柿叶总黄酮的提取和纯化方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种总黄酮的提取方法，尤其涉及柿叶总黄酮的提取和纯化方法，属于柿叶总黄酮的提取和纯化领域。
【背景技术】
[0002]柿叶是植物柿树(D1spyros kaki Thunb.)的新鲜或干燥叶。现代科学分析发现，柿叶除含有丰富的维生素C外，还含有三萜类化合物，鞣质类化合物以及大量的黄酮类化合物，如槲皮素、山奈酚、异槲皮苷等。研宄发现柿叶具有抗菌、消炎、活血、降压、降脂、抗癌、去黄褐斑作用，可广泛开发用于食品、药品和化妆品等领域。其中，柿叶总黄酮具有活血化淤、通络、止血、抗氧化、抗癌、降血糖、降血压、降血脂等药理作用，临床用于治疗冠心病，脑动脉硬化，疗效确切(曹珊等，柿叶总黄酮药理作用研宄及其临床应用探讨，中医学报，2012，第 27 卷，总第 171 期，p987_989)。
[0003]获得高纯度的柿叶总黄酮的对于确保柿叶提取物发挥医疗及保健功效至关重要。目前制备较高纯度柿叶总黄酮的方法一般是首先柿叶经水(或碱水)提醇沉、或者含醇水提得到柿叶粗黄酮，将柿叶粗黄酮进一步精制得到纯品总黄酮。柿叶粗黄酮精制的工艺主要有乙酸乙酯多次萃取法以及大孔树脂吸附法。因为乳化等问题，采用乙酸乙酯多次萃取的精制方法存在生产周期长、产品纯度不高、溶剂耗费大、耗能高、效费比低等较为严重的问题，严重制约了工业化生产。采用树脂吸附法进行精制时，由于树脂在使用过程中的不可避免的劣化造成工艺参数的不确定性，最终导致产品质量不稳；此外，采用树脂吸附法进行精制还存在溶剂消耗量大，生产周期长等问题，亟待改进。
【发明内容】
[0004]本发明所要解决的技术问题是提供一种新的柿叶总黄酮的提取和纯化方法，该方法生产周期短、耗费溶剂少、所制备的总黄酮纯度高。
[0005]为解决上述技术问题，本发明所采取的技术方案是:
[0006]一种柿叶总黄酮的提取和纯化方法，包括以下步骤:
[0007](I)柿叶用水提取，得到柿叶粗提液；(2)柿叶粗提液中加入萃取溶剂，在多级离心萃取装置中采用多级离心萃取的方式获得有机溶剂相；(3)采用单级离心反萃取的方式除去有机溶剂相中的杂质，收集去除杂质后的有机溶剂相，浓缩、干燥，即得高纯柿叶总黄酮。
[0008]优选的，步骤(I)中将干燥柿叶加8-12倍质量水，煎煮2次，每次煎煮0.5_2h，合并煎煮液，减压浓缩至比重1.01-1.15的浸膏，得到柿叶粗提液；
[0009]步骤(2)中，按体积比计，柿叶粗提液与萃取溶剂的比例优选为1:0.3-1.2 ;所述的萃取溶剂包括但不限于乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、正丁醇或二氯甲烷中的任何一种或多种按照任意比例组成的混合物，优选为乙酸乙酯；
[0010]步骤(2)中所述的多级离心萃取优选为2-10级离心萃取，更优选为3-6级离心萃取，特别优选为5级离心萃取；所述的离心转速为lOOO-lOOOOrpm，优选为1500-8000rpm，最优为 2000-3000rpm。
[0011]步骤(3)中所述的采用单级离心反萃取的方式除去有机溶剂相中的杂质包括向有机溶剂相中加入去离子水进行离心反萃取；优选的，按体积比计，有机溶剂相与去离子水的比例为1:0.3-1.2 ;所述的离心转速优选lOOO-lOOOOrpm，优选为1500-8000rpm，最优为2000-3000rpmo
[0012]本发明柿叶总黄酮的提取和纯化方法，分离效率高，生产周期短；克服了现有的萃取柿叶总黄酮过程中所存在的乳化效应，显著减少了有机溶剂的用量，有效降低了生产成本，生产效率高；经过HPLC法检测，本发明方法能够获得高纯度的柿叶总黄酮产品，总黄酮纯度最高可达99.3%。本发明所提取的精制柿叶总黄酮可以用于药品、食品、保健品、化妆品的原料或者添加剂，用途广泛。
【附图说明】
[0013]图1为本发明离心萃取精制柿叶总黄酮的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0014]下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但是应理解所述实施例仅是范例性的，不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改或替换均落入本发明的保护范围。
[0015]说明:以下实施例中所用到柿叶均是同一来源、同一批次的柿叶，不存在任何实质性差异。
[0016]实施例1
[0017]称取柿叶粗粉(30目)100g，加水1000ml，微沸煎煮60min，滤出煎煮液；滤渣加水800ml微沸煎煮35min，合并煎煮液，减压浓缩至比重1.03的浸膏，得柿叶粗提液；将柿叶粗提液泵入多级串联离心萃取机(购自张家港市中沃机械有限公司，CTL50型离心萃取机)，同时泵入等体积的乙酸乙酯溶液，开启离心转速为2000rpm，进行5级串联离心萃取，收集有机溶剂相；在离心反萃取单元时，泵入与有机溶剂相等体积的去离子水，开启离心转速为2000rpm，进行离心反萃取，收集反萃取除杂质后的乙酸乙酯溶液，减压回收溶剂至干，所得干燥物进一步在50°C减压干燥完全，即得。
[0018]采用《中华人民共和国药典》2010版一部规定HPLC分析方法测定产品总黄酮的纯度；测定结果:产品总黄酮的纯度为99.3%。
[0019]实施例2
[0020]称取柿叶粗粉(30目)1000g，加水12000ml，微沸煎煮50min，滤出煎煮液；滤渣加水8000ml微沸煎煮30min，合并煎煮液，减压浓缩至比重1.09，得柿叶粗提液；将柿叶粗提液泵入多级串联离心萃取机(购自张家港市中沃机械有限公司，CTL50型离心萃取机)，同时泵入等体积的乙酸乙酯溶液，开启离心转速为6000rpm，进行2级串联离心萃取，收集有机溶剂相；在离心反萃取单元时，泵入与有机溶剂相等体积的去离子水，开启离心转速为6000rpm，进行离心反萃取，收集反萃取除杂质后的乙酸乙酯溶液，减压回收溶剂至干，所得干燥物进一步在50°C减压干燥完全，即得。
[0021]采用《中华人民共和国药典》2010版一部规定HPLC分析方法测定产品总黄酮的纯度；测定结果:产品总黄酮的纯度为89.2%。
[0022]实施例3
[0023]称取柿叶粗粉(30目)100g，加水1200ml，微沸煎煮90min，滤出煎煮液；滤渣加水100ml微沸煎煮45min，合并煎煮液，减压浓缩至比重1.08，得柿叶粗提液；将柿叶粗提液泵入多级串联离心萃取机(购自张家港市中沃机械有限公司，CTL50型离心萃取机)，同时泵入等体积的正丁醇溶液，开启离心转速为5000rpm，进行3级串联离心萃取，收集有机溶剂相；在离心反萃取单元时，泵入与有机溶剂相等体积的去离子水，开启离心转速为5000rpm，进行离心反萃取，收集反萃取除杂质后的正丁醇溶液，减压回收溶剂至干，所得干燥物进一步在50°C减压干燥完全，即得。
[0024]采用《中华人民共和国药典》2010版一部规定HPLC分析方法测定产品总黄酮的纯度；测定结果:产品总黄酮的纯度为88.6%。
[0025]实施例4
[0026]称取柿叶粗粉(30目)100g，加水1000ml，微沸煎煮60min，滤出煎煮液；滤渣加水800ml微沸煎煮35min，合并煎煮液，减压浓缩至比重1.06的浸膏，得柿叶粗提液；将柿叶粗提液泵入多级串联离