土贝母苷甲作为抑制Yoda1激活Piezo1通道的特异性拮抗剂的应用的制作方法

本发明属于生化领域，具体涉及土贝母苷甲作为特异性抑制yoda1对piezo1通道的激活作用的拮抗剂的应用。

背景技术：

piezo1是一种机械敏感的ca²⁺通透性非选择性阳离子通道蛋白，以三聚体的形式聚集在中心离子孔周围，具有螺旋桨般的结构，对na⁺、k⁺和ca²⁺具有渗透性。piezo1被发现胚胎血管成熟、血压调节、生理功能、高血压依赖性动脉结构重建、尿渗透调节、上皮内环境稳定和轴突生长等方面的作用已被证实。piezo1的功能突变不仅与一种溶血性贫血(遗传性口腔细胞增生症)有关，与常染色体隐性遗传的先天性淋巴管发育不良也有关系。然而，关于它的药理学探索尚属初级阶段。

yoda1是第一个被发现能够特异性激活piezo1通道的化学激活剂，而且只对piezo1有特异性作用，对于piezo2无明显作用。yoda1的作用不需要其他蛋白质或特定脂质结构域，可以在无机械刺激的情况下激活piezo1。目前，piezo1通道拮抗剂目前发现的只有gd³⁺和钌红这两个，而且并不是piezo1特异的，寻找一种piezo1通道特异性的拮抗剂具有重要意义。

技术实现要素：

针对上述问题，本发明的目的是提供一种能有效抑制yoda1对piezo1通道的激活作用的特异性拮抗剂。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：土贝母苷甲作为抑制yoda1激活piezo1通道的特异性拮抗剂的应用。

土贝母苷甲作为用于制备调节piezo1通道的药物的应用。

所述药物包括药学上可接受的辅料。

土贝母苷甲是中草药土贝母的主要活性成分，成本较低，而piezo1在血压调节、生理功能、高血压依赖性动脉结构重建、尿渗透调节、上皮内环境稳定和轴突生长等方面都有多种作用；由于土贝母苷甲能够特异抑制piezo1通道激活作用，因此可用于制备调节piezo1通道的相关药物制剂，对piezo1通道相关的生理研究和疾病治疗具有重要意义。

附图说明

图1为土贝母苷甲在内皮细胞对yoda1的反应结果。

图2为土贝母苷甲在trpc5过表达的hek293t细胞的反应结果。

图3为土贝母苷甲在trpm2过表达的hek293t细胞的反应结果。

具体实施方式

为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1土贝母苷甲在内皮细胞抑制yoda1的反应

选取确定表达内源性piezo1通道的人脐静脉内皮细胞(huvecs)，铺96孔板后，用10μm土贝母苷甲(tbms1)预处理半小时，同时设立正常对照组(dmso)，加入piezo1特异性激活剂yoda1，采用高通量钙流工作站进行细胞通过piezo1通道进入胞内ca²⁺的测量。

结果表明土贝母苷甲能够抑制yoda1反应(图1a)，说明土贝母苷甲能抑制yoda1激活的piezo1通道的钙内流，差异具有统计学意义(p<0.05)(图1b)。此外，tbms1对yoda1诱导的ca²⁺进入具有浓度依赖性的抑制作用，土贝母苷甲的50％抑制浓度ic50为1.11μm(图1c)。

实验例2土贝母苷甲在trpc5过表达的hek29t细胞的反应结果

选取在人源胚胎肾细胞(hek293t)上过表达trpc5，铺96孔板后，用10μm土贝母苷甲(tbms1)预处理半小时，同时设立正常对照组(dmso)，加入钙通道激活剂gadoliniumiii(gd³⁺)，采用高通量钙流工作站进行细胞通过trp通道进入胞内ca²⁺的测量。

结果表明土贝母苷甲与对照组dmso反应无明显差异(图2a)，说明土贝母苷甲不影响gd³⁺激活的trp通道的钙内流，差异无统计学意义(p＞0.05)(图2b)。

实验例3土贝母苷甲在trpm2过表达的hek29t细胞的反应结果

选取在人源胚胎肾细胞(hek293t)上过表达trpm2基因，铺96孔板后，用10μm土贝母苷甲(tbms1)预处理半小时，同时设立正常对照组(dmso),加入钙通道激活剂过氧化氢(h2o2)，采用高通量钙流工作站进行细胞通过trp通道进入胞内ca²⁺的测量。

结果表明土贝母苷甲与对照组dmso反应无明显差异(图3a)，说明土贝母苷甲不影响h2o2激活的钙通道的钙内流，差异无统计学意义(p＞0.05)(图3b)。

综合上述实施例1～3的实验结果最终得出结论：土贝母苷甲可以抑制yoda1激活的piezo1通道的钙内流，且通过验证它不影响trp通道的钙内流，说明其具有piezo1通道的选择性，是潜在的天然的piezo1通道抑制剂。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

技术特征：

1.土贝母苷甲作为抑制yoda1激活piezo1通道的特异性拮抗剂的应用。

2.土贝母苷甲作为用于制备调节piezo1通道的药物的应用。

3.如权利要求2所述的药物，其特征在于，包括药学上可接受的辅料。

技术总结
本发明公开了土贝母苷甲作为抑制Yoda1激活Piezo1通道的特异性拮抗剂的应用。所述特异性拮抗剂可用于制备调节Piezo1通道的药物，所述药物还包括药学上可接受的辅料。土贝母苷甲的特异抑制Piezo1通道激活的可用于制备调节Piezo1通道的药物，在调节多种Piezo1通道相关的生理活动过程中有重要的意义。

技术研发人员：李静;刘思琳
受保护的技术使用者：广州中医药大学(广州中医药研究院)
技术研发日：2019.08.19
技术公布日：2019.11.15