本发明涉及天然药物提取技术领域，尤其涉及一种蒲公英提取物及其制备方法。
背景技术：
蒲公英(Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.)菊科，蒲公英属多年生草本植物。蒲公英别名黄花地丁、婆婆丁、华花郎等。蒲公英植物体中含有蒲公英醇、蒲公英素、胆碱、有机酸、菊糖等多种健康营养成分。性味甘，微苦，寒。归肝、胃经。有利尿、缓泻、退黄疸、利胆等功效。治热毒、痈肿、疮疡、内痈、目赤肿痛、湿热、黄疸、小便淋沥涩痛、疔疮肿毒，乳痈，瘰疬，牙痛，目赤，咽痛，肺痈，肠痈，湿热黄疸，热淋涩痛。治急性乳腺炎，淋巴腺炎，瘰疬，疔毒疮肿，急性结膜炎，感冒发热，急性扁桃体炎，急性支气管炎，胃炎，肝炎，胆囊炎，尿路感染等。蒲公英可生吃、炒食、做汤，是药食兼用的植物。
近年来，研究表明蒲公英的药用价值与其所含黄酮类物质有着极大的关系，引起了人们的关注。黄酮类有效物质对治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面均有显著效果，无副作用，具有开发保健食品或药品的潜力。目前有文献报道的蒲公英总黄酮提取方法包括醇提取法和微波法，但是这些方法的提取率较低。谷肄静等公开了一种蒲公英总黄酮的提取方法，最终优化出以40％乙醇为提取溶剂，在70℃、料液比1:20的条件下提取4次，每次提取30min，所得蒲公英粗总黄酮提取率仅为17.51％(以芦丁计)(谷肄静,王立娟.蒲公英总黄酮的提取及其抑菌性能[J].东北林业大学学报,2007,35(8).)。中国专利CN102133542A公开了一种蒲公英总黄酮的提取方法，以石油醚对蒲公英进行提取，再加入乙醇后进行超声，得到蒲公英总黄酮提取物，该方法提取到的蒲公英总黄酮提取物中，总黄酮含量最高仅为25.3％。
可见，目前的蒲公英总黄酮提取方法的提取率较低，本领域缺乏一种总黄酮提取率高的方法。
技术实现要素：
本发明为了克服现有蒲公英总黄酮提取物制备方法的提取率低的缺陷，提供了一种蒲公英提取物及其制备方法，制备成本低，总黄酮提取率高。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种蒲公英提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将蒲公英打浆，得到的蒲公英浆以甲醇提取，固液分离，得到甲醇提取液；
(2)将甲醇提取液浓缩至原体积的10％后，以60～90℃沸程石油醚萃取得到的浓缩液，分离石油醚层，回收石油醚后得到初级提取物1；
(3)将初级提取物1与甲醇按照质量比1:3～5的比例混合，静置，过滤，回收过滤所得滤液中的甲醇，得到初级提取物2；
(4)将初级提取物2以水稀释后，以LSA-10大孔树脂吸附，依次以pH值为5的盐酸溶液、水和甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱部分，干燥，得到蒲公英提取物。
优选的，步骤(1)所述蒲公英浆与甲醇的质量比为1:8～15。
优选的，步骤(1)所述甲醇提取的次数为2～4次。
优选的，每次甲醇提取的温度独立的为80～88℃，每次甲醇提取的时间独立的为2～4h。
优选的，步骤(2)所述萃取的次数为2～4次。
优选的，步骤(4)所述初级提取物2与水的质量比为1:2～4。
优选的，所述步骤(4)中，pH值为5的盐酸溶液的洗脱用量为3BV，洗脱流速为2BV/h；
水的洗脱用量为3BV，洗脱流速为3BV/h。
优选的，所述蒲公英为野生蒲公英。
本发明还提供了一种上述技术方案所述制备方法得到的蒲公英提取物，其特征在于，总黄酮的质量百分含量为70％以上。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
本发明提供了一种蒲公英提取物的制备方法，将蒲公英打浆后进行甲醇提取，所得甲醇提取液浓缩后用石油醚萃取，得到初级提取物1；再以甲醇提取，得到初级提取物2；以LSA-10大孔树脂进行吸附，依次以pH值为5的盐酸溶液、水和甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱部分，干燥，得到蒲公英提取物。本发明提供的制备方法操作简便，所用LSA-10大孔树脂可再生利用，制备成本低且环境污染小；本发明使用甲醇和石油醚作为提取溶剂和洗脱溶剂，安全性高，廉价易得，生产成本较低；本发明制备得到的蒲公英提取物中总黄酮含量高，可达到70％以上。
具体实施方式
本发明提供了一种蒲公英提取物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将蒲公英打浆，得到的蒲公英浆以甲醇提取，固液分离，得到甲醇提取液；
(2)将甲醇提取液浓缩至原体积的10％后，以60～90℃沸程石油醚萃取得到的浓缩液，分离石油醚层，回收石油醚后得到初级提取物1；
(3)将初级提取物1与甲醇按照质量比1:3～5的比例混合，静置，过滤，回收过滤所得滤液中的甲醇，得到初级提取物2；
(4)将初级提取物2以水稀释后，以LSA-10大孔树脂吸附，依次以pH值为5的盐酸溶液、水和甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱部分，干燥，得到蒲公英提取物。
本发明将蒲公英打浆，得到的蒲公英浆以甲醇提取，固液分离，得到甲醇提取液。在本发明中，所述蒲公英优选为野生蒲公英。在本发明中，所述蒲公英优选为新鲜蒲公英。
在本发明中，所述蒲公英浆与甲醇的质量比优选为1：8～15，更优选:1:10。本发明对所述蒲公英打浆无特殊限定，采用本领域已知的方法进行即可。在本发明中，所述甲醇提取的次数优选为2～4次，更优选为3次。在本发明中，每次甲醇提取的温度优选为80～88℃，更优选为85±1℃。在本发明中，每次甲醇提取的时间优选为2～4h，更优选为3h。在本发明中，进行多次甲醇提取时，将每次甲醇提取得到的滤液进行合并，即得甲醇提取液。本发明对所述固液分离方法无特殊限定，采用本领域已知的方法即可，例如离心或过滤。
得到甲醇提取物后，本发明将甲醇提取液浓缩至原体积的10％后，以60～90℃沸程石油醚萃取得到的浓缩液，分离石油醚层，回收石油醚后得到初级提取物1。
在本发明中，所述60～90℃沸程石油醚萃取的次数优选为2～4次，更优选为3次。本发明对所述甲醇提取液浓缩的方式无特殊限定，采用本领域已知方法进行即可。在本发明中，所述60～90℃沸程石油醚与浓缩液的质量比优选为1:25～40，更优选为1:30。本发明对所述回收石油醚的方法无特殊限定，采用本领域已知方法即可。
得到初级提取物1后，本发明将初级提取物1与甲醇按照质量比1:3～5的比例混合，静置，过滤，回收过滤所得滤液中的甲醇，得到初级提取物2。
在本发明中，所述初级提取物1与甲醇的质量比优选为1:4。在本发明中，所述过滤后优选的对滤液进行减压浓缩，再回收甲醇。本发明所述减压浓缩按照常规试验操作进行即可，本发明对此无特殊限定。
得到初级提取物2后，本发明将初级提取物2以水稀释后，以LSA-10大孔树脂吸附，依次以pH值为5的盐酸溶液、水和甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱部分，干燥，得到蒲公英提取物。本发明采用LSA-10大孔树脂进行吸附，该大孔树脂可再生利用，成本低并且循环利用对环境的污染小。
在本发明中，所述初级提取物2与水的质量比优选为1:2～4，更优选为1:3。在本发明中，所述pH值为5的盐酸溶液的洗脱用量优选为3BV，洗脱流速优选为2BV/h；在本发明中，所述盐酸溶液优选为稀盐酸溶液，所述稀盐酸溶液的质量百分浓度不超过20％。所述水的洗脱用量优选为3BV，洗脱流速优选为3BV/h。在本发明中，以甲醇为洗脱溶液洗脱至无蒲公英总黄酮流出为止。甲醇的洗脱流速优选为1BV/h。
本发明还提供了一种上述技术方案所述制备方法得到的蒲公英提取物，其中的总黄酮的质量百分含量为70％以上。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
1)取蒲公英新鲜材料，水洗净，打浆，得到蒲公英浆；以10倍质量于蒲公英的纯甲醇提取三次(每次提取温度85±1℃，提取时间为3h)。每次提取的混合物进行300目滤过，合并滤液，减压浓缩至原总体积的十分之一，得浓缩液；按照质量比1：30的比例将浓缩液与60-90℃沸程石油醚混合，萃取三次，回收石油醚后进一步浓缩至原来一半，得到初步提取物1；
2)初步提取物1加纯甲醇至初步提取物1质量的5倍，静置、过滤、减压浓缩、回收甲醇，得初步提取物2；
3)初步提取物1加水稀释至相当于4倍浓缩液的重量，加上LSA－10大孔树脂柱上进行吸附，先以2BV/h的流速，用pH＝5的稀盐酸溶液3BV洗脱,再以3BV/h的流速，用3BV纯水洗脱，弃去洗脱液，然后以1BV/h的流速用100％甲醇洗脱，最后以甲醇洗脱液，60℃浓缩，真空干燥，得蒲公英提取物。
按照下述检测方法对制备的蒲公英提取物进行检测：
①对照品制备：精密称取芦丁对照品208mg，置于100ml害量瓶中，加70％乙醇使溶解并稀释至刻度，摇匀。
②样品溶液制备精密称取样品050g精密加入70％乙醇50ml，称定重量，超声处理30分钟，称定重量，用70％乙醇补足减失重量即得。
③标准曲线的制备精密称取对照品溶液0.0、l.0、20.3.0、4.0.5.0ml分别置于25ml色管中，加70％z醇10ml，加5％亚硝酸钠溶液1ml.摇匀，放置6分钟，加lmol/氢氧化钠溶液l0ml，加70％乙醇置刻度，摇匀，放置15分钟。各取10ml置于50ml容量瓶中，用70％乙醇稀释至到度。在510nm的波长下测定吸光度。
(2)①样品溶渣的制备：分别精确称取80℃温干燥的样品用50％甲醇回流提取，料液比1：15提取两次，每次30min，将两次提取液合并浓缩至一定体积，用30％甲醇定容至50ml容量瓶中。从其中取出12溶液放入100ml容量瓶中，稀释至刻度，再从100血容量瓶中取出l.5ml溶液，放至10ml容量瓶中，定容，为待测样品液Ia和IIa。
②最大吸收波长的选择：分别作样品液Ia、lla及芦丁标准品的吸收曲线，均在350nm处有一强吸收，因此选择350nm为测定波长。
③标准曲线的制定：精密称取芦丁对照品103mg，用少量30％乙醇溶解后，转移至50血容量瓶，用蒸馏水定容至刻度。分别精密量取2m1、3ml、4ml、5ml、6ml芦丁溶液置于100血容量瓶中，于350nm波长处测定吸光值，以芦丁空白为参比，以芦丁浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线，提示4.12～12.36mg/103ml浓度之间，吸光度值与浓度呈现良好的线性关系。
④含量测定结果：分别吸取2.2.1中Ia待测样品液各适量于石英比色池中.按标准芦丁一吸光度测定法，以样液空白参比，于350nm波长下测定吸光值，计算各提取液中总黄酮含量。计算公式为：
样品总黄酮含量(％)＝0.03692(A+0.1644)/W。
注：上式为通过回归方程转化而来，式中A为测得样品液的吸光度值，w为称样量。
经检测，上述方法制备得到的蒲公英提取物中，总黄酮的质量百分含量70％。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。