专利名称：一种麦冬皂苷d的提取方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，尤其涉及一种麦冬皂苷D的提取方法。
背景技术：
麦冬Ophiopogon japonicus (Thunb. ) Ker-Gawl.又名沿阶草、书带草、麦门冬，为
百合科沿阶草属多年生常绿草本植物，是一味常用于滋阴的中药，始于《神农本草经》，历代本草都有记载。麦冬具有养阴生津，润肺清心。可用于肺燥干咳，虚痨咳嗽，津伤口渴，心烦失眠，内热消渴，肠燥便秘，咽白喉等症。现代研究发现麦冬含有留体皂苷、高异黄酮、多糖、氨基酸等成分，药理实验表明麦冬皂苷类成分具有一定的抗心肌缺血、抗心律失常等作用。麦冬皂苷D =C44H7tlO16,属于甾体皂苷类，易溶于乙醇和水，不溶于丙酮、石油醚等非极性溶剂。其对心脑血管系统方面具有显著的作用，如蒋风荣等发表的“麦冬皂苷D对过氧化氢造模的HUVEC保护作用机制研究”，该文献明确了麦冬皂苷D可以稳定线粒体膜电位， 减少钙离子内流，增加细胞的活力，对人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)有一定的保护作用。 因此本发明提供一种麦冬皂苷D的分离方法，为麦冬有效成分的开发奠定基础。现有文献中提取麦冬皂苷D多是通过回流，萃取和大孔树脂纯化等手段得到麦冬总皂苷，再通过反复柱层析的方法得到麦冬皂苷D。如卢克刚等发表的“川麦冬中麦冬皂苷 D对照品的制备”，该文献公开的方法是80%乙醇回流提取，加水稀释后，用乙酸乙酯萃取， 萃余液用水饱和正丁醇萃取，萃取液过减压硅胶柱，收集含目标产物的洗脱液再过加压硅胶柱，洗脱液过ODS硅胶柱，最后通过凝胶柱洗脱得麦冬皂苷D，工艺步骤繁多，操作复杂， 制备量少且周期长。现有专利“一种治疗慢性支气管炎的中药制剂及制备方法和应用”(专利号200510069530.幻，该专利以70 90%的乙醇回流提取，浓缩，加水分散后用石油醚萃取，萃余液再用水饱和正丁醇萃取，然后上大孔树脂柱，高醇洗脱液浓缩后上氧化铝柱吸附，用70%乙醇洗脱，最后经高效液相制备色谱梯度分离得到麦冬皂苷D。该方法采用回流提取能耗大，高效液相的处理量小，且样品有损失。现有提取麦冬皂苷D的方法普遍存在着能耗大，工艺步骤多，制备量少的的问题，因此提供一种能耗低、制备量大的麦冬皂苷D的提取方法是很有必要的。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种麦冬皂苷D的提取方法，该方法操作简单，
广品含量尚。本发明之所以采用微波提取，是因为微波提取具有选择性，极性较大的分子可以获得较多的微波能，因而采用微波提取可以选择性的提取一些极性成分，微波提取还具有加热均勻，高效清洁的优点；采用高速逆流色谱法分离纯化，因为该分离方法操作简便，同时也避免了样品的损失，与传统分离手段相比，克服了其操作繁琐，分离周期长的缺点，并具有制备量大，产品纯度高的优点。
本发明是采用以下技术方案来实现的一种麦冬皂苷D的提取方法，其特征在于包含以下步骤取麦冬干燥药材粉碎至 20 60目，置微波装置中用8 15倍量60 80%的乙醇溶液提取15 30分钟，提取液浓缩至浸膏，加适量水分散后，加入1 3倍量的水饱和正丁醇萃取1 4次，合并萃取液加0. 5 1倍量丙酮沉淀，过滤，滤液蒸干得麦冬总皂苷，再采用高速逆流色谱法对其进行分离纯化，以氯仿-甲醇-1%氨水(6 10 11 15 5)作为两相溶剂系统，混勻后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将麦冬总皂苷粉末用下相溶解，流出物减压蒸干即得麦冬皂苷D产品。所述的微波提取是指先将药材和提取液浸泡0. 5 5小时，再置于微波装置中辐照提取，设定额定功率为200 1000W，提取温度为60 80°C。所述的高速逆流色谱法分离，参数设定色谱仪转速700 lOOOr/min，流动相流速 0. 8 3. Oml/min。本发明的积极效果是1)微波提取选择性的提取极性成分，减少非极性杂质混入，且提取均勻、快速、 能耗低；2)高速逆流色谱法分离无需使用载体，减少了操作过程中样品的损失，分离效果好，制备量大。下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1 取麦冬干燥药材500g，粉碎过40目筛，加入4L80%的乙醇溶液浸泡0. 5小时，再置于微波装置中辐照提取15min，提取温度为60 70°C，微波装置功率设定为200W，提取液浓缩得浸膏68g，加150ml水分散，再加200ml水饱和正丁醇萃取2次，合并萃取液，用300ml 丙酮沉淀，过滤，滤液蒸干得麦冬总皂苷11. Sg。将氯仿、甲醇、氨水按7 13 5的体积比量取，超声混合后加入分液漏斗中， 静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，将上述黄色粉末用500ml下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以2. Oml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为850r/min，通过进样阀进样，每次进样量为150mg，收集流出液，减压蒸干即得麦冬皂苷 D2. 7g，含量 99. 3%。实施例2:取麦冬干燥药材500g，粉碎过60目筛，加入6L70%的乙醇溶液浸泡2. 5小时，再置于微波装置中辐照提取18min，提取温度为60 70°C，微波装置功率设定为500W，提取液浓缩得浸膏71g，加180ml水分散，再加250ml水饱和正丁醇萃取3次，合并萃取液，用400ml 丙酮沉淀，过滤，滤液蒸干得麦冬总皂苷13. 3g。将氯仿、甲醇、氨水按(6 15 5)的体积比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，将上述黄色粉末用600ml下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以0. Sml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为lOOOr/min，通过进样阀进样，每次进样量为180mg，收集流出液，减压蒸干即得麦冬皂苷 D3. 4g，含量 98. 6%0实施例3:取麦冬干燥药材lOOOg，粉碎过20目筛，加入12L60%的乙醇溶液浸泡4小时，再置于微波装置中辐照提取20min，提取温度为70 80°C，微波装置功率设定为1000W，提取液浓缩得浸膏147g，加350ml水分散，再加500ml水饱和正丁醇萃取2次，合并萃取液，用 600ml丙酮沉淀，过滤，滤液蒸干得麦冬总皂苷25. 4g。将氯仿、甲醇、氨水按(10 14 5)的体积比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，将上述黄色粉末用1.2L下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以3. Oml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为800r/min，通过进样阀进样，每次进样量为200mg，收集流出液，减压蒸干即得麦冬皂苷 D6. 3g，含量 99. 1%ο实施例4 取麦冬干燥药材lOOOg，粉碎过40目筛，加入15L65%的乙醇溶液浸泡5小时，再置于微波装置中辐照提取30min，提取温度为60 65°C，微波装置功率设定为1000W，提取液浓缩得浸膏127g，加300ml水分散，再加400ml水饱和正丁醇萃取3次，合并萃取液，用 700ml丙酮沉淀，过滤，滤液蒸干得麦冬总皂苷21. lg。将氯仿、甲醇、氨水按(7 12 5)的体积比量取，超声混合后加入分液漏斗中，静置使上、下相分层，取上相作为固定相，下相作为流动相，将上述黄色粉末用900ml下相溶解，再用上相泵满色谱柱，然后以2. 5ml/min的流速泵入流动相，平衡后设定色谱仪转速为900r/min，通过进样阀进样，每次进样量为160mg，收集流出液，减压蒸干即得麦冬皂苷 D4. 6g，含量 99. 5%。
权利要求
1.一种麦冬皂苷D的提取方法，其特征在于包含以下步骤取麦冬干燥药材粉碎至 20 60目，置微波装置中用8 15倍量60 80%的乙醇溶液提取15 30分钟，提取液浓缩至浸膏，加适量水分散后，加入1 3倍量的水饱和正丁醇萃取1 4次，合并萃取液加0. 5 1倍量丙酮沉淀，过滤，滤液蒸干得麦冬总皂苷，再采用高速逆流色谱法对其进行分离纯化，以氯仿-甲醇-1%氨水(6 10 11 15 5)作为两相溶剂系统，混勻后置分液漏斗中静置分层，取上相为固定相，下相为流动相，将麦冬总皂苷粉末用下相溶解，流出物减压蒸干即得麦冬皂苷D产品。
2.如权利要求1所述的一种麦冬皂苷D的提取方法，其特征在于所述的微波提取是指先将药材和提取液浸泡0. 5 5个小时，再置于微波装置中辐照提取，设定额定功率为 200 1000W，提取温度为60 80°C。
3.如权利要求2所述的一种麦冬皂苷D的提取方法，其特征在于所述的高速逆流色谱法分离，参数设定色谱仪转速700 lOOOr/min，流动相流速0. 8 3. Oml/min。
全文摘要
本发明涉及一种麦冬皂苷D的提取方法，工艺步骤包括将麦冬药材粉碎，用60～80％的乙醇溶液微波提取，提取液浓缩至浸膏，加适量水分散后，加入水饱和正丁醇萃取2～4次，合并萃取液加丙酮沉淀，过滤，滤液蒸干得麦冬总皂苷，再采用高速逆流色谱法对麦冬总皂苷进行分离纯化，流出物减压蒸干即得产品。本方法制备量大，样品损失少，产品含量高。
文档编号C07J71/00GK102558284SQ201010603888
公开日2012年7月11日 申请日期2010年12月24日 优先权日2010年12月24日
发明者刘东锋, 李法庆 申请人:苏州宝泽堂医药科技有限公司