本发明涉及医药技术领域，具体涉及知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ在制备抗认知障碍药物中的应用。
背景技术：
知母为百合科植物知母(anemarrhenaasphodeloidesbge)的干燥根茎。味苦、甘，性寒。归肺、胃、肾经。具有清热泻火，滋阴润燥的作用。用于外感热病，高热烦渴，肺热燥咳，骨蒸潮热，内热消渴，肠燥便秘。知母作为传统中药，知母皂苷是其主要成分之一，在其根茎中含皂苷约6％，种类繁多，且具有广泛的活性和药理作用。根据皂苷类苷元结构的不同，可主要将其归纳为螺甾皂苷、呋甾皂苷两大类。研究发现，知母具有抗肿瘤、抗老年痴呆、改善学习记忆能力、抗凝血、抗血栓、降血糖、降血脂、抗抑郁、降血压等药理活性。知母皂苷是临床常用中药材知母的最主要活性成分，具有广泛的生物活性和药理作用。研究表明，知母皂苷及其苷元具有防治老年痴呆症、保护脑缺血损伤、抗凝血、抗氧化、抗肿瘤、抗骨质疏松、抗炎、降血压、降血糖及降血脂等药理活性。已经报道的皂苷类成分有二十多种，例如知母皂苷ai(a-i)、知母皂苷aii(a-ii)、知母皂苷aiii(a-iii)、知母皂苷aiv(a-iv)、知母皂苷b、知母皂苷bi(b-i)、知母皂苷bii(b-ii)等等。
认知是机体认识和获取知识的智能加工过程，涉及学习、记忆、语言、思维、精神、情感等一系列随意、心理和社会行为。认知障碍指与上述学习记忆以及思维判断有关的大脑高级智能加工过程出现异常，从而引起严重学习、记忆障碍，同时伴有失语或失用或失认或失行等改变的病理过程。认知的基础是大脑皮层的正常功能，任何引起大脑皮层功能和结构异常的因素均可导致认知障碍。抑郁症是一种普遍的精神障碍，能够引起精神及身体的伤害。抑郁症主要的特点是情绪低落，快乐感缺失，甚至悲观厌世，可有自杀企图或行为，这种状态同时伴有疲劳，注意力不集中，睡眠障碍及认知、语言功能障碍等。目前，临床研究不能完全阐明抑郁症的发病机制，但可以肯定的是，生物、心理与社会环境诸多方面因素参与了抑郁症的发病过程。文献《知母皂苷及其苷元的药理作用研究进展》中记载知母皂苷具有抗氧化作用，其中知母皂苷i、ia、b-ii和b-iii均对甲酰-甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸、花生四烯酸诱导的过氧化物有抑制作用，其强度与浓度呈正比关系。知母皂苷b-i仅对fmlp诱导的过氧化物有增强作用，而对其他两者诱导的过氧化物基本无作用，知母皂苷a-iii对pma诱导的过氧化物有增强作用而对aa诱导的过氧化物有显著抑制作用。此外，有文献报道知母皂苷对抑郁具有治疗作用，但现有文献多集中在单体知母皂苷b-ⅱ，如文献《知母皂苷b-ⅱ抗抑郁作用及其机制研究》。经文献检索等，到目前为止，尚未发现有知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ在制备抗认知障碍药物的直接相关报道。
技术实现要素：
发明人研究发现知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ具有显著的抗认知障碍作用。经动物实验证明：知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ成分抗认知障碍作用。实验发现知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ对认知障碍起着治疗作用。
本发明的第一个目的是针对现有技术中的不足，提供知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ新的用途。
本发明的第二个目的是针对现有技术中的不足，提供一种抗认知障碍疾病的药物。
为实现上述第一个目的，本发明采取的技术方案是：
知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ作为活性成分在制备抗认知障碍疾病产品中的应用。
另一方面，本发明还提供知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ作为活性成分的组合物在制备抗认知障碍疾病产品中的应用。
在上述产品或组合物中，包括0.01～99.99％的知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ，以及0.01～99.99％的辅助成分，所述百分比为占所述产品或组合物的质量百分比。较佳的，所述产品或组合物中活性成分知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ的重量百分比为60.00～80.00％，所述辅助成分所占重量百分比为20.00～40.00％。
在上述产品或组合物中，所述的认知障碍疾病是指精神衰弱、癔症、抑郁症、老年痴呆或精神分裂。
在上述产品或组合物中，所述的抗认知障碍疾病是指用于预防、治疗认知障碍疾病的产品中的一种。
在上述产品或组合物中，所述产品包括药物、试剂或食品中的一种；较佳的，所述产品是指药品。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
一种抗认知障碍疾病的药物，所述抗认知障疾病的药物的活性成分为知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ。
在上述药物中，作为一个优选方案，所述药物还可包括一种或多种制药学上可接受的辅助成分，所述制药学上可接受的辅助成分为赋形剂、填充剂或稀释剂。
在上述药物中，包括0.01～99.99％的知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ，以及0.01～99.99％的辅助成分，所述百分比为占所述产品或组合物的质量百分比。较佳的，所述产品或组合物中活性成分知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ的重量百分比为60.00～80.00％，所述辅助成分所占重量百分比为20.00～40.00％。
在上述药物中，所述的抗认知障碍疾病是指用于预防、治疗认知障碍疾病的产品中的一种。
本发明的药物可以为本领域常规的各种剂型，较佳的为固体、半固体或液体的形式，可以为水溶液、非水溶液或混悬液，更佳的为粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、丸剂、溶液、悬浮液或注射液等。所述药物的给药途径较佳的为注射给药或口服给药。所述注射给药较佳的包括静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮内注射或皮下注射等途径。
所述的药物还可进一步包含常规载体，例如：稀释剂、赋形剂和水等，填充剂如淀粉、蔗糖，乳糖、微晶纤维素等；粘合剂如纤维素衍生物、藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；润湿剂如甘油；崩解剂如羧甲基淀粉钠、羟丙纤维素、交联羧甲基纤维素、琼脂、碳酸钙和碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇、十二烷基硫酸钠；吸附载体如高龄土和皂粘土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和镁、微粉硅胶和聚乙二醇等。另外还可以在药物中加入其它辅剂如香味剂、甜味剂等。
本发明的上述产品、组合物以及药物可以包括“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ。“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间下有效达到所需治疗效果的量。知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ的治疗有效量可以根据诸如个体的病况、年龄、性别和体重以及该知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ在该个体引起所需反应的能力等因素而变化。治疗有效量亦指该知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ的有益治疗效果超过其任何毒性或有害效果的量。“预防有效量”是指在必要剂量和时间下有效达到所需预防效果的量。因为预防剂量用于患病前或疾病早期的受治疗者，预防有效量通常小于治疗有效量。本发明知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ的治疗或预防有效量的典型的非限制性范围是5～20mg/kg，更优选为5～10mg/kg。应注意，剂量值将根据欲减轻的疾病类型和严重性变化，也就是说用于患者时，本发明所述的知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ剂量或用量，通常根据患者或使用者的年龄和体重以及身体状况或患者症状的状况来决定。另外，应理解，对于任何特定受治疗者，应随着时间根据个体需要和给与或监督给与所述组合物的人的专业判断调整特定剂量制度，并且本文设定的剂量范围仅为例证性的，并不会限制要求保护的组合物的范围或实践。
本发明提出的知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ作为活性成分在抗认知障碍疾病中的应用系首次公开。本发明通过慢性温和不可预知刺激大鼠模型，进行不同干预组大鼠强迫游泳实验、旷场实验，并检测大鼠血清中5-羟色胺(5-ht)、皮质酮(cort)及促肾上腺皮质激素(acth)水平。动物实验证明：知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ具有明显的抗抑郁作用。
本发明首次通过实验证明，知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ可以单独使用具有抗认知障碍作用，药物活性成分可通过人工化学合成技术进行大规模制备。由于药物的活性成分单一，药物制备过程中质量易控，可实施性强，为将来药物开发中低成本和高产率的制备奠定了基础。另外，此类药物的制剂形式多样，可根据患者需要制成不同制剂形式，还可作为抗认知障碍的食品和保健品的活性成分，便于不同疾病患者服用。本发明的新型抗认知障碍药物的发现，具有非常好的开发应用前景。
具体实施方式
本发明研究了现有的知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ抗认知障碍的新的药理作用和新用途，提供了一种新的具有抗认知障碍的作用的药物。下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明记载的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
实施例1：知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ对抑郁症大鼠的抗抑郁作用
一、实验方法：sd雄性大鼠60只(由中国人民解放军第二军医大学实验动物中心提供)，体重180-220g。所有大鼠单笼饲养，连续接受35d各种不同的应激刺激，包括：4℃冰水游泳5min、开灯过夜(白炽灯，5w，900cm2)、夹尾巴10min、倾斜45度过夜、禁水24h、足底电击(电压50mv，每隔30s刺激1次，持续10s，共8次)、禁食24h、湿笼(白天将300ml水泼入垫料中，8h后换干垫料)。每天随机接受2种不同的刺激，且相邻的2d内所予刺激均不相同，末次刺激后进行各项指标检测。
二、实验步骤：
(1)配置药品：精密称取知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ，配成1mg/ml待用；氟西汀片剂用生理盐水溶解，配成浓度1mg/ml，待用。
(2)分组并标记：将60只大鼠随机分成6组并标记，分别为空白对照组、模型组、阳性药组(氟西汀10mg/kg/d)、知母皂苷bⅰ组(剂量60mg/kg)、知母皂苷ⅰa知母皂苷、知母皂苷aⅲ组(剂量60mg/kg)。给药组边造模边给药，连续5周灌服给药。
三、观测指标
①旷场试验
将大鼠放入敞箱中间，记录3min内大鼠穿过方格的数量，三足以上穿过一格为1分，水平穿过的格子总数为水平运动分数；同时统计其双足垂直离地的次数，垂直离地一次为1分，垂直离地的次数为大鼠垂直运动的得分。水平运动和垂直运动总和为旷场运动得分。本试验可检测大鼠自主活动能力和对外界的好奇程度，慢性应激处理后的大鼠旷场试验得分会明显降低。结果见下表1。
表1各组大鼠旷场实验结果(
注：与空白对照组比较，#p<0.05,##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
给予应激刺激后，模型组大鼠的水平穿越格数、竖立次数均显著低于正常组(p<0.01)，说明大鼠出现抑郁症状，造模成功。与模型组相比，知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ组和氟西汀组大鼠的水平穿越格数、竖立次数均有增加，差异具有统计学意义(p<0.05，p<0.01)。
②强迫游泳试验
将大鼠放入直径20cm、深70cm的透明水缸内，保持水温25℃，先将大鼠放入适应性游泳1min，随后记录大鼠4min内游泳不动的时间，本试验可反映大鼠在紧急情况下本能的求生欲望，慢性应激处理后大鼠的游泳不动时间会延长。结果见下表2。
表2各组大鼠游泳不动时间的比较
注：与空白对照组比较，#p<0.05,##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
造模后，与空白对照组相比，模型组大鼠强迫游泳不动时间显著延长(p<0.01)，大鼠出现抑郁症状。与模型组相比，知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ组和氟西汀组大鼠不动时间减少，差异具有统计学意义(p<0.05)。
③血清中5-ht、cort及促acth水平检测
3％戊巴比妥钠0.3～0.4ml注入腹膜腔内麻醉大鼠，腹主动脉取5ml血液，保留标本。常温静置1h后放入离心机进行离心。4℃，1500r/min，离心15min，取上部血清，-80℃冰箱保存。根据试剂盒说明书用elisa法检验血清中5-ht、cort及促acth水平。结果见下表3。
表3各组大鼠血清中5-ht、cort、acth含有量的比较
注：与空白对照组比较，#p<0.05,##p<0.01；与模型组比较，*p<0.05，**p<0.01
模型组大鼠血清中5-ht、cort、acth水平显著低于空白对照组(p<0.01)。与模型组相比，氟西汀组和知母皂苷bⅰ组的5-ht、cort、acth水平显著升高(p<0.01)，知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ组的cort、acth水平显著升高，差异具有统计学意义(p<0.01)。
上述结果表明，知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ具有抗抑郁作用。
实施例2：知母皂苷bⅰ/知母皂苷ⅰa/知母皂苷aⅲ片剂的制备
取知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ，以及适量的辅料，辅料包括淀粉、乳糖、羧甲基淀粉钠、淀粉浆。先将药物活性成分过筛，与淀粉和乳糖混匀，加入适量的淀粉浆和羧甲基淀粉钠搅拌均匀，筛网制粒，分析含量后压片，包装成品。所述知母皂苷bi与辅助成分的用量为0.01～99.99％：0.01～99.99％。具体用量可根据制剂的生产需要进行选择。
实施例3：知母皂苷bⅰ/知母皂苷ⅰa/知母皂苷aⅲ胶囊剂的制备
取知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ，以及适量的辅料，辅料包括淀粉、微粉硅胶。先将药物活性成分过筛，与适量淀粉、微粉硅胶混匀，直接装入胶囊内，封装、包装成品。所述知母皂苷bi与辅助成分的用量为0.01～99.99％：0.01～99.99％。具体用量可根据制剂的生产需要进行选择。
实施例4：知母皂苷bⅰ/知母皂苷ⅰa/知母皂苷aⅲ粉针剂的制备
取知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ，以及适量的辅料，辅料包括甘露醇和注射用水。先将药物活性成分过筛，加入到适量注射用水中，搅拌使其溶解，加入处方量甘露醇，搅拌使其完全溶解，加入液体量0.1％针用活性炭，充分搅拌，脱碳过滤。用微孔滤膜过滤，灌装、冷冻干燥、压塞扎盖、包装成品。所述知母皂苷bi与辅助成分的用量为0.01～99.99％：0.01～99.99％。具体用量可根据制剂的生产需要进行选择。
实施例5：知母皂苷bⅰ/知母皂苷ⅰa/知母皂苷aⅲ葡萄糖输液的制备
取知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ2g，先后加入适量聚乙二醇、葡萄糖和注射用水，搅拌使其溶解；加注射用水至5000ml；用0.22μm微孔滤膜过滤；分装灌封，每瓶100ml，灭菌即可。所述知母皂苷bi与辅助成分的用量为0.01～99.99％：0.01～99.99％。具体用量可根据制剂的生产需要进行选择。
实施例6：知母皂苷bⅰ/知母皂苷ⅰa/知母皂苷aⅲ口服液的制备
取知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ，加入溶剂溶解，溶剂为乙醇、丙二醇、甘油、peg400或水，然后加入辅料三氯蔗糖和柠檬味香精，配成100ml溶液，分装，湿热灭菌灌装即得口服液。所述知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ与辅助成分的用量为0.01～99.99％：0.01～99.99％。具体用量可根据制剂的生产需要进行选择。
本发明首次通过实验证明，知母皂苷bⅰ、知母皂苷ⅰa、知母皂苷aⅲ可以单独使用具有抗认知障碍作用，药物活性成分可通过人工化学合成技术进行大规模制备。由于药物的活性成分单一，药物制备过程中质量易控，可实施性强，为将来药物开发中低成本和高产率的制备奠定了基础。另外，此类药物的制剂形式多样，可根据患者需要制成不同制剂形式，还可作为抗认知障碍的食品和保健品的活性成分，便于不同疾病患者服用。本发明的新型抗认知障碍药物的发现，具有非常好的开发应用前景。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。