一种山楂叶提取物的提取方法及山楂叶提取物与流程

[0001]
本发明涉及生物提取技术领域，具体涉及一种山楂叶提取物的提取方法。


背景技术：

[0002]
山楂叶为蔷薇科山楂属植物山里红的干燥叶，总黄酮和金丝桃苷为山楂叶干燥叶所提取的有效成分，总黄酮有降压，增加冠脉流量，降血脂，强心，抗心律不齐的左右。金丝桃苷对心肌缺血再灌，脑缺血再灌，脑梗塞等有很好的保护作用。其相关制剂被广泛地用于心脑血管的治疗，如益心酮软胶囊，益心酮片等。然而，现有技术中所得的山楂叶提取物提取出的总黄酮含量均未超过80％，同时对金丝桃苷的含量未做要求，或者提取出的金丝桃苷含量很低，其提取方法工艺复杂，现有的山楂叶提取物的提取方法有待进一步改进。


技术实现要素：

[0003]
为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本发明的目的之一在于提供一种山楂叶提取物的提取方法及山楂叶提取物，该提取方法提取出的山楂叶提取物中，总黄酮含量大于90％，金丝桃苷含量大于0.5％，该提取方法的活性成分收率高，提取工艺简单，提取效率高，便于操作控制，有利于工业化生产。
[0004]
本发明的通过下述技术方案实现：一种山楂叶提取物的提取方法，包括如下步骤：
[0005]
(1)取山楂叶，粉碎成山楂叶粉后，采用乙醇作为溶剂进行渗漉，收集渗漉液；
[0006]
(2)对渗漉液进行减压浓缩并回收乙醇，得到浓缩液a；
[0007]
(3)浓缩液a加水稀释，得到稀释液；稀释液采用石油醚进行萃取，分出水层，得到处理液；
[0008]
(4)采用乙酸乙酯对处理液进行提取，得到提取液；
[0009]
(5)对提取液进行减压浓缩并回收乙酸乙酯，得到浓缩液b；进行干燥后，得到山楂叶提取物。
[0010]
本发明的山楂叶提取物的提取方法中，采用乙醇进行渗漉，渗漉过程中，提取出了其中的有效成分，同时也溶出了大量的叶绿素，这些成分不除，会影响有效成分总黄酮和金丝桃苷的含量；本发明通过用石油醚萃取的方法除去色素，再用乙酸乙酯提取出所需的总黄酮和金丝桃苷，并控制石油醚和乙酸乙酯的量；制得的山楂叶提取物中，总黄酮含量大于90％，金丝桃苷含量大于0.5％，该提取方法的活性成分收率高，提取工艺简单，提取效率高，便于操作控制，生产成本低，有利于工业化生产,且采用的溶剂回收率高。
[0011]
进一步的，所述步骤(1)中，乙醇的加入量为山楂叶粉的9-11倍量，所述乙醇的浓度为95％wt，渗漉速度为2.5-3.5ml/分钟。即每kg山楂叶粉加入10l的95％乙醇。所述山楂叶先进行粗粉碎后，再进行超微粉碎至过180目筛。
[0012]
进一步的，所述步骤(2)中，对渗漉液进行减压回收乙醇,浓缩至浓缩液a的相对密度为1.03-1.05，得到浓缩液a。
[0013]
进一步的，所述步骤(2)中，所述减压浓缩的压力为300-500pa。本发明通过采用上
述减压浓缩的步骤，浓缩效率高，活性成份不易破坏，产品质量好，提高了。
[0014]
进一步的，所述步骤(3)中，所述浓缩液a与加入水的体积比为1:0.9-1.1，所述稀释液与石油醚的体积比为1:5.5-6.5。
[0015]
进一步的，所述步骤(3)中，采用石油醚进行萃取的温度为65-80℃。
[0016]
本发明通过用石油醚萃取的方法,并严格控制萃取过程中的各工艺参数以及控制各组分的用量，有利于除去色素，提高山楂叶提取物的纯度，其对有效成分总黄酮和金丝桃苷的含量损失小，提高了有效成分的产品收率和提取效率。
[0017]
进一步的，所述步骤(4)中，所述处理液与乙酸乙酯的体积比为1:3.8-4.2。
[0018]
进一步的，所述步骤(4)中，采用乙酸乙酯对处理液进行超声波提取，所述超声波提取的功率为125-145w，超声频率为30-40khz，提取时间为30-60min，所述超声波提取采用间隔超声提取，间隔时间为60-90s，每次超声150-210s。本发明采用乙酸乙酯对处理液进行超声波间隔超声提取，有利于提高有效成分总黄酮和金丝桃苷的含量，其活性成分收率高，操作简单易控，提取效率高。
[0019]
进一步的，所述步骤(5)中，所述减压浓缩的压力为300-500pa。本发明通过采用上述减压浓缩的步骤，浓缩效率高，活性成份不易破坏，效成分总黄酮和金丝桃苷的含量收率高，产品质量好。
[0020]
进一步的，所述步骤(5)中，采用对浓缩液b进行真空冷冻干燥，真空冷冻干燥方法包括如下步骤：
[0021]
a1、浓缩液b浓缩至含水率小于60％后，进行预冷冻，得到经过预冷冻的提取物a1，所述预冷冻时间为-25～-20℃，预冷冻时间为45-75min；
[0022]
a2、将经过预冷冻的提取物a1置于真空冷冻干燥设备中进行冷冻，冷冻时间为-45～-35℃，真空度为50-100pa，冷冻干燥时间为90-150min，得到提取物a2；
[0023]
a3、将真空冷冻干燥设备中的温度降至-55～-50℃，抽真空进行升华干燥，当温度达28-34℃时保持负压60-120min，加压至常压后，取出经干燥的提取物，备用。
[0024]
进一步的，所述步骤a3具体为：将真空冷冻干燥设备中的温度降至-55～-50℃，抽真空进行升华干燥，其中升温步骤为：s1、温度由-50℃上升到-30℃阶段过程中，升温速度为4-6℃/10min,真空度保持在10-30pa；s2、从-30℃升至-10℃阶段，升温速度为4-6℃/10min，真空度保持在35-55pa之间；s3、从-10℃至0℃阶段，升温速度为7-9℃/10min，真空度保持在60-80pa；s4、从0℃升温至28-34℃阶段，升温速度为7-9℃/10min，真空度保持在10-30pa保持负压60-120min，加压至常压后，取出经干燥的提取物，备用。
[0025]
本发明通过采用上述真空冷冻干燥工艺，根据不同阶段，配合不同的升温速度和真空度，山楂叶提取物中的有效成分损失小，含水量降至4％以下，可延长提取物的保藏时间，即不影响产品的质量，使产品质量稳定，又可达到快速升华的目的，缩短冻干时间，并可大大节约能耗。
[0026]
本发明还提供一种由上述山楂叶提取物的提取方法提取制得的山楂叶提取物。本发明的山楂叶提取物中，总黄酮含量大于90％，金丝桃苷含量大于0.5％，活性成分收率高，产品纯度高，产品质量稳定。
[0027]
本发明的有益效果在于：本发明的山楂叶提取物的提取方法中，采用乙醇进行渗漉，渗漉过程中，提取出了其中的有效成分，同时也溶出了大量的叶绿素，这些成分不除，会
影响有效成分总黄酮和金丝桃苷的含量；本发明通过用石油醚萃取的方法除去色素，再用乙酸乙酯提取出所需的总黄酮和金丝桃苷，并控制石油醚和乙酸乙酯的量；制得的山楂叶提取物中，总黄酮含量大于90％，金丝桃苷含量大于0.5％，该提取方法的活性成分收率高，提取工艺简单，提取效率高，便于操作控制，生产成本低，有利于工业化生产。
具体实施方式
[0028]
为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
[0029]
实施例1
[0030]
本实施例中，一种山楂叶提取物的提取方法，包括如下步骤：
[0031]
(1)取山楂叶，粉碎成山楂叶粉后，采用乙醇作为溶剂进行渗漉，收集渗漉液；
[0032]
(2)对渗漉液进行减压浓缩并回收乙醇，得到浓缩液a；
[0033]
(3)浓缩液a加水稀释，得到稀释液；稀释液采用石油醚进行萃取，分出水层，得到处理液；
[0034]
(4)采用乙酸乙酯对处理液进行提取，得到提取液；
[0035]
(5)对提取液进行减压浓缩并回收乙酸乙酯，得到浓缩液b；进行干燥后，得到山楂叶提取物。
[0036]
进一步的，所述步骤(1)中，乙醇的加入量为山楂叶粉的10倍量，所述乙醇的浓度为95％wt，渗漉速度为3ml/分钟。即每kg山楂叶粉加入10l的95％乙醇。所述山楂叶先进行粗粉碎后，再进行超微粉碎至过180目筛。
[0037]
进一步的，所述步骤(2)中，对渗漉液进行减压回收乙醇,浓缩至浓缩液a的相对密度为1.04，得到浓缩液a。所述减压浓缩的压力为400pa。
[0038]
进一步的，所述步骤(3)中，所述浓缩液a与加入水的体积比为1:1，所述稀释液与石油醚的体积比为1:6。采用石油醚进行萃取的温度为70℃。
[0039]
进一步的，所述步骤(4)中，所述处理液与乙酸乙酯的体积比为1:4。
[0040]
进一步的，所述步骤(4)中，采用乙酸乙酯对处理液进行超声波提取，所述超声波提取的功率为130w，超声频率为35khz，提取时间为45min，所述超声波提取采用间隔超声提取，间隔时间为75s，每次超声180s。
[0041]
进一步的，所述步骤(5)中，所述减压浓缩的压力为400pa。
[0042]
进一步的，所述步骤(5)中，采用对浓缩液b进行真空冷冻干燥，真空冷冻干燥方法包括如下步骤：
[0043]
a1、浓缩液b浓缩至含水率小于60％后，进行预冷冻，得到经过预冷冻的提取物a1，所述预冷冻时间为-22℃，预冷冻时间为60min；
[0044]
a2、将经过预冷冻的提取物a1置于真空冷冻干燥设备中进行冷冻，冷冻时间为-40℃，真空度为60pa，冷冻干燥时间为120min，得到提取物a2；
[0045]
a3、将真空冷冻干燥设备中的温度降至-52℃，抽真空进行升华干燥，当温度达30℃时保持负压90min，加压至常压后，取出经干燥的提取物，备用。提取物经真空冷冻干燥后，含水量降至4％以下。
[0046]
进一步的，所述步骤a3具体为：将真空冷冻干燥设备中的温度降至-52℃，抽真空
进行升华干燥，其中升温步骤为：s1、温度由-50℃上升到-30℃阶段过程中，升温速度为5℃/10min,真空度保持在20pa；s2、从-30℃升至-10℃阶段，升温速度为5℃/10min，真空度保持在40pa；s3、从-10℃至0℃阶段，升温速度为8℃/10min，真空度保持在70pa；s4、从0℃升温至30℃阶段，升温速度为8℃/10min，真空度保持在20pa，保持负压90min，缓慢加压至常压后，取出经干燥的提取物，备用。
[0047]
实施例2
[0048]
本实施例中，所述步骤(1)中，乙醇的加入量为山楂叶粉的9倍量，所述乙醇的浓度为95％wt，渗漉速度为2.5ml/分钟。
[0049]
进一步的，所述步骤(2)中，对渗漉液进行减压回收乙醇,浓缩至浓缩液a的相对密度为1.03，得到浓缩液a。所述减压浓缩的压力为300pa。
[0050]
进一步的，所述步骤(3)中，所述浓缩液a与加入水的体积比为1:0.9，所述稀释液与石油醚的体积比为1:5.5。采用石油醚进行萃取的温度为65℃。
[0051]
进一步的，所述步骤(4)中，所述处理液与乙酸乙酯的体积比为1:3.8。
[0052]
进一步的，所述步骤(4)中，采用乙酸乙酯对处理液进行超声波提取，所述超声波提取的功率为125w，超声频率为30khz，提取时间为30min，所述超声波提取采用间隔超声提取，间隔时间为60s，每次超声150s。
[0053]
进一步的，所述步骤(5)中，所述减压浓缩的压力为300pa。
[0054]
进一步的，所述步骤(5)中，采用对浓缩液b进行真空冷冻干燥，真空冷冻干燥方法包括如下步骤：
[0055]
a1、浓缩液b浓缩至含水率小于60％后，进行预冷冻，得到经过预冷冻的提取物a1，所述预冷冻时间为-25℃，预冷冻时间为45-75min；
[0056]
a2、将经过预冷冻的提取物a1置于真空冷冻干燥设备中进行冷冻，冷冻时间为-45℃，真空度为50pa，冷冻干燥时间为90min，得到提取物a2；
[0057]
a3、将真空冷冻干燥设备中的温度降至-55℃，抽真空进行升华干燥，当温度达28℃时保持负压120min，加压至常压后，取出经干燥的提取物，备用。
[0058]
进一步的，所述步骤a3具体为：将真空冷冻干燥设备中的温度降至-55℃，抽真空进行升华干燥，其中升温步骤为：s1、温度由-50℃上升到-30℃阶段过程中，升温速度为4℃/10min,真空度保持在10pa；s2、从-30℃升至-10℃阶段，升温速度为4℃/10min，真空度保持在35pa之间；s3、从-10℃至0℃阶段，升温速度为7℃/10min，真空度保持在60pa；s4、从0℃升温至28℃阶段，升温速度为7℃/10min，真空度保持在10pa保持负压120min，加压至常压后，取出经干燥的提取物，备用。
[0059]
本实施例的其余内容与实施例1相同，这里不再赘述。
[0060]
实施例3
[0061]
本实施例中，所述步骤(1)中，乙醇的加入量为山楂叶粉的11倍量，所述乙醇的浓度为95％wt，渗漉速度为3.5ml/分钟。
[0062]
进一步的，所述步骤(2)中，对渗漉液进行减压回收乙醇,浓缩至浓缩液a的相对密度为1.05，得到浓缩液a。所述减压浓缩的压力为500pa。
[0063]
进一步的，所述步骤(3)中，所述浓缩液a与加入水的体积比为1:1.1，所述稀释液与石油醚的体积比为1:6.5。采用石油醚进行萃取的温度为80℃。
[0064]
进一步的，所述步骤(4)中，所述处理液与乙酸乙酯的体积比为1:4.2。
[0065]
进一步的，所述步骤(4)中，采用乙酸乙酯对处理液进行超声波提取，所述超声波提取的功率为145w，超声频率为40khz，提取时间为60min，所述超声波提取采用间隔超声提取，间隔时间为90s，每次超声210s。
[0066]
进一步的，所述步骤(5)中，所述减压浓缩的压力为500pa。
[0067]
进一步的，所述步骤(5)中，采用对浓缩液b进行真空冷冻干燥，真空冷冻干燥方法包括如下步骤：
[0068]
a1、浓缩液b浓缩至含水率小于60％后，进行预冷冻，得到经过预冷冻的提取物a1，所述预冷冻时间为-20℃，预冷冻时间为75min；
[0069]
a2、将经过预冷冻的提取物a1置于真空冷冻干燥设备中进行冷冻，冷冻时间为-35℃，真空度为100pa，冷冻干燥时间为50min，得到提取物a2；
[0070]
a3、将真空冷冻干燥设备中的温度降至-50℃，抽真空进行升华干燥，当温度达34℃时保持负压60min，加压至常压后，取出经干燥的提取物，备用。
[0071]
进一步的，所述步骤a3具体为：将真空冷冻干燥设备中的温度降至-50℃，抽真空进行升华干燥，其中升温步骤为：s1、温度由-50℃上升到-30℃阶段过程中，升温速度为6℃/10min,真空度保持在30pa；s2、从-30℃升至-10℃阶段，升温速度为6℃/10min，真空度保持在55pa之间；s3、从-10℃至0℃阶段，升温速度为9℃/10min，真空度保持在80pa；s4、从0℃升温至34℃阶段，升温速度为9℃/10min，真空度保持在30pa保持负压60min，加压至常压后，取出经干燥的提取物，备用。
[0072]
本实施例的其余内容与实施例1相同，这里不再赘述。
[0073]
实施例4
[0074]
本实施例中，所述步骤(1)中，乙醇的加入量为山楂叶粉的9-11倍量，所述乙醇的浓度为95％wt，渗漉速度为3.2ml/分钟。
[0075]
进一步的，所述步骤(2)中，对渗漉液进行减压回收乙醇,浓缩至浓缩液a的相对密度为1.035，得到浓缩液a。所述步骤(2)中，所述减压浓缩的压力为350pa。
[0076]
进一步的，所述步骤(3)中，采用石油醚进行萃取的温度为75℃。
[0077]
进一步的，所述步骤(4)中，采用乙酸乙酯对处理液进行超声波提取，所述超声波提取的功率为135w，超声频率为35khz，提取时间为40min，所述超声波提取采用间隔超声提取，间隔时间为70s，每次超声200s。
[0078]
进一步的，所述步骤(5)中，所述减压浓缩的压力为350pa。
[0079]
进一步的，所述步骤(5)中，采用对浓缩液b进行真空冷冻干燥，真空冷冻干燥方法包括如下步骤：
[0080]
a1、浓缩液b浓缩至含水率小于60％后，进行预冷冻，得到经过预冷冻的提取物a1，所述预冷冻时间为-22℃，预冷冻时间为50min；
[0081]
a2、将经过预冷冻的提取物a1置于真空冷冻干燥设备中进行冷冻，冷冻时间为-42℃，真空度为60pa，冷冻干燥时间为100min，得到提取物a2；
[0082]
a3、将真空冷冻干燥设备中的温度降至-52℃，抽真空进行升华干燥，当温度达32℃时保持负压75min，加压至常压后，取出经干燥的提取物，备用。
[0083]
进一步的，所述步骤a3具体为：将真空冷冻干燥设备中的温度降至-52℃，抽真空
进行升华干燥，其中升温步骤为：s1、温度由-50℃上升到-30℃阶段过程中，升温速度为5℃/10min,真空度保持在15pa；s2、从-30℃升至-10℃阶段，升温速度为5℃/10min，真空度保持在50pa之间；s3、从-10℃至0℃阶段，升温速度为8℃/10min，真空度保持在65pa；s4、从0℃升温至32℃阶段，升温速度为8℃/10min，真空度保持在25pa保持负压80min，加压至常压后，取出经干燥的提取物，备用。
[0084]
本实施例的其余内容与实施例1相同，这里不再赘述。
[0085]
对比例1
[0086]
本对比例与实施例1的区别在于：所述步骤(2)中采用乙酸乙酯对处理液进行震荡提取取代超声波提取，提取时间为45min。
[0087]
对比例2
[0088]
本对比例与实施例1的区别在于：所述步骤(5)中采用带式干燥取代真空冷冻干燥，带式干燥温度为70℃。
[0089]
按照2020版中国药典的测定方法对实施例1-4和对比例1-2进行测定，测定得到总黄酮和金丝桃苷含量如下：
[0090][0091][0092]
本发明实施例1-4制得的山楂叶提取物中，总黄酮含量大于90％，金丝桃苷含量大于0.5％，该提取方法的活性成分收率高，提取工艺简单，提取效率高，便于操作控制，生产成本低，有利于工业化生产.
[0093]
上述实施例为本发明较佳的实现方案，除此之外，本发明还可以其它方式实现，在不脱离本发明构思的前提下任何显而易见的替换均在本发明的保护范围之内。