CD47阻断疗法和CD38抗体的组合的制作方法

本公开涉及阻断cd47/sirpα相互作用的药物的方法和用途。更具体地，本公开涉及组合起来可用于改善癌症疗法的方法和用途。

背景技术：

癌细胞由与癌细胞抗原结合的抗体并且通过fc受体与所述抗体的fc部分结合来募集并活化巨噬细胞而被靶向破坏。癌细胞上的cd47与巨噬细胞上的sirpα之间的结合传递“不要吃我(don’teatme)”信号，使许多肿瘤细胞能够逃避巨噬细胞的破坏。已经表明抑制cd47/sirpα相互作用(cd47阻断)将使巨噬细胞“看到”并破坏靶cd47+癌细胞。sirpα通过cd47阻断来治疗癌症的用途描述于wo2010/130053中。

trilliumtherapeutics的wo2014/094122描述了一种抑制或拮抗cd47与sirpα之间的相互作用的蛋白质药物。这种cd47阻断剂是人sirpα的一种形式，其并入了与基于igg的fc区域的特别有用的形式连接的其胞外结构域的特定区域。以这种形式，sirpαfc药物对存在cd47+表型的癌细胞的存活力表现出显著的影响。这种影响特别是在急性骨髓性白血病(aml)细胞和许多其他类型的癌症上可见。具有显著改变的一级结构和有效的cd47结合亲和力的sirp的可溶性形式描述于wo2013/109752中。

已经描述了其他cd47阻断剂，并且这些包括各种cd47抗体(参见例如，stanford的us8562997和inhibrx的wo2014/123580)，每种抗体都包含不同的抗原结合位点，但共同地具有与内源性sirpα竞争结合cd47、与巨噬细胞相互作用并最终增加cd47+疾病细胞消耗的能力。这些cd47抗体具有与并入sirpα结构的药物固有的活性大不相同的体内活性。例如，后者表现出可忽略不计的与红细胞的结合，而cd47抗体和高亲和力sirpα变体的相反特性需要适应施用后的药物“池”的策略。

还提出使用其他剂来阻断cd47/sirpα轴。这些剂包括在virallogic的wo2010/083253中描述的cd47fc蛋白，以及如universityhealthnetwork的wo2013/056352、eberhard的us6913894和其他地方所述的sirpα抗体。

cd47阻断方法在抗癌药物开发中表现出巨大的临床前景。需要提供改善这些药物的作用、并且特别是改善并入sirpα的cd47结合形式的cd47阻断剂的作用的方法和手段。

技术实现要素：

当与cd47阻断剂组合时，抗肿瘤抗体的作用得以提高。本公开表明，当与cd38抗体组合施用时，特别是sirpαfc的抗癌作用得以增强。在实施方案中，sirpαfc具有包含人sirpα的igv结构域的igg4同种型，并且cd38抗体是达雷木单抗(daratumumab)。由sirpαfc引起的达雷木单抗活性的增强表现为治疗的cd47+癌细胞的消耗增加，患者存活改善和/或肿瘤大小或分布减少，例如总体肿瘤负担减少。

一方面，提供了一种用于治疗存在cd47+疾病细胞的受试者的方法，其包括向所述受试者施用药物组合，所述药物组合包含sirpαfc的igg4同种型(称为sirpαg4)和cd38抗体，诸如达雷木单抗或其市售形式，合适地，靶向的疾病细胞的表型为cd38+和cd47+。

在一个相关方面，提供了sirpαg4与cd38抗体组合用于治疗存在cd47+疾病细胞(诸如癌细胞，并且特别是具有cd47+/cd38+表型的癌细胞)的受试者的用途。

另一方面，提供了一种包含sirpαg4和cd38抗体的药物组合，其用于治疗cd47+/cd38+疾病细胞。

另一方面，还提供了一种试剂盒，其包含含有sirpαg4和cd38抗体的药物组合，连同教导它们用于治疗疾病细胞的说明书。

在具体的实施方案中，cd47阻断剂与cd38抗体的组合用于治疗血液癌症，诸如骨髓瘤、淋巴瘤或白血病。

在替代实施方案中，与cd38抗体组合使用的sirpafc是sirpag1。在其他替代实施方案中，cd38抗体是达雷木单抗，或者其活性的cd38结合片段，或者达雷木单抗的活性的cd38结合变体的双特异性或双功能形式。

本发明的其他特征和优点通过下列详述将变得明显。然而应该理解，虽然详述和具体实施例示出本发明的优选实施方案，但它们仅通过说明的方式给出，因为通过此详述，本发明的精神和范围内的各种变化和修改对于本领域技术人员来说将变得明显。

附图说明

图1示出了以下结果，在肿瘤接种后第11天开始用cd38抗体达雷木单抗(10mg/kg，2次/周)与sirpαg4(10mg/kg，5次/周)组合治疗mm.1s(人多发性骨髓瘤细胞系)荷瘤小鼠时，与cd38抗体达雷木单抗(10mg/kg，2次/周)单一疗法或sirpαg4(10mg/kg，5次/周)单一疗法相比，观察到增加的肿瘤生长抑制(a和c)和改善的存活(b)；并且

图2示出了以下结果，在肿瘤接种后第3天开始用cd38抗体达雷木单抗(10mg/kg，2次/周)与sirpαg4(10mg/kg，5次/周)组合治疗daudi(人伯基特淋巴瘤细胞系)荷瘤小鼠时，与cd38抗体达雷木单抗(10mg/kg，2次/周)单一疗法或sirpαg4(10mg/kg，5次/周)单一疗法相比，观察到增加的肿瘤生长抑制(a和c)和改善的存活(b)。

具体实施方式

本公开提供了可用于治疗存在具有cd47+表型的疾病细胞的受试者的方法、用途、组合和试剂盒。在这种方法中，cd47+癌症受试者接受cd38抗体(诸如达雷木单抗)和cd47阻断剂的组合，后者优选是人sirpα的fc融合形式，即sirpafc，其中fc是igg4同种型或其fc受体结合变体，称为sirpag4。cd38抗体的作用通过cd47结合sirpαg4得以显著增强。当cd47+疾病细胞是cd47+癌细胞以及也会结合达雷木单抗并因此具有cd38+表型的肿瘤时，治疗作用就很明显。

术语“cd47+”用于指示由本发明的cd47阻断剂的结合靶向的细胞的表型。可以使用cd47抗体作为亲和配体通过流式细胞术来鉴定cd47+的细胞。适当标记的cd47抗体可商购获得用于此用途(例如，克隆b6h12的抗体产物可购自bdbiosciences)。针对cd47表型检查的细胞可以包括标准肿瘤活检样品，尤其包括从疑似携带内源性cd47+癌细胞的受试者获取的血液样品。作为使用本发明的药物组合的疗法的靶标的特别感兴趣的cd47疾病细胞是“过表达”cd47的那些细胞。这些cd47+细胞通常是疾病细胞，并且在其表面上呈递的cd47密度超过给定类型细胞的正常cd47密度。cd47过表达将在不同的细胞类型之间变化，但是在本文中是指例如通过流式细胞术或通过免疫染色或通过基因表达分析等确定的任何cd47水平，其大于在具有对于所述细胞类型而言正常的cd47表型的对应细胞上可测量的水平。

术语“cd47+疾病细胞”意指与疾病相关联并具有cd47+表型的细胞。在一个实施方案中，cd47+疾病细胞是癌细胞。

在实施方案中，cd47阻断剂是人sirpαfc的igg4型式，所述cd47阻断剂干涉并抑制或阻断在cd47与sirpα相互作用时引起的信号传输。如trilliumtherapeutics的wo2014/094122(其全部内容以引用的方式并入本文)中所述，优选的sirpαg4是人sirpα的与cd47相互作用并已表明具有抗癌活性的区域的fc融合形式。如本文所用，术语“人sirpα”是指人sirpα的野生型内源性成熟形式。在人类中，sirpα蛋白以两种主要形式存在。一种形式，即变体1或v1形式，具有表示为ncbirefseqnp_542970.1的氨基酸序列(残基27-504构成成熟形式)。另一种形式，即变体2或v2形式，相差13个氨基酸，并且具有在genbank表示为caa71403.1的氨基酸序列(残基30-504构成成熟形式)。这两种形式的sirpα占人类中存在的sirpα形式的约80％，并且在本文中两者均被术语“人sirpα”所涵盖。本公开最特别地涉及包含人sirp变体2形式或v2的药物组合。

在本发明的药物组合中，sirpαfc融合蛋白具有至少包括人sirpα的残基32-137的sirpα组件(106聚体)，其构成并根据当前命名法定义v2形式的igv结构域。如下所示，这种sirpα序列在本文中称为seqidno.1。

在一个优选的实施方案中，sirpαfc融合蛋白并入了如seqidno.1所定义的igv结构域，以及另外的在sirpα序列内连续的侧翼残基。由人sirpα的v2形式的残基31-148表示的igv结构域的这种优选形式为118聚体，其具有如下所示的序列：

sirpαfc蛋白并入了具有效应子功能的fc区。fc是指“可结晶片段”并且表示抗体的恒定区，其主要包括重链恒定区和铰链区内的组件。在实施方案中，fc区包括下部铰链-ch2-ch3结构域。更优选地，fc区包括ch1-ch2-ch3结构域。

具有“效应子功能”的fc组件是具有至少一些天然或工程化功能(诸如至少一些对抗体依赖性细胞毒性的贡献或一些固定补体的能力)的fc组件。同样，fc将至少与fc受体结合。

在实施方案中，fc区具有野生型人igg4恒定区的序列。在替代实施方案中，并入融合蛋白中的fc区来源于具有拥有效应子活性的恒定区的任何igg4抗体，所述恒定区存在但其效力天然地显著弱于igg1fc区。此类fc区的序列可以例如对应于以下任何igg4序列的fc区：来自uniprotkb/swiss-prot的p01861(残基99-327)和来自genbank的cac20457.1(残基99-327)。在一个具体且优选的实施方案中，g4fc区在位置228(eu编号)处并入了一个改变，其中此位置处的丝氨酸被脯氨酸取代(s228p)，由此来稳定fc二聚体内的二硫键。

在一个具体的实施方案中，fc区是基于人igg4的氨基酸序列，其在uniprotkb/swiss-prot中被表示为p01861，残基99-327，并具有如下所示的氨基酸序列，并且所述序列在本文中称为seqidno.6：

在一个替代实施方案中，sirpαfc具有基于人igg1的氨基酸序列的fc区，其在uniprotkb/swiss-prot中被表示为p01857，残基104-330，并且具有如下所示的氨基酸序列：

在一个具体的实施方案中，当fc组件是igg4fc时，fc至少并入了s²²⁸p突变，并具有如下列出的氨基酸序列，并且所述序列在本文中称为：

在一个具体且优选的实施方案中，sirpαfc融合蛋白具有如下所示的氨基酸序列编号6：在此实施方案中，融合蛋白的fc组件是基于igg4并且并入了s²²⁸p突变：

这种sirpαfc融合蛋白被称为sirpαg4。

在一个替代实施方案中，sirpαfc融合蛋白具有如下所示的氨基酸序列：在此实施方案中，融合蛋白的fc组分是基于igg1：

这种sirpαfc融合蛋白被称为sirpαg1。

在一个优选的实施方案中，提供了sirpαfc蛋白并将其以分泌的同二聚体融合形式使用，其中融合蛋白的两个拷贝通过存在于分开的sirpαfc单个多肽链(例如具有seqidno.6的sirpαg4链)中的半胱氨酸之间的共价结合而偶联。

本发明的药物组合包含如刚刚所述的sirpαg4或sirpαg1，以及与分化簇38结合的抗体，所述分化簇38即人cd38(hcd38)，也称为环状adp核糖水解酶。这是一种存在于许多免疫细胞表面上的糖蛋白，所述免疫细胞包括cd4+、cd8+、b淋巴细胞和自然杀伤细胞。cd38还在细胞粘附、信号转导和钙信号传导中起作用。它是一种多功能胞外酶，其催化环状adp-核糖(cadpr)从nad+到adp-核糖的合成和水解。这些反应产物对于细胞内ca2+的调节至关重要。

如本文所用，术语“hcd38”是指包括表达和加工的蛋白质的蛋白质，被称为uniprotkb/swiss-protp28907。术语cd38在本文中一般地使用，并且是指野生型蛋白质及其天然存在的变体。术语“wtcd38”更具体地仅用于指示人cd38的野生型形式。术语“cd38+”用于表征将与cd38抗体结合并应当响应达雷木单抗治疗的疾病细胞的表型。在本文中称为“cd38+”的靶向的疾病细胞包括结合达雷木单抗的癌细胞，包括过表达cd38的癌细胞，即与cd38正常或cd38缺乏的细胞相比存在更大的表面cd38密度的细胞。

因此，具有cd47+/cd38+表型的疾病细胞是一种可以与cd47阻断剂和cd38抗体结合并响应其治疗的疾病细胞。

本发明的组合更具体地并且在一个实施方案中，是基于现在可以商品名商购获得的被称为达雷木单抗的hcd38抗体。达雷木单抗是一种与cd38结合的cd38定向单克隆抗体，所述cd38是在多发性骨髓瘤细胞的表面上高表达的信号传导分子，与疾病阶段无关。这样做时，达雷木单抗触发患者的自身免疫系统攻击癌细胞，从而通过多种免疫介导的作用机制以及通过免疫调节作用导致快速肿瘤细胞死亡，此外还通过凋亡(程序性细胞死亡)指导肿瘤细胞死亡。

达雷木单抗是针对cd38抗原的免疫球蛋白g1κ(igg1κ)人单克隆抗体，在哺乳动物细胞系(中国仓鼠卵巢)中产生。达雷木单抗的分子量为约148kda。在本发明的实施方案中，在本发明的组合中使用了达雷木单抗的活性片段，而不是全长抗体。可用的片段特别包括fab片段。

就氨基酸序列而言，达雷木单抗可由其重链和轻链序列定义，见于http://www.genome.jp/dbget-bin/www_bget？dr:d10777，如下

重链

以及

轻链

作为无色至浅黄色无防腐剂的溶液在单剂量小瓶中提供，用于静脉内输注。ph为5.5。用0.9％的氯化钠注射液usp稀释darzalex。每个单剂量20ml小瓶含有400mg达雷木单抗、冰乙酸(3.7mg)、甘露醇(510mg)、聚山梨醇酯20(8mg)、三水合乙酸钠(59.3mg)、氯化钠(70.1mg)和注射用水。

每个单剂量5ml小瓶含有100mg达雷木单抗、冰乙酸(0.9mg)、甘露醇(127.5mg)、聚山梨醇酯20(2mg)、三水合乙酸钠(14.8mg)、氯化钠(17.5mg)和注射用水。

在一个实施方案中，sirpαg4与配制的达雷木单抗或已经配制的组合使用。

包含在本发明的药物组合中的每种药物可以分开配制用于组合使用。当在两种药物的接受者中，达雷木单抗的作用增强或至少影响sripαg4的作用时，称这些药物“组合使用”。在将药物物理混合以进行组合施用时以及在将它们分开放置在能够进行本发明的组合疗法的试剂盒中时，这些药物也是组合的。

组合中的两种药物协同作用，使得相对于单独的任一种剂，组合的作用均得以增强。在一个优选的实施方案中，两种药物组合使用以治疗具有cd47+/cd38+表型的癌症。这种益处表现为统计学上显著的在给定的靶细胞适应性或活力参数方面的改善。例如，当暴露于cd47阻断剂和cd38抗体的组合时，在cd47+癌细胞，并且尤其是在cd47+/cd38+癌细胞中的益处可以是活的癌细胞数量相对于未治疗的统计学上显著减少(因此消耗)，或者癌细胞的数量或肿瘤的大小的减少，或者任何特定肿瘤类型的内源性位置或分布的改善。就治疗的受试者的总体存活而言，也可以看到益处。在实施方案中，相对于仅使用sirpαg4或仅使用达雷木单抗时获得的结果，由药物组合治疗产生的改善可以表现为至少累加且期望的协同作用。达雷木单抗对达雷木单抗抗性疾病(诸如晚期多发性骨髓瘤患者或cd38水平较低的患者)的有效性也得以改善。

在使用中，就剂量大小和剂型以及方案而言，组合中的每种药物均可如其用于单一疗法那样进行配制。在这方面，如在适当的临床试验中所表明的，由它们的组合使用所产生的改善可以允许使用稍微减小的剂量大小或频率。

在这种方法中，每种药物以包含药学上可接受的载剂的剂型并且以治疗有效的量提供。如本文所用，“药学上可接受的载剂”意指任何和所有生理上相容且可用于蛋白质/抗体制剂领域的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。药学上可接受的载剂的实例包括水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等中的一种或多种以及其组合。在许多情况中，优选的是在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(诸如甘露醇、山梨醇)或氯化钠。药学上可接受的载剂还可包括少量的辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂，其增强药剂的保存期限或有效性。sirpαg4融合蛋白和cd38抗体中的每一种都使用治疗制剂领域中的实践标准来配制。适于诸如通过注射或输注静脉内施用的溶液是特别有用的。

可以通过将所需量的活性化合物与以上所述的成分的一种或组合按照需要掺入适当的溶剂中，接着进行灭菌微滤，来制备无菌溶液。通常，通过将活性化合物掺入无菌媒介物中来制备分散体，所述媒介物含有碱性分散介质和以上列举的所需要的其他成分。在用于制备无菌散剂的情况下，是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，它们由其先前的无菌过滤溶液得到活性成分和任何另外的所需成分的散剂。

如本文所用，“有效量”是指在所需剂量和特定时间段内有效达到所需治疗结果的量。组合中的每种药物的治疗有效量可根据诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重以及药物在接受者中引起所需响应的能力等的因素而变化。治疗有效量也是其中药剂的治疗有益作用超过任何毒性或有害作用的量。当然，cd38抗体将以适合患者给药的量进行配制，如批准其用于人类的监管机构所允许的那样。因此，在使用中，就剂量大小和剂型以及方案而言，组合中的每种药物均如其用于单一疗法那样进行配制。在这方面，如在适当控制的临床试验中所表明的，由它们的组合使用所产生的协同/益处可以允许使用稍微减小的剂量大小或频率。

sirpαfc融合蛋白可通过任何已建立的蛋白质递送途径施用于受试者，特别是静脉内、皮内、瘤内和皮下注射或输注或者通过口服或鼻腔施用。

本发明的组合中的药物可以依次地或基本上同时地施用，例如连续或同时施用。在实施方案中，在施用sirpαfc之前给予cd38抗体。在替代方案中，可以在施用sirpαfc之后或期间给予cd38抗体。因此，在实施方案中，经受疗法的受试者是已经用组合药物中的一种(诸如cd38抗体)治疗，然后用组合药物中的另一种(诸如sirpαfc药物)治疗的受试者。最期望的是，两种药物的活性在患者体内重叠一段足以使药物组合使用时促进的活性得以改善的时间。

可以调整给药方案以提供最佳的所需响应(例如，治疗响应)。例如，可以施用每种药物的单次推注，或者可以随时间的推移施用若干分开的剂量，或者可以如由治疗情况所指示将剂量成比例地减少或增加。为了施用方便和剂量均匀，配制单位剂型的肠胃外组合物是特别有利的。如本文所用，“单位剂型”是指适合作为用于待治疗的受试者的单一剂量的物理上离散单位；每个单位含有经计算可产生所需治疗作用的预定量的活性化合物以及所需的药物载剂。

药物可以组合配制，使得所述组合可以在一次施用(例如一种注射剂或一个输注袋)中引入接受者。或者，可以将药物作为在单个包装中一起提供的分开的单元组合在一起，并且与根据本发明的方法使用其的说明书组合在一起。在另一个实施方案中，提供了一种制品，其含有sirpαfc药物和cd38抗体组合，其量可用于治疗本文所述的病症。所述制品包含本发明的抗体药物组合的一种或两种药物，以及容器和标签。合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器和试管。所述容器可由诸如玻璃或塑料的各种材料制成。所述容器装有有效治疗病状的组合物并且可以具有无菌入口(例如，所述容器可以是具有皮下注射针头可刺穿的塞子的静脉注射溶液袋或小瓶)。容器上的或与容器相关联的标签指示所述组合物与根据本公开的sirpαfc药物组合使用，从而引发增强的对cd47+疾病细胞的作用。所述制品还可以包括第二容器，其包含药学上可接受的缓冲剂，诸如磷酸盐缓冲盐水、林格氏(ringer’s)溶液或右旋糖溶液。它还可以包含商业和用户角度所需的其他物质，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头、注射器和具有使用说明书的包装插页。

对于施用，sirpαfc药物的剂量应在约0.0001至100mg/kg宿主体重、并且更通常是在0.01至10mg/kg宿主体重的范围内。例如，肠胃外sirpαfc剂量可以为0.3mg/kg体重、1mg/kg体重、3mg/kg体重、5mg/kg体重或10mg/kg体重或在0.1-100mg/kg的范围内。当cd47阻断剂是seqidno.6或7的sirpαfc融合蛋白时，剂量可以是通过肿瘤内注射施用的每次给药约1ug-10mg。

已建立达雷木单抗给药用于治疗多发性骨髓瘤，并且这种相同的方法也可以指导其用于治疗其他适应症。也就是说，在已接受了至少3种疗法(包括蛋白酶体抑制剂(pi)和免疫调节剂(imid))或pi和imid双重难治的患者中，达雷木单抗被指定为多发性骨髓瘤的单一疗法。第1-8周：16mg/kg静脉内输注每周一次；第9-24周：16mg/kg静脉内输注每2周一次；并且从第25周开始直至疾病进展：16mg/kg静脉内输注每4周一次。

达雷木单抗还被指定与硼替佐米和地塞米松组合用于治疗已接受至少1种现有疗法的多发性骨髓瘤患者：第1-9周：16mg/kg静脉内输注每周一次；第10-24周：16mg/kg静脉内输注每3周一次；并且从第25周开始直至疾病进展：16mg/kg静脉内输注每4周一次。

达雷木单抗还被指定与来那度胺和地塞米松组合用于治疗已接受至少1种现有疗法的多发性骨髓瘤患者：第1-8周：16mg/kg静脉内输注每周一次；第9-24周：16mg/kg静脉内输注每2周一次；并且从第25周开始直至疾病进展：16mg/kg静脉内输注每4周一次

同样，达雷木单抗治疗被指定与泊马度胺和地塞米松组合用于治疗已接受包括来那度胺和蛋白酶体抑制剂在内的至少2种现有疗法的多发性骨髓瘤患者：第1-8周：16mg/kg静脉内输注每周一次；第9-24周：16mg/kg静脉内输注每2周一次；并且从第25周开始直至疾病进展：16mg/kg静脉内输注每4周一次。

达雷木单抗(jnj-54767414)可以静脉内(iv)输注形式施用，其剂量为16mg/kg每周一次持续前3个周期，在周期4-8的第1天(每3周)然后在随后周期的第1天(每4周)施用。前8个周期是21天周期；周期9及以后的周期为28天周期。

如上所述，达雷木单抗可以与被称为硼替佐米的蛋白酶体抑制剂和地塞米松组合使用。

硼替佐米可在每个21天周期的第1、4、8和11天以1.3mg/m2皮下(sc)施用。可以施用八个硼替佐米治疗周期。

地塞米松可在前8个硼替佐米治疗周期的第1、2、4、5、8、9、11和12天(周期1-3除外)以20mg口服施用。在周期1-3中，参与者在第1、2、4、5、8、9、11、12和15天接受地塞米松20mg。在参与者接受达雷木单抗输注的几周内，地塞米松将在达雷木单抗输注前作为输注前药物以20mg的剂量静脉内施用。

所述药物组合可用于治疗多种cd47+疾病细胞。在一个实施方案中，所述药物组合可用于抑制cd47+和dc38+细胞的生长或增殖。这些癌症包括实体癌(包括癌和肉瘤)以及血液癌症。如本文所用，“血液癌症”是指血液的癌症并且包括白血病、淋巴瘤和骨髓瘤等。“白血病”是指血液中的癌症，其中产生了太多抵抗感染无效的白细胞，从而排挤了构成血液的其他部分，诸如血小板和红细胞。应理解，白血病病例被分类为急性或慢性。某些形式的白血病可能是例如急性淋巴细胞白血病(all)；急性髓细胞白血病(aml)；慢性淋巴细胞白血病(cll)；慢性骨髓性白血病(cml)；骨髓增生性病症/赘生物(mpds)；和骨髓增生异常综合征。“淋巴瘤”可以是指霍奇金淋巴瘤、惰性和侵袭性非霍奇金淋巴瘤、皮肤t细胞淋巴瘤(ctcl)、外周t细胞淋巴瘤(ptcl)、伯基特淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(mcl)和滤泡性淋巴瘤(小细胞和大细胞)等。骨髓瘤包括多发性骨髓瘤(mm)、巨细胞骨髓瘤、重链骨髓瘤以及轻链骨髓瘤和bence-jones骨髓瘤。

在一些实施方案中，用药物组合治疗的血液癌症是cd47+白血病，优选地选自急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和骨髓增生异常综合征，优选人急性骨髓细胞白血病。

在其他实施方案中，用药物组合治疗的血液癌症是cd47+淋巴瘤或骨瘤髓，选自霍奇金淋巴瘤、惰性和侵袭性非霍奇金淋巴瘤、弥漫性大细胞淋巴瘤(dlbcl)、套细胞淋巴瘤、t细胞淋巴瘤(包括蕈样肉芽肿)、sezary综合征、伯基特淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤(小细胞和大细胞)、多发性骨髓瘤(mm)、巨细胞骨髓瘤、重链骨髓瘤和轻链或bence-jones骨髓瘤以及平滑肌肉瘤。

在一个具体的实施方案中，本发明的组合治疗的癌症是多发性骨髓瘤。在另一个具体的实施方案中，靶向的癌症是套细胞淋巴瘤。在另一实施方案中，本发明的组合治疗的癌症是复发性或难治性霍奇金淋巴瘤。在另一个具体的实施方案中，cd47阻断剂是sirpαg4。在另一具体的实施方案中，cd38抗体是达雷木单抗。

在再其他实施方案中，达雷木单抗与诸如seqidno.6或seqidno.7的sirpαfc组合使用，诸如用于治疗皮肤t细胞淋巴瘤或多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，所述组合用于治疗t细胞淋巴瘤，诸如蕈样肉芽肿或sezary综合征。

因此，在具体的实施方案中，提供了cd47阻断剂与cd38抗体组合用于治疗特定cd47+癌症的用途，其中：

i)cd47阻断剂是seqidno.1的sirpαg4，并且cd38抗体是达雷木单抗，诸如用于治疗作为皮肤t细胞淋巴瘤或者多发性骨髓瘤或者复发性或难治性霍奇金淋巴瘤的癌症；

ii)cd47阻断剂是seqidno.2的sirpαg1，并且cd38抗体是达雷木单抗，诸如用于治疗作为皮肤t细胞淋巴瘤或者多发性骨髓瘤或者复发性或难治性霍奇金淋巴瘤的癌症；

iii)cd47阻断剂是任何sirpαfc，并且cd38抗体是达雷木单抗，诸如用于治疗作为皮肤t细胞淋巴瘤或者多发性骨髓瘤的癌症。

可以使用sirαg4和达雷木单抗组合治疗的其他癌症包括具有cd38+/cd47+表型的那些癌症。治疗可以靶向的癌症包括实体瘤(包括merkel细胞癌)、血液恶性肿瘤诸如单克隆丙种球蛋白病、郁积型多发性骨髓瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性髓细胞白血病、急性成淋巴细胞白血病和慢性淋巴细胞白血病。

所需的药物组合将表现出统计学上显著改善的癌细胞响应。可以证明这是由于与cd47阻断剂组合导致统计学上显著改善的cd38抗体活性，反之亦然，其中统计学显著性如以下实施例中所示，并且期望地提供>0.05的p值，并且更期望地提供>0.01诸如>0.001的p值。

包括cd47阻断和cd38抑制的组合疗法也可以与可用于治疗靶向的适应症的任何其他剂或模态(诸如辅助疗法中的手术)或者与新辅助疗法中的另外的化疗一起利用。特别是达雷木单抗可以与来那度胺、硼替佐米和地塞米松以经批准用于治疗多发性骨髓瘤患者的方式一起使用。

以下非限制性实施例对本公开进行说明。

实施例

肿瘤细胞经常通过增加cd47的细胞表面表达来逃避巨噬细胞介导的破坏，所述cd47通过结合巨噬细胞上的抑制性信号调节蛋白α(sirpα)受体来传递抗吞噬(“不吃(do-not-eat)”)信号。先前的研究已表明，使用可溶性sirpα-igg1fc融合蛋白tti-621阻断cd47-sirpα途径在体外触发巨噬细胞吞噬肿瘤细胞，并在体内有效抑制肿瘤生长。在本研究中，在多个模型系统中评估了含有igg4fc尾巴的可溶性sirpα-fc变体蛋白sirpag4(seqidno.6)的体外和体内功效。

与cd47阻断抗体不同，sirpαg4与人红细胞的结合最少，并且在体外不引起血凝反应。因此，它避免了大的循环抗原池，并且不太可能引起患者贫血。另外，sirpag4有效地诱导来源于患有血液肿瘤和实体瘤的患者的大量肿瘤细胞的吞噬作用。尽管也观察到了人血小板的体外吞噬作用，但是在竞争性吞噬作用测定中，sirpαg4优先于血小板诱导肿瘤细胞的吞噬作用。

在不同的肿瘤模型中评估了sirpαg4单一疗法和/或组合疗法的体内功效。在伯基特淋巴瘤(daudi)和多发性骨髓瘤(mm.1s)异种移植肿瘤模型中，还探讨了sirpαg4与达雷木单抗(抗cd38抗体)组合的潜力。在这两种模型中，sirpαg4单一疗法均表现出部分肿瘤生长抑制。然而，当sirpαg4与达雷木单抗组合时，治疗功效进一步增强。

总的来说，这些结果表明sirpαg4在一系列血液肿瘤和实体瘤中诱导有效的肿瘤特异性巨噬细胞吞噬作用，并且在dlbcl异种移植肿瘤模型中作为单一治疗剂有效。此外，sirpαg4增强了达雷木单抗在血液异种移植肿瘤模型中的功效。这些数据支持将sirpαg4与抗肿瘤抗体组合用于患有血液恶性肿瘤的癌症患者。

具体地，如图1所示，将matrigel中的5x10⁶个mm.1s细胞(地塞米松敏感的多发性骨髓瘤)在第0天皮下移植到nodscid的右侧(n＝9-10只小鼠/组)中。在第11天，当平均肿瘤大小为约112-114mm³时，将小鼠随机分组，并接受腹膜内(ip)注射sirpαg410mg/kg5次/周(黑色三角形)和/或达雷木单抗10mg/kg2次/周(灰色三角形)或媒介物对照5次/周(未示出)。图1a示出了每个治疗组的平均肿瘤体积和标准平均偏差。当每组≥25％的动物被杀死时，曲线终止。基于第26天的肿瘤体积，通过单向anova(tukey多重比较检验)计算统计学显著性。图1b表明了在增加荷瘤小鼠的存活方面的益处。使用prismgraphpad软件通过logrank检验(针对多重比较进行调整)计算存活曲线的统计显著性。图1c提供了每个治疗组的单个肿瘤生长蜘蛛图。给药方案以倒三角形表示。

另外，如图2所示，将matrigel中的1x10⁷个daudi细胞(来自16岁的男性的b成淋巴细胞系；ebna阳性，携带ebv标记、补体受体、表面结合的免疫球蛋白和igg的fc片段的表面标记)皮下移植到nodscid的右侧中。腹膜内(ip)注射10mg/kgsirpαg45次/周，从第3天开始(黑色三角形)；和/或10mg/kg达雷木单抗2次/周，从第10天开始(灰色三角形)；或媒介物对照5次/周(未示出)，来治疗小鼠。(图2a)示出了每个治疗组的平均肿瘤体积和标准平均偏差。当每组≥25％被杀死时，曲线终止。基于第32天的肿瘤体积，通过单向anova(tukey多重比较检验)计算统计学显著性。图2b表明了荷瘤小鼠的存活的增加。使用prismgraphpad软件通过logrank检验(针对多重比较进行调整)计算存活曲线的统计显著性。图2c提供了每个治疗组的单个肿瘤生长蜘蛛图。给药方案以倒三角形表示。

尽管已参考目前被认为是优选的实施例对本发明进行了描述，但是应当理解，本发明不限于所公开的实施例。与此相反，本发明旨在涵盖各种修改和包括在所附权利要求书的精神和范围内的等效布置。

所有出版物、专利和专利申请以引用的方式整体并入本文，其程度如同每个单独出版物、专利或专利申请具体地和单独地被指示为以引用的方式整体并入。

序列表

<110>延龄草治疗公司(trilliumtherapeuticsinc.)

<120>cd47阻断疗法和cd38抗体的组合

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