯状细胞炎症后增生的发生情况。沿着0-3的量表对上皮脱屑程度和粘膜纤毛腺损伤程度进行评分，其中：0无损伤；1轻微损伤；2中度损伤；3严重损伤。通过从0至3进行评分来评估单核和白细胞浸润的程度，其中：0-检查区域中不存在单核细胞；1-检查区域中存在1-5个单核细胞；2-检查区域中存在6-10个单核细胞；3-检查区域中存在超过10个单核细胞。统计分析所有数据均使用描述性统计进行分析。数据分布的正态性通过shapiro-wilks检验进行验证。对于正态性，计算平均值和平均值的标准误差(sem)，并与n(值的数量)一起在表格中示出。当数据不符合正态性标准时，计算中值以及第一和第三四分位距。各组之间的差异根据分布类型，使用参数或非参数检验进行分析。正态分布数据的分析使用单因素分散分析检验(anova)完成，而进一步的事后分析使用tukey的方法完成。不符合正态分布的数据使用非参数kruskal-wallis检验进行分析，而各组之间的差异使用mann-whitney检验进行分析。以0.05的显著水平确定差异。统计分析使用statistica10.0软件(statsoftinc，美国)完成。结果目视检查结果首次给予lps后，所有组的家兔都表现出相同的鼻炎体征：打喷嚏和抓鼻子，这与第一阶段鼻窦炎相对应。在给予的第三天，lps在鼻腔的可见区域中引起鼻充血和粘膜水肿。首次给予被测化合物后，从鼻中观察到水肿和浆液排出物。在研究的第9天和第10天，在治疗组中极少(1/6)观察到鼻腔干燥和打喷嚏但没有分泌物的情况。组织学检查结果鼻前庭的粘膜表现出典型的组织学结构，表征为分层的鳞状上皮，逐渐过渡为简单的呼吸上皮。鼻内衬有两种类型的对应于呼吸区和嗅觉区的粘膜。呼吸区的粘膜表征为假复层柱状纤毛上皮、基底膜和下面的疏松结缔组织。呼吸区的上皮由纤毛上皮细胞、基底细胞和杯状细胞组成。用阿尔辛蓝进行的组织化学染色显示，大多数杯状细胞中都存在含有葡萄糖胺的大囊泡，这表示这些细胞的功能活性增加。我们在基底膜中观察到许多浆液粘液腺。嗅觉区位于背侧鼻甲和鼻腔顶部。嗅觉上皮由支持细胞、嗅觉细胞和基底细胞构成。表3显示了鼻粘膜的形态学数据。表3杯状细胞形态学研究结果(m±sem，n＝6)。*经过tukey检验后，p<0.05；具有统计学显著性差异。主要数据符合正态分布标准。单因素分散分析检验(anova)以及通过tukey检验完成的事后分析进一步揭示了以下差异(表3)：-与对照组相比，给予洋葱皮粗提物和槲皮素+2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮后，家兔的阿尔辛阳性细胞与杯状细胞总数的比率下降。-与对照组相比，给予槲皮素4'-糖苷后，家兔1mm上皮中杯状细胞数量增加。表4炎症的形态测定和评估(评分03)n＝6*具有统计学显著差异，p<0.05；mann-whitney检验表5家兔鼻窦炎症研究结果。*具有统计学显著差异，p<0.05；mann-whitney检验使用kruskal-wallis检验和mann-whitney检验从0到3进行评分对病理性炎症程度进行非参数分析，结果表明各组之间存在以下显著差异：-在接受洋葱皮粗提物、槲皮素+2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮或原儿茶酸的组中，粘膜的白细胞浸润低于对照组。-在接受槲皮素+2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮或槲皮素-4'-葡萄糖苷的组中未观察到上皮脱皮；-在接受洋葱皮粗提物的组中，呼吸区的炎性病变程度明显更低；-在接受槲皮素的组中，没有杯状细胞炎性增生和急性化脓性鼻窦炎的症状；-在接受槲皮素+2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮或洋葱皮粗提物的组中，急性卡他性鼻窦炎的发生率更低；-各组之间在急性化脓性鼻窦炎的外观上未观察到差异。所有杯状细胞都含有被阿尔辛蓝染色的粘多糖。杯状细胞的数量在炎症过程中增加并在处理后一定会减少。从获得的数据可以得出以下结论，这些细胞的比例在诱法炎症后显著增加。一般，这一过程伴有粘膜浸润。如果没有浸润，但杯状细胞的数量仍然很高，则认为是炎症后增生，这是得到改善的迹象。对照组。在对照组中未观察到宏观变化。显微镜检查表明，给予lps会引起呼吸区和嗅觉区的炎症。在前庭中观察到粘膜和下层组织中发生水肿和白细胞浸润。在呼吸区观察到粘液腺发生上皮脱落和萎缩。用阿尔辛蓝染色表明，在呼吸区中杯状细胞存在聚集增生区。上皮的形态计量学评估显示，相对于杯状细胞的总数，含有葡萄糖胺和粘多糖的杯状细胞显著增加。在粘膜和下层组织中还观察到中度淋巴细胞和巨噬细胞浸润。在犁鼻器中发现中度炎性变化。因此，在给予促炎剂lps后，在兔中观察到急性卡他性鼻窦炎(表5)。第二组中用0.9％氯化钠溶液处理的动物在目视观察时未见任何宏观变化。显微镜研究发现以下一些症状，粘膜的呼吸区和嗅觉区上皮脱屑、中度到显著的白细胞浸润到、存在渗出液并且中性粒细胞和细胞碎片数量增加。1mm上皮上的阿尔辛阳性细胞数以及杯状细胞数均低于未处理的动物。这是由于粘膜坏死和上皮炎性病变所致。一般，在该组中观察到急性卡他性鼻窦炎和化脓性鼻窦炎的症状。接受洋葱皮粗提物和槲皮素+2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮的第三组和第四组动物在宏观(目视)检查期间未见疾病症状。与非处理组相比，显微镜检查显示出非常轻微的炎症症状。粘膜出线轻度淋巴细胞浸润，并且在下层组织中几乎不存在。在这两组中均未发现上皮脱屑的症状。我们观察到呼吸区和嗅觉区以及粘液腺有再生迹象。一些动物出现炎后杯状细胞增生。在接受槲皮素+2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮的组中，无急性化脓性鼻窦炎。在分别接受nacl中槲皮素、槲皮素4’-糖苷和原儿茶酸的第五组、第六组和第七组动物中，宏观检查后未观察到外部变化。显微镜研究显示出炎症过程的症状，这比接受洋葱皮粗提物和槲皮素+2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮的动物的症状更严重，但比未处理的家兔的症状更轻。在这些组中未观察到化脓性鼻窦炎的症状。结论用洋葱皮提取物和从其分离的化合物处理后，动物的组织学检查结果表明，与未处理的动物和安慰剂处理的动物相比，洋葱皮提取物和槲皮素+2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮显示出最佳的治疗效果。洋葱皮粗提物的最佳治疗效果可以通过几种化合物的总和进行解释，每种化合物都显示出或多或少的抗炎活性并且可能具有强化能力。意外地，与单独使用槲皮素相比，槲皮素和2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮的混合物的治疗效果最佳。这可以通过两个原因进行解释。首先是存在2-(3,4-二羟基苯甲酰基)-2,4,6-三羟基-3(2h)-苯并呋喃酮。第二是与溶液中的槲皮素相比，悬浮液形式的槲皮素可能具有长效作用。槲皮素-4’-糖苷(gca)和原儿茶酸对鼻窦炎都显示出中等活性。通过将每种被测物质的剂量与所达到的治疗效果相关联，我们得出以下结论，槲皮素在含有nacl或nacl/nahco3的溶液中的悬浮液形式可能是治疗急性和慢性鼻窦炎的首选药物。当前第1页12