丙戊酸钠在制备抑制胶质瘢痕形成的药物中的应用及其药物组合物的制作方法

本发明涉及一种丙戊酸钠在制备抑制胶质瘢痕形成的药物中的应用及其药物组合物。
背景技术：
：脑卒中，又称脑血管意外，是一组以脑组织缺血及出血性损伤症状为主要临床表现的疾病。该病发病急，有极高的致残率和较高的死亡率，是当今世界上危害人类健康的最主要的疾病之一。近年来，我国脑血管疾病患者逐年上升，以缺血性脑血管病最多见。目前，我国每年新发脑中风120-150万人，死亡80-100万人，存活者中约75％致残，5年复发率高达41％。脑卒中是一种常见的中枢神经系统损伤。脑缺血损伤后，一系列的应激反应(例如炎症、酸中毒等)会诱导星形胶质细胞聚集、迁移和增生，我们称之为“反应性星形胶质细胞”。星形胶质细胞被激活后，随着中风时间的延长，在损伤区域聚集了大量的星型胶质细胞。这些细胞的形态发生了明显的变化，细胞胞体肥大肿胀，突触缩短变粗，细胞与细胞之间的生长相互叠加和覆盖，形成胶质瘢痕，而这些胶质瘢痕在缺血再灌注的初期和晚期发挥不同的作用。在脑缺血损伤的早期，反应性星形胶质细胞能够分泌脑源性神经营养因子，抑制炎症反应使神经元免受进一步的损伤。然而，胶质瘢痕作为一道物理屏障，同样会阻碍损伤区域细胞间的物质交换和神经细胞突触的再生，进而影响新的神经环路的建立，成为脑中风患者后期功能恢复过程中的重大障碍。丙戊酸钠(又名vpa)，现有技术中，丙戊酸钠作为一种广谱抗癫痫药被发现，是一种不含氮的广谱抗癫痫药，对多种方法引起的惊厥，均有不同程度的对抗作用，其化学结构式是：现有技术中，未有研究证实，丙戊酸钠可作为脑缺血后抑制胶质瘢痕的药物进行应用。技术实现要素：本发明的目的是提供丙戊酸钠在制备抑制胶质瘢痕形成药物中的应用，在实验中，丙戊酸钠可有效减少大鼠脑组织损伤后胶质瘢痕的形成，显著抑制原代星形胶质细胞的激活，说明其可用于制备抑制胶质瘢痕形成药物中。为了实现上述目的，本发明第一方面提供了一种丙戊酸钠在制备抑制胶质瘢痕形成的药物中的应用，所述丙戊酸钠的结构式为优选地，所述胶质瘢痕为中枢神经系统损伤后，星形胶质细胞活化、增殖所形成的胶质瘢痕。优选地，所述中枢神经系统损伤为缺血性脑卒中、出血性脑卒中、脑外伤或脊髓损伤中的一种或多种。第二方面，本发明提供了一种用于抑制胶质瘢痕形成的药物组合物，其中，由丙戊酸钠和药学上可接受的载体和/或辅料组成，所述丙戊酸钠的结构式为优选地，所述药物组合物为溶剂或稀释剂。优选地，所述药物组合物为适于口服、直肠、局部、口腔、舌下、皮下、肌肉、静脉的制剂。优选地，所述药物组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、混悬剂、糖浆剂、肠溶制剂、乳剂悬浮液或注射剂。优选地，所述药物组合物为注射制剂。本发明提供了丙戊酸钠的新用途，经实验证明，其具有显著的脑神经保护作用，可有效抑制原代星形胶质细胞的激活，显著抑制大鼠脑组织损伤后胶质瘢痕的形成，从而能够明显改善局灶性脑缺血大鼠脑萎缩体积及显著改善其神经症状，促进恢复；表明丙戊酸钠在制备抑制胶质瘢痕形成药物中有重要的应用价值。具体地，本发明与现有技术相比具有以下优点：1、本发明提供了一种丙戊酸钠的新用途，该化合物具有显著的脑神经保护作用，可有效抑制原代星形胶质细胞的激活，显著抑制大鼠脑组织缺血损伤后胶质瘢痕的形成，从而明显改善局灶性脑缺血大鼠脑萎缩体积及显著改善其神经症状，促进恢复，这表明丙戊酸钠在制备抑制胶质瘢痕形成药物中有重要的应用价值。2、本发明为临床上更合理的将丙戊酸钠应用在抑制胶质瘢痕形成药物中提供了实验数据。附图说明图1是实施例1中vpa对改善脑缺血大鼠的神经症状的影响示意图；图2是实施例1中vpa对改善脑缺血大鼠的抓力的影响示意图；图3是实施例1中vpa对改善脑缺血大鼠的脑萎缩的影响示意图；图4是实施例2中vpa对脑缺血性大鼠胶质瘢痕相关蛋白gfap，neurocan和phosphacan的表达的影响示意图；图5是实施例3中vpa对体外胶质瘢痕模型中相关蛋白gfap，neurocan和phosphacan的表达的影响示意图；图6是实施例3中vpa抑制体外胶质瘢痕模型中相关蛋白gfap和neurocan的表达的免疫荧光图谱；图7是实施例3中vpa抑制体外胶质瘢痕模型中相关蛋白gfap和phosphacan的表达的免疫荧光图谱。具体实施方式以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，如无特别说明，所用的各材料均可通过商购获得，如无特别说明，所用的方法为本领域的常规方法。丙戊酸钠(valproate)，以下简称vpa，是一种不含氮的广谱抗癫痫药，对多种方法引起的惊厥，均有不同程度的对抗作用，对于应用于脑缺血后抑制胶质瘢痕的形成方面未有报道，本发明的发明人，通过对vpa进一步研究发现，其有效减少大鼠脑组织损伤后胶质瘢痕的形成，显著抑制原代星形胶质细胞的激活，能够用于抑制胶质瘢痕形成，由此完成了本发明。第一方面，本发明提供一种丙戊酸钠在制备抑制胶质瘢痕形成的药物中的应用，所述丙戊酸钠的结构式为在本发明中，优选地，胶质瘢痕为中枢神经系统损伤后，星形胶质细胞活化、增殖所形成的胶质瘢痕。对于上述中枢神经系统损伤没有特别的限定，包括但不限于缺血性脑卒中、出血性脑卒中、脑外伤或脊髓损伤，在本发明中，优选地，所述中枢神经系统损伤为缺血性脑卒中、出血性脑卒中、脑外伤或脊髓损伤中的一种或多种。第二方面，本发明提供了一种用于抑制胶质瘢痕形成的药物组合物，其特征在于，由丙戊酸钠和药学上可接受的载体和/或辅料组成，所述丙戊酸钠的结构式为在本发明中，对于所述药物组合物的制剂类型没有特别的限定，可以为包括适用于口服、肠胃外(包括皮下、皮内、肌肉、静脉和关节)、直肠和局部(包括皮肤、口腔、舌下和眼内)给药的制剂。在本发明中，所述药物组合物为溶剂或稀释剂。在本发明中，优选地，所述药物组合物为适于口服、直肠、局部、口腔、舌下、皮下、肌肉、静脉的制剂。对于最合适的途径可能取决于受体的状况和病症。该制剂可以方便地以单位剂量的形式存在，并可以通过药学领域所熟知的任意方法制备。对于上述适用于口服给药的制剂可能的存在形式为离散单元形式，例如可以为含有预定量的活性组分的胶囊或片剂、粉末或颗粒、溶液或含水液体或不含水液体的悬浮物、或水包油乳化液或油包水乳化液。活性成分也可以以药丸或膏状的形式存在。在本发明中，优选地，所述药物组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、滴丸剂、混悬剂、糖浆剂、肠溶制剂、乳剂悬浮液或注射剂。上述片剂可以通过加压或模压制成，可任选地伴有一种或多种辅助成分。加压片剂可以通过在合适的仪器中对自由流动形式的活性组分进行压缩而制得，可任选地将活性组分与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或分散剂进行混合。模压片剂可以通过在合适的仪器中将惰性液体稀释剂湿润的粉末化合物模塑成型而制得。所述片剂可以任选地被涂覆，从而使活性组分持续、延迟或受控地释放。对于上述用于肠胃外给药的制剂包括含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和溶质的含水的和不含水的无菌注射液。用于肠胃外给药的制剂还包括含水的和不含水的无菌悬浮物，其可以含有悬浮剂和增稠剂。在本发明中，优选地，所述药物组合物的剂型为注射制剂。对于上述本发明药物组合物的各种剂型可以按照药学领域中熟知的方法进行制备。除非另外定义，本发明所使用的所有技术上和科技上的术语都与本申请所属领域的普通技术人员所理解的常规含义相同。下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：实施例1vpa对大鼠局灶性缺血性脑中风的保护作用。雄性sd大鼠，随机分为对照组(假手术组)、对照给药组(vpa250mg/kg)模型组、模型给药组(vpa250mg/kg)，每组10只。采用线栓法制作大鼠短暂性大脑中动脉闭塞模型(tmcao)。mcao90min后对照给药组和模型给药组的大鼠立即腹腔注射vpa溶液(250mg/kg)，模型组及假手术组的大鼠再灌的同时立即腹腔注射相应体积的生理盐水。首次注射vpa及生理盐水后，次日相同时刻完成第二次注射，之后每天一次，共注射28天。采用longa法对再灌注后的大鼠进行神经症状评分，每周一次，共四周，评分越高，神经功能缺陷越明显。如表1所示的神经症状评分标准。表1评分神经症状0正常，神经功能没有损伤1左侧前肢伸展不完全，神经功能轻微损伤2大鼠行走时向瘫痪侧转圈，神经功能中度损伤3大鼠行走时向瘫痪侧倾倒，神经功能重度损伤4大鼠完全不能行走，意识出现障碍图1是实施例1中vpa对改善脑缺血大鼠的神经症状的影响示意图，mean±sd，n＝10；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01。由图1可知：vpa能够减少脑缺血大鼠的神经症状评分。抓力法进行神经功能：将大鼠放在抓力板上，将抓力板向前推，抓住大鼠尾部，左手松开抓力板，大鼠用力抓住抓力板时，用力向后拉鼠，测定大鼠最大抓力，记下数据。每只大鼠记录10次数据。图2是实施例1中vpa对改善脑缺血大鼠的抓力的影响示意图，mean±sd，n＝10；与假手术组比较##p<0.01；与模型组比较，**p<0.01。由图2可知：vpa能够改善脑缺血大鼠的抓力。抓力法进行神经功能的测定，缺血再灌注28天后切片观察vpa对脑萎缩体积的影响。图3是实施例1中vpa对改善脑缺血大鼠的脑萎缩的影响示意图，mean±sd，n＝10；与假手术组比较##p<0.01；与模型组比较，**p<0.01。由图3可知：vpa能够改善脑缺血大鼠的脑萎缩。实施例2vpa对缺血性大鼠胶质瘢痕相关蛋白gfap，neurocan和phosphacan的表达的抑制作用。雄性sd大鼠，随机分为对照组(假手术组)、对照给药组(vpa250mg/kg)、模型组、模型给药组(vpa250mg/kg)，每组3只。采用线栓法制作大鼠短暂性大脑中动脉闭塞模型(tmcao)。mcao90min后对照给药组和模型给药组的大鼠立即腹腔注射vpa溶液(250mg/kg)，模型组及假手术组的大鼠再灌的同时立即腹腔注射相应体积的生理盐水。首次注射vpa及生理盐水后，次日相同时刻完成第二次注射，之后每天一次，共注射7天。断头取脑，检测胶质瘢痕相关蛋白gfap，neurocan和phosphacan的表达。图4是实施例2中vpa对脑缺血性大鼠胶质瘢痕相关蛋白gfap，neurocan和phosphacan的表达的影响示意图，mean±sd，n＝3，与对照组比较#p<0.05，##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05,**p<0.01。实施例3vpa对体外胶质瘢痕模型中相关蛋白gfap，neurocan和phosphacan的表达的抑制作用。原代星形胶质细胞在培养皿或24孔板中培养到一定程度时(约占培养皿或培养板中孔的80％)，分为对照组(non-ogd)、对照给药组(non-ogd+vpa)、胶质瘢痕模型组(ogd6h-re24h)以及模型给药组(ogd6h-re24h+vpa)，采用westernblot方法或免疫荧光法检测胶质瘢痕相关蛋白gfap，neurocan和phosphacan的表达。图5是实施例3中vpa对体外胶质瘢痕模型中相关蛋白gfap，neurocan和phosphacan的表达的影响示意图，mean±sd，n＝3，与对照组比较##p<0.01；与模型组比较，**p<0.01。图6是实施例3中vpa抑制体外胶质瘢痕模型中相关蛋白gfap和neurocan的表达的免疫荧光图谱；其中，绿色荧光代表gfap，红色荧光代表neurocan。图7是实施例3中vpa抑制体外胶质瘢痕模型中相关蛋白gfap和phosphacan的表达的免疫荧光图谱；其中，绿色荧光代表gfap，红色荧光代表phosphacan。以上结果表明：vpa对缺血性脑损伤具有一定的保护作用，能显著抑制胶质瘢痕的形成，可以用于这一类的疾病的预防和治疗。以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。当前第1页12