使用抗HER2抗体药物缀合物治疗癌症的组合物和方法与流程

使用抗her2抗体药物缀合物治疗癌症的组合物和方法
1.相关申请的交叉引用本技术要求2019年10月29日提交的美国临时申请号62/927,623的优先权，所述临时申请的内容出于所有目的在此以其整体通过引用并入。
2.ascii文本文件提交序列表以下以ascii文本文件提交的内容通过引用以其整体并入本文：序列表的计算机可读形式(crf)(文件名：720692000240seqlist.txt，记录的日期：2020年10月19日，大小：14 kb)。
3.发明领域本技术属于癌症治疗剂的领域，并且涉及使用抗体-药物缀合物(adc)治疗癌症的组合物和方法。
4.背景人表皮生长因子受体(her)家族在许多肿瘤的发病机制中发挥重要作用。her2受体在许多肿瘤(25%的乳腺癌、20%的卵巢癌、30%的肠型胃癌、20%的肺癌)中过表达，并且这种过表达与侵袭性肿瘤和不良预后相关(slamon dj等人, science, 1987, 235(4785): 177; slamon dj等人, science, 1989, 244(495): 707; morrison c等人, j. clin. oncol., 2006, 24(15):2376)。尽管近来在靶向her2的治疗药剂的开发中有进展，但具有转移性her2-阳性乳腺癌和胃癌的患者的疾病很少被治愈。针对her2的原型抗体-药物缀合物(adc)，恩美曲妥珠单抗(ado-trastuzumab emtansine, kadcyla
®
)，已被批准用于治疗过表达her2的癌症。然而，其应用仅限于乳腺癌。
5.fda批准的kadcyla
®
的美国处方信息包括来自具有晚期her2-阳性乳腺癌的女性中的3期试验的数据，所述女性已经接受先前用紫杉烷和曲妥珠单抗的疗法。与用拉帕替尼和卡培他滨治疗的对照组相比，恩美曲妥珠单抗组展现客观反应率(43.6%)、无进展存活期(中值9.6个月)和总体存活期(中值30.9个月)的统计学显著改善。处方信息包括肝毒性、心脏毒性和胚胎-胎儿毒性的加框警告。对于肺毒性、输液相关反应、出血、血小板减少和神经毒性列出了额外的警告和注意事项。如在讨论来自更近期的恩美曲妥珠单抗的试验的结果的社论(k. jhaveri, j clin oncol. 2017; 35(2):127-130)中所示，恩美曲妥珠单抗的效力可能受限于“... her2-t-dm1复合物的内化不佳，her2-t-dm1复合物的细胞内和内体运输缺陷，t-dm1的溶酶体降解缺陷，以及药物外排泵(诸如多药耐药性1)的表达增加”。
6.仍然需要改进的治疗剂来治疗具有her2-阳性癌症的患者。一种改进恩美曲妥珠单抗的效力和/或安全性概况的新adc可以为具有her2-阳性癌症的患者提供有益的治疗替代方案。
7.本文引用的所有出版物、专利和专利申请在此以其整体通过引用并入本文。
8.发明简述在一个方面，本发明提供了治疗个体中的her2-阳性癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和包含毒素的缀合部分，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨
酰胺残基，且其中所述缀合部分缀合至所述受体谷氨酰胺残基。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过免疫组织化学(ihc)测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症如通过荧光原位杂交(fish)测试所确定为阳性。
9.在根据上述方法中任一种的一些实施方案中，所述个体对标准疗法无反应或不适合标准疗法。在一些实施方案中，所述个体先前未接受第二种her2-靶向剂。在一些实施方案中，所述个体先前已接受第二种her2-靶向剂。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症对第二种her2-靶向剂具有抗性或难治性。在一些实施方案中，所述第二种her-2靶向剂是曲妥珠单抗、恩美曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或拉帕替尼。
10.在根据上述方法中任一种的一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以不超过约8 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以不超过约6 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约0.3 mg/kg至约8 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约0.3 mg/kg、约0.5 mg/kg、约1.0 mg/kg、约2.0 mg/kg、约3.0 mg/kg、约4.5 mg/kg、约6.0mg/kg或8.0mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约1 mg/kg至约2 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约2 mg/kg至约3 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约1.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约2.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约3.0 mg/kg的剂量施用。
11.在一个方面，提供了治疗个体中的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和包含毒素的缀合部分，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，其中所述缀合部分缀合至所述受体谷氨酰胺残基，且其中所述抗体-药物缀合物以不超过约8 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以不超过约6 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约0.3 mg/kg至约8 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约0.3 mg/kg、约0.5 mg/kg、约1.0 mg/kg、约2.0 mg/kg、约3.0 mg/kg、约4.5 mg/kg、约6.0mg/kg或8.0mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约1 mg/kg至约2 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约2 mg/kg至约3 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约1.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约2.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物以约3.0 mg/kg的剂量施用。
12.在根据上述方法中任一种的一些实施方案中，静脉内施用所述抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，约每三周一次、约每隔一周或约每周一次施用所述抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，所述个体是人。
13.在根据上述方法中任一种的一些实施方案中，所述癌症是实体癌。在一些实施方案中，所述癌症选自乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌和肺癌。在一些实施方案中，所述癌症是晚期癌症。在一些实施方案中，所述癌症是转移性癌症。在一些实施方案中，所述个体已经受先前癌症疗法、诸如抗her2抗体疗法(例如曲妥珠单抗)的失败。
14.在根据上述方法中任一种的一些实施方案中，所述抗her2抗体的fc区是n-糖基化的。在一些实施方案中，受体谷氨酰胺残基是根据eu编号的抗her2抗体的重链中的q295。
15.在根据上述方法中任一种的一些实施方案中，her2抗体的每条重链缀合至缀合部分。在一些实施方案中，所述缀合部分通过转谷氨酰胺化缀合至所述受体谷氨酰胺残基。
16.在根据上述方法中任一种的一些实施方案中，所述抗her2抗体包含：重链可变区(vh)，其包含：包含seq id no:1的氨基酸序列的重链互补决定区(hc-cdr) 1、包含seq id no:2的氨基酸序列的hc-cdr2和包含seq id no:3的氨基酸序列的hc-cdr3；和轻链可变区(vl)，其包含：包含seq id no:4的氨基酸序列的轻链互补决定区(lc-cdr) 1、包含seq id no:5的氨基酸序列的lc-cdr2和包含seq id no:6的氨基酸序列的lc-cdr3。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含：包含seq id no:7的氨基酸序列的vh和包含seq id no:8的氨基酸序列的vl。在一些实施方案中，所述fc区是iggl fc。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含：包含seq id no:9的氨基酸序列的重链和包含seq id no:10的氨基酸序列的轻链。
17.在根据上述方法中任一种的一些实施方案中，所述缀合部分包含可切割的接头。在一些实施方案中，所述毒素是单甲基澳瑞他汀e (mmae)。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(iii)的化学结构：，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12的整数。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(i)的化学结构：。
18.在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。
19.在根据上述方法中任一种的一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物是dp303c。
20.还提供了用于上述方法中任一种中的试剂盒和制品。
21.应当理解，可以组合本文所述的各个实施方案的特性中的一种、一些或所有以形成本发明的其他实施方案。本发明的这些和其他方面对于本领域技术人员将变得显而易见。
22.附图简述图1描绘dp001的示意性结构。
23.图2显示用dp001(蓝色圆形和蓝色线)、dp303c(绿色三角形和绿色线)或t-dm1(棕色方形和棕色线)处理后sk-br-3细胞(her2 3+细胞系)的细胞增殖抑制曲线。
24.图3显示用dp001(蓝色圆形和蓝色线)、dp303c(绿色三角形和绿色线)或t-dm1(棕
色方形和棕色线)处理后jimt-1细胞(her2 2+细胞系)的细胞增殖抑制曲线。
25.图4显示用dp001(蓝色圆形和蓝色线)、dp303c(绿色三角形和绿色线)或t-dm1(棕色方形和棕色线)处理后hs746t细胞(her2阴性细胞系)的细胞增殖抑制曲线。
26.图5显示dp303c对人胃癌异种移植模型nci-n87的生长的影响。用nci-n87细胞(her2 3+细胞系)植入无胸腺裸小鼠。以单剂量静脉内向动物施用的空白对照(pbs，灰色实心圆形和灰色线)、2 mg/kg的dp303c(紫色空心菱形和紫色点线)、4 mg/kg的dp303c(紫色实心菱形和紫色短划线)、8 mg/kg的dp303c(紫色空心菱形和紫色实线)、2 mg/kg的t-dm1(黑色空心方形和黑色点线)、4 mg/kg的t-dm1(黑色实心方形和黑色短划线)或8 mg/kg的t-dm1(黑色实心方形和黑色实线)。在指定的时间点测量肿瘤的大小。每个治疗组的数据以平均值呈现。
27.图6显示dp303c对人乳腺癌异种移植模型jimt-1的生长的影响。用jimt-1细胞植入无胸腺裸小鼠。以单剂量静脉内向动物施用空白对照(对照)、dp303c、t-dm1或bp-adc。在指定的时间点测量肿瘤的大小。每组中存在5只动物。每个治疗组的数据以平均值呈现。
28.图7显示在sd大鼠中单次iv推注3 mg/kg(蓝色菱形和蓝色长划线)、10 mg/kg(红色方形和红色短划线)或30 mg/kg(灰色三角形和灰色实线) dp303c后的血清dp303c浓度-时间曲线。数据代表平均值
ꢀ±ꢀ
标准偏差。
29.图8显示在sd大鼠中单次iv推注3 mg/kg(蓝色菱形和蓝色长划线)、10 mg/kg(红色方形和红色短划线)或30 mg/kg(绿色三角形和绿色实线) dp303c后的血清总抗体(dp001)浓度-时间曲线。数据代表平均值
ꢀ±ꢀ
标准偏差。
30.图9显示在sd大鼠中单次iv推注3 mg/kg(蓝色菱形和蓝色长划线)、10 mg/kg(红色方形和红色短划线)或30 mg/kg(绿色三角形和绿色实线) dp303c后的游离 mmae浓度-时间曲线。数据代表平均值
ꢀ±ꢀ
标准偏差。
31.图10显示在食蟹猴中单次静脉内输注1.2 mg/kg(正方形和点线)、4 mg/kg(三角形和短划线)或12 mg/kg(菱形和实线) dp303c后dp303c的血清浓度-时间曲线。数据代表平均值
ꢀ±ꢀ
标准偏差。
32.图11显示在食蟹猴中单次静脉内输注1.2 mg/kg(正方形和点线)、4 mg/kg(三角形和短划线)或12 mg/kg(菱形和实线) dp303c后总抗体(dp001)的血清浓度-时间曲线。数据代表平均值
ꢀ±ꢀ
标准偏差。
33.图12显示在食蟹猴中单次静脉内输注1.2 mg/kg(正方形和点线)、4 mg/kg(三角形和短划线)或12 mg/kg(菱形和实线) dp303c后游离mmae的血浆浓度-时间曲线。数据代表平均值
ꢀ±ꢀ
标准偏差。
34.图13显示在食蟹猴中两次静脉内输注6 mg/kg(蓝色正方形和点线)或20 mg/kg(红色三角形和长划线) dp303c后游离mmae的血浆浓度-时间曲线。数据代表平均值
ꢀ±ꢀ
标准偏差。
35.图14a和14b显示在食蟹猴中静脉内输注0、6、20/12、40/30 mg/kg dp303c后dp303c的血清浓度-时间曲线。血清dp303c浓度-时间曲线显示的各组和输注情况如下：第2组在第一剂后(6.0 mg/kg，第1天，空心圆形)，第3组在第一剂后(20.0 mg/kg，第1天，空心方形)，第4组在第一剂后(40.0 mg/kg，第1天，实心方形)，第2组在第四剂后(6.0 mg/kg，第64天，空心三角形)，第3组在第四剂后(12.0 mg/kg，第64天，实心三角形)，第4组在第三剂
后(30.0 mg/kg，第43天，实心圆形)。图14a显示在雄性食蟹猴中dp303c的血清浓度-时间曲线。图14b显示在雌性食蟹猴中dp303c的血清浓度-时间曲线。
36.图15a和15b显示在食蟹猴中静脉内输注0、6、20/12、40/30 mg/kg dp303c后总抗体(dp001)的血清浓度-时间曲线。血清总抗体(dp001)浓度-时间曲线中显示各组和输注情况如下：第2组在第一剂后(6.0 mg/kg，第1天，空心圆形)，第3组在第一剂后(20.0 mg/kg，第1天，空心方形)，第4组在第一剂后(40.0 mg/kg，第1天，实心方形)，第2组在第四剂后(6.0 mg/kg，第64天，空心三角形)，第3组在第四剂后(12.0 mg/kg，第64天，实心三角形)，第4组在第三剂后(30.0 mg/kg，第43天，实心圆形)。图15a显示在雄性食蟹猴中总抗体(dp001)的血清浓度-时间曲线。图15b显示在雌性食蟹猴中总抗体(dp001)的血清浓度-时间曲线。
37.图16a和16b显示在食蟹猴中静脉内输注0、6、20/12、40/30 mg/kg dp303c后游离mmae的血清浓度-时间曲线。血清游离mmae浓度-时间曲线中显示各组和输注情况如下：第2组在第一剂后(6.0 mg/kg，第1天，空心圆形)，第3组在第一剂后(20.0 mg/kg，第1天，空心方形)，第4组在第一剂后(40.0 mg/kg，第1天，空心三角形)，第2组在第四剂后(6.0 mg/kg，第64天，实心圆形)，第3组在第四剂后(12.0 mg/kg，第64天，实心方形)，第4组在第三剂后(30.0 mg/kg，第43天，空心三角形)。图16a显示在雄性食蟹猴中游离mmae的血清浓度-时间曲线。图16b显示在雌性食蟹猴中游离mmae的血清浓度-时间曲线。
38.发明详述本技术提供了使用抗体-药物缀合物(adc)治疗个体中的her2-阳性癌症的方法，所述抗体-药物缀合物(adc)的毒素组分缀合至抗her2抗体的糖基化fc区中的内源性受体谷氨酰胺残基。在一些实施方案中，所述adc是dp303c。本文所述的adc在体外和体内具有改进的缀合稳定性，这有助于增加针对her2-阳性癌症(诸如her2 2+和3+癌症)的效力，并减少不良反应。本文所述的方法可用于治疗各种her2-阳性实体癌，包括对标准her2-靶向疗法有抗性的那些。
39.因此，在一个方面，本技术提供了治疗个体中的her2-表达癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和包含毒素的缀合部分，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，且其中所述缀合部分缀合至所述受体谷氨酰胺残基。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述个体对第二种her2-靶向剂、诸如曲妥珠单抗、恩美曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或拉帕替尼具有抗性或难治性。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀合物是dp303c。
40.在另一个方面，提供了治疗个体中的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和包含毒素的缀合部分，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，其中所述缀合部分缀合至所述受体谷氨酰胺残基，且其中所述抗体-药物缀合物以不超过约8 mg/kg(例如，不超过约6 mg/kg，约1 mg/kg至约2 mg/kg，或约2 mg/kg至3 mg/kg)的剂量施用。在一些实施方案中，静脉内施用所述抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，每三周一次、每隔一周或每周一次施用所述抗体-药物缀合物。在一些实施方案中，所述抗体-药物缀
合物是dp303c。
41.i. 定义如本文所用，“her2”是指人表皮生长因子受体2。“her2-阳性癌症”是指与非癌性正常细胞相比在癌细胞上过表达her2的癌症。her2状态可以使用已知的her2测试(包括免疫组化(ihc)测试、荧光原位杂交(fish)测试、减法探针技术显色原位杂交(spot-light her2 cish)测试和inform双原位杂交(inform her2 dual ish)测试)来确定。her2-阳性癌症包括在ihc测试中测试为2+(临界)或3+(阳性)的癌症。her2-阳性癌症还包括在her2 fish测试、spot-light her2 cish测试和/或inform her2 dual ish测试中测试为阳性的癌症。“her2 2+癌症”是指在ihc测试中测试为2+的癌症。“her2 3+癌症”是指在ihc测试中测试为3+的癌症。
42.如本文所用，“治疗(treatment)”或“治疗(treating)”是用于获得有益或期望的结果(包括临床结果)的方法。为了本发明的目的，有益或期望的临床结果包括但不限于以下中的一种或多种：减轻由疾病导致的一种或多种症状，减少疾病的程度，稳定疾病(例如，预防或延迟疾病的恶化)，预防或延迟疾病的扩散(例如，转移)，预防或延迟疾病的复发，减少疾病的复发率，延迟或减缓疾病的进展，改善疾病状态，提供疾病的缓解(部分或全部)，减少治疗疾病所需的一种或多种其他药物的剂量，延迟疾病的进展，提高生活质量，和/或延长存活期。在一些实施方案中，与治疗前同一受试者中的相应症状或与未接受治疗的其他受试者中的相应症状相比，所述治疗将与癌症相关的一种或多种症状的严重程度降低至少约10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或100%中的任一者。“治疗”还涵盖癌症的病理性结果的减少。本发明的方法考虑这些治疗方面中的任何一个或多个。
43.术语“复发(recurrence)”、“复发(relapse)”或“复发(relapsed)”是指癌症或疾病在疾病消失的临床评价之后的重新出现。远处转移或局部复发的诊断可以被视为复发。
44.术语“难治的”或“抗性的”是指对治疗无反应的癌症或疾病。
[0045]“辅助环境”是指其中个体已经具有癌症病史并且通常(但不一定)对疗法(其包括但不限于手术(例如，手术切除)、放射疗法和化学疗法)有反应的临床环境。然而，由于他们的癌症病史，这些个体被认为处于发展该疾病的风险中。“辅助环境”中的治疗或施用是指随后的治疗模式。风险的程度(例如，当辅助环境中的个体被认为是“高风险”或“低风险”时)取决于几个因素，最常见的是首次治疗时的疾病程度。
[0046]“新辅助环境”是指在主要/确定性疗法之前实施该方法的临床环境。
[0047]
如本文所用，“延迟”癌症的发展意指推迟、阻碍、减缓、延缓、稳定和/或推迟疾病的发展。这种延迟可能具有不同的时间长度，这取决于病史和/或所治疗的个体。如本领域技术人员显而易见的，充分或显著的延迟实际上可以涵盖预防，因为个体没有发展该疾病。“延迟”癌症的发展的方法是当与不使用该方法相比时，在给定时间范围内降低疾病发展的概率和/或在给定时间范围内降低疾病程度的方法。此类比较通常基于使用统计学显著数量的受试者的临床研究。癌症发展可以是用标准方法(包括但不限于计算机轴向断层扫描(cat扫描)、磁共振成像(mri)、超声、凝血测试、动脉造影、活检、尿细胞学和膀胱镜检查)可检测的。发展也可以是指最初可能无法检测到的癌症进展，并且包括发生、复发和发作。
[0048]
本文使用的术语“有效量”是指足以治疗指定病症、病况或疾病、诸如改善、减轻、减少和/或延迟其一种或多种症状的化合物或组合物的量。关于癌症，有效量包括足以引起
肿瘤缩小和/或降低肿瘤生长速率(诸如抑制肿瘤生长)或预防或延迟癌症中其他不希望的细胞增殖的量。在一些实施方案中，有效量是足以延迟癌症发展的量。在一些实施方案中，有效量是足以预防或延迟复发的量。在一些实施方案中，有效量是足以降低个体中的复发率的量。有效量可以在一次或多次施用中进行施用。有效量的药物或组合物可以：(i)减少癌细胞的数量；(ii)减小肿瘤大小；(iii)在一定程度上抑制、延缓、减缓和优选停止癌细胞浸润至外周器官中；(iv)抑制(即在一定程度上减缓并优选停止)肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)预防或延缓肿瘤的发生和/或复发；(vii)降低肿瘤的复发率，和/或(viii)在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。
[0049]
如本领域所理解，“有效量”可以呈一个或多个剂量，即，可能需要单剂量或多剂量来实现期望的治疗终点。在施用一种或多种治疗剂的情况下可以考虑有效量，并且如果与一种或多种其他药剂联合，可能会或实现期望或有益的结果，则可以考虑以有效量给予治疗剂(例如，抗体-药物缀合物)。本发明的组合疗法中的组分(例如，第一和第二疗法)可以使用每种组分相同或不同的施用途径依次、同时或并行地施用。因此，组合疗法的有效量包括当依次、同时或并行地施用时产生期望结果的第一疗法的量和第二疗法的量。
[0050]“个体”或“受试者”是哺乳动物，更优选人。哺乳动物还包括但不限于农场动物、运动动物、宠物(诸如猫、狗、马)、灵长类动物、小鼠和大鼠。
[0051]
术语“抗体”以最广义使用，并且具体涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)和抗体片段，只要它们表现出期望的生物活性或功能。如本文所用，术语“免疫球蛋白”(ig)和“抗体”可互换使用。
[0052]
如本文所用的“全长抗体”是指构成抗体的天然生物形式、包括可变区和恒定区的分子。例如，在大多数哺乳动物(包括人和小鼠)中，igg同种型的全长抗体是四聚体，且由相同的两对两条免疫球蛋白链组成，每对具有一条轻链和一条重链，每条轻链包含免疫球蛋白结构域vl和cl，且每条重链包含免疫球蛋白结构域vh、ch1、ch2和ch3。在一些哺乳动物中，例如在骆驼和美洲驼中，igg抗体可以仅由两条重链组成，每条重链包含附接至fc区的可变结构域。
[0053]
如本文所用的“fc区”是指包含抗体重链的恒定区且排除第一恒定区免疫球蛋白结构域的多肽。对于igg，所述fc区可以包含免疫球蛋白结构域ch2和ch3以及ch1和ch2之间的铰链。
[0054]
如本文所用，术语“特异性识别”或“特异性结合”是指可测量和可再现的相互作用，诸如靶标和抗体(或分子或部分)之间的吸引或结合，其决定了在包括生物分子在内的异质分子群体存在的情况下靶标的存在。例如，特异性或优先结合表位的抗体是以比其与靶标的其他表位或非靶标表位的结合更大的亲和力、亲合力、更容易和/或更长的持续时间结合该表位的抗体。还应理解，例如，特异性或优先结合第一靶标的抗体(或部分或表位)可以或可以不特异性或优先结合第二靶标。因此，“特异性结合”或“优先结合”不一定需要(尽管它可以包括)排他结合。特异性结合靶标的抗体可以具有至少约10 3 m ‑1或10 4 m ‑1、有时约10 5 m ‑1或10 6 m ‑1、在其他情况下约10 6 m ‑1或10 7 m ‑1、约10 8 m ‑1至10 9 m ‑1或约10 10 m ‑1至10 11 m ‑1或更高的缔合常数。各种免疫测定形式可用于选择与特定蛋白特异性免疫反应的抗体。例如，固相elisa免疫测定通常用于选择与蛋白特异性免疫反应的单克隆抗体。对于可用于确定特异性免疫反应性的免疫测定形式和条件的描述，参见，例如，
harlow and lane (1988) antibodies, a laboratory manual, cold spring harbor publications, new york。
[0055]
术语“恒定结构域”是指免疫球蛋白分子的相对于所述免疫球蛋白的其他部分(可变结构域)(其含有抗原结合位点)具有更保守的氨基酸序列的部分。恒定结构域含有重链的ch1、ch2和ch3结构域(统称为ch)和轻链的chl(或cl)结构域。
[0056]
抗体的“可变区”或“可变结构域”是指抗体的重链或轻链的氨基末端结构域。重链的可变结构域可以被称为“vh”。轻链的可变结构域可以被称为“vl”。这些结构域通常是抗体的最可变部分并且含有抗原结合位点。
[0057]
术语“可变”是指可变结构域的某些部分在抗体间序列上差异很大并且用于每个特定抗体对其特定抗原的结合和特异性中的事实。然而，变异性并非均匀分布在抗体的可变结构域中。它集中于均在轻链和重链可变结构域中的三个称为高变区(hvr，也称为cdr)的片段中。可变结构域的最高度保守的部分被称为框架区(fr)。天然重链和轻链的可变结构域各自包含主要采用β-折叠构型的四个fr区，其通过三个hvr连接，所述hvr形成连接β-折叠结构的环，并且在一些情况下形成β-折叠结构的部分。每条链中的hvr通过fr区紧密相连在一起，并且与来自另一条链的hvr促成形成抗体的抗原结合位点(参见kabat等人，sequences of proteins of immunological interest，第五版，national institute of health, bethesda, md. (1991))。恒定结构域不直接参与抗体与抗原的结合，但表现出各种效应功能，诸如抗体参与抗体依赖性细胞毒性。
[0058]
来自任何哺乳动物物种的抗体(免疫球蛋白)的“轻链”可以基于它们的恒定结构域的氨基酸序列被分配至两种明显不同的类型(称为卡帕(“κ”)和兰姆达(“λ”))之一。
[0059]
如本文所用的术语igg“同种型”或“亚类”意指由其恒定区的化学和抗原特征定义的任何免疫球蛋白亚类。根据其重链的恒定结构域的氨基酸序列，抗体(免疫球蛋白)可以分配为不同的类别。存在五种主要类别的免疫球蛋白：iga、igd、ige、igg和igm，并且这些中的一些可以进一步分为亚类(同种型)，例如igg1、igg2、igg3、igg4、iga1和iga2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定结构域分别被称为α、γ、
ɛ
、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的，并且通常描述于例如abbas等人cellular and mol. immunology, 第4版 (w.b. saunders, co., 2000)。抗体可以是较大融合分子的一部分，其通过抗体与一种或多种其他蛋白或肽的共价或非共价缔合形成。
[0060]
如本文所用，术语“cdr”或“互补决定区”欲意指在重链和轻链多肽两者的可变区内发现的非邻接抗原组合位点。这些特定区域已描述于kabat等人, j. biol. chem. 252:6609-6616 (1977); kabat等人, u.s. dept. of health and human services,
ꢀ“
sequences of proteins of immunological interest
”ꢀ
(1991); chothia等人, j. mol. biol. 196:901-917 (1987); al-lazikani b.等人, j. mol. biol., 273: 927-948 (1997); maccallum等人, j. mol. biol. 262:732-745 (1996); abhinandan和martin, mol. immunol., 45: 3832-3839 (2008); lefranc m.p.等人, dev. comp. immunol., 27: 55-77 (2003); 以及honegger和pl
ü
ckthun, j. mol. biol., 309:657-670 (2001)，其中在针对彼此比较时所述定义包括氨基酸残基的重叠或子集。尽管如此，应用任一定义来提及抗体或移植抗体的cdr或其变体意图在如本文所定义和使用的术语的范围内。涵盖如上文引用的参考文献各自所定义的cdr的氨基酸残基阐述于下表a中，作为比
较。cdr预测算法和接口是本领域已知的，包括，例如，abhinandan和martin, mol. immunol., 45: 3832-3839 (2008); ehrenmann f.等人, nucleic acids res., 38: d301-d307 (2010); 和adolf-bryfogle j.等人, nucleic acids res., 43: d432-d438 (2015)。本段中引用的参考文献的内容通过引用以其整体并入本文以用于本发明中并且用于可能包含在本文的一项或多项权利要求中。
[0061]
表a：cdr定义kabat1chothia2maccallum3imgt4aho
5vh
cdr131-3526-3230-3527-3825-40vhcdr250-6553-5547-5856-6558-77vhcdr395-10296-10193-101105-117109-137v
l
cdr124-3426-3230-3627-3825-40v
l
cdr250-5650-5246-5556-6558-77v
l
cdr389-9791-9689-96105-117109-1371残基编号遵循kabat等人, 同上的命名法2残基编号遵循chothia等人, 同上的命名法3残基编号遵循maccallum等人, 同上的命名法4残基编号遵循lefranc等人, 同上的命名法5残基编号遵循honegger和pl
ü
ckthun, 同上的命名法。
[0062]
关于本文鉴定的多肽和抗体序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”或“同源性”被定义为在考虑任何保守取代作为序列同一性的一部分的情况下对序列进行比对后，候选序列中与所比较多肽中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分比。出于测定氨基酸序列同一性百分比的目的的比对可以以本领域中的技能范围内的各种方式例如使用公开可得的计算机软件、诸如blast、blast-2、align、megalign (dnastar)或muscle软件来实现。本领域技术人员可以确定用于测量比对的适当参数，包括在所比较序列的全长内实现最大比对所需的任何算法。然而，出于本文的目的，使用序列比较计算机程序muscle (edgar, r.c.,nucleic acids research 32(5):1792-1797, 2004; edgar, r.c., bmc bioinformatics 5(1):113, 2004)生成氨基酸序列同一性％值。
[0063]
人igg fc区的“ch1结构域”(也称为“h1”结构域的“c1”)通常从约氨基酸118延伸至约氨基酸215 (eu编号系统)。
[0064]“铰链区”通常被定义为从人igg1的glu216延伸至pro230 (burton, molec. immunol.22:161-206 (1985))。可以通过将形成重链间s-s键的第一个和最后一个半胱氨酸残基放置在相同位置而将其他igg同种型的铰链区与igg1序列比对。
[0065]
人igg fc区的“ch2结构域”(也称为“h2”结构域的“c2”)通常从约氨基酸231延伸至约氨基酸340。ch2结构域的独特之处在于其不与另一个结构域紧密配对。相反，两个n-连接的支链碳水化合物链间插在完整天然igg分子的两个ch2结构域之间。已经推测，碳水化合物可提供结构域-结构域配对的替代物，并帮助稳定ch2结构域。burton, molec immunol. 22:161-206 (1985)。
[0066]“ch3结构域”(也称为“c2”或“h3”结构域)包含fc区中残基c-末端至ch2结构域的延伸段(即从抗体序列的约氨基酸残基341至c-末端(通常在igg的氨基酸残基446或447
处))。
[0067]
本文中的“氨基酸修饰”意指多肽序列中的氨基酸取代、插入和/或缺失。本文中的“氨基酸取代”或“取代”意指蛋白序列中给定位置处的氨基酸被另一个氨基酸替代。多肽的“变体”是指具有与参考多肽(通常是天然或“亲本”多肽)实质上相同的氨基酸序列的多肽。所述多肽变体可以在天然氨基酸序列内的某些位置处具有一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入。
[0068]“转谷氨酰胺酶”在本文中与“tgase”可互换使用，是指能够实施转谷氨酰胺反应的酶。如本文所用的术语“转谷氨酰胺”是指这样的反应，其中来自蛋白/肽的受体谷氨酰胺残基的γ-谷氨酰胺酰基被转移至胺基团，诸如伯胺或赖氨酸的ε-氨基。
[0069]
术语“受体谷氨酰胺残基”，当涉及多肽或蛋白的氨基酸残基时，是指这样的谷氨酰胺残基，其在合适的条件下，被tgase识别并且可以通过tgase经由谷氨酰胺和供体胺基(诸如赖氨酸或结构上相关的伯胺诸如氨基戊基)之间的反应与包含供体胺基的缀合部分交联。
[0070]
本文所用的“抗体上的内源性受体谷氨酰胺残基”是指天然存在的抗体fc区中的受体谷氨酰胺残基。在一些实施方案中，所述内源性受体谷氨酰胺残基是通过eu编号的q295，且侧接asn297位置处的n-糖基化位点。
[0071]
应当理解，本文所述的本发明的方面和实施方案包括“由方面和实施方案组成”和“基本上由方面和实施方案组成”。
[0072]
本文提及“约”值或参数包括(并描述)针对该值或参数本身的变化。例如，提及“约x”的描述包括“x”的描述。本文所用的术语“约x-y”与“约x至约y”具有相同的含义。
[0073]
如本文所用，提及“不是”值或参数通常意指且描述“除了值或参数以外”。
[0074]
如本文和所附权利要求书中所用，单数形式“一个/种(a)”、“一个/种(an)”或“该/所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另有明确指示。
[0075]
ii. 治疗方法本技术提供了使用抗体-药物缀合物(adc)治疗癌症、诸如her2-阳性癌症的方法，所述抗体-药物缀合物(adc)包含经由抗her2抗体的fc区中的内源性受体谷氨酰胺残基与包含毒素的缀合部分缀合的抗her2抗体。部分iii
ꢀ“
抗体-药物缀合物(adc)”中描述的adc中的任一种都可用于本文所述的方法中。
[0076]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的her2-阳性(例如，如通过ihc所确定的her 2+或her2 3+)癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和包含毒素的缀合部分，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，且其中所述缀合部分缀合至所述受体谷氨酰胺残基。在一些实施方案中，所述fc区是n-糖基化的。在一些实施方案中，受体谷氨酰胺残基在相对于谷氨酰胺残基的+2位处侧接n-糖基化位点。在一些实施方案中，受体谷氨酰胺残基在抗her2抗体的重链的位置295处，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症如通过fish测试所确定为阳性。在一些实施方案中，所述个体对标准疗法无反应或不适合标准疗法。在一些实施方案中，所述个体先前未接受第二种her2-靶向剂。在一些实施方
案中，所述her2-阳性癌症是实体癌，诸如乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌或肺癌。
[0077]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的her2-阳性(例如，如通过ihc所确定的her 2+或her2 3+)癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和缀合部分，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，其中所述缀合部分包含单甲基澳瑞他汀e (mmae)，且其中所述抗her2抗体经由受体谷氨酰胺残基缀合至缀合部分。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(ii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(iii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(i)的化学结构。在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症如通过fish测试所确定为阳性。在一些实施方案中，所述个体对标准疗法无反应或不适合标准疗法。在一些实施方案中，所述个体先前未接受第二种her2-靶向剂。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是实体癌，诸如乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌或肺癌。
[0078]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的her2-阳性(例如，如通过ihc所确定的her 2+或her2 3+)癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和缀合部分，其中所述抗her2抗体包含：(a) vh，其包含：包含seq id no:1的氨基酸序列的hc-cdrl、包含seq id no:2的氨基酸序列的hc-cdr2、包含seq id no:3的氨基酸序列的hc-cdr3；和(b) vl，其包含：包含seq id no:4的氨基酸序列的lc-cdr1、包含seq id no:5的氨基酸序列的lc-cdr2和包含seq id no:6的氨基酸序列的lc-cdr3，其中所述抗her2抗体包含糖基化(例如n-糖基化)的 fc区，其包含内源性受体谷氨酰胺残基，其中所述缀合部分具有式(iii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数，且其中所述缀合部分经由受体谷氨酰胺残基缀合至抗her2抗体。在一些实施方案中，所述受体谷氨酰胺残基在位置295处，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述抗her2抗体在fc区的位置297处被n-糖基化，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含：(a)包含seq id no:7的氨基酸序列的vh，和(b)包含seq id no:8的氨基酸序列的vl。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(i)的化学结构。在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症如通过fish测试所确定为阳性。在一些实施方案中，所述个体对标准疗法无反应或不适合标准疗法。在一些实施方案中，所述个体先前未接受第二种her2-靶向剂。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是实体癌，诸如乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌或肺癌。
[0079]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的her2-阳性(例如，如通过ihc所确定的her 2+或her2 3+)癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和缀合部分，其中所述抗her2抗体包含：包含seq id no:9的氨基酸序列的重链和包含seq id no:10的氨基酸序列的轻链，其中所述缀合部分具有式(i)的化学结构，且其中所述缀合部分经由受体谷氨酰胺残基缀合至抗her2抗体。在一
些实施方案中，所述受体谷氨酰胺残基在位置295处，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述抗her2抗体的fc区的位置297处是n-糖基化的，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。在一些实施方案中，所述抗her2抗体是dp001。在一些实施方案中，所述抗her2抗体是曲妥珠单抗。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症如通过fish测试所确定为阳性。在一些实施方案中，所述个体对标准疗法无反应或不适合标准疗法。在一些实施方案中，所述个体先前未接受第二种her2-靶向剂。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是实体癌，诸如乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌或肺癌。
[0080]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中对第二种her2-靶向剂具有抗性或难治性的her2-阳性癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和包含毒素的缀合部分，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，且其中所述缀合部分缀合至所述受体谷氨酰胺残基。在一些实施方案中，所述fc区是n-糖基化的。在一些实施方案中，受体谷氨酰胺残基在相对于谷氨酰胺残基的+2位处侧接n-糖基化位点。在一些实施方案中，受体谷氨酰胺残基在抗her2抗体的重链的位置295处，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症如通过fish测试所确定为阳性。在一些实施方案中，所述第二种her2靶向剂是曲妥珠单抗、恩美曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或拉帕替尼。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是实体癌，诸如乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌或肺癌。
[0081]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中对第二种her2-靶向剂具有抗性或难治性的her2-阳性癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和缀合部分，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，其中所述缀合部分包含mmae，且其中所述抗her2抗体经由受体谷氨酰胺残基缀合至缀合部分。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(ii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(iii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(i)的化学结构。在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症如通过fish测试所确定为阳性。在一些实施方案中，所述第二种her2靶向剂是曲妥珠单抗、恩美曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或拉帕替尼。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是实体癌，诸如乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌或肺癌。
[0082]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中对第二种her2-靶向剂具有抗性或难治性的her2-阳性癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和缀合部分，其中所述抗her2抗体包含：(a) vh，其包含：包含seq id no:1的氨基酸序列的hc-cdrl、包含seq id no:2的氨基酸序列的hc-cdr2、包含seq id no:3的氨基酸序列的hc-cdr3；和(b) vl，其包含：包含seq id no:4的氨基酸序列
的lc-cdr1、包含seq id no:5的氨基酸序列的lc-cdr2和包含seq id no:6的氨基酸序列的lc-cdr3，其中所述抗her2抗体包含糖基化(例如n-糖基化)的fc区，其包含内源性受体谷氨酰胺残基，其中所述缀合部分具有式(iii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数，且其中所述缀合部分经由受体谷氨酰胺残基缀合至抗her2抗体。在一些实施方案中，所述受体谷氨酰胺残基在位置295处，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述抗her2抗体在fc区的位置297处被n-糖基化，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含：(a)包含seq id no:7的氨基酸序列的vh，和(b)包含seq id no:8的氨基酸序列的vl。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(i)的化学结构。在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症如通过fish测试所确定为阳性。在一些实施方案中，所述第二种her2靶向剂是曲妥珠单抗、恩美曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或拉帕替尼。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是实体癌，诸如乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌或肺癌。
[0083]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中对第二种her2-靶向剂具有抗性或难治性的her2-阳性癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和缀合部分，其中所述抗her2抗体包含：包含seq id no:9的氨基酸序列的重链和包含seq id no:10的氨基酸序列的轻链，其中所述缀合部分具有式(i)的化学结构，且其中所述缀合部分经由受体谷氨酰胺残基缀合至抗her2抗体。在一些实施方案中，所述受体谷氨酰胺残基在位置295处，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述抗her2抗体的fc区的位置297处是n-糖基化的，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。在一些实施方案中，所述抗her2抗体是dp001。在一些实施方案中，所述抗her2抗体是曲妥珠单抗。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症如通过fish测试所确定为阳性。在一些实施方案中，所述第二种her2靶向剂是曲妥珠单抗、恩美曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或拉帕替尼。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是实体癌，诸如乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌或肺癌。
[0084]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物(adc)，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和包含毒素的缀合部分，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，其中所述缀合部分缀合至所述受体谷氨酰胺残基，且其中所述抗体-药物缀合物以不超过约8 mg/kg(例如，不超过约6 mg/kg，约1 mg/kg至约2 mg/kg，或约2 mg/kg至约3 mg/kg)的剂量施用。在一些实施方案中，所述fc区是n-糖基化的。在一些实施方案中，受体谷氨酰胺残基在相对于谷氨酰胺残基的+2位处侧接n-糖基化位点。在一些实施方案中，受体谷氨酰胺残基在抗her2抗体的重链的位置295处，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述adc以约0.3 mg/kg至约8 mg/kg、诸如约0.3 mg/kg、约0.5 mg/kg、约1.0 mg/kg、约2.0 mg/kg、约3.0 mg/kg、约4.5 mg/kg、约6.0 mg/kg或8.0 mg/kg中任一者的剂量施用。在一些实施方案中，所述adc以约1 mg/kg至约2 mg/kg、诸如约1.0 mg/kg或约2.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述adc以约2 mg/kg至约3 mg/kg、诸如约2.0 mg/kg或约
3.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，静脉内施用所述adc。在一些实施方案中，约每三周一次、约每隔一周或约每周一次施用所述adc。在一些实施方案中，所述癌症是her2-阳性癌症。在一些实施方案中，所述癌症选自乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌和肺癌。
[0085]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和缀合部分，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，其中所述缀合部分包含mmae，其中所述抗her2抗体经由受体谷氨酰胺残基缀合至缀合部分，且其中所述抗体-药物缀合物以不超过约8 mg/kg(例如，不超过约6 mg/kg，约1 mg/kg至约2 mg/kg，或约2 mg/kg至约3 mg/kg)的剂量施用。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(ii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(iii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(i)的化学结构。在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。在一些实施方案中，所述adc以约0.3 mg/kg至约8 mg/kg、诸如约0.3 mg/kg、约0.5 mg/kg、约1.0 mg/kg、约2.0 mg/kg、约3.0 mg/kg、约4.5 mg/kg、约6.0mg/kg或8.0mg/kg中任一者的剂量施用。在一些实施方案中，所述adc以约1 mg/kg至约2 mg/kg、诸如约1.0 mg/kg或约2.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述adc以约2 mg/kg至约3 mg/kg、诸如约2.0 mg/kg或约3.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，静脉内施用所述adc。在一些实施方案中，约每三周一次、约每隔一周或约每周一次施用所述adc。在一些实施方案中，所述癌症是her2-阳性癌症。在一些实施方案中，所述癌症选自乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌和肺癌。
[0086]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和缀合部分，其中所述抗her2抗体包含：(a) vh，其包含：包含seq id no:1的氨基酸序列的hc-cdrl、包含seq id no:2的氨基酸序列的hc-cdr2、包含seq id no:3的氨基酸序列的hc-cdr3；和(b) vl，其包含：包含seq id no:4的氨基酸序列的lc-cdr1、包含seq id no:5的氨基酸序列的lc-cdr2和包含seq id no:6的氨基酸序列的lc-cdr3，其中所述抗her2抗体包含糖基化(例如n-糖基化)的fc区，其包含内源性受体谷氨酰胺残基，其中所述缀合部分具有式(iii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数，其中所述缀合部分经由受体谷氨酰胺残基缀合至抗her2抗体，且其中所述抗体-药物缀合物以不超过约8 mg/kg(例如，不超过约6 mg/kg，约1 mg/kg至约2 mg/kg，或约2 mg/kg至约3 mg/kg)的剂量施用。在一些实施方案中，所述受体谷氨酰胺残基在位置295处，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述抗her2抗体的fc区的位置297处是n-糖基化的，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含：(a)包含seq id no:7的氨基酸序列的vh，和(b)包含seq id no:8的氨基酸序列的vl。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(i)的化学结构。在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。在一些实施方案中，所述adc以约0.3 mg/kg至约8 mg/kg、诸如约0.3 mg/kg、约0.5 mg/kg、约1.0 mg/kg、约2.0 mg/kg、约3.0 mg/kg、约4.5 mg/kg、约6.0mg/kg或8.0mg/kg中任一者的剂量施用。在一些实施方案中，所述adc以约1 mg/kg至约2 mg/kg、诸如约1.0 mg/kg或约2.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述adc以约2 mg/kg至约3 mg/kg、诸如约2.0 mg/kg或约3.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，静脉内施用所述adc。在一些实施方案中，约每三周一次、约每隔一周或约每周一次施用所述
adc。在一些实施方案中，所述癌症是her2-阳性癌症。在一些实施方案中，所述癌症选自乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌和肺癌。
[0087]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和缀合部分，其中所述抗her2抗体包含：包含seq id no:9的氨基酸序列的重链和包含seq id no:10的氨基酸序列的轻链，其中所述缀合部分具有式(i)的化学结构，其中所述缀合部分经由受体谷氨酰胺残基缀合至抗her2抗体，且其中所述抗体-药物缀合物以不超过约8 mg/kg(例如，不超过约6 mg/kg，约1 mg/kg至约2 mg/kg，或约2 mg/kg至约3 mg/kg)的剂量施用。在一些实施方案中，所述受体谷氨酰胺残基在位置295处，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述抗her2抗体的fc区的位置297处是n-糖基化的，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。在一些实施方案中，所述抗her2抗体是dp001。在一些实施方案中，所述抗her2抗体是曲妥珠单抗。在一些实施方案中，所述adc以约0.3 mg/kg至约8 mg/kg、诸如约0.3 mg/kg、约0.5 mg/kg、约1.0 mg/kg、约2.0 mg/kg、约3.0 mg/kg、约4.5 mg/kg、约6.0mg/kg或8.0mg/kg中任一者的剂量施用。在一些实施方案中，所述adc以约1 mg/kg至约2 mg/kg、诸如约1.0 mg/kg或约2.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述adc以约2 mg/kg至约3 mg/kg、诸如约2.0 mg/kg或约3.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，静脉内施用所述adc。在一些实施方案中，约每三周一次、约每隔一周或约每周一次施用所述adc。在一些实施方案中，所述癌症是her2-阳性癌症。在一些实施方案中，所述癌症选自乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌和肺癌。
[0088]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的dp303c，其中约每三周一次静脉内施用dp303c，且剂量为不超过约8 mg/kg。在一些实施方案中，所述adc以约0.3 mg/kg至约8 mg/kg、诸如约0.3 mg/kg、约0.5 mg/kg、约1.0 mg/kg、约2.0 mg/kg、约3.0 mg/kg、约4.5 mg/kg、约6.0mg/kg或8.0mg/kg中任一者的剂量施用。在一些实施方案中，提供了治疗个体中的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的dp303c，其中约每三周一次静脉内施用dp303c，且剂量为约1 mg/kg至约2 mg/kg。在一些实施方案中，所述adc以约1.0 mg/kg或约2.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，提供了治疗个体中的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的dp303c，其中约每三周一次静脉内施用dp303c，且剂量为约2 mg/kg至约3 mg/kg。在一些实施方案中，所述adc以约2.0 mg/kg或约3.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述癌症是her2-阳性癌症。在一些实施方案中，所述癌症选自乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌和肺癌。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述her2-阳性癌症如通过fish测试所确定为阳性。在一些实施方案中，所述个体对标准疗法无反应或不适合标准疗法。在一些实施方案中，所述个体先前未接受第二种her2-靶向剂。在一些实施方案中，所述个体先前已接受第二种her2-靶向剂。在一些实施方案中，所述癌症对第二种her2-靶向剂具有抗性或难治性。在一些实施方案中，所述第二种her2靶向剂是曲妥珠单抗、恩美曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或拉帕替尼。
[0089]
dp303c是抗体药物缀合物，其具有靶向her2的单克隆igg1抗体(dp001)与一个可切割的lnd1002(毒素)，所述可切割的lnd1002(毒素)位点特异性缀合至dp001的每条重链
的恒定区中的谷氨酰胺295。dp303c具有约1.8至约2.2、诸如约1.8、1.9、2.0、2.1或2.2的dar(药物抗体比)。
[0090]
癌症治疗可以通过例如肿瘤消退、肿瘤重量或大小缩小、进展时间、存活期持续时间、无进展存活期、总体反应率、反应持续时间、生活质量、蛋白表达和/或活性来评估。可以采用确定疗法效力的方法，包括例如通过放射成像测量反应。
[0091]
adc的示例性施用途径包括但不限于口服、静脉内、腔内、瘤内、动脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、经粘膜、经皮、眼部、局部、腹膜内、颅内、胸膜内和表皮途径，或被递送至已知含有癌细胞的淋巴腺、身体空间、器官或组织中。在一些实施方案中，静脉内施用所述adc。在一些实施方案中，通过输注施用所述adc。在一些实施方案中，通过注射施用所述adc。
[0092]
施用于个体的adc的给药方案可以随着特定adc组成、施用方法以及所治疗癌症的特定类型和阶段而变化。在一些实施方案中，adc的有效量低于诱导毒理学效应(即，高于临床可接受的毒性水平的效应)的水平或处于当组合物施用于个体时可以控制或耐受潜在副作用的水平。本文提及的剂量是相对于adc的整个分子量确定的。在一些实施方案中，所述adc以不超过约以下中的任一者的剂量施用：12 mg/kg、11 mg/kg、10 mg/kg、9 mg/kg、8 mg/kg、7.5 mg/kg、7 mg/kg、6.5 mg/kg、6 mg/kg、5.5 mg/kg、5 mg/kg、4.5 mg/kg、4 mg/kg、3.5 mg/kg、3.25 mg/kg、3 mg/kg、2.9 mg/kg、2.8 mg/kg、2.75 mg/kg、2.7 mg/kg、2.6 mg/kg、2.5 mg/kg、2.4 mg/kg、2.3 mg/kg、2.25 mg/kg、2.2 mg/kg、2.1 mg/kg、2 mg/kg、1.9 mg/kg、1.8 mg/kg、1.75 mg/kg、1.7 mg/kg、1.6 mg/kg、1.5 mg/kg、1.4 mg/kg、1.3 mg/kg、1.25 mg/kg、1.2 mg/kg、1.1 mg/kg、1 mg/kg、0.8 mg/kg、0.6 mg/kg、0.5 mg/kg、0.4 mg/kg或0.3 mg/kg。在一些实施方案中，所述adc的剂量在以下范围中的任一者内，其中所述范围具有以下中任一者的上限：12 mg/kg、11 mg/kg、10 mg/kg、9 mg/kg、8 mg/kg、7.5 mg/kg、7 mg/kg、6.5 mg/kg、6 mg/kg、5.5 mg/kg、5 mg/kg、4.5 mg/kg、4 mg/kg、3.5 mg/kg、3.25 mg/kg、3 mg/kg、2.9 mg/kg、2.8 mg/kg、2.75 mg/kg、2.7 mg/kg、2.6 mg/kg、2.5 mg/kg、2.4 mg/kg、2.3 mg/kg、2.25 mg/kg、2.2 mg/kg、2.1 mg/kg、2 mg/kg、1.9 mg/kg、1.8 mg/kg、1.75 mg/kg、1.7 mg/kg、1.6 mg/kg、1.5 mg/kg、1.4 mg/kg、1.3 mg/kg、1.25 mg/kg、1.2 mg/kg、1.1 mg/kg、1 mg/kg、0.8 mg/kg、0.6 mg/kg、0.5 mg/kg或0.4 mg/kg，和以下任一者的独立地选择的下限：11 mg/kg、10 mg/kg、9 mg/kg、8 mg/kg、7.5 mg/kg、7 mg/kg、6.5 mg/kg、6 mg/kg、5.5 mg/kg、5 mg/kg、4.5 mg/kg、4 mg/kg、3.5 mg/kg、3.25 mg/kg、3 mg/kg、2.9 mg/kg、2.8 mg/kg、2.75 mg/kg、2.7 mg/kg、2.6 mg/kg、2.5 mg/kg、2.4 mg/kg、2.3 mg/kg、2.25 mg/kg、2.2 mg/kg、2.1 mg/kg、2 mg/kg、1.9 mg/kg、1.8 mg/kg、1.75 mg/kg、1.7 mg/kg、1.6 mg/kg、1.5 mg/kg、1.4 mg/kg、1.3 mg/kg、1.25 mg/kg、1.2 mg/kg、1.1 mg/kg、1 mg/kg、0.8 mg/kg、0.6 mg/kg、0.5 mg/kg、0.4 mg/kg或0.3 mg/kg，且其中下限小于上限。在一些实施方案中，所述adc以如下中任一者的剂量施用：约0.3 mg/kg至约12 mg/kg、约0.6 mg/kg至约8 mg/kg、约1 mg/kg至约8 mg/kg、约3 mg/kg至约8 mg/kg、约0.6 mg/kg至约6 mg/kg、约1 mg/kg至约6 mg/kg、约1 mg/kg至约2 mg/kg、约1 mg/kg至约1.5 mg/kg、约1.5 mg/kg至约2.0 mg/kg、约2.0 mg/kg至约2.5 mg/kg、约1 mg/kg至约3 mg/kg、约2 mg/kg至约3 mg/kg、约2.5 mg/kg至约3 mg/kg、约2 mg/kg至约2.5 mg/kg、约1.5 mg/kg至约2.5 mg/kg、约0.5 mg/kg至约3.0 mg/kg、约2 mg/kg至约4 mg/kg、约4 mg/kg至约8 mg/kg、约8 mg/kg至约12 mg/kg、约0.5 mg/kg至约5 mg/kg或约1 mg/kg
至约5 mg/kg。本文所述的剂量可以是指食蟹猴的合适剂量、其人等效剂量或个体的特定物种的等效剂量。在一些实施方案中，对于食蟹猴或人个体，所述adc以与约0.3 mg/kg至约8 mg/kg(诸如诸如约0.3 mg/kg至约6 mg/kg、约0.6 mg/kg至约4.5 mg/kg、约1 mg/kg至约2 mg/kg、或约2 mg/kg至约3 mg/kg)等效的剂量施用。在一些实施方案中，对于食蟹猴或人个体，所述adc以与不超过约8 mg/kg (诸如不超过约6 mg/kg、约4.5 mg/kg、约3 mg/kg或约2 mg/kg；或约1mg/kg至约2 mg/kg，或约2mg/kg至约3 mg/kg)等效的剂量施用。
[0093]
在一些实施方案中，所述adc以约0.3 mg/kg至约8 mg/kg、诸如约0.3、0.6、1、2、3、4.5、6或8 mg/kg中任一者的剂量施用。在一些实施方案中，所述adc以约1 mg/kg至约2 mg/kg、诸如约1.0 mg/kg或约2.0 mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中，所述adc以约2 mg/kg至约3 mg/kg、诸如约2.0 mg/kg或约3.0 mg/kg的剂量施用。
[0094]
有效量的adc可以单剂量或多剂量施用。对于包括以多剂量施用adc的方法，示例性给药频率包括但不限于每周一次，每周一次而不中断，在三周中的两周每周一次，在四周中的三周每周一次，每三周一次，每两周一次，每月一次，每六个月一次，每年一次等。在一些实施方案中，约每周一次、每2周一次或每3周一次施用所述adc。在一些实施方案中，每次施用之间的间隔为小于约3年、2年、12个月、11个月、10个月、9个月、8个月、7个月、6个月、5个月、4个月、3个月、2个月、1个月、4周、3周、2周或1周中的任一者。在一些实施方案中，每次施用之间的间隔为大于约1周、2周、3周、4周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、2年或3年中的任一者。在一些实施方案中，给药时间表没有中断。
[0095]
在一些实施方案中，msfp以低频率施用，例如，频率不超过每周一次、每隔一周一次、每三周一次、每个月一次、每2个月一次、每3个月一次、每4个月一次、每5个月一次、每6个月一次、每7个月一次、每8个月一次、每9个月一次、每10个月一次、每11个月一次、每年一次或更少中的任一者。在一些实施方案中，所述adc以单剂量施用。在一些实施方案中，所述adc约每三周一次施用。
[0096]
在一些实施方案中，所述adc以不超过约8 mg/kg、诸如不超过6 mg/kg、4.5 mg/kg、3 mg/kg、2 mg/kg或1 mg/kg中任一者的剂量每周一次、每隔一周一次或每三周一次进行施用。在一些实施方案中，所述adc以约0.3 mg/kg至约8 mg/kg、诸如约0.3、0.6、1、2、3、4.5、6或8 mg/kg中任一者的剂量每周一次、每隔一周一次或每三周一次进行施用。在一些实施方案中，所述adc以约1 mg/kg至约2 mg/kg的剂量每周一次、每隔一周一次或每三周一次进行施用。在一些实施方案中，所述adc以约2 mg/kg至约3 mg/kg的剂量每周一次、每隔一周一次或每三周一次进行施用。在一些实施方案中，所述adc以约1.0 mg/kg的剂量每周一次、每隔一周一次或每三周一次进行施用。在一些实施方案中，所述adc以约2.0 mg/kg的剂量每周一次、每隔一周一次或每三周一次进行施用。在一些实施方案中，所述adc以约3.0 mg/kg的剂量每周一次、每隔一周一次或每三周一次进行施用。
[0097]
所述adc的施用可以延长一段延长时间，诸如从约一周至约一个月，从约一个月至约一年，从约一年至约几年。在一些实施方案中，msfp经至少约1周、2周、3周、4周、5周、1个月、2个月、3个月、4个月、5个月、6个月、7个月、8个月、9个月、10个月、11个月、12个月、1年、2年、3年、4年或更长时间中任一者的时段施用。
[0098]
本文所述的方法适用于治疗各种癌症，诸如实体癌。所述方法适用于所有阶段的
癌症，包括早期癌症、非转移性癌症、原发性癌症、晚期癌症、局部晚期癌症、转移性癌症或缓解中的癌症。在辅助环境或新辅助环境中，本文所述的方法可用作第一疗法、第二疗法、第三疗法或与本领域已知的其他类型的癌症疗法(诸如化学疗法、手术、放射、基因疗法、免疫疗法、骨髓移植、干细胞移植、靶向疗法、冷冻疗法、超声疗法、光动力疗法、射频消融等)的组合疗法。在一些实施方案中，所述癌症对先前的疗法具有抗性或难治性。在一些实施方案中，所述个体已经从先前的疗法复发。在一些实施方案中，所述个体具有复发性癌症。在一些实施方案中，所述方法在初始/确定性疗法之前实施。在一些实施方案中，所述方法用于治疗先前已经治疗的个体。在一些实施方案中，所述方法用于治疗先前尚未治疗的个体。在一些实施方案中，所述方法用作一线疗法。在一些实施方案中，所述方法用作二线疗法。
[0099]
在一些实施方案中，所述方法适用于治疗在癌细胞的表面上过表达her2的癌症，诸如her2-阳性实体癌。在一些实施方案中，所述实体癌是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述实体癌是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述实体癌是如通过fish测试所确定的her2阳性的。在一些实施方案中，与正常细胞相比，所述个体中的癌细胞表达至少约超过2、5、10、20、50、100、200、500、1000或更多倍中任一者的her2。在一些实施方案中，所述个体中的癌细胞在细胞上具有不超过约250,000，诸如不超过约200,000；100,000；75,000；50,000；25,000；10,000；7,500；或5,000相对her2密度，如使用定量her2受体密度测定法、例如quantum 647 mesf (bang laboratories)所测定。在一些实施方案中，个体中的癌细胞具有与jimt-1细胞相当或更高的her2受体密度。已经描述了各种癌细胞系的her2密度，参见例如li. jy等人
ꢀ“
a biparatopic her2-targeting antibody-drug conjugate induces tumor regression in primary models refractory to or ineligible for her2-targeted therapy.
”ꢀ
cancer cell, 29(1): 117-129, 2016，其通过引用并入本文。在一些实施方案中，所述her2-阳性实体癌选自乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌和肺癌。
[0100]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的乳腺癌(例如，her2-阳性乳腺癌)的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种。在一些实施方案中，所述乳腺癌是早期乳腺癌、非转移性乳腺癌、晚期乳腺癌、iv期乳腺癌、局部晚期乳腺癌、转移性乳腺癌、缓解的乳腺癌、辅助环境中的乳腺癌或新辅助环境中的乳腺癌。在一些实施方案中，所述乳腺癌在新辅助环境中。在一些实施方案中，所述乳腺癌处于晚期。在一些实施方案中，所述乳腺癌是her2-阳性乳腺癌。在一些实施方案中，所述乳腺癌是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述乳腺癌是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述乳腺癌是如通过fish测试所确定的her2阳性的。在一些实施方案中，所述乳腺癌已转移至肝、肺、肾上腺、淋巴结和/或腹膜。
[0101]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的卵巢癌(例如，her2-阳性卵巢癌)的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种。在一些实施方案中，所述卵巢癌是卵巢上皮癌。在一些实施方案中，所述卵巢癌是i期(例如，ia、ib或ic期)、ii期(例如，iia、iib或iic期)、iii期(例如，iiia、hib或hic期)或iv期。在一些实施方案中，所述卵巢癌是her2-阳性卵巢癌。在一些实施方案中，所述卵巢癌是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述卵巢癌是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述卵巢癌是如通过fish测试所确定的her2阳性的。
[0102]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的结直肠癌(例如，her2-阳性结直肠癌)的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种。在一些实施方案中，所述结直肠癌是乙状结肠癌。在一些实施方案中，所述结直肠癌是i期、ii期(例如，iia、iib或iic期)、iii期(例如，iiia、iiib或iiic期)或iv期(例如，iva、ivb或ivc期)。在一些实施方案中，所述卵巢癌是her2-阳性卵巢癌。在一些实施方案中，所述结直肠癌是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述结直肠癌是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述结直肠癌是如通过fish测试所确定的her2阳性的。
[0103]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的胃癌(例如，her2-阳性胃癌)的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种。在一些实施方案中，所述胃癌是腺癌、淋巴瘤、胃肠间质瘤(gist)或类癌瘤。在一些实施方案中，所述胃癌是0期(原位癌)、i期、ii期、iii期或iv期。在一些实施方案中，所述胃癌是her2-阳性胃癌。在一些实施方案中，所述胃癌是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述胃癌是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述胃癌是如通过fish测试所确定的her2阳性的。
[0104]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的尿道癌(例如，her2-阳性尿道癌)的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种。在一些实施方案中，所述尿道癌是鳞状细胞癌、移行细胞癌或腺癌。在一些实施方案中，所述尿道癌是远端尿道癌或近端尿道癌。在一些实施方案中，所述尿道癌是her2-阳性尿道癌。在一些实施方案中，所述尿道癌是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述尿道癌是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述尿道癌是如通过fish测试所确定的her2阳性的。
[0105]
在一些实施方案中，提供了治疗个体中的肺癌(例如，her2-阳性肺癌)的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种。在一些实施方案中，所述肺癌是非小细胞肺癌(nsclc)。nsclc的实例包括但不限于大细胞癌、腺癌、神经内分泌肺肿瘤和鳞状细胞癌。在一些实施方案中，所述肺癌是小细胞肺癌(sclc)。在一些实施方案中，所述肺癌是her2-阳性肺癌。在一些实施方案中，所述肺癌是如通过ihc测试所确定的her2 2+。在一些实施方案中，所述肺癌是如通过ihc测试所确定的her2 3+。在一些实施方案中，所述肺癌是如通过fish测试所确定的her2阳性的。
[0106]
本文所述的方法可用于癌症治疗的各个方面。在一些实施方案中，提供了抑制个体中的细胞增殖(诸如肿瘤生长)的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种，其中所述adc以不超过约8 mg/kg(诸如不超过约6 mg/kg、约4.5 mg/kg、约3 mg/kg或约2 mg/kg；或约1 mg/kg至约2 mg/kg，或约2 mg/kg至约3 mg/kg)的剂量施用于所述个体。在一些实施方案中，至少约10%(包括例如至少约20%、30%、40%、60%、70%、80%、90%或100%中任一者)细胞增殖被抑制。
[0107]
在一些实施方案中，提供了抑制个体中的肿瘤转移的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种，其中所述adc以不超过约8 mg/kg(诸如不超过约6 mg/kg、约4.5 mg/kg、约3 mg/kg或约2 mg/kg；或约1 mg/kg至约2 mg/kg，或约2 mg/kg至约3 mg/kg)的剂量施用于所述个体。在一些实施方案中，至少约10%(包括例如至少约20%、30%、40%、60%、70%、80%、90%或100%中任一者)转移被抑制。
[0108]
在一些实施方案中，提供了减少(诸如根除)个体中预先存在的肿瘤转移(诸如向淋巴结的转移)的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种，其中所述adc以不超过约8 mg/kg(诸如不超过约6 mg/kg、约4.5 mg/kg、约3 mg/kg或约2 mg/kg；或约1 mg/kg至约2 mg/kg，或约2 mg/kg至约3 mg/kg)的剂量施用于所述个体。在一些实施方案中，至少约10%(包括例如至少约20%、30%、40%、60%、70%、80%、90%或100%中任一者)转移被减少。
[0109]
在一些实施方案中，提供了减少个体中预先存在的肿瘤转移(诸如向淋巴结的转移)的发生率或负担的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种，其中所述adc以不超过约8 mg/kg(诸如不超过约6 mg/kg、约4.5 mg/kg、约3 mg/kg或约2 mg/kg；或约1 mg/kg至约2 mg/kg，或约2 mg/kg至约3 mg/kg)的剂量施用于所述个体。
[0110]
在一些实施方案中，提供了减小个体中的肿瘤大小的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种，其中所述adc以不超过约8 mg/kg(诸如不超过约6 mg/kg、约4.5 mg/kg、约3 mg/kg或约2 mg/kg；或约1 mg/kg至约2 mg/kg，或约2 mg/kg至约3 mg/kg)的剂量施用于所述个体。
[0111]
在一些实施方案中，提供了延长个体中的癌症疾病进展时间的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种，其中所述adc以不超过约8 mg/kg(诸如不超过约6 mg/kg、约4.5 mg/kg、约3 mg/kg或约2 mg/kg；或约1 mg/kg至约2 mg/kg，或约2 mg/kg至约3 mg/kg)的剂量施用于所述个体。在一些实施方案中，所述方法将疾病进展时间延长至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、16、20、24、28、32、36周或更多周中的任一者。
[0112]
在一些实施方案中，提供了延长具有癌症的个体的存活期的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种，其中所述adc以不超过约8 mg/kg(诸如不超过约6 mg/kg、约4.5 mg/kg、约3 mg/kg或约2 mg/kg；或约1 mg/kg至约2 mg/kg，或约2 mg/kg至约3 mg/kg)的剂量施用于所述个体。在一些实施方案中，所述方法将所述个体的存活期延长至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、18或24个月中的任一者。
[0113]
在一些实施方案中，提供了减轻具有癌症的个体中的一种或多种症状的方法，其包括向所述个体施用有效量的本文所述的adc中的任一种，其中所述adc以不超过约8 mg/kg(诸如不超过约6 mg/kg、约4.5 mg/kg、约3 mg/kg或约2 mg/kg；或约1 mg/kg至约2 mg/kg，或约2 mg/kg至约3 mg/kg)的剂量施用于所述个体。
[0114]
本发明还提供了用于本部分中所述的方法中的本文所述的adc中的任一种的组合物，以及adc在制备用于治疗癌症的药物中的用途。
[0115]
iii. 抗体-药物缀合物(adc)本技术还提供了可用于本文所述的治疗方法的抗体-药物缀合物(adc)。所述adc可以包含本文所述的抗her2抗体中的任一种，其经由抗her2抗体的fc区中的内源性受体谷氨酰胺残基与本文所述的缀合部分中的任一种缀合。
[0116]
在一些实施方案中，提供了包含抗her2抗体和包含毒素的缀合部分的adc，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，且其中所述缀合部分缀合至所述受体谷氨酰胺残基。在一些实施方案中，所述fc区是n-糖基化的。在一些实施方案中，受体谷氨酰胺残基在相对于谷氨酰胺残基的+2位处侧接n-糖基化位点。
[0117]
在一些实施方案中，提供了包含全长抗her2抗体和包含毒素的缀合部分的adc，其
中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，且其中所述缀合部分经由所述抗her2抗体的重链的位置295处的受体谷氨酰胺残基缀合至所述抗her2抗体，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含n-糖基化的fc区。在一些实施方案中，所述缀合部分经由所述抗her2抗体的重链的位置295处的受体谷氨酰胺残基缀合至所述抗her2抗体，且其中n-糖基化在重链的位置297处，其中编号是根据eu编号。
[0118]
在一些实施方案中，提供了包含抗her2抗体和缀合部分的adc，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，其中所述缀合部分包含至少一个(诸如1、2或更多个) mmae，其中所述抗her2抗体经由受体谷氨酰胺残基缀合至缀合部分。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(ii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(iii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(i)的化学结构。在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。在一些实施方案中，所述组合物中缀合部分和抗her2抗体之间的平均摩尔比为约1:1至约2:1。在一些实施方案中，所述组合物中至少约80%(诸如至少约85%、90%、95%或更多中的任一者)的adc在缀合部分和抗her2抗体之间的摩尔比为约2:1。
[0119]
在一些实施方案中，提供了包含抗her2抗体和缀合部分的adc，其中所述抗her2抗体包含：(a) vh，其包含：包含seq id no:1的氨基酸序列的hc-cdrl、包含seq id no:2的氨基酸序列的hc-cdr2、包含seq id no:3的氨基酸序列的hc-cdr3；和(b) vl，其包含：包含seq id no:4的氨基酸序列的lc-cdr1、包含seq id no:5的氨基酸序列的lc-cdr2和包含seq id no:6的氨基酸序列的lc-cdr3，其中所述抗her2抗体包含糖基化(例如n-糖基化)的fc区，其包含内源性受体谷氨酰胺残基，其中所述缀合部分具有式(iii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数，且其中所述缀合部分经由受体谷氨酰胺残基缀合至抗her2抗体。在一些实施方案中，所述受体谷氨酰胺残基在位置295处，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述抗her2抗体在fc区的位置297处被n-糖基化，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(i)的化学结构。在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。在一些实施方案中，所述组合物中缀合部分和抗her2抗体之间的平均摩尔比为约1:1至约2:1。在一些实施方案中，所述组合物中至少约80%(诸如至少约85%、90%、95%或更多中的任一者)的adc在缀合部分和抗her2抗体之间的摩尔比为约2:1。
[0120]
在一些实施方案中，提供了包含抗her2抗体和缀合部分的adc，其中所述抗her2抗体包含：(a)包含seq id no:7的氨基酸序列的vh；和(b)包含seq id no:8的氨基酸序列的vl，其中所述抗her2抗体包含糖基化(例如n-糖基化)的fc区，其包含内源性受体谷氨酰胺残基，其中所述缀合部分具有式(iii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数，且其中所述缀合部分经由受体谷氨酰胺残基缀合至抗her2抗体。在一些实施方案中，所述受体谷氨酰胺残基在位置295处，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述抗her2抗体在fc区的位置297处被n-糖基化，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(i)的化学结构。在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。在一些实施方案中，所述组合物中缀合部分和抗her2抗体之间的平均摩尔比为约1:1至约2:1。在一些实施方案中，所述组合物中至少约80%(诸如至少约85%、90%、95%或更多中的任一者)的adc在缀合部分和抗her2抗体之间的摩尔比为约2:1。
[0121]
在一些实施方案中，提供了包含抗her2抗体和缀合部分的adc，其中所述抗her2抗体包含：包含seq id no:9的氨基酸序列的重链和包含seq id no:10的氨基酸序列的轻链，其中所述缀合部分具有式(iii)的化学结构，其中n是1和12之间的整数，且其中所述缀合部分经由受体谷氨酰胺残基缀合至抗her2抗体。在一些实施方案中，所述受体谷氨酰胺残基在位置295处，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述抗her2抗体的fc区的位置297处是n-糖基化的，其中编号是根据eu编号。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(i)的化学结构。在一些实施方案中，所述缀合部分是lnd1002。在一些实施方案中，所述抗her2抗体是dp001。在一些实施方案中，所述抗her2抗体是曲妥珠单抗。在一些实施方案中，所述adc是dp303c。在一些实施方案中，所述组合物中缀合部分和抗her2抗体之间的平均摩尔比为约1:1至约2:1。在一些实施方案中，所述组合物中至少约80%(诸如至少约85%、90%、95%或更多中的任一者)的adc在缀合部分和抗her2抗体之间的摩尔比为约2:1。
[0122]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体是全长抗体。在一些实施方案中，所述抗her2抗体是包含fc区的抗体片段。在一些实施方案中，所述fc区包含部分或全部铰链区。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含天然存在的免疫球蛋白的fc区。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含igg1、igg2、igg3、igg4亚型或来自iga、ige、igd或igm的fc区。在一些实施方案中，所述fc区来自人igg，且根据eu编号系统，所述fc区是从位置glu216或ala231处的氨基酸残基至其羧基末端。
[0123]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体中的fc区是n-糖基化的。例如，在一些实施方案中，在n-糖基化位点处附接的多糖链是至少约1、10、20、30、40、50、60、70、80、90或100个单位中的任一者。
[0124]
在一些实施方案中，提供了包含本文所述的adc中的任一种的组合物，其中所述组合物中的至少一些(但不一定是全部)抗her2抗体在fc区中被糖基化(例如n-糖基化)。例如，在一些实施方案中，提供了包含抗体-药物缀合物的组合物，其中所述抗体-药物缀合物包含经由抗her2抗体上的内源性受体谷氨酰胺残基缀合至缀合部分的抗her2抗体，其中所述组合物中的至少一些(例如至少约50%、60%、70%、80%、90%或95%中的任一者)抗体-药物缀合物在fc区中被糖基化(例如n-糖基化)。
[0125]
在一些实施方案中，所述n-糖基化位点侧接缀合部分缀合的受体谷氨酰胺残基。在一些实施方案中，所述n-糖基化位点和所述受体谷氨酰胺残基分开5个或更少个氨基酸残基。在一些实施方案中，所述n-糖基化位点和所述受体谷氨酰胺分开5、4、3、2或1个氨基酸残基。在一些实施方案中，所述n-糖基化位点和所述受体谷氨酰胺彼此相邻。在一些实施方案中，所述受体谷氨酰胺残基在相对于谷氨酰胺残基的+2位处侧接n-糖基化位点。在一些实施方案中，所述受体谷氨酰胺残基在相对于谷氨酰胺残基的+1、+2、+3、+4或+5位处侧接n-糖基化位点。在一些实施方案中，所述受体谷氨酰胺残基在相对于谷氨酰胺残基的-1、-2、-3、-4或-5位处侧接n-糖基化位点。在一些实施方案中，所述n-糖基化的fc区包含seq id no:11 (kpreeqx1nstx2r，其中x1是y或f且x2是y或f)的氨基酸序列，且其中所述缀合部分经由seq id no:11的位置6处的受体谷氨酰胺残基缀合至含fc的多肽，且其中所述n-糖基化在seq id no:11的位置8处。在一些实施方案中，所述n-糖基化的fc区包含seq id no:12 (kpreeqynstyr)的氨基酸序列，且其中所述缀合部分经由seq id no:12的位置6处的受体谷氨酰胺残基缀合至含fc的多肽，且其中所述n-糖基化在seq id no:2的位置8处。
[0126]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含人igg1的fc区。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含n-糖基化的fc区，其包含seq id no:13的氨基酸序列(人igg1的ch2序列)，且其中所述缀合部分经由seq id no:13的位置65处的受体谷氨酰胺残基缀合至含fc的多肽，且其中所述n-糖基化在seq id no:13的位置67处。
[0127]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含人igg2的fc区。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含n-糖基化的fc区，其包含seq id no:14的氨基酸序列(人igg2的ch2序列)，且其中所述缀合部分经由seq id no:14的位置64处的受体谷氨酰胺残基缀合至含fc的多肽，且其中所述n-糖基化在seq id no:14的位置66处。
[0128]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含人igg3的fc区。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含n-糖基化的fc区，其包含seq id no:15的氨基酸序列(人igg3的ch2序列)，且其中所述缀合部分经由seq id no:15的位置65处的受体谷氨酰胺残基缀合至含fc的多肽，且其中所述n-糖基化在seq id no:15的位置67处。
[0129]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含人igg4的fc区。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含n-糖基化的fc区，其包含seq id no:16的氨基酸序列(人igg4的ch2序列)，且其中所述缀合部分经由seq id no:16的位置65处的受体谷氨酰胺残基缀合至含fc的多肽，且其中所述n-糖基化在seq id no:16的位置67处。
[0130]
seq id no:13 (人igg1)seq id no:14 (人igg2)seq id no:15 (人igg3)seq id no:16 (人igg4)
[0131]
本文所述的adc具有以特定和化学计量控制的方式(即在由n-糖基化位点侧接的fc区的受体谷氨酰胺残基处)与缀合部分缀合的抗her2抗体组分。在一些实施方案中，所述缀合部分与所述抗her2抗体的摩尔比为约1:1。在一些实施方案中，所述缀合部分与所述抗her2抗体的摩尔比为约2:1。在一些实施方案中，所述组合物中至少约80%(诸如至少约85%、90%、95%或更多中的任一者)的adc的缀合部分与抗her2抗体摩尔比为约1:1。在一些实施方案中，所述组合物中至少约80%(诸如至少约85%、90%、95%或更多中的任一者)的adc的缀合部分与抗her2抗体摩尔比为约2:1。在一些实施方案中，所述组合物中至少约80%(诸如至少约85%、90%、95%或更多中的任一者)的adc的缀合部分与抗her2抗体的摩尔比为约1:1至约2:1。
[0132]
在一些实施方案中，在体内施用后至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9
天、10天或更长时间后，所述adc以约50%或更多存在于个体(例如，哺乳动物)中。在一些实施方案中，在体内施用后至少约1天、2天、3天、4天、5天、6天、1周、8天、9天、10天或更长时间中任一者后，所述adc以约20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%或95%或更多中任一者存在于个体(例如，哺乳动物)中。在一些实施方案中，个体的游离毒素(例如，mmae)暴露量为在体内施用所述adc后adc暴露量的不超过约1%、0.9%、0.8%、0.7%、0.6%、0.5%、0.4%、0.3%、0.2%、0.1%、0.09%、0.08%、0.07%、0.06%、0.05%、0.04%、0.03%、0.02%、0.01%或更少中任一者。
[0133]
抗her2抗体本文所述的adc包含抗her2抗体。在一些实施方案中，所述抗her2抗体特异性结合在人细胞(例如，人癌细胞)的细胞表面上表达的人her2。在一些实施方案中，所述抗her2抗体特异性结合人癌细胞(例如，乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、胃癌细胞、尿道癌细胞或肺癌细胞)的细胞表面上表达的her2。
[0134]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体是曲妥珠单抗。在一些实施方案中，所述抗her2抗体不是曲妥珠单抗。在一些实施方案中，所述抗her2抗体特异性结合与曲妥珠单抗相同的her2中的表位。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含与曲妥珠单抗相同的序列，例如重链cdr、轻链cdr、重链可变区、轻链可变区、重链和/或轻链序列。在一些实施方案中，所述抗her2抗体是曲妥珠单抗的生物类似物。在一些实施方案中，所述抗her2抗体是dp001。
[0135]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含重链可变区(vh)，所述重链可变区(vh)包含：包含seq id no:1的氨基酸序列的重链互补决定区(hc-cdr) 1，或其包含最多达约5个(诸如约1、2、3、4或5个中任一个)氨基酸取代的变体，包含seq id no:2的氨基酸序列的hc-cdr2，或其包含最多达约5个(诸如约1、2、3、4或5个中任一个)氨基酸取代的变体，和包含seq id no:3的氨基酸序列的hc-cdr3，或其包含最多达约5个(诸如约1、2、3、4或5个中任一个)氨基酸取代的变体。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含轻链可变区(vl)，所述轻链可变区(vl)包含：包含seq id no:4的氨基酸序列的轻链互补决定区(lc-cdr) 1，或其包含最多达约5个(诸如约1、2、3、4或5个中任一个)氨基酸取代的变体，包含seq id no:5的氨基酸序列的lc-cdr2，或其包含最多达约3个(诸如约1、2或3个中任一个)氨基酸取代的变体，和包含seq id no:6的氨基酸序列的lc-cdr3，或其包含最多达约5个(诸如约1、2、3、4或5个中任一个)氨基酸取代的变体。
[0136]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含：vh，其包含：包含seq id no:1的氨基酸序列的hc-cdrl、包含seq id no:2的氨基酸序列的hc-cdr2和包含seq id no:3的氨基酸序列的hc-cdr3；和vl，其包含：包含seq id no:4的氨基酸序列的lc-cdr1、包含seq id no:5的氨基酸序列的lc-cdr2和包含seq id no:6的氨基酸序列的lc-cdr3。
[0137]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含：a) vh，其包含seq id no:1的氨基酸序列、seq id no:2的氨基酸序列和seq id no:3的氨基酸序列；和ii) vl，其包含seq id no:4的氨基酸序列、seq id no:5的氨基酸序列和seq id no:6的氨基酸序列。
[0138]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含：a) vh，其包含seq id no:7的一个、两个或三个cdr，和/或b) v
l
，其包含seq id no:8的一个、两个或三个cdr。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含：a) vh，其包含seq id no:7的重链可变区的hc-cdr1、hc-cdr2和
hc-cdr3，和/或b) vl，其包含seq id no:8的轻链可变区的lc-cdr1、lc-cdr2和lc-cdr3。
[0139]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含vh，所述vh包含seq id no:7的氨基酸序列或其与seq id no:7具有至少约80%(包括例如至少约80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%中任一者)序列同一性的变体。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含vl，所述vl包含seq id no:8的氨基酸序列或其与seq id no:8具有至少约80%(包括例如至少约80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%中任一者)序列同一性的变体。
[0140]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含：a)包含seq id no:7的氨基酸序列的vh；和b)包含seq id no:8的氨基酸序列的vl。
[0141]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含重链，所述重链包含seq id no:9的氨基酸序列或其与seq id no:9具有至少约80%(包括例如至少约80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%中任一者)序列同一性的变体。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含λ轻链恒定区。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含κ轻链恒定区。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含轻链，所述轻链包含seq id no:10的氨基酸序列或其与seq id no:10具有至少约80%(包括例如至少约80%、85%、90%、95%、96%、97%、98%或99%中任一者)序列同一性的变体。
[0142]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含：包含seq id no:9的氨基酸序列的重链和包含seq id no:10的氨基酸序列的轻链。
[0143]
示例性抗her2抗体序列显示于下表b中。使用igblast算法预测示例性cdr序列。参见，例如，ye j. 等人. nucleic acids research, 41:w34-w40 (2013)，其公开内容通过引用以其整体并入本文。本领域技术人员将认识到已知许多算法用于预测抗体重链和轻链可变区中的cdr位置，并且包含来自本文所述抗体但基于除了igblast以外的预测算法的cdr的抗体药剂在本发明的范围内。示例性抗体重链和轻链可变区序列根据国际免疫遗传学信息系统
®
(international immunogenetics information system
®
，imgt)划界。参见，例如，lefranc, m.-p. 等人, nucleic acids res., 43:d413-422 (2015)，其公开内容通过引用以其整体并入本文。本领域技术人员将认识到包含来自本文所述抗体但基于除了imgt以外的算法的vh或vl序列的抗体药剂在本发明的范围内。
[0144]
表b. 抗her2抗体序列seqidnohc-cdrseqidnolc-cdr1gfnikdtyih4rasqdvntava2riyptngytryadsvkg5sasflys3wggdgfyamdy6qqhyttppt
[0145]
seq id no:7 (vh)seq id no:8 (vl)seq id no:9 (重链；糖基化位点为粗体并加下划线)
seq id no:10 (轻链)
[0146]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体是dp001。dp001是一种抗her2单克隆抗体，其具有与曲妥珠单抗(herceptin
®
)相同的氨基酸序列。具体地，它含有1328个氨基酸，其具有两条450个氨基酸(49284.65 da，seq id no:9)的重链(hc)和两条214个氨基酸(23443.10 da，seq id no:10)的轻链(lc)。dp001是通过16个二硫键(12个链内和4个链间)连接的两条igg1亚类的hc和两条κ亚类的lc的异四聚体。dp001的示意性结构描绘于图1中。
[0147]
本文所述的抗her2抗体涵盖单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段(例如，fab、fab'、f(ab')2、fv、fc等)、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体(例如，完全人抗体)、单链(scfv)、双特异性抗体、多特异性抗体、其突变体、包含抗体部分的融合蛋白以及包含所需特异性的抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其他修饰构型。所述抗体可以是鼠、大鼠、骆驼、人或任何其他来源的(包括人源化抗体)。本公开中使用的抗体还包括单结构域抗体，其是抗体重链的可变结构域或抗体轻链的可变结构域。holt等人, trends biotechnol. 21:484-490, 2003。制备包含抗体重链的可变结构域或抗体轻链的可变结构域的结构域抗体(其含有来自抗体的六个天然存在的hvr或cdr中的三个)的方法也是本领域已知的。参见，例如，muyldermans, rev. mol. biotechnol. 74:277-302, 2001。
[0148]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体是单克隆抗体。如本文所用，单克隆抗体是指基本上同质抗体的抗体，即构成群体的个体抗体是相同的，除了可能以少量存在的可能的天然存在的突变。此外，与通常包括针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制剂相比，单克隆抗体不是离散抗体的混合物。修饰语“单克隆”指示抗体的特征为从基本上同质的抗体群体获得，并且不应解释为需要通过任何特定方法产生抗体。例如，本公开中使用的单克隆抗体可以通过首先由kohler和milstein, 1975, nature, 256:495描述的杂交瘤方法制备，或者可以通过诸如美国专利号4,816,567中描述的重组dna方法制备。例如，单克隆抗体也可以从使用mccafferty等人, 1990, nature, 348:552-554中描述的技术生成的噬菌体文库中分离。
[0149]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体是嵌合抗体。如本文所用，嵌合抗体是指具有来自第一物种的可变区或部分可变区和来自第二物种的恒定区的抗体。完整的嵌合抗体包含两个拷贝的嵌合轻链和两个拷贝的嵌合重链。嵌合抗体的产生是本领域已知的(cabilly等人 (1984), proc. natl. acad. sci. usa, 81:3273-3277; harlow和lane (1988), antibodies: a laboratory manual, cold spring harbor laboratory)。通常，在这些嵌合抗体中，轻链和重链两者的可变区均模拟源自一种哺乳动物物种的抗体的可变区，而恒
定部分与源自另一哺乳动物物种的抗体中的序列同源。此类嵌合形式的一个明显优势是，例如，可变区可以方便地源自目前已知的来源，使用容易得到的杂交瘤或来自非人宿主生物体的b细胞与源自例如人细胞制备物的恒定区组合。尽管可变区具有易于制备的优点，并且特异性不受其来源的影响，但与来自非人来源的恒定区相比，人类的恒定区在注射抗体时不太可能引发来自人受试者的免疫应答。然而，该定义不限于该特定实例。
[0150]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体是人源化抗体。如本文所用，人源化抗体是指非人(例如，鼠)抗体的形式，其为特异性嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(诸如fv、fab、fab'、f(ab')2或抗体的其他抗原结合子序列)，其含有源自非人免疫球蛋白的最小序列。对于大部分，人源化抗体是人免疫球蛋白(受体抗体)，其中来自受体的hvr或cdr的残基被具有期望特异性、亲和力和能力的来自非人物种(供体抗体)诸如小鼠、大鼠或兔的hvr或cdr的残基所替代。在一些情况下，所述人免疫球蛋白的fv框架区(fr)残基被相应的非人残基替代。此外，人源化抗体可以包含既不存在于受体抗体中也不存在于引入的hvr或cdr或框架序列中、但被包括以进一步改进和优化抗体性能的残基。一般而言，人源化抗体将包含基本上所有的至少一个以及通常两个可变结构域，其中所有的或者基本上所有的hvr或cdr区对应于非人免疫球蛋白的那些，并且所有的或者基本上所有的fr区是人免疫球蛋白共有序列的那些。人源化抗体还将最佳地包含免疫球蛋白恒定区或结构域(fc)(通常是人免疫球蛋白的恒定区或结构域)的至少一部分。抗体可以具有如wo99/58572中所述修饰的fc区。其他形式的人源化抗体具有一个或多个(一、二、三、四、五、六个) hvr或cdr，其相对于原始抗体被改变，其也称为“源自”来自原始抗体的一个或多个hvr或cdr的一个或多个hvr或cdr。
[0151]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体是人抗体。如本文所用，人抗体意指具有对应于由人产生的抗体的氨基酸序列的氨基酸序列的抗体和/或已经使用本领域已知的用于制备人抗体的任何技术制备。本文使用的人抗体包括包含至少一个人重链多肽或至少一个人轻链多肽的抗体。一个这种实例是包含鼠轻链和人重链多肽的抗体。可以使用本领域已知的各种技术产生人抗体。在一个实施方案中，人抗体选自噬菌体文库，其中该噬菌体文库表达人抗体(vaughan等人, 1996, nature biotechnology, 14:309-314; sheets等人, 1998, pnas, (usa) 95:6157-6162; hoogenboom和winter, 1991, j. mol. biol., 227:381; marks等人, 1991, j. mol. biol., 222:581)。人抗体也可以通过将人免疫球蛋白基因座引入转基因动物(例如其中内源性免疫球蛋白基因已经部分或完全失活的小鼠)中来制备。该方法描述于美国专利号5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；和5,661,016中。或者，可以通过使产生针对靶抗原的抗体的人b淋巴细胞(此类b淋巴细胞可以从个体中回收或可以已经在体外免疫)永生化来制备人抗体。参见，例如, monoclonal antibodies and cancer therapy, alan r. liss, p. 77 (1985); boerner等人, 1991, j. immunol., 147 (1):86-95；和美国专利号5,750,373。
[0152]
本文所述的抗her2抗体可以进一步包括被修饰(即，通过共价附接任何类型的分子，只要这种共价附接允许抗体保留其抗原结合免疫特异性)的类似物和衍生物。例如，抗体的衍生物和类似物包括已经进一步修饰(例如，通过糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白水解切割、连接至细胞配体或其他蛋白等)的那些。化学修饰可以通过已知技术(包括但不限于特定的化学切割、乙酰化、配制等)
来实施。另外，所述类似物或衍生物可以含有一个或多个非天然氨基酸。
[0153]
在一些实施方案中，考虑了本文提供的抗her2抗体的氨基酸序列变体。例如，可能期望提高所述抗体的结合亲和力和/或其他生物学特性。抗体的氨基酸序列变体可以通过将适当的修饰引入编码所述抗体的核苷酸序列中或通过肽合成来制备。此类修饰包括例如在所述抗体的氨基酸序列内的残基缺失和/或插入和/或取代。可进行缺失、插入和取代的任何组合以获得最终的构建体，前体是最终构建体具有期望的特征，例如，抗原结合。在一些实施方案中，提供了具有一个或多个氨基酸取代的抗her2抗体变体。用于取代诱变的目标位点包括hvr和fr。可将氨基酸取代引入目标抗体中，并针对期望活性筛选产物，例如，保留/提高抗原结合、降低免疫原性或改善adcc或cdc。保守取代显示于下表c中。
[0154]
表c：保守取代原始残基示例性取代优选取代ala(a)val;leu;ilevalarg(r)lys;gln;asnlysasn(n)gln;his;asp,lys;argglnasp(d)glu;asnglucys(c)ser;alasergln(q)asn;gluasnglu(e)asp;glnaspgly(g)alaalahis(h)asn;gln;lys;argargile(i)leu;val;met;ala;phe;正亮氨酸leuleu(l)正亮氨酸;ile;val;met;ala;pheilelys(k)arg;gln;asnargmet(m)leu;phe;ileleuphe(f)trp;leu;val;ile;ala;tyrtyrpro(p)alaalaser(s)thrthrthr(t)val;sersertrp(w)tyr;phetyrtyr(y)trp;phe;thr;serpheval(v)ile;leu;met;phe;ala;正亮氨酸leu
[0155]
氨基酸可根据共同侧链特性分为不同的类别：a.疏水：正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；b.中性亲水：cys、ser、thr、asn、gln；c.酸性：asp、glu；d.碱性：his、lys、arg；e.影响链取向的残基：gly、pro；f.芳族：trp、tyr、phe。
[0156]
非保守取代将需要用这些类别之一的成员替换另一个类别。
glennie, blood 103:2738-2743 (2004))。还可以使用本领域已知的方法进行fcrn结合和体内清除/半衰期测定(参见例如petkova, s. b. 等人, int'l. immunol. 18(12):1759-1769 (2006))。
[0161]
效应功能降低的抗体包括fc区残基238、265、269、270、297、327和329中的一个或多个被取代的抗体(美国专利号6,737,056)。此类fc突变体包括在氨基酸位置265、269、270、297和327中的两个或更多个处具有取代的fc突变体，包括残基265和297取代为丙氨酸的所谓“dana”fc突变体(美国专利号7,332,581)。
[0162]
描述了具有改进或降低的与fcr的结合的某些抗体变体。(参见例如美国专利号6,737,056；wo 2004/056312；和shields等人, j. biol. chem. 9(2): 6591-6604 (2001).)。
[0163]
在一些实施方案中，在fc区中进行改变，其导致改变(即，改进或减少)的c1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(cdc)，例如，如美国专利号6,194,551、wo 99/51642和idusogie等人, j. immunol. 164: 4178-4184 (2000)中所述。
[0164]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含变体fc区，所述变体fc区包含一个或多个增加半衰期和/或改进与新生儿fc受体(fcrn)的结合的氨基酸取代。具有增加的半衰期和改进的与fcrn的结合的抗体描述于us2005/0014934a1(hinton等人)中。那些抗体包含fc区，所述fc区中具有一个或多个改进fc区与fcrn的结合的取代。此类fc变体包括在以下fc区残基中的一个或多个处具有取代的那些：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如fc区残基434的取代(美国专利号7,371,826)。关于fc区变体的其他实例，还参见duncan & winter, nature 322:738-40 (1988); 美国专利号5,648,260; 美国专利号5,624,821; 和wo 94/29351。
[0165]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体被改变以增加或降低抗her2抗体糖基化的程度。对抗her2抗体的糖基化位点的添加或缺失可以便利地通过改变抗her2抗体或其多肽部分的氨基酸序列、使得建立或除去一个或多个糖基化位点来实现。
[0166]
在抗her2抗体包含fc区的情况下，可以改变与其附接的碳水化合物。由哺乳动物细胞产生的天然抗体通常包含分支的双触角寡糖，其通常通过n-键附接至fc区的ch2结构域的asn297。参见例如wright等人，tibtech 15:26-32(1997)。寡糖可以包括各种碳水化合物，例如甘露糖、n-乙酰基葡糖胺(glcnac)、半乳糖和唾液酸，以及附接至双触角寡糖结构的“茎”中的glcnac的岩藻糖。在一些实施方案中，可以对本发明的抗her2抗体中的寡糖进行修饰以产生具有某些改进特性的抗her2抗体变体。
[0167]
附接至fc的ch2结构域的n-聚糖是异质的。cho细胞中生成的抗体或fc融合蛋白被岩藻糖基转移酶活性岩藻糖基化。参见shoji-hosaka等人, j. biochem. 2006, 140:777
‑ꢀ
83。通常，在人血清中可以检测到小部分天然存在的无岩藻糖基化igg。fc的n-糖基化对于与fcγr的结合是重要的；并且n-聚糖的无岩藻糖基化增加fc与fcγriiia的结合能力。增加的fcγriiia结合可以增强adcc，这在其中期望细胞毒性的某些抗体治疗应用中会是有利的。
[0168]
进一步提供具有二等分寡糖的抗her2抗体变体，例如，其中附接至抗her2抗体的fc区的双触角寡糖被glcnac二等分。此类抗her2抗体变体可能具有减少的岩藻糖基化和/或改进的adcc功能。此类抗体变体的实例描述于例如wo 2003/011878 (jean-mairet等
人)；美国专利号6,602,684 (umana等人)；us2005/0123546(umana等人)和ferrara等人, biotechnology and bioengineering, 93(5): 851-861 (2006)。还提供了在附接至fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗her2抗体变体。此类抗her2抗体变体可具有改进的cdc功能。此类抗体变体描述于例如wo 1997/30087 (patel等人)；wo 1998/58964 (raju, s.)；和wo 1999/22764 (raju, s.)。
[0169]
在一些实施方案中，包含fc区的抗her2抗体变体能够结合fcγriii。在一些实施方案中，所述抗her2抗体包含人野生型igg1 fc区。
[0170]
还提供了一种或多种编码抗her2抗体的重链和/或轻链的核酸、包含所述一种或多种核酸的载体以及制备所述抗her2抗体的方法。
[0171]
缀合部分本文所述的adc的缀合部分包含毒素，诸如可用于癌症疗法的细胞毒剂。在一些实施方案中，所述毒素是化学治疗剂。在一些实施方案中，所述毒素是小分子药物。细胞毒剂的实例包括，但不限于蒽环霉素、澳瑞他汀、多拉司他汀、cc-1065、多卡霉素、烯二炔、格尔德霉素、美登素、嘌呤霉素、紫杉烷、长春花生物碱、sn-38、微管溶素(tubulysin)、哈米特林(hemiasterlin)及其立体异构体、等排物、类似物或衍生物。在一些实施方案中，所述缀合部分包含单丹磺酰尸胺(mdc)。在一些实施方案中，所述缀合部分包含tam1。在一些实施方案中，所述缀合部分包含单甲基澳瑞他汀e(mmae)。
[0172]
蒽环霉素类源自细菌链霉菌，并且已经用于治疗广泛范围的癌症，诸如白血病、淋巴瘤、乳腺癌、子宫癌、卵巢癌和肺癌。示例性蒽环霉素类包括，但不限于柔红霉素、多柔比星(即，阿霉素)、表柔比星、伊达比星、戊柔比星和米托蒽醌。
[0173]
多拉司他汀类及其肽类似物和衍生物澳瑞他汀类是已经显示具有抗癌和抗真菌活性的高度有效的抗有丝分裂剂。参见，例如，美国专利号5,663,149和pettit等人, antimicrob. agents chemother. 42:2961-2965 (1998)。示例性多拉司他汀类和澳瑞他汀类包括，但不限于澳瑞他汀e、澳瑞他汀eb (aeb)、澳瑞他汀efp (aefp)、mmad、mmaf、mmae和5-苯甲酰戊酸-ae酯(aevb)。
[0174]
多卡霉素和cc-1065是具有细胞毒性效力的dna烷化剂。参见boger和johnson, pnas 92:3642-3649 (1995)。示例性多拉司他汀类和澳瑞他汀类包括，但不限于(+)-多卡霉素a和(+)-多卡霉素sa以及(+)-cc-1065。
[0175]
烯二炔类是一类抗肿瘤细菌产品，其特征在于九元和十元环或存在共轭的三-双-三键的环状系统。示例性烯二炔类包括，但不限于卡奇霉素(calicheamicin)、埃斯培拉霉素(esperamicin)和达内霉素(dynemicin)。
[0176]
格尔德霉素类是结合hsp90(热休克蛋白90)的苯醌安莎霉素抗生素，并且已经用作抗肿瘤药物。示例性格尔德霉素类包括但不限于17-aag (17-n-烯丙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素)和17-dmag (17-二甲基氨基乙基氨基-17-去甲氧基格尔德霉素)。
[0177]
美登素类或其衍生物美登木素生物碱类通过在有丝分裂期间经由抑制微管蛋白聚合来抑制微管形成而抑制细胞增殖。参见remillard等人, science 189:1002-1005 (1975)。示例性美登素类和美登木素生物碱类包括但不限于mertansine(dm1)及其衍生物以及安丝菌素。
[0178]
紫杉烷类是用作抗微管蛋白剂或有丝分裂抑制剂的二萜类。示例性紫杉烷类包括
但不限于紫杉醇(例如，taxol
®
)和多西他赛(taxotere
®
)。
[0179]
长春花生物碱类也是抗微管蛋白剂。示例性长春花生物碱类包括但不限于长春新碱、长春碱、长春地辛和长春瑞滨。
[0180]
本领域技术人员可以对期望化合物进行化学修饰，以使该化合物的反应更便于制备本发明的缀合物的目的。
[0181]
在一些实施方案中，所述缀合部分包含毒素多肽(或毒素蛋白)。毒素多肽的实例包括，但不限于白喉毒素(diphtheria) a链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素a链、蓖麻毒素a链、相思豆毒素a链、蒴莲根毒素a链、α-帚曲毒素、油桐(aleurites fordii)蛋白类、石竹素蛋白类、美洲商陆(phytolaca americana)蛋白类(papi、papii和pap-s)、苦瓜(momordica charantia)抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆毒素、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂、白树毒素、mitogellin、局限曲菌素、酚霉素(phenomycin)、伊诺霉素(enomycin)、单端孢霉烯族毒素(tricothecene)、抑制剂胱氨酸结(ick)肽类(例如，ceratotoxins)和芋螺毒素(例如，kiiia或smiiia)。
[0182]
本文所述的缀合部分包含胺供体基团，其缀合至抗her2抗体中的受体谷氨酰胺残基。任何不含胺供体基团的缀合部分可以经由含有胺供体基团的小分子柄间接缀合至抗her2抗体。
[0183]
如本文所用的术语“胺供体基团”是指含有一个或多个反应性胺(例如，伯胺)的反应基。例如，所述缀合部分可以包含胺供体基团(例如，伯胺-nh2)、接头和毒素(例如，小分子)。所述缀合部分还可以是含有反应性lys(例如，内源性lys)的多肽或生物相容性聚合物。在一些实施方案中，所述胺供体基团是伯胺(-nh2)，其提供转谷氨酰胺酶的底物，以允许将缀合部分经由受体谷氨酰胺与抗her2抗体缀合。因此，所述供体谷氨酰胺和胺供体基团之间的连接可以是式-ch
2-ch
2-co-nh-的连接。
[0184]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体和所述缀合部分通过接头连接。短语“接头”是指将所述化合物的一个结构元件连接至所述相同化合物的一个或多个其他结构元件的化合物的结构元件。在一些实施方案中，所述接头是不可切割接头(non-cleavable linker)。合适的不可切割接头包括，但不限于，nh
2-r-x、nh2nh-r-x和nh
2-o-r-x，其中r是烷基或聚乙二醇基团(也称为peg)，其中x是毒素。聚乙二醇基团或peg基团可以具有式-(ch2ch2o)
n-，其中n是至少1的整数。在一些实施方案中，n是2、4、6、8、10、12、16、20或24中任一个。
[0185]
在一些实施方案中，所述抗her2抗体和所述缀合部分通过可切割接头连接。合适的可切割接头包括，但不限于，lys-phe-x、lys-val-cit-pabc-x、nh
2-(ch2ch2o)
n-val-cit-pabc-x和nh
2-(ch2ch2o)
n-(val-cit-pabc-x)2，其中x是毒素，且n是至少1的整数(诸如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23或24中任一个)。pabc是指对氨基苄氧基羰基。cit是指瓜氨酸。
[0186]
其他示例性胺供体基团-接头包括，但不限于ac-lys-gly、氨基己酸、ac-lys-β-ala、氨基-peg2(聚乙二醇)-c2、氨基-peg3-c2、氨基-peg6-c2、ac-lys-val(缬氨酸)-cit (瓜氨酸)-pabc (对氨基苄氧基羰基)、氨基己酰基-val-cit-pabc、腐胺和ac-lys-腐胺。
[0187]
在一些实施方案中，所述缀合部分经由-nh-(c)
n-接头与受体谷氨酰胺残基连接，其中(c)n是取代或未取代的烷基或杂烷基链，其中n是约1至约60的整数。在一些实施方案
中，所述链的碳被烷氧基、羟基、烷基羰氧基、烷基-s-、硫醇(thiol)、烷基-c(o)s-、胺、烷基胺、酰胺或烷基酰胺取代。在一些实施方案中，n是约2至约20。
[0188]
在一些实施方案中，所述接头是支链的。在一些实施方案中，所述接头是直链的。在一些实施方案中，所述接头具有多于一个(诸如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个)附接位点用于附接活性部分。这些活性部分可以是彼此相同或不同的。例如，所述缀合部分可以包含与多个毒素(诸如化学治疗剂)连接的基于聚缩醛的或基于聚缩醛衍生物的聚合物。
[0189]
在一些实施方案中，所述缀合部分包含选自以下的毒素：ac-lys-gly-mmad、氨基-peg3-c2-mmad、氨基-peg6-c2-mmad、氨基-peg3-c2-氨基-壬酰基-mmad]、氨基己酰基-val-cit-pabc-mmad、ac-lys-β-ala-mmad、氨基己酰基-mmad、ac-lys-val-cit-pabc-mmad、氨基己酰基-mmae、氨基-peg3-c2-mmae、氨基-peg2-c2-mmae、氨基己酰基-mmaf、氨基己酰基-val-cit-pabc-mmae、氨基己酰基-val-cit-pabc-mmaf、氨基-peg2-c2-mmaf、氨基-peg3-c2-mmaf、腐胺基-格尔德霉素和ac-lys-腐胺基-格尔德霉素。在一些实施方案中，所述胺供体剂是氨基己酰基-val-cit-pabc-mmae、氨基己酰基-val-cit-pabc-mmaf、ac-lys-腐胺基-格尔德霉素、ac-lys-β-ala-mmad、ac-lys-val-cit-pabc-mmad、氨基己酰基-val-cit-pabc-mmad和氨基-peg6-c2-mmad。
[0190]
在一些实施方案中，所述缀合部分是美登素衍生物。在一些实施方案中，所述缀合部分是包含不可切割的接头(诸如氨基-(ch2ch2o)
n-接头)的mmae衍生物。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(ii)的化学结构：(ii)，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12的整数。
[0191]
在一些实施方案中，所述缀合部分是包含可切割的接头的mmae衍生物(诸如氨基-(ch2ch2o)
n-val-cit-pabc-mmae)。在一些实施方案中，所述缀合部分具有式(iii)的化学结构：，其中n是选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11和12的整数。
[0192]
在一些实施方案中，所述缀合部分包含具有式(i)的化学结构的毒素：
。
[0193]
在一些实施方案中，所述毒素是lnd1002。lnd1002是一种衍生自mmae的毒素，其具有带有伯胺基团的peg接头，所述伯胺基团用于缀合。lnd1002具有式(i)的化学结构。
[0194]
本文考虑的化学化合物包括其盐、溶剂化物或立体异构体，其包括盐、溶剂化物和立体异构体的所有排列，诸如主题化合物的立体异构体的药学上可接受的盐的溶剂化物。
[0195]
术语“药学上可接受的盐”意指对于施用于患者、诸如哺乳动物可接受的盐(对于给定的剂量方案具有可接受的哺乳动物安全性的具有抗衡离子的盐)。此类盐可以衍生自药学上可接受的无机或有机碱以及药学上可接受的无机或有机酸。“药学上可接受的盐”是指化合物的药学上可接受的盐，所述盐衍生自本领域众所周知的各种有机和无机抗衡离子并且仅通过实例的方式，包括钠、钾、钙、镁、铵、四烷基铵等；并且当分子含有碱性官能团时，有机或无机酸的盐，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、甲酸盐、酒石酸盐、苯磺酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐、草酸盐等。
[0196]
术语“其盐”意指当酸的质子被阳离子、诸如金属阳离子或有机阳离子等替代时形成的化合物。在适用的情况下，所述盐是药学上可接受的盐，尽管这对于不意欲施用于患者的中间体化合物的盐而言不是需要的。通过实例的方式，本发明化合物的盐包括其中化合物被无机或有机酸质子化以形成阳离子的那些，其中无机或有机酸的共轭碱作为盐的阴离子组分。
[0197]“溶剂化物”是指由溶剂分子与溶质的分子或离子的组合形成的络合物。所述溶剂可以是有机化合物、无机化合物或两者的混合物。溶剂的一些实例包括但不限于甲醇、n,n-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、二甲亚砜和水。当溶剂是水时，形成的溶剂化物是水合物。
[0198]“一种立体异构体”和“多种立体异构体”是指具有相同原子连通性但在空间中原子排列不同的化合物。立体异构体包括顺-反异构体、e和z异构体、对映异构体和非对映异构体。
[0199]
制备抗体-药物缀合物的方法本文所述的adc可以使用本领域中任何合适的方法(例如，通过使用转谷氨酰胺酶将缀合部分中的胺基缀合至抗体中的内源性受体谷氨酰胺残基)来制备。参见，例如，美国专利号10,357,472，其通过引用以其整体并入本文。
[0200]
在一些实施方案中，抗her2 adc使用野生型或工程改造的转谷氨酰胺酶制备。适用于制备本文所述的adc的工程改造的转谷氨酰胺酶包括美国专利号10,471,037(其通过引用以其整体并入本文)中描述的那些。
[0201]
tgase通过在一种蛋白的赖氨酸供体残基和另一种蛋白的受体谷氨酰胺残基之间形成蛋白酶抗性异肽键来催化共价蛋白交联，并伴随着氨的释放。已经提出转谷氨酰胺酶的催化机理如下。在含有谷氨酰胺的第一底物(受体或q底物)结合酶之后，其与tgase的活性中心中的半胱氨酸残基形成γ-谷氨酰硫酯，称为酰基酶中间体，伴随着氨的释放。然后
第二底物(供体或k-底物)结合酰基酶中间体并攻击硫酯键。形成并释放产物(通过nε(γ-谷氨酰基)赖氨酸异肽桥(isopetide bridge)交联的两个蛋白)。这重新建立了呈其初始形式的酶的活性中心cys残基，并允许其参与另一个催化循环。认为共价酰基酶中间体的形成是这些反应中的限速步骤。许多转谷氨酰胺酶的催化三联体是木瓜蛋白酶样的，其含有cys-his-asp(其中his是组氨酸，且asp是天冬氨酸)和至关重要的位于远离活性中心cys的36个残基处的色氨酸(trp)残基。相反，从链轮丝菌属种(streptoverticillium sp)(参见上文)分离的细菌tgase具有非典型催化三联体，并且显示与其他tgase的木瓜蛋白酶样催化三联体没有序列同源性。
[0202]
已经在各种活生物体(包括微生物生物体)中报道了几种类型的转谷氨酰胺酶。实例是来自豚鼠肝脏(gtgase)、鱼肝(ftgase)和微生物(mtgase)的tgase和任何重组tgase (rtgase)。根据本发明也可以使用除了此处列出的tgase以外的其他tgase。有用的tgase的实例包括微生物转谷氨酰胺酶，诸如例如来自美国专利号5,156,956中公开的茂原链霉菌(streptomyces mobaraense)、肉桂链霉菌(streptomyces cinnamoneum)和灰肉链霉菌(streptomyces griseocarneum)，和美国专利号5,252,469中公开的淡紫灰链霉菌(streptomyces lavendulae)，以及jp2003199569中公开的拉达卡链霉菌(streptomyces ladakanum)。其他有用的微生物转谷氨酰胺酶已从枯草芽孢杆菌(公开于美国专利号5,731,183)和各种粘菌中分离。有用的微生物转谷氨酰胺酶的其他实例是wo 96/06931(例如，来自bacilus lydicus的转谷氨酰胺酶)和wo 96/22366中公开的那些。有用的非微生物转谷氨酰胺酶包括豚鼠肝转谷氨酰胺酶和来自各种海洋来源如扁鱼真鲷(flat fish pagrus major) (公开于ep-0555649)和日本牡蛎长牡蛎(crassostrea gigas) (公开于美国专利号5,736,356)的转谷氨酰胺酶。示例性tgase是细菌转谷氨酰胺酶(btg)(参见例如ec 2.3.2.13，蛋白-谷氨酰胺-γ-谷氨酰转移酶)。在另一个示例性实施方案中，tgase来自茂原链霉菌(s. mobaraense)。在另一个实施方案中，tgase是与天然tgase具有至少80％序列同源性的突变体(例如，工程改造的)tgase。一个实例是源自茂原链霉菌的重组细菌转谷氨酰胺酶(可得自zedira, darmstadt, germany)。
[0203]
拉达卡链霉菌(streptomyces ladakanum) atcc 27441或nrrl3191 mtgase作为前mtgase原(genbank登录号ay241675)表达。前mtgase原中存在410个氨基酸残基，成熟酶中的331个氨基酸加上前体(pre)的30个氨基酸和酶原(pro)的49个氨基酸。肽原是成熟酶的强烈抑制剂。根据ay241675设计的引物用于将来自atcc 27441dna的mtgase原和成熟mtgase克隆至pet29b(+)载体的nde i和xho i位点中。活性mtgase可以获得自mtgase原的肠激酶轻链(ekl)消化或成熟mtgase的重折叠。来自拉达卡链霉菌(strep ladakanum)的mtgase(tg_sl)非常类似于来自茂原链霉菌(strep. mobaraensis)的mtgase(tg_sm，由ajinomoto作为activa
®
销售)，具有少量氨基酸差异。
[0204]
用于本文所述的方法中的转谷氨酰胺酶可以从多种来源获得或制备。在一些实施方案中，所述转谷氨酰胺酶是钙依赖性转谷氨酰胺酶，其需要钙诱导酶构象变化并允许酶活性。例如，转谷氨酰胺酶可以源自豚鼠肝脏，并通过商业来源(例如，sigma-aldrich (st louis, mo.)和mp biomedicals (irvine, calif.))获得。在一些实施方案中，所述转谷氨酰胺酶是钙非依赖性转谷氨酰胺酶，其不需要钙诱导酶构象变化并允许酶活性。在一些实施方案中，所述转谷氨酰胺酶是源自微生物基因组的微生物转谷氨酰胺酶，诸如来自链轮
丝菌属或链霉菌属(streptomices)(例如，茂原链霉菌或茂原链轮丝菌(streptoverticillium mobarensis))的转谷氨酰胺酶。在一些实施方案中，所述转谷氨酰胺酶是哺乳动物蛋白(例如，人转谷氨酰胺酶)、细菌蛋白、植物蛋白、真菌蛋白(例如，卵菌(oomycetes)和放线菌(actinomycetes)转谷氨酰胺酶)或原核生物蛋白。在一些实施方案中，所述转谷氨酰胺酶来自微球菌属(micrococcus)、梭菌属(clostridium)、turolpsis、根霉属(rhizopus)、红曲霉属(monascus)或芽孢杆菌属(bacillus)。
[0205]
在一些实施方案中，本文所述的方法中使用的转谷氨酰胺酶是使用重组技术产生的重组蛋白。在一些实施方案中，所述tgase通过如下制备：(a)培养包含含有编码tgase的酶原的核酸的载体的宿主细胞(诸如原核细胞)，和(b)通过切割酶原的原序列(例如通过内激酶(endokinase)轻链)获得成熟tgase。在一些实施方案中，通过色谱法(诸如通过亲和色谱法或离子交换色谱法)纯化tgase。在一些实施方案中，tgase被标记(诸如his-标记)以促进纯化。
[0206]
在一些实施方案中，所述抗her2 adc通过在足以生成所述adc的条件下在转谷氨酰胺酶存在的情况下使抗her2抗体与缀合部分接触来制备，其中所述抗her2抗体包含n-糖基化的fc区，其中所述n-糖基化的fc区包含侧接n-糖基化位点的受体谷氨酰胺残基，且其中所述缀合部分经由受体谷氨酰胺残基缀合至抗her2抗体。在一些实施方案中，所述抗her2 adc通过在足以生成所述adc的条件下在转谷氨酰胺酶存在的情况下使包含抗her2抗体的组合物与缀合部分接触来制备，其中所述抗her2抗体的至少一些(例如，至少约50%、60%、70%、80%、90%或更多)包含n-糖基化的fc区，其中所述fc区包含侧接n-糖基化位点的受体谷氨酰胺残基，且其中所述缀合部分经由受体谷氨酰胺残基缀合至抗her2抗体。
[0207]
在一些实施方案中，所述抗her2 adc在两个步骤中制备。首先，将小分子柄经由tgase与抗her2抗体缀合以生成中间体缀合物。随后，将毒素共价或非共价地经由小分子柄偶联至中间体缀合物。可以特异性设计小分子柄以定制毒素的偶联，因此允许任何种类的毒素与抗her2抗体的缀合。当抗her2抗体和/或毒素的供应有限时，且当毒素具有低水溶性和/或诱导抗her2抗体聚集时，两步法是特别有用的。
[0208]
本文所述的小分子柄通常具有-nh
2-r的结构，其中r是允许毒素的附接的部分。在本文所述的方法中引入小分子柄显著增加所述方法的灵活性。具体地，所述小分子柄的结构可以定制为附接期望的毒素。例如，在一些实施方案中，r是特异性结合至结合配偶体的配体。这允许附接含有结合配偶体的任何分子(诸如蛋白)。合适的配体/结合配偶体对包括，但不限于抗体/抗原、抗原/抗体、抗生物素蛋白/生物素、生物素/抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白/生物素、生物素/链霉抗生物素蛋白、谷胱甘肽/gst、gst/谷胱甘肽、麦芽糖结合蛋白/直链淀粉、直链淀粉/麦芽糖结合蛋白、纤维素结合蛋白和纤维素、纤维素/纤维素结合蛋白等。
[0209]
本文所述的其他合适的小分子柄包括，但不限于nh
2-ch
2-ch(oh)-ch
2-nh2、nh
2-r-(or')2、nh
2-r=o、nh
2-r-sh、nh
2-r-叠氮化物。这些小分子柄允许通过合适的接头诸如nh
2-o-r-x、马来酰亚胺-r-x和环辛炔-r-(r'-x)2附接缀合部分，其中x是活性部分，且r和r'独立地是接头基团，诸如包含烷基或聚乙二醇基团的接头基团。
[0210]
tgase催化的反应可以实施几小时至一天(例如过夜)。使缀合部分或小分子柄以400至600 μmol/l的配体浓度与抗her2抗体(例如，1 mg/ml)反应，其提供相比于抗her2抗
体60-90倍过量的底物，或以较低过量的底物，例如，1至20倍，或10-20倍。所述反应可以在不含钾的磷酸盐缓冲盐水(pbs；ph 8)中在37℃下进行。4小时至几天之后，达到稳态条件。然后使用离心-透析(vivaspin
®ꢀ
mwco 50 kda, vivascience, winkel, switzerland)或渗滤(pellicon
®ꢀ
mwmco 50kda, millipore)去除过量的配体和酶。可以通过hplc监测反应。
[0211]
可以使用任何合适的方法分析所得的adc。例如，可以通过使用上-下方法的液相色谱质谱法(lc/ms)表征adc的化学计量，以评价与抗体缀合的缀合部分的数目，特别是组合物的同质性。可以在lc/ms分析之前还原缀合物，且分别测量轻链和重链。
[0212]
在一个实施方案中，分析所述adc的载药量(例如每个抗her2抗体的缀合物中毒素的数目)。此类方法可用于确定每个抗her2抗体的缀合部分或毒素(诸如mmae)的平均数目以及组合物中每个抗体的缀合部分或毒素(诸如mmae)的数目的分布，即具有任何给定水平的载药量或dar的总抗体的百分比。可以测定具有一定数目(n)的缀合受体谷氨酰胺(例如，n=1、2、3、4、5、6等)的抗体部分。适于此类测定和更通常地适于载药量的一种技术是疏水相互作用色谱法(hic)，hic可以如对于例如hamblett等人(2004) cancer res.10:7063-7070；wakankar等人(2011) mabs 3(2):161-172；和lyon等人(2012) methods in enzymology, vol. 502:123-138(其公开内容通过引用并入本文)所述实施。
[0213]
可以控制缀合反应中的转谷氨酰胺酶和抗her2抗体之间的摩尔比率，以允许有效的转谷氨酰胺反应。例如，在一些实施方案中，所述转谷氨酰胺酶和所述抗her2抗体的摩尔比率为约10:1至约1:100。可以控制所述反应混合物中的转谷氨酰胺酶的量以允许有效的转谷氨酰胺酶反应。例如，在一些实施方案中，所述反应混合物中的转谷氨酰胺酶的浓度约为约0.01 mg/ml至约5 mg/ml中任一种。在一些实施方案中，缀合部分和抗her2抗体之间的浓度比为约2:1至约800:1。在一些实施方案中，抗her2抗体和缀合部分的缀合效率为至少约30%(例如，至少约40%、50%、60%、70%、80%、90%或更多)。缀合效率也可以在不同的温度(诸如室温或37℃)下测量。
[0214]
在一些实施方案中，在缀合反应之后纯化adc。例如，可以使用亲和色谱法(诸如蛋白a柱和/或大小排阻柱)纯化adc。
[0215]
iv. 药物组合物、试剂盒和制品还提供包含本文所述的抗体-药物缀合物中的任一种的药物组合物。在一些实施方案中，所述药物组合物进一步包含药学上可接受的载体。在一些实施方案中，所述药物组合物包含约50mm柠檬酸钠、约10 mm柠檬酸、约4.0% (w/v)蔗糖和约0.02% (w/v)聚山梨醇酯20。在一些实施方案中，所述药物组合物包含约10 mg/ml的adc。
[0216]
术语“药学上可接受的载体”在本文中用于描述除了本发明的化合物以外的任何成分。赋形剂的选择在很大程度上取决于因素，诸如具体施用方式、赋形剂对溶解度和稳定性的影响以及剂型的性质。如本文所用，“药学上可接受的载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。药学上可接受的赋形剂的一些实例是水、盐水、磷酸盐缓冲盐水、葡萄糖、甘油、乙醇等，以及其组合。在一些实施方案中，在所述药物组合物中包括等渗剂，包括但不限于糖类、多元醇类(例如，甘露醇、山梨醇)或氯化钠。药学上可接受的物质的额外实例包括，但不限于润湿剂或少量辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂，防腐剂或缓冲剂，其增强抗体的保质期或有效性。
[0217]
在一些实施方案中，将药物组合物配制成具有约4.5至约9.0的范围内的ph，包括例如约5.0至约8.0、约6.5至约7.5或约6.5至约7.0中任一者的ph范围。在一些实施方案中，还可以通过添加合适的张力调节剂、诸如甘油使药物组合物与血液等渗。
[0218]
待用于体内施用的药物组合物通常配制成无菌的、基本上等渗的，并且完全符合美国食品和药物管理局的所有良好生产规范(gmp)规定。通过经由无菌过滤膜过滤容易实现无菌。在一些实施方案中，所述组合物不含病原体。对于注射，所述药物组合物可以呈液体溶液的形式，例如在生理相容的缓冲液、诸如hank氏溶液或ringer氏溶液中。此外，药物组合物可以呈固体形式并在使用前立即重新溶解或悬浮。还包括冻干组合物。
[0219]
在一些实施方案中，所述药物组合物适合施用于人。在一些实施方案中，所述药物组合物包含在一次性小瓶、诸如一次性密封小瓶中。在一些实施方案中，所述药物组合物包含在多次使用的小瓶中。在一些实施方案中，所述药物组合物散装包含在容器中。在一些实施方案中，所述药物组合物是冷冻保存的。
[0220]
本文所述的药物组合物可以作为单一单位剂量或作为多个单一单位剂量制备、包装或批量出售。如本文所用，“单位剂量”是包含预定量的活性成分的药物组合物的个别量(discrete amount)。活性成分的量通常等于将施用于受试者的活性成分的剂量或此类剂量的方便分数，例如此类剂量的一半或三分之一。
[0221]
在一些实施方案中，本文所述的药物组合物适合于肠胃外施用。药物组合物的肠胃外施用包括特征在于物理破裂受试者的组织且通过组织中的缺口施用药物组合物、因此通常导致直接施用入血流、肌肉或内部器官的任何施用途径。例如，肠胃外施用包括，但不限于通过注射组合物、通过经手术切口应用组合物、通过经组织穿透性非手术创口应用组合物等而施用药物组合物。具体而言，考虑肠胃外施用包括，但不限于皮下、腹膜内、肌内、胸骨内、静脉内、动脉内、鞘内、心室内、尿道内、颅内、滑膜内注射或输注；和肾透析输注技术。在一些实施方案中，所述药物组合物适用于静脉内施用。
[0222]
适合于肠胃外施用的药物组合物的制剂可以以适合于大剂量施用或连续施用的形式制备、包装或销售。可注射制剂可以以单位剂型(诸如在安瓿或含有防腐剂的多剂量容器中)制备、包装或销售。用于肠胃外施用的制剂包括，但不限于悬浮液、溶液、油性或水性媒介物中的乳液、糊剂等。此类制剂可以进一步包含一种或多种额外成分，包括，但不限于悬浮剂、稳定剂或分散剂。在用于肠胃外施用的制剂的一个实施方案中，所述活性成分以干燥(即粉末或颗粒)形式提供，其用于在肠胃外施用重构组合物前用合适的媒介物(例如，无菌无热原水)重构。肠胃外制剂还包括可以含有赋形剂诸如盐、碳水化合物和缓冲剂(优选至3-9的ph)的水溶液，但，对于一些应用，它们可以更合适地配制为无菌非水溶液或作为干燥形式与合适的媒介物诸如无菌、无热原的水结合使用。示例性肠胃外施用形式包括在无菌水溶液中的溶液或悬浮液，例如丙二醇或右旋糖水溶液。如果需要，可以合适地缓冲此类剂型。可用的其他可肠胃外施用的制剂包括包含呈微晶形式或脂质体制备物的活性成分的那些。用于肠胃外施用的制剂可以配制为立即释放和/或工程改造的释放。工程改造的释放制剂包括受控、延迟、持续、脉冲、靶向和程序性释放制剂。例如，在一个方面，可以通过将所需量的adc与一种上面列举的成分或上面列举的成分的组合(根据需要)并入适当的溶剂中、随后过滤灭菌来制备无菌可注射溶液。通常，通过将活性化合物并入含有基础分散介质和来自上面列举的那些的所需其他成分的无菌媒介物中来制备分散体。在用于制备无菌可
注射溶液的无菌粉末的情况下，示例性的制备方法是真空干燥和冷冻干燥，其得到活性成分的粉末加上来自其先前无菌过滤溶液的任何额外期望成分。可以例如通过使用包衣诸如卵磷脂、通过在分散体的情况下维持所需的粒径和通过使用表面活性剂来维持溶液的适当的流动性。可以通过在组合物中包括延迟吸收的试剂(例如，单硬脂酸盐和明胶)来实现可注射组合物的延长吸收。
[0223]
可以调节剂量方案以提供最佳的期望反应。例如，可以施用单次大剂量，或者可以随时间施用几个分开的剂量。为了便于施用和剂量的均匀性，特别有利地以剂量单位形式配制肠胃外组合物。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为用于待治疗的患者/受试者的单位剂量的物理离散单位；每个单位含有经计算为与所需药物载体结合产生期望治疗效果的预定量的活性化合物。
[0224]
本技术还提供了用于本文所述的癌症治疗中的试剂盒(或制品)。所述试剂盒可以包括一个或多个容器，所述容器包含用于治疗癌症(例如，her2-阳性癌症)的adc中的任一种。本文所述的试剂盒可以进一步包括从商业和用户的角度看期望的其他材料，包括其他缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头、注射器和包装插页，以及用于执行本文所述的任何方法的说明书。在一些实施方案中，所述试剂盒包含用于施用adc以治疗癌症、诸如乳腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌或肺癌的说明书。所述试剂盒可以进一步包含基于鉴定该个体是否具有癌症和癌症阶段来选择适合于治疗的个体的描述。涉及adc的使用的说明书通常包括关于用于预期治疗的剂量、给药方案和施用途径的信息。所述容器可以是单位剂量、大包装(例如，多剂量包装)或亚单位剂量。在本发明的试剂盒中提供的说明书通常是标记或包装插页上的书面说明书(例如，试剂盒中包括的纸片)，但机器可读说明书(例如，在磁性或光学存储盘上携带的说明书)也是可接受的。
[0225]
所述试剂盒在合适的包装中。合适的包装包括，但不限于小瓶、瓶、罐、柔性包装(例如，密封的mylar或塑料袋)等。还考虑与特定装置(诸如输注装置例如微型泵)组合使用的包装。试剂盒可以具有无菌进入端口，例如，所述容器可以是静脉内溶液袋或具有可通过皮下注射针头刺穿的塞子的小瓶。所述容器可以进一步包含第二药物活性剂。这些制品可以进一步被灭菌和/或密封。
[0226]
viii. 示例性实施方案本文提供的实施方案有：1. 治疗个体中的her2-阳性癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和包含毒素的缀合部分，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，且其中所述缀合部分缀合至所述受体谷氨酰胺残基。
[0227]
2. 实施方案1的方法，其中所述her2-阳性癌症是如通过免疫组织化学(ihc)测试所确定的her2 3+。
[0228]
3. 实施方案1的方法，其中所述her2-阳性癌症是如通过ihc测试所确定的her2 2+。
[0229]
4. 实施方案1的方法，其中所述her2-阳性癌症如通过荧光原位杂交(fish)测试所确定为阳性。
[0230]
5. 实施方案1-4中任一项的方法，其中所述个体对标准疗法无反应或不适合标准
疗法。
[0231]
6. 实施方案5的方法，其中所述个体先前未接受第二种her2-靶向剂。
[0232]
7. 实施方案1-4中任一项的方法，其中所述个体先前已接受第二种her2-靶向剂。
[0233]
8. 实施方案7的方法，其中所述her2-阳性癌症对第二种her2-靶向剂具有抗性或难治性。
[0234]
9. 实施方案7或8的方法，其中所述第二种her2靶向剂是曲妥珠单抗、恩美曲妥珠单抗、帕妥珠单抗或拉帕替尼。
[0235]
10. 实施方案1-9中任一项的方法，其中所述抗体-药物缀合物以不超过约8 mg/kg的剂量施用。
[0236]
11. 治疗个体中的癌症的方法，其包括向所述个体施用有效量的抗体-药物缀合物，其中所述抗体-药物缀合物包含抗her2抗体和包含毒素的缀合部分，其中所述抗her2抗体包含糖基化fc区，所述糖基化fc区包含内源性受体谷氨酰胺残基，其中所述缀合部分缀合至所述受体谷氨酰胺残基，且其中所述抗体-药物缀合物以不超过约8 mg/kg的剂量施用。
[0237]
12. 实施方案11的方法，其中所述癌症是实体癌。
[0238]
13. 实施方案12的方法，其中所述癌症选自乳腺癌、结直肠癌、卵巢癌、胃癌、尿道癌和肺癌。
[0239]
14. 实施方案11-13中任一项的方法，其中所述抗体-药物缀合物以不超过约6 mg/kg的剂量施用。
[0240]
15. 实施方案11-13中任一项的方法，其中所述抗体-药物缀合物以约0.3 mg/kg至约8 mg/kg的剂量施用。
[0241]
16. 实施方案15的方法，其中所述抗体-药物缀合物以约0.3 mg/kg、约0.5 mg/kg、约1.0 mg/kg、约2.0 mg/kg、约3.0 mg/kg、约4.5 mg/kg、约6.0mg/kg或8.0mg/kg的剂量施用。
[0242]
17. 实施方案1-16中任一项的方法，其中静脉内施用所述抗体-药物缀合物。
[0243]
18. 实施方案1-17中任一项的方法，其中约每三周一次、约每隔一周或约每周一次施用所述抗体-药物缀合物。
[0244]
19. 实施方案1-18中任一项的方法，其中所述个体是人。
[0245]
20. 实施方案1-19中任一项的方法，其中所述抗her2抗体的fc区是n-糖基化的。
[0246]
21. 实施方案1-20中任一项的方法，其中受体谷氨酰胺残基是根据eu编号的抗her2抗体的重链中的q295。
[0247]
22. 实施方案1-21中任一项的方法，其中her2抗体的每条重链缀合至缀合部分。
[0248]
23. 实施方案1-22中任一项的方法，其中所述缀合部分通过转谷氨酰胺化缀合至所述受体谷氨酰胺残基。
[0249]
24. 实施方案1-23中任一项的方法，其中所述抗her2抗体包含：重链可变区(vh)，其包含：包含seq id no:1的氨基酸序列的重链互补决定区(hc-cdr) 1、包含seq id no:2的氨基酸序列的hc-cdr2和包含seq id no:3的氨基酸序列的hc-cdr3；和轻链可变区(vl)，其包含：包含seq id no:4的氨基酸序列的轻链互补决定区(lc-cdr) 1、包含seq id no:5的氨基酸序列的lc-cdr2和包含seq id no:6的氨基酸序列的lc-cdr3。
[0250]
25. 实施方案24的方法，其中所述抗her2抗体包含：包含seq id no:7的氨基酸序列的vh和包含seq id no:8的氨基酸序列的vl。
[0251]
26. 实施方案1-25中任一项的方法，其中所述fc区是iggl fc。
[0252]
27. 实施方案26的方法，其中所述抗her2抗体包含：包含seq id no:9的氨基酸序列的重链和包含seq id no:10的氨基酸序列的轻链。
[0253]
28. 实施方案1-27中任一项的方法，其中所述毒素是单甲基澳瑞他汀e (mmae)。
[0254]
29. 实施方案1-28中任一项的方法，其中所述缀合部分包含可切割的接头。
[0255]
30. 实施方案29的方法，其中所述缀合部分是式i的化合物：。
[0256]
31. 实施方案1-30中任一项的方法，其中所述抗体-药物缀合物是dp303c。
实施例
[0257]
可以通过参考以下实施例进一步理解本发明，所述实施例通过举例说明的方式提供，并且不意在限制。
[0258]
实施例1. dp303c的制备和配制。
[0259]
dp303c是一种抗体药物缀合物，其被设计为靶向人中的表皮生长因子受体2 (her2)阳性的癌症。更具体地，该产品是一种靶向her2的单克隆igg1抗体(dp001)，其在每条重链的恒定区中的谷氨酰胺295处位点特异性缀合了一个可切割的lnd1002(毒素)。dp303c具有约2.0(诸如1.8至2.2)的dar(药物抗体比)。
[0260]
dp001是一种抗her2单克隆抗体，其具有与曲妥珠单抗(herceptin
®
)相同的氨基酸序列。具体地，其含有1328个氨基酸，其具有两条450个氨基酸(49284.65 da，seq id no:9)的重链(hc)和两条214个氨基酸(23443.10 da，seq id no:10)的轻链(lc)。dp001是通过16个二硫键(12个链内和4个链间)连接的两条igg1亚类的hc和两条κ亚类的lc的异四聚体。dp001的示意性结构描绘于图1中。
[0261]
lnd1002是一种衍生自mmae的毒素，其具有peg接头与用于与抗体偶联的伯胺基团。lnd1002具有如下所示的式(i)的化学结构：。
[0262]
dp303c通过将dp001与lnd1002缀合而获得，所述缀合由微生物转谷氨酰胺酶
(mtgase)催化。简言之，在洁净室中的层流罩下将dp001、ph 8.0的反应缓冲液(50 mm tris-乙酸盐、2mm edta、0.1% tween-20)和dmso中的lnd1002装载入无菌、柔性、乙烯-醋酸乙烯酯袋中。一旦混合物达到期望温度，通过无菌注射器将mtgase添加至袋中以开始缀合反应。然后将袋在30℃下孵育长达120小时。使用rp-hplc监测反应。当重链转化率达到≥ 95%时，认为缀合反应完成。
[0263]
使用消毒的akta
® ready系统，将完成的反应物以30-35g dp303c/l树脂装载至消毒的captiva
®
蛋白a柱上，最短停留时间为5分钟，以确保dp303c产物的完全结合。使用在线0.2
µ
m深度过滤器，在纯化期间从反应物和/或缓冲液中除去任何颗粒，并维持无菌。然后用过量的结合和洗涤缓冲液洗涤柱，以便在期望产物的低ph洗脱之前除去mtgase、未反应的lnd1002和任何不需要的缓冲液组分。将洗脱部分收集在预填充有中和缓冲液的无菌收集袋中。
[0264]
纯化的dp303c如下配制：50mm柠檬酸钠、10 mm柠檬酸、4.0% (w/v)蔗糖和0.02% (w/v)聚山梨醇酯20中的10mg/mldp303c。将dp303c制剂的浓缩组分在无菌容器中制备并过滤通过0.2
ꢀµ
m无菌pes过滤器并添加至dp303c浓缩储备溶液中。在洁净室中的层流罩内进行配制步骤。然后，将最终配制的溶液过滤通过0.2
ꢀµ
m无菌pes过滤器。将最终过滤的产物储存在-20℃用于长期储存。
[0265]
实施例2. 与dp001和t-dm1相比，dp303c针对her2-高表达细胞系的细胞毒性作用使用her2 3+人乳腺癌sk-br-3细胞系，在基于细胞的测定中评估dp303c、dp001和t-dm1 (也称为恩美曲妥珠单抗(kadcyla
®
))的细胞毒性(li jy等人, cancer cell 29,117-129)。
[0266]
使sk-br-3细胞在组织培养烧瓶中生长至约70%汇合，然后从烧瓶中吸出培养基，并用小量不含镁和钙的dpbs洗涤细胞。细胞用胰蛋白酶处理以提起粘附的细胞并重新悬浮于新鲜培养基中至约1 x 105个细胞/ml的最终浓度。将重新悬浮的细胞转移至96-孔板的孔中，并在37℃、5% co2、85%相对湿度下孵育过夜，以使细胞粘附。在过夜孵育后，以500 ng/ml、167 ng/ml、55.6 ng/ml、19 ng/ml、6.2 ng/ml、2.06 ng/ml、0.69 ng/ml或0.229 ng/ml的最终浓度将dp001、dp303c或t-dm1添加至孔中。一式三份添加每种浓度的dp001、dp303c或t-dm1。新鲜培养基用作阴性对照。然后，将板在板振荡器上轻轻摇动15-20秒并在85%湿度下孵育3天。
[0267]
在孵育后，将刃天青(sigma，目录号199303，批号mkbp3801v)添加至每个孔，至约0.0005
‰
的最终浓度，并用板振荡器轻轻混合。将板进一步孵育3小时。随后，在spectramax geminixs
®
读板器上，以λ
ex 555 / λ
em 585nm (570nm截止值)，使用基于细胞的测定方案的模板对板进行测定。从具有dp001、dp303c或t-dm1处理的细胞的所有孔的rfu读数中减去空白培养基孔的平均rfu。软件xlfit excel版本(4.3.2 build11)(id business solutions limited)拟合模型201用于计算ic
50
。下表1比较sk-br-3细胞中dp001、dp303c和t-dm1的ic
50
。ic
50
表明，与dp001相比，dp303c和t-dm1的细胞毒性作用更高。
[0268]
表1ic
50
(ng/ml)ic
50
(nm)dp001175.21.19dp303c19.20.131
t-dm-127.40.189
[0269]
图2显示用dp001(蓝色圆形和蓝色线)、dp303c(绿色三角形和绿色线)或t-dm1(棕色方形和棕色线)处理后sk-br-3细胞的细胞增殖抑制曲线。如图2中所示，dp001、dp303c和t-dm1针对sk-br-3细胞(一种her2高表达细胞系)具有细胞毒性。dp303c针对该her2高表达细胞系具有与t-dm1相似的细胞毒性作用。与dp001(一种her2靶向抗体)相比，dp303c和t-dm1两者杀死sk-br-3细胞作用更强。
[0270]
实施例3：与dp001和t-dm1相比，dp303c针对her2低表达细胞系的细胞毒性作用使用her2 2+乳腺癌jimt-1细胞系，在基于细胞的测定中评估dp303c、dp001和t-dm1的细胞毒性(li jy等人, cancer cell 29,117-129)。
[0271]
使jimt-1细胞在组织培养烧瓶中生长至约70%汇合，然后从烧瓶中吸出培养基，并用小量不含镁和钙的dpbs洗涤细胞。细胞用胰蛋白酶处理以提起粘附的细胞并重新悬浮于新鲜培养基中至约1 x 105个细胞/ml的最终浓度。将重新悬浮的细胞转移至96-孔板的孔中，并在37℃、5% co2、85%相对湿度下孵育过夜，以使细胞粘附。在过夜孵育后，以10,000 ng/ml, 2,500 ng/ml, 625 ng/ml, 156 ng/ml, 39.1 ng/ml, 9.77 ng/ml或2.44 ng/ml的最终浓度将dp001、dp303c或t-dm1添加至每个孔中。一式三份添加每种浓度的dp001、dp303c或t-dm1。新鲜培养基用作阴性对照。然后，将板在板振荡器上轻轻摇动15-20秒并在85%湿度下孵育5天。
[0272]
在孵育后，将刃天青(sigma，目录号199303，批号mkbp3801v)添加至每个孔，至约0.0005
‰
的最终浓度，并用板振荡器轻轻混合。将板进一步孵育3小时。随后，在spectramax geminixs
®
读板器上，以λ
ex 555 / λ
em 585nm (570nm截止值)，使用基于细胞的测定方案的模板对板进行测定。从具有dp001、dp303c或t-dm1处理的细胞的所有孔的rfu读数中减去空白培养基孔的平均rfu。软件xlfit excel版本(4.3.2 build11)(id business solutions limited)拟合模型201用于计算ic
50
。下表2比较jimt-1细胞中dp001、dp303c和t-dm1的ic
50
。ic
50
表明，dp303c的细胞毒性作用比t-dm1更高。
[0273]
表2ic
50
(ng/ml)ic
50
(nm)dp001n/an/adp303c62.60.42t-dm-11282.38.66
[0274]
图3显示用dp001(蓝色圆形和蓝色线)、dp303c(绿色三角形和绿色线)或t-dm1(棕色方形和棕色线)处理后jimt-1细胞的细胞增殖抑制曲线。如图3中所示，dp303c和t-dm1两者针对jimt-1细胞系(一种her2低表达细胞系)具有细胞毒性。dp303c针对该her2低表达细胞系的细胞毒性比tdm-1更高。
[0275]
实施例4：与dp001和t-dm1相比，dp303c针对her2阴性细胞系的细胞毒性作用在基于细胞的测定中评估dp303c、dp001和t-dm1针对hs746t细胞的细胞毒性。hs746t是一种人胃癌细胞系，其几乎不表达，乃至不表达her2 (corso s, 等人, mol cancer 2010; 9:121)。
[0276]
使hs746t细胞在组织培养烧瓶中生长至约70%汇合，然后从烧瓶中吸出培养基，并用小量不含镁和钙的dpbs洗涤细胞。细胞用胰蛋白酶处理以提起粘附的细胞并重新悬浮于
新鲜培养基中至约1 x 105个细胞/ml的最终浓度。将重新悬浮的细胞转移至96-孔板的孔中，并在37℃、5% co2、85%相对湿度下孵育过夜，以使细胞粘附。在过夜孵育后，以10,000 ng/ml、2,500 ng/ml、625 ng/ml、156 ng/ml、39.1 ng/ml、9.77 ng/ml、2.44 ng/ml或0.610 ng/ml的最终浓度将dp001、dp303c或t-dm1添加至每个孔中。一式三份添加每种浓度的dp001、dp303c或t-dm1。新鲜培养基用作阴性对照。然后，将板在板振荡器上轻轻摇动15-20秒并在85%湿度下孵育5天。
[0277]
在孵育后，将刃天青(sigma，目录号199303，批号mkbp3801v)添加至每个孔，至约0.0005
‰
的最终浓度，并用板振荡器轻轻混合。将板进一步孵育3小时。随后，在spectramax geminixs
®
读板器上，以λ
ex 555 / λ
em 585nm (570nm截止值)，使用基于细胞的测定方案的模板对板进行测定。从具有dp001、dp303c或t-dm1处理的细胞的所有孔的rfu读数中减去空白培养基孔的平均rfu。软件xlfit excel版本(4.3.2 build11)(id business solutions limited)拟合模型201用于计算ic
50
。
[0278]
图4显示用dp001(蓝色圆形和蓝色线)、dp303c(绿色三角形和绿色线)或t-dm1(棕色方形和棕色线)处理后hs746t细胞的细胞增殖抑制曲线。如图4中所示，dp001、t-dm1和dp303c没有显示针对hs746t细胞(一种her2阴性细胞系)的细胞毒性作用。
[0279]
实施例5：dp303c与t-dm1相比对小鼠异种移植nci-n87癌症模型的抗肿瘤作用在nci-n87小鼠异种移植模型中研究dp303c的体内抗肿瘤活性。nci-n87是一种过表达her2 (her2 3+)的胃癌细胞系。将nci-n87细胞皮下植入雌性无胸腺裸小鼠中。将荷瘤小鼠随机分为7个处理组(6只小鼠/组)，并通过单次静脉内注射空白、dp303c或t-dm1。
[0280]
根据下式计算相对肿瘤体积(rtv)：rtv=tvn/tv0，其中tvn是在第n天的肿瘤体积，且tv0是在第0天的肿瘤体积。使用下式计算肿瘤生长抑制率(tgi)：tgi (%)=(1
–
t/c)
×
100，其中t/c通过计算t/c=(处理组的平均rtv)/(对照组的平均rtv)来确定。
[0281]
dp303c有效抑制nci-n87异种移植模型中的肿瘤生长(图5)。用4或8 mg/kg的dp303c对荷瘤小鼠进行单剂量处理导致肿瘤消退(tgi为81.1%和92.5%)，长达40天没有再生长。在低剂量水平(2 mg/kg)下，dp303c显示47.9%的肿瘤生长抑制。作为比较，t-dm1在所有剂量水平均未引起肿瘤消退，并且对于2、4和8 mg/kg，肿瘤生长抑制百分比分别为-28.2%、16.8%和39.9%。
[0282]
实施例6：dp303c与t-dm1和抗her2双互补位单链抗体adc相比对小鼠异种移植jimt-1癌症模型的肿瘤生长抑制作用在人类乳腺癌的小鼠异种移植模型中研究dp303c的体内抗肿瘤活性。jimt-1是一种her2-阳性乳腺癌细胞系。jimt-1异种移植模型以其对目前的抗her2治疗剂(诸如曲妥珠单抗和t-dm1)的不敏感性而已知(li等人, 2016)。肿瘤细胞植入后，将荷瘤小鼠随机分为10个处理组(5只小鼠/组)，通过单次静脉内注射空白、dp303c、t-dm1或双互补位adc。
[0283]
如图6中所示，在jimt-1异种移植模型中，在所有剂量水平下，单剂量dp303c的施用诱导完全肿瘤消退。在这些动物中的一些中没有发现肿瘤再生长，并且它们维持无肿瘤长达4周，直至研究结束。相比之下，t-dm1没有显著抑制肿瘤生长，其中对于8、116和32 mg/kg，tgi%分别为4.9%、16.9%和16.8%。在本研究中，在所有处理组中均未观察到显著的体重减轻或死亡。
[0284]
实施例7：dp303c的药代动力学和毒性研究
本实施例描述了dp303c在大鼠中单剂量注射后以及在食蟹猴中单剂量注射后的药代动力学研究。本实施例还描述了dp303c的非临床安全性研究，包括大鼠中的非glp单剂量毒理学研究、食蟹猴中的非glp 29天剂量范围发现研究以及食蟹猴中的glp重复剂量毒理学研究。此外，本实施例描述了dp303c在人和食蟹猴血浆中稳定性的体外评估以及评价dp303c制剂对溶血和红细胞聚集的影响的体外glp研究。
[0285]
单次静脉内注射dp303c后大鼠中的dp303c的五周药代动力学研究(非glp)本研究的目标是确定在3 mg/kg、10 mg/kg和30 mg/kg(3只/性别/组)的剂量水平下，在sprague dawley大鼠中单次静脉内施用dp303c后dp303c、总抗her2抗体、游离(未缀合) mmae和lnd1002(接头mmae)的药代动力学曲线。
[0286]
使用elisa测定法分析从本研究收集的大鼠血清中的dp303c和总抗体dp001的浓度，其中dp303c和总抗体dp001两者的定量下限为0.3125。通过串联液相色谱/质谱(lc-ms/ms)方法分析游离mmae和接头-mmae (lnd002，游离有效载荷)的浓度，其中mmae的定量下限为5.0 pg/ml，且lnd1002的定量下限为0.170 ng/ml。
[0287]
下表3显示dp303c和总抗体的平均药代动力学参数。值表示为平均值
±
标准偏差；[n]指示动物样品编号；c
max
是最大观察浓度；auc
0-t
是直至最后可测量浓度的浓度时间曲线下面积；auc
0-∞
是从时间零至无穷大的浓度时间曲线下面积；t
1/2
是半衰期；cl是全身清除率；v
ss
是稳态分布容积。
[0288]
表3。
[0289]
在单次静脉内推注dp303c后，在3 mg/kg至30 mg/kg的剂量范围内，dp303c c
max
和auc∞两者均以剂量-比例方式增加(图7)。对于3、10和30 mg/kg剂量水平，峰值浓度(cmax)分别为73.5、238和630
ꢀµ
g/ml(表3)。在3 mg/kg，auc∞值为470
µg•
天/ml，在10 mg/kg，auc∞值为1331
µg•
天/ml，且在30 mg/kg，auc∞值为4498
µg•
天/ml。对于3 mg/kg、10 mg/kg和30 mg/kg，dp303c清除率(cl)分别为6.44、7.68和6.90ml/天/kg，且终末期半衰期(t
1/2
)分别为9.25、9.79和9.42天。在3 mg/kg，稳态分布容积(v
ss
)为82.9 ml/kg，在10 mg/kg，稳态分布容积(v
ss
)为104.0 ml/kg，在30 mg/kg，稳态分布容积(v
ss
)为90.2 ml/kg。结果表明，在3至30 mg/kg的剂量范围内，大鼠中dp303c的线性pk。
[0290]
在单次静脉内推注dp303c后，在3至30 mg/kg的剂量范围内，总抗体的c
max
和auc
∞
也剂量比例地增加(图8)。在3、10和30 mg/kg，总抗体的峰值浓度(c
max
)分别为71.2、256和701
ꢀµ
g/ml(表3)。在3、10和30 mg/kg，auc
∞
值分别为515、1432和4428
ꢀµg•
天/ml。在3、20和30 mg/kg的剂量水平下，总抗体的终末期半衰期(t
1/2
)分别为9.67、9.75和8.67天，且清除率(cl)分别为5.86、7.07和6.90 ml/天/kg。在3 mg/kg的总抗体的稳态分布容积(v
ss
)为79.1 ml/kg，在10 mg/kg的总抗体的稳态分布容积(v
ss
)为96.6ml/kg，且在30 mg/kg的总抗体的稳态分布容积(v
ss
)为83.1ml/kg。总抗体的pk曲线与dp303c的pk曲线非常相似，表明在大鼠中，mmae从dp303c的去缀合有限。
[0291]
在dp303c的静脉内给药后，mmae的血清浓度(c
max
)在3和10 mg/kg剂量组中在给药后6小时以及在30 mg/kg剂量组中在给药后24小时达到峰值水平，随后为缓慢的消除期(图9)。对于3 mg/kg、10 mg/kg和30 mg/kg组，未缀合的mmae的峰值浓度分别为约0.03 ng/ml、0.08 ng/ml和0.3 ng/ml。mmae的暴露量分别为3 mg/kg、10 mg/kg和30 mg/kg剂量水平下dp303c的暴露量(auc
0-t
，以摩尔计)的约(0.011%、0.014%、0.016%)。在大多数样品中通常无法检测到有效载荷lnd1002的血清浓度，且未进行pk分析。
[0292]
总之，在大鼠中单次静脉内施用dp303c后，dp303c和总抗体之间的pk曲线，诸如暴露量和消除半衰期非常相似。表明在3至30 mg/kg的剂量范围内的线性pk，并且未观察到性别差异。单剂量静脉内施用d303c后，游离mmae的血清暴露量为《0.03%的dp303c。lnd1002的血清浓度通常检测不到。
[0293]
在食蟹猴中单次静脉内施用后dp303c的药代动力学研究本研究的目标是确定在食蟹猴中以1.2、4.0和12 mg/kg(3只/性别/组)的剂量水平单次静脉内施用dp303c后，dp303c的药代动力学曲线。此外，还评估总抗体和游离mmae的pk。
[0294]
通过elisa测定法测定dp303c和总抗体dp001在从本研究收集的食蟹猴血清中的浓度，其中dp303c和总抗体dp001两者的定量下限为0.3125ng/ml。猴血浆中游离mmae和接头-mmae (lnd002，游离有效载荷)两者的浓度通过串联液相色谱/质谱(lc-ms/ms)方法分析，其中对于本研究，mmae的定量下限为0.03 ng/ml，且lnd1002的定量下限为1.0 ng/ml。
[0295]
下表4显示在单次静脉内输注dp303c后食蟹猴中游离mmae的平均药代动力学参数。值表示为平均值
±
标准偏差；[n]指示动物样品编号；c
max
是最大观察浓度；auc
0-t
是直至最后可测量浓度的浓度时间曲线下面积；auc
0-∞
是从时间零至无穷大的浓度时间曲线下面积；nc指示未计算的值。
[0296]
表4
。
[0297]
在单次静脉内输注dp303c后，在1.2 mg/kg至12 mg/kg的剂量范围内，dp303c的c
max
以剂量比例方式增加(图10)。在1.2 mg/kg的峰值浓度为30.1
ꢀµ
g/ml，在4 mg/kg的峰值浓度为93.5
ꢀµ
g/ml，且在12 mg/kg的峰值浓度为297.4
ꢀµ
g/ml(表4)。在1.2、4.0和12 mg/kg，auc
∞
分别为1300、6417和24834 h
•µ
g/ml，且清除率(cl)分别为0.96、0.65和0.49 ml/h/kg。dp303c auc
∞
的增加大于剂量比例，而dp303c清除率(cl)随着剂量水平的增加而降低，表明在猴中在1.2至12 mg/kg的剂量范围内的dp303c的非线性pk。在1.2 mg/kg、4.0 mg/kg和12 mg/kg，dp303c的终末期半衰期(t
1/2
)分别为130.1、136.8和118.6小时。
[0298]
在食蟹猴中单次静脉内输注dp303c后，总抗体pk与dp303c pk相似。在1.2 mg/kg至12 mg/kg的剂量范围内，总抗体c
max
以剂量比例方式增加(图11)。在1.2 mg/kg，总抗体的峰值浓度为30.8
µ
g/ml，在4 mg/kg，总抗体的峰值浓度为103.7
ꢀµ
g/ml，在12 mg/kg，总抗体的峰值浓度为323.7
ꢀµ
g/ml(表4)。从1.2至12 mg/kg，总抗体的平均auc
∞
的增加大于剂量比例。在1.2 mg/kg，平均auc
∞
值为1374 h
•µ
g/ml，在4 mg/kg，平均auc
∞
值为7333 h
•µ
g/ml，在12 mg/kg，平均auc
∞
值为27854 h
•µ
g/ml。对于所有剂量水平，平均总抗体auc
∞
比平均dp303c auc
∞
大不超过15%，表明mmae从dp303c的去缀合有限。总抗体的清除率(cl)从1.2 mg/kg的0.91 ml/天/kg、4 mg/kg的0.57ml/天/kg下降至12 mg/kg的0.44 ml/天/kg。在1.2、4和12 mg/kg，总抗体的半衰期(t
1/2
)分别为123.0、138.4和124.0小时。
[0299]
用dp303c给药后，在1.2 mg/kg组的大多数时间点，猴血浆中的游离mmae未检测到或低于定量下限。因此，对于1.2 mg/kg组中的动物没有估计游离mmae的药代动力学参数(表4)。游离mmae的暴露量在4 mg/kg和12 mg/kg均非常低。观察到的达到血浆中游离mmae的峰值水平的中等时间为48小时(图12)。在4和12 mg/kg，血浆中游离mmae的c
max
分别为0.059和0.135 ng/ml，且auc0-t分别为7.56和32.0 h
•
ng/ml。在4 mg/kg和12 mg/kg的对应剂量组中，游离mmae的暴露量仅为dp303c的暴露量的0.01%。
[0300]
总之，在食蟹猴中单次静脉内施用dp303c后，dp303c和总抗体的平均auc
∞
超过剂量比例地增加，表明在1.2至12 mg/kg的剂量范围内dp303c在食蟹猴中的非线性pk。在猴中，dp303c暴露量比总抗体低《15%，表明mmae从dp303c的去缀合有限。游离mmae的暴露量非常低，并且不超过dp303c暴露量的0.03%。本研究中dp303c pk未观察到性别差异。
[0301]
在大鼠中单次静脉内注射后dp303c的初步毒性研究(非glp)本研究的目标是评估潜在毒性，并通过在大鼠中单次静脉内施用dp303c、随后为21天随访时段来确定dp303c的最大耐受剂量(mtd)。
[0302]
向雌性sprague dawley大鼠(5只/组)施用媒介物(对照)或分别为10、20、40、60和100 mg/kg的剂量水平的dp303c。本研究中评估的参数和终点包括21天的给药后时段期间的临床体征和观察、体重、食物消耗和临床病理学参数(血液学)。在本研究中，所有剂量组都没有死亡或濒临死亡。临床观察限于在100 mg/kg的最高剂量组的动物中的活动降低。给药后5天开始降低的活动，在第8天左右变得最明显，且然后逐渐恢复至正常。在100 mg/kg组观察到轻度体重减轻(在第4天约4%)，并且在其他剂量组中发现体重增加较低的趋势。
[0303]
血液学分析表明，用60和100 mg/kg dp303c处理的动物中的红血细胞(rbc)、血细胞比容和血红蛋白含量的适度下降。在两个高剂量组中，dp303c处理后总白细胞和巨噬细胞/单核细胞的数量也减少。血小板计数略微下降，但不是统计学显著的。在两种高剂量水平，在dp303c处理后21天，所有观察到的对血液学参数的不良反应均恢复至正常。用10、20或40 mg/kg的dp303c处理的动物中，没有显著的处理相关的血液学变化。
[0304]
进行了一项额外的单剂量研究，以评估额外剂量水平的毒性。向sprague dawley大鼠(10只/组)施用媒介物(对照)或分别为50、100和200 mg/kg的剂量水平的dp303c。本研究中评估的参数和终点包括22天的给药后时段期间的临床体征和观察、体重、食物消耗和临床病理学参数(血液学)。200 mg/kg dp303c引起大鼠死亡。在用100 mg/kg dp303c或更高的剂量水平的组中观察到下巴或颈部上的水肿/焦痂/溃疡、暂时异常眼部分泌、减少的体重增加和食物消耗。在用50 mg/kg dp303c或更高的剂量水平的组中观察到单核细胞的增加以及淋巴细胞和嗜酸性粒细胞的减少。
[0305]
总之，在大鼠中单次静脉内施用dp303c的主要毒性是在高剂量(60和100 mg/kg)的贫血和白细胞减少症，其在21天后是可逆的。在本研究中未达到大鼠中的dp303c的最大耐受剂量，并且所述最大耐受剂量不会低于单次静脉内施用后100 mg/kg。
[0306]
食蟹猴中两次静脉内注射后dp303c的29天剂量范围发现和毒理学研究(非glp)本研究的目标是评估在每3周一次静脉内施用dp303c(持续2个剂量)后食蟹猴中的dp303c的潜在毒性和毒代动力学(tk)。该研究充当剂量范围发现，以帮助为随后的猴中的glp研究选择剂量。通过每3周静脉内输注(持续2个剂量)，向雄性和雌性食蟹猴静脉内施用媒介物(对照，1只/性别/组)或6 (第2组)、20 (第3组)、60 (第4组)和100 mg/kg(第5组)的剂量水平的dp303c (2只/性别/组)。终末尸检安排在第29天，第二次给药后7天。由于死亡和濒临死亡，通过方案修改，在两个高剂量组(60和100 mg/kg，第4组和第5组)中仅施用一剂dp303c。
[0307]
本研究中评估的毒理学终点包括兽医身体观察、临床体征、注射部位观察、体重、食物消耗、临床病理学(血液学、凝血、临床化学、尿液分析)、毒代动力学、大体尸检发现、器官重量和组织病理学检查。
[0308]
dp303c相关死亡发生在第4组(60 mg/kg)和第5组(100 mg/kg)中。60 mg/kg的剂量水平的两只动物分别在第一次给药后的第10天和第12天死亡。在100 mg/kg组中，1只动物在第8天死亡，并且由于身体状况不佳，3只动物分别第8天和第10天被安乐死。在第7天开始，这些早期死亡动物呈现有活动减少、自残、驼背姿势、皮肤冰冷、俯卧、食欲不振、肌肉无力、水样粪便、惊吓反射减少、呼吸沉重和皮肤坏死的临床症状。在所有这些计划外死亡动物中都发现体重损失(高达18%)。血液学变化包括60和100 mg/kg组中在d8时白血细胞(wbc)、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞和网织红细胞的严重减少。在第
15天和后面的时间点，在60 mg/kg的2只存活动物中发现血小板增加。大体观察包括在60 mg/kg，一只计划外尸检动物中的肺部的中度黑色变色，以及在100 mg/kg，一只动物中的阴道增生。
[0309]
在6 mg/kg和20 mg/kg，在用低剂量水平的dp303c处理的动物中，未发现死亡或濒临死亡。在处理期间，在两组中均未观察到dp303c相关的临床体征。在第15天，在20 mg/kg的动物中观察到白血细胞(wbc)、嗜中性粒细胞和淋巴细胞的轻度下降，但在6 mg/kg没有。这些不利的变化在后来的时间点被逆转。在这2个处理组中，不存在对体重、器官重量、食物消耗、凝血和临床化学参数的dp303c相关的影响。
[0310]
总之，单剂量的dp303c在100 mg/kg的剂量水平的所有6只动物以及60 mg/kg的剂量水平的一半动物中引起死亡或发病。这2个高剂量组中的动物患有白细胞减少症，其特征在于白血细胞(wbc)、嗜中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞严重减少。在60 mg/kg，在计划外死亡的动物之一中发现肺部的中度黑色变色。由于本研究中未进行组织病理学分析，计划外动物死亡的原因不是非常清楚。在持续2个剂量的6 mg/kg和20 mg/kg的低剂量水平下，所有动物都存活，直至研究结束，并且没有发现显著的dp303c相关的临床体征和临床病理变化。基于这些结果，认为通过静脉内施用两个剂量≤20mg/kg的dp303c在食蟹猴中被良好耐受。
[0311]
通过测定dp303c、总抗体和游离mmae的血浆浓度来评价dp303c的tk曲线。通过elisa测定法测定从本研究收集的食蟹猴血清中dp303c和总抗体dp001的浓度，其中dp303c和总抗体dp001的定量下限均为0.3125 ng/ml。通过串联液相色谱/质谱(lc-ms/ms)方法分析猴血浆中游离mmae和接头-mmae (lnd002，游离有效载荷)两者的浓度，其中对于本研究，mmae的定量下限为0.03 ng/ml，且lnd1002的定量下限为1.0 ng/ml。
[0312]
下表5显示在静脉内输注第一剂和第二剂dp303c后食蟹猴中dp303c的药代动力学参数。值表示为平均值
±
标准偏差；[n]指示动物样品编号；c
max
是最大观察浓度；auc
0-t
是直至最后可测量浓度的浓度时间曲线下面积；auc
0-∞
是从时间零至无穷大的浓度时间曲线下面积；t
1/2
是半衰期；cl是全身清除率；v
ss
是稳态分布容积。
[0313]
表5
。
[0314]
下表6显示在第一和第二剂静脉内输注dp303c后食蟹猴中游离mmae的平均药代动力学参数。值表示为平均值
±
标准偏差；[n]指示动物样品编号；c
max
是最大观察浓度；auc
0-t
是直至最后可测量浓度的浓度时间曲线下面积。
[0315]
表6。
[0316]
在本研究中的第2组和第3组中进行药代动力学参数的分析，因为在第4组和第5组中的指定时间点，pk样品收集不完整。在第1天静脉内输注dp303c后，dp303c的auc
∞
从6 mg/kg的12076 h
•µ
g/ml高于剂量比例地增加至20 mg/kg的78466 h
•µ
g/ml。在6和20 mg/kg，分别地，dp303c的半衰期(t
1/2
)从86.4小时增加至152小时，而清除率(cl)从0.525 ml/h/kg降低至0.275 ml/h/kg。这些数据表明dp303c在猴中6至20 mg/kg的剂量范围内的非线性pk(表5)。对于总抗体，观察到非常相似的非线性pk曲线(表5)。总抗体和dp303c的暴露量(auc
∞
)是相当的。在静脉内输注dc303c后，总抗体的auc
0-∞
比dp303c的auc
0-∞
高《10%。在6和20 mg/kg的剂量水平下，mmae的c
max
分别为0.078和0.173 ng/ml(表6)。血浆mmae浓度在静脉内输注后48和96小时之间达到峰值水平(图13)。mmae auc
0-t
在6 mg/kg为9.29 h
•
ng/ml，且在20 mg/kg为51.32 h
•
ng/ml。
[0317]
在第22天静脉内输注dp303c后，从6至20 mg/kg的剂量水平，dp303c和总抗体的auc
∞
均超过剂量比例地增加(表5)。dp303c的c
max
和auc
0-∞
值在第一次给药后和第二次给药后之间是相似的。在6和20 mg/kg，mmae的峰值浓度(c
max
)分别为0.045和0.210 ng/ml。
[0318]
总之，在6和30 mg/kg的剂量组中分析dp303c、总抗体和游离mmae的pk。在食蟹猴中静脉内输注dp303c后，dp303c和总抗体的auc
∞
大于剂量比例地增加，表明非线性动力学。dp303c的终末半衰期为约95.3至115小时。与dp303c相比，在猴中的mmae暴露量非常低。完
整dp303c和总抗体的相当血浆暴露量，连同低水平的游离mmae，表明在猴中mmae从dp303c的去缀合忽略不计。
[0319]
持续5剂向食蟹猴每3周一次施用(具有4周恢复时段)的dp303c的重复剂量静脉内毒性研究(glp)本研究的目标是评估在食蟹猴中持续总共5剂每3周一次静脉内施用dp303c后，dp303c的潜在毒性、毒代动力学(tk)和免疫原性。该研究还评估任何不良反应和可能的延迟毒性在4周无处理时段期间的可逆性。该glp研究旨在提供关键的非临床安全性数据，以支持dp303c的首次人体内(ftih)1期临床研究。
[0320]
选择总共20只雄性和20只雌性幼稚食蟹猴并登记于该研究中。这些动物基于体重和性别被随机分配至4组。第1组是媒介物对照(盐水，0 mg/kg)，且第2组、第3组和第4组分别是dp303c处理组，低(6.0 mg/kg)、中(20 mg/kg)和高(40 mg/kg)剂量组。每组由每种性别的五只动物组成。dp303c和盐水经由每三周一次的30分钟静脉内输注进行施用。每组每种性别三只猴被分配至主要研究阶段，并且终末尸检安排在第89天，施用最后一剂后4天。每组每种性别两只猴被分配至恢复阶段，并且恢复尸检安排在第113天，最后一剂后4周。在进行研究期间，如所安排对于五个剂量(在第1天、第22天、第43天、第64天和第85天)施用盐水和6 mg/kg的dp303c。中间剂量组的dp303c以20 mg/kg用三个剂量(第1天、第22天和第43天)施用。对于剩余两个剂量(第64天和第85天)，由于在以20 mg/kg的第三剂后发生一例死亡，剂量减少至12 mg/kg。该剂量组的剂量表示为20/12 mg/kg。高剂量组的dp303c以40mg/kg用两个剂量施用(第1天和第22天)。由于计划外动物死亡，第三剂(第43天)的剂量减少至30 mg/kg，且在第三剂后不再给予更多的剂量。该剂量组的剂量表示为40/30 mg/kg。40/30mg组中存活动物的尸检安排在第71天，最后一个剂量后4周(恢复时段)。
[0321]
本研究中评估的毒理学终点包括临床体征和观察、局部耐受性、体重、食物消耗、眼底镜检查、体温、ecg、临床病理学参数(血液学、凝血、临床化学和尿液分析)、淋巴细胞表型、抗药物抗体形成和毒代动力学(tk)、大体尸检发现、器官重量和组织病理学检查。
[0322]
40/30 mg/kg dp303c组中的剂量水平耐受性不佳。以40 mg/kg第二次给药后，由于濒临死亡状况，三只动物分别在第20天、第26天和第29天被安乐死。30 mg/kg第三次给药后，一只动物在第54天死亡，并且另外两只分别在第43天和第53天被安乐死。观察到的症状包括活动减少、驼背姿势、前列腺(prostate)、皮肤冰冷、食欲不振、流涎、鼻子中的透明和/或红色排出物、皮肤多个部位处的结痂区域、身体僵硬，这在大多数早死动物中在第10天和第14天之间开始。其他体征包括在一些动物中发现的眼中流泪、柔软和水样的粪便、罗音、呼吸缓慢、呼吸困难和呼吸沉重。在给药时段开始观察到体重减轻。
[0323]
高剂量组中的血液学变化包括白血细胞(wbc)、淋巴细胞、嗜酸性粒细胞的轻度至中度减少和嗜中性粒细胞的严重减少。其他变化包括红血细胞(rbc)、血红蛋白、血细胞比容的轻度至中度减少，以及网织红细胞和血小板增加。早在第8天，在高剂量组的所有动物中都观察到这些血液学变化。在cp303c处理的后面的时间点发现单核细胞计数的增加。在恢复后的存活动物中，贫血和白细胞减少症的血液学表现回复至基线或减轻。凝血变化包括在计划外死亡动物中凝血酶原时间和活化部分促凝血酶原激酶时间的最小延长。临床化学变化包括白蛋白的轻度至中度降低和球蛋白的增加连同白蛋白与球蛋白比率的相应降低。其他发现包括天冬氨酸氨基转移酶的2-3倍增加以及血液钙、氯化物和肌酸的最小减
少。恢复后，增加的天冬氨酸氨基转移酶回复至正常。
[0324]
高剂量组的大体观察包括在6只计划外死亡动物中的4只中，肺部的紫色或深色变色，有时连同肺粘附于胸壁或胸腔中的流体。在这些动物中还发现增加的肺器官重量(与支气管有关)。在计划外死亡动物中的主要显微镜检查发现包括胸腺、脾脏和淋巴结中的细胞结构显著减少，以及伴有纤维化的肺部炎症。计划外死亡的原因归因于dp303c相关的肺部炎症和纤维化，以及胸腺、脾脏和淋巴结中淋巴细胞的消耗。其他重要发现包括小血管和肾小球中的血栓以及肾脏中伴有或不伴有管型(cast)的轻微肾小管变性，肝脏中极少至轻微的变性/坏死，以及皮肤中的一些单细胞坏死。在恢复后，在一些存活动物中仍观察到淋巴器官、肺和肝脏中的那些组织病理学变化，但发生率和严重程度较低。
[0325]
在20/12 mg/kg的中间剂量水平，一只动物在以20 mg/kg第三次给药后第60天死亡。所有其他动物都存活，直至在第89天或第113天安排的尸检。计划外死亡的原因归因于脾脏和淋巴结中淋巴细胞的耗竭以及肺部炎症和纤维化。20/12 mg/kg组中的临床体征包括少数动物中的活动减少、食欲不振、皮肤冰冷、透明或红色鼻排出物、软便、咳嗽和呼吸急促。血液学发现包括血红蛋白的极少降低。临床化学变化包括由于球蛋白轻度增加而导致的白蛋白与球蛋白比率降低。大体观察包括终末尸检时10只动物中的4只中的肺变色连同肺器官重量增加。主要的显微镜检查发现包括6只终末尸检动物中的5只中的脾脏和/或淋巴结中的淋巴细胞轻度至中度减少，以及6只动物中的4只中的肺中的轻度至中度炎症和纤维化。在恢复尸检时，仅在3只动物中的1只中观察到淋巴器官中淋巴细胞的轻度耗竭，表明脾脏、胸腺和淋巴结中淋巴细胞的耗竭被部分逆转。在恢复后，在动物中仍发现肺部炎症和纤维化。
[0326]
以6 mg/kg的低剂量水平用dp303c处理的所有动物健康良好地存活，直至在第89天和第113天安排的尸检。在主要和恢复时段期间没有观察到显著的dp303c相关临床体征。不存在对体重、食物消耗、眼部检查、体温、注射部位观察、ecg、血液学参数、凝血和临床化学参数的dp303c相关影响。此外，在终末或恢复尸检中没有dp303c相关的器官重量变化和大体发现。
[0327]
总之，持续3个剂量以20 mg/kg静脉内施用dp303c导致1例死亡，并且在将剂量从20 mg/kg改为12 mg/kg后，其他动物存活至安排的尸检。持续3个剂量以40/30 mg/mg静脉内施用dp303c导致10只动物中的6只中的死亡或发病。计划外死亡的原因归因于dp303c相关的肺部炎症和纤维化，以及胸腺、脾脏和淋巴结中淋巴细胞的耗竭。在大多数终末尸检动物中也观察到伴有纤维化的肺部炎症和脾脏和/或淋巴结中淋巴细胞的轻度至中度耗竭，但这些变化的发生率和严重程度在恢复后较低。在本研究的条件下，建议的最高非严重毒性剂量(hnstd)为12 mg/kg。持续5个剂量以6 mg/ml施用dp303c没有诱导任何dp303c相关临床体征和临床病理学参数的异常变化。因此，dp303c的未观察到不良反应水平(noael)被认为是6 mg/kg/剂(第4次给药间隔平均c
max 137.2
µ
g/ml，auc
0-t 14149h
•µ
g/ml)。
[0328]
通过测定dp303c(完整分子)、总抗体(缀合和未缀合的抗体)和mmae随时间推移的血清或血浆水平来评估dp303c的tk曲线。使用elisa测定法测定猴血清中dp303c和总抗体dp001的浓度，其中dp303c和总抗体dp001两者的定量下限均为0.3125ng/ml。通过串联液相色谱/质谱(lc-ms/ms)方法分析猴血浆中mmae的浓度，其中mmae的定量下限为0.03 ng/ml。
[0329]
下表7显示在静脉内输注dp303c后，dp303c在食蟹猴中的药代动力学参数。值表示
为平均值
±
标准偏差；[n]指示动物样品编号；m指示雄性；f指示雌性；c
max
是最大观察浓度；auc
0-t
是直至最后可测量浓度的浓度时间曲线下面积；auc
0-∞
是从时间零至无穷大的浓度时间曲线下面积；t
1/2
是半衰期；cl是全身清除率；v
ss
是稳态分布容积。
[0330]
表7。
[0331]
下表8显示在静脉内输注dp303c后，总抗体在食蟹猴中的药代动力学参数。值表示为平均值
±
标准偏差；[n]指示动物样品编号；m指示雄性；f指示雌性；c
max
是最大观察浓度；auc
0-t
是直至最后可测量浓度的浓度时间曲线下面积；auc
0-∞
是从时间零至无穷大的浓度时间曲线下面积；t
1/2
是半衰期；cl是全身清除率；v
ss
是稳态分布容积。
[0332]
表8
。
[0333]
下表9显示在静脉内输注dp303c后，游离mmae在食蟹猴中的药代动力学参数。值表示为平均值
±
标准偏差；[n]指示动物样品编号；m指示雄性；f指示雌性；t
max
是到以最大浓度存在的时间；auc
0-t
是直至最后可测量浓度的浓度时间曲线下面积。
[0334]
表9。
[0335]
在第1天静脉内输注dp303c后，dp303c c
max
从6 mg/kg的131.7(雄性)/147.4(雌性) μg/ml剂量比例地增加至40 mg/ml的935.4(m)/943.6(f) μg/ml (图14a和图14b)。平均auc
0-t
从6 mg/kg的12668 (m)/13463 (f)
ꢀµg•
h/ml超过剂量比例地增加至40 mg/kg的126795 (m)/132131 (f)
ꢀµg•
h/ml(表7)。对于6-、20-和40-mg/kg剂量水平，dp303c的清除率(cl)分别为0.46 (m)/0.44 (f)、0.33 (m)/0.34 (f)和0.28 (m)/0.26 (f) ml/天/kg，且半衰期(t
½
) 分别为115.1 (m)/103.0 (f)、168.3 (m)/159.8 (f)和158.3 (m)/162.3 (f)小时。随着dp303c剂量增加的cl的降低与t
1/2
的增加平行。这些数据表明dp303c的非线性pk并表明存在在6和40 mg/kg的单次静脉内给药之间变得饱和的槽。
[0336]
在第64天静脉内给药dp303c后，6 mg/kg剂量水平组中的dp303c c
max
和auc
0-t
为134.3 (m)/140.1 (f)
ꢀµ
g/ml和14031 (m)/14266 (f)
ꢀµg•
h/ml (图14a和14b)。在第一次
给药后和在第64天第4次给药后dp303c c
max
和auc
0-t
的平均值是相似的，表明在其q3w施用后dp303c暴露量没有积累。t
1/2
和cl值在第一次给药间隔和第4次给药间隔之间是大致相当的。此外，在雄性和雌性中观察到相似的dp303c浓度-时间曲线，表明两种性别中的全身暴露相似(表7)。
[0337]
总抗体pk与dp303c pk大致相似。在第1天单次静脉内输注dp303c后，平均总抗体c
max
从6 mg/kg的144.5 (m)/157.2 (f)
ꢀµ
g/ml剂量比例地增加至40 mg/ml 的935.4 (m)/833.7 (f)
ꢀµ
g/ml (图15a和15b)。总抗体的平均auc
0-t
值从6 mg/kg的15039 (m)/15338 (f)
ꢀµg•
h/ml略微超过剂量比例地增加至40 mg/kg的126795/113875
ꢀµg•
h/ml(表8)。对于6-、12-和30-mg/kg剂量水平，总抗体的cl分别为0.38 (m)/0.38 (f)、0.29 (m)/0.27 (f)、0.28 (m)/0.30 (f) ml/天/kg，且t
1/2
分别为123.7 (m)/108.8 (f)、179.0 (m)/178.1 (f)和158.3 (m)/177.6 (f)小时。第一次给药后总抗体的c
max
和auc
0-t
的平均值与以6 mg/kg第4次给药后的平均值是相当的，表明多次给药后总抗体暴露量没有累积。
[0338]
在第1天静脉内输注施用dp303c后，在所有剂量水平的72-317小时之间观察到血浆中游离mmae的峰值浓度(图16a和16b)。游离mmae的平均c
max
从6 mg/kg的0.0635 (m)/0.0641 (f)ng/kg增加至40 mg/kg的0.3838 (m)/0.4878 (f) ng/kg(表9)。游离mmae的auc
0-t
也随着剂量从13.08 (m)/8.94 (f)增加至135.12 (m)/141.12 ng
•
h/ml。在第43天或第64天静脉内输注dp303c后，在所有剂量水平在24-96小时之间发现血浆中游离mmae的峰值浓度(图16a和16b)。在dp303c的6-、12-和30-mg/kg剂量水平，游离mmae的c
max
值分别为0.0529 (m)/0.0616 (f)、0.3845 (m)/0.1727 (f)和0.6787 (m)/0.8637 (f) ng/kg (表9)。在6 mg/kg的平均auc
0-t
为7.11 (m)/14.15 (f) ng
•
h/ml，在12 mg/kg的平均auc
0-t
为114.52 (m)/53.53 (f)且在30 mg/kg的平均auc
0-t
为151.37 (m)/143.39 (f) ng
•
h/ml。
[0339]
在本研究中进行抗药物抗体(ada)测试，以评价针对dp303c的ada。在glp重复剂量毒理学研究中，使用桥接免疫测定法来筛选来自食蟹猴的血清样品中的针对dp303c的抗药物抗体(ada)。在该测定中，生物素标记的dp303c、ada和dp303c形成桥式复合物，所述桥式复合物使用链霉抗生物素蛋白-hrp进行定量。将每个样品的信号背景比(s/b)与截点因子进行比较。任何s/b等于或高于截点因子的样品都被认为是阳性的。测定的灵敏度被确定为14.27 ng/ml。发现所有样品都是阴性的，并且未检测到ada。
[0340]
总之，在第1天和第43天/第64天在食蟹猴中静脉内输注施用dp303c后，dp303c和总抗体的血浆暴露量大于剂量比例地增加，表明非线性动力学。在q3w施用dp303c后，未观察到dp303c或总抗体的积累。dp303c的终末半衰期为120.6至162.5小时。完整dp303c和总抗体的相当血浆暴露量连同非常低水平的游离mmae表明猴中mmae从dp303c的去缀合忽略不计。雄性和雌性食蟹猴表现出所有分析物的相似的浓度-时间曲线。
[0341]
dp303c在人和食蟹猴血浆中的血浆稳定性研究(glp)本研究的目前是评估dp303c在来自人和食蟹猴的合并血浆中的体外稳定性。dp303c在人或猴血浆中以100
ꢀµ
g/ml的浓度在37℃下孵育96小时。在孵育后0、4、24、48、72和96小时收集样品，且然后针对dp303c、游离mmae和总dp001(裸dp001加上dp303c)进行分析。
[0342]
食蟹猴和人血浆中dp303c和总抗体dp001的浓度使用elisa测定法进行分析，其中dp303c和总抗体dp001的定量下限为0.3125 ng/ml。通过串联液相色谱/质谱(lc-ms/ms)方
法分析猴血浆中mmae的浓度，其中mmae的定量下限为0.03 ng/ml。
[0343]
下表10显示在37℃，dp303c在猴和人血浆中的稳定性。
[0344]
表10。
[0345]
下表11显示在37℃下96小时期间猴和人血浆中游离mmae的形成。值表示为平均值
±
标准偏差；nc代表值未计算；a指示3个样品中的2个中的游离mmae浓度低于定量下限(lloq)。
[0346]
表11。
[0347]
在96小时的测试时段期间，dp303c和dp001的浓度变化在猴(无变化)和人(约10%降低)血浆中非常小(表10)。在所有时间点，dp303c和dp001之间的比率范围为0.96至1.11。与该结果一致，到研究结束，猴和人血浆中的游离mmae浓度非常低：猴和人血浆中分别为1.318和0.752 ng/ml(表11)。游离mmae为猴和人血浆中dp303c浓度的约0.132%和0.073%。所有这些数据都表明dp303c在血浆中具有非常好的缀合稳定性。
[0348]
dp303c在人和食蟹猴血液中的溶血可能性研究(glp)本研究的目标是评估dp303c制剂对人和食蟹猴血液中的溶血和红细胞聚集的潜在影响。将人或食蟹猴红细胞与浓度为0.2、0.4、0.6、0.8和1mg/ml的dp303c在37℃下孵育3小时。在3小时测试时段期间，通过肉眼观察或分光光度分析，未观察到用dp303c处理的溶血和凝血，表明dp303c没有引起人和猴红血细胞的溶血和聚集。
[0349]
讨论dp303c证明在人和猴血浆中的体外稳定性非常好。在人血浆中孵育96小时后，90%的dp303c是完整的分子。在3至30 mg/kg的剂量范围内，dp303c在大鼠中展现线性pk，其中终末半衰期为9天。在所有剂量的大鼠中，dp303c和总抗体之间的pk参数非常相似，表明mmae从dp303c的去缀合有限。在所有3项单剂量和重复剂量食蟹猴研究中，dp303c在1.2至40 mg/kg的剂量范围内展现非线性pk，其中终末半衰期为4至7天。dp303c和总抗体在食蟹猴中的相当暴露量也表明在猴中mmae没有显著的去缀合。在静脉内给药dp303c后，猴中的mmae的血浆水平非常低。在所有动物研究中，dp303c、总抗体或游离mmae的pk曲线中均未观察到性别差异。在重复剂量glp研究中，在q3w施用dp303c后，未观察到dp303c或总抗体的积累。
[0350]
在非glp和glp研究两者中，在食蟹猴中不能耐受剂量水平≥ 40/30mg/kg dp303c，导致动物死亡和濒临死亡。在这两项研究中还发现剂量依赖性白细胞减少症和贫血症，其特征在于rbc质量、wbc、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和淋巴细胞减少。在glp重复剂量毒理学研究中，主要剂量限制性毒性是脾脏、胸腺和淋巴结中的剂量依赖性淋巴细胞耗竭和肺毒性。肺毒性的临床症状包括咳嗽、呼吸困难和呼吸沉重，同时大体观察到肺的紫色或深色变色、肺器官重量增加和伴有纤维化的肺部炎症。然而，在29天非glp研究中没有清楚地注意到肺毒性，如通过大体观察和肺器官重量所评价。可能的解释可能是在dp303c处理后发展明显的肺部炎症并伴有纤维化和肺损伤需要更长的时间，因为在29天非glp剂量范围发现研究中，计划外动物死亡发生在第10天或更早。glp重复剂量毒理学研究中的其他显著组织病理学发现包括肾脏中伴或不伴管型(cast)的轻微肾小管变性，肝脏中的极少或轻度变性/坏死，和皮肤或注射部位中的表皮中的轻度单细胞坏死。
[0351]
在29天非glp剂量范围发现研究中，20 mg/kg dp303c的剂量水平被良好耐受。在glp重复剂量毒理学研究中，所有动物在20/12 mg/kg dp303c下存活，除了在剂量从20改为12mg/kg之前发生的一例计划外动物死亡。在少数动物中，在20/12 mg/ml的临床体征限于鼻中的红色排出物、食欲不振、软便、皮肤冰冷、活动减少、咳嗽和呼吸急促。组织病理学发现与40/30 mg/kg dp303c下的组织病理学发现相似，但恢复后通常更温和且部分可逆。基于这些数据，认为猴中dp303c的最高非严重毒性剂量(hnstd)为12 mg/kg/剂 iv，每3周一次。在29天非glp剂量范围发现研究和glp重复剂量毒理学研究两者中，在6 mg/kg dp303c的低剂量水平下，所有动物都存活，而没有dp303c相关临床体征和临床病理学发现。此外，在任何剂量下都未观察到dp303c相关心脏毒性的体征，如通过ecg所评估。因此，dp303c在猴中的未观察到不良反应水平(noael)被确定为每三周一次静脉内施用的6 mg/kg。
[0352]
除了食蟹猴之外，还在非glp单剂量毒理学研究(研究dp-15-0818)中在大鼠中评价dp303c的非临床安全性。在该研究中，在所有组中都没有死亡或濒临死亡。主要不良反应包括在高剂量(60和100 mg/kg)的dp303c下白细胞、巨噬细胞/单核细胞、血细胞比容和血红蛋白的降低。在dp303c处理后21天，观察到的血液学变化回复至正常水平。因此，在本研究中，在大鼠中未达到dp303c的最大耐受剂量，并且所述最大耐受剂量被确定为在单次静脉内施用后不低于100 mg/kg。dp303c在猴和大鼠中的耐受性差异可能是由于抗原分布和结合的差异。
[0353]
总之，dp303c在非临床安全性研究中的主要毒性是贫血、白细胞减少、胸腺、脾脏
和淋巴结中淋巴细胞的耗竭以及肺部炎症和纤维化。这些不良作用在动物中是剂量依赖性的、可逆的和可监测的。因此，基于完成的非临床安全包、ich s9指南和fda出版物(saber和leighton，2015)，对于用dp303c的首次人体试验提出0.6 mg/kg的起始剂量。使用体重用于缩放，基于在食蟹猴中6 mg/kg的1/10
th noael计算起始剂量。
[0354]
实施例8：用于首次人体内(ftih)研究的dp303c pk测定基于目前为非临床研究验证的测定法，开发并验证以下用于首次人体内(ftih)研究的pk测定法：1)用于定量人血清样品中dp303c的水平的elisa测定法；2)用于定量人血清样品中dp001(总抗体)的水平的elisa测定法；3)液相色谱与串联质谱(lc-ms/ms)测定法以定量人血清样品中游离mmae弹头的水平。进行实验以评估如下的测定参数：1)定量上限和下限；2)准确度和精确度；3)特异性；4)选择性；5)稀释线性；和6)样品稳定性。对于ada检测采用免疫测定法和分层免疫原性测试方法，以支持ftih临床试验。将首先筛选样品，并且一旦证实测试样品对ada的存在呈阳性，将评价ada的特异性。将针对1)检测限值；2)精确度；3)截点；和4)药物耐受性评估ada测定法。样品基质将是血清。
[0355]
dp303c ftih研究的剂量递增方案是0.6、1.2、2.0、3.0和4 mg/kg静脉内输注，每3周一次(q3w)。可以基于来自该研究的安全性和临床活动数据，评估通过从每群组先前的剂量水平增加高达25%实现的至更高剂量水平的任选递增。dp303c剂量选择基于来自非临床安全性研究和fda出版物(saber和leighton，2015)和ich s9的安全边际量。使用体重用于缩放，基于食蟹猴中6 mg/kg的未观察到不良反应水平(noael)的1/10估计安全边际量。使用体表面积用于缩放，还基于食蟹猴中12 mg/kg的最高非严重毒性剂量(hnstd)的1/6计算安全边际量。预期0.6 mg/kg的起始剂量具有10的安全边际量(基于6 mg/kg的hed noael)和6.5的安全边际量(基于3.87 mg/kg的hed hnstd)(表12)。预计4 mg/kg的最高剂量具有1.5的安全边际量(基于hed noael)和1的安全边际量(基于hed hnstd)。
[0356]
表12. 提出的dp303c临床剂量的预测安全边际量。
[0357]
实施例9：dp303c的安全性、药代动力学、免疫原性和抗肿瘤活性研究本实施例描述了一项1a/1b期多中心、开放标签、剂量递增/递减和剂量扩展研究，以评估dp303c在具有选定的表达her2的晚期实体瘤的受试者中的安全性、药代动力学、免疫原性和抗肿瘤活性。该研究的主要目标是评价dp303c在具有标准疗法难治或不存在标准疗法的her2-阳性晚期实体瘤的受试者中的安全性和耐受性，并确定dp303c的最大耐受剂量(mtd)和/或推荐2期剂量(rp2d)。该研究的次要目标是评估dp303c在具有her2-阳性乳腺
癌或胃癌的受试者中的抗肿瘤活性，确定dp303c的药代动力学(pk)曲线，以及确定dp303c的免疫原性。
[0358]
1a期：剂量递增/递减该研究的1a期部分登记具有her2-阳性晚期实体瘤的受试者。治疗各3名受试者的剂量水平群组。1a期中待研究的剂量水平(dl)为：dl
ꢀ‑
1：0.3 mg/kg；dl 1：0.5 mg/kg或0.6 mg/kg；dl 2：1 mg/kg或1.2 mg/kg；dl 3：2.0 mg/kg；dl 4：3.0 mg/kg；dl 5：4.0 mg/kg。起始剂量(dl 1)为0.5 mg/kg或0.6 mg/kg。对于第一剂，第一剂在生理盐水中经60 (
±
10)分钟通过静脉内输注进行施用；如果耐受，后续输注可以经30 (
±
5)分钟施用。
[0359]
本研究使用传统的3+3设计，其在1期研究中广泛用于确定mtd并作为选择rp2d的基础。起始剂量为0.6 mg/kg，猴确定性重复给药毒性研究中noael(未观察到不良反应水平)的十分之一。4.0 mg/kg剂量低于与猴中的严重毒性相关的剂量(20 mg/kg，其与异速缩放后的6.7 mg/kg的人剂量相当)。
[0360]
在剂量递减设计中，经初始的21天及以后的时段评价剂量限制毒性(dlt)，以确定剂量递增或递减。如果4.0 mg/kg剂量水平不超过mtd，则剂量递增可能继续从先前的剂量水平增加高达25%，直至在剂量水平上超过mtd (≥2dlt)。dlt被nci ctcae v 4.03定义为与研究药物相关的ae，或在dp303c的第一个21天周期期间发生的研究药物相关且临床显著的实验室异常，并符合以下标准：4级嗜中性粒细胞减少症(绝对嗜中性粒细胞计数[anc]《500/mm3)，持续》7天；伴有发热(温度》38.0℃)的发热性嗜中性粒细胞减少症(anc《1000/mm3)，持续》1小时；4级血小板减少症(血小板计数《250,000/mm3)，持续》2天；伴有临床显著出血的≥3级血小板减少症(血小板计数《50,000/mm3)；≥2级肺炎；任何≥其他≥3级非血液学毒性，不包括经次优治疗的恶心、呕吐和腹泻、脱发和/或短暂(《1周) 3级疲劳；经最优治疗的恶心、呕吐或腹泻≥3级，其持续超过72小时；lvef 《40%或lvef从基线下降≥10%且lvef 《45%；由于dp303c相关的毒性，治疗延迟》21天。
[0361]
连续评价第1周期(c1)后dlt样毒性的发生，并将其并入未来关于进一步剂量递增/递减的决策中。如果现有证据表明与研究治疗的关系在逻辑上不可能、医学上不合理或由于明确的替代解释而高度不可能，则ae不被视为可能的dlt。
[0362]
关于剂量递增的决定基于累积的安全性数据做出，所述安全性数据包括不良事件报告、生命体征、实验室结果、ecg以及lvef和肺功能测试的结果。在c1中的dlt评估时段期间，使用以下规则来确定剂量递增是否适当：每个群组中最初将登记3名受试者；如果群组中的前3名受试者无一经历dlt，则多达3名新受试者将被登记入下一剂量水平的群组中；如果群组中的前3名受试者中1名经历dlt，则该群组将被扩展至多达6名受试者。如果在该群组中的6名受试者中没有额外受试者发生dlt，则多达3名新受试者将被登记入下一剂量水平的群组中；如果3或6名受试者群组中的2名或更多受试者经历dlt，则该剂量水平高于mtd并且剂量递增将停止，3名额外受试者将被登记并在先前的剂量水平针对dlt进行评估，除非6名受试者已经在该剂量水平进行评估；当已经测试高于mtd的剂量时，6名受试者中少于2名(即《33%)经历dlt的最高剂量将被视为mtd。
[0363]
在最后一名受试者已经完成dlt观察时段或经历dlt并且已经审查所有相关安全性数据后，做出每个群组的剂量递增决定。即使没有观察到dlt，也可以将多达3名受试者添加至群组中，以更彻底地评估潜在的安全信号。在一些情况下，在21天dlt评估时段之后发
生的治疗相关的ae被考虑用于剂量递增/递减决策。
[0364]
1b期：剂量扩展rp2d是预期对于重复施用可耐受的剂量。基于对临床安全性数据的审查，rp2d可能低于mtd。在确定mtd和选择rp2d后，该研究的1b期剂量扩展部分将开始。在扩展期间，将各近似10名受试者登记进入2种定义的癌症类型：乳腺癌和胃癌(包括胃食管交界处的腺癌)。对于两种肿瘤类型，her2-阳性被定义为：her2 ihc 2+和ish阳性或ihc 3+。
[0365]
在10名受试者(在两种剂量扩展癌症类型中合计)已经接受第一个研究治疗周期(3周/21天)后，smc将审查所有可用的安全性数据并评价是否有必要对给药方案或研究设计进行任何修改。
[0366]
对于每种扩展癌症类型，如果在任何时候≥3名受试者经历dlt样ae或其他不可接受的毒性，则将暂停进一步登记，等待smc审查。smc可能建议将后续受试者登记在下一较低剂量水平或中等剂量水平。
[0367]
纳入和排除标准登记来自不同地点的近似54名受试者，在剂量递增/递减期间(1a期)多达15-30名以及在剂量扩展期间(1b期)多达20-24名，且每种癌症类型中近似10名受试者。可以登记额外的受试者以解决退出并确保在剂量递增期间最少数量的dlt可评估受试者。只有当所有以下标准都适用时，受试者才有资格被纳入研究中：1. 研究相关程序前签署知情同意书；2. 男性或女性18-75岁；3. 标准疗法后已经进展或不存在标准疗法的晚期、her2-阳性雌激素受体(er)恶性肿瘤的诊断。先前已经用her2靶向疗法(诸如曲妥珠单抗、帕妥珠单抗、拉帕替尼或恩美曲妥珠单抗)治疗的受试者有资格。her2-阳性被定义为ihc 2+和ish阳性或ihc 3+：对于1a期，受试者可能具有任何类型的实体瘤，条件是对于her2呈ihc 2+或3+阳性或ish-阳性；对于1b期，受试者必须具有对于her2呈ihc 2+或3+阳性或ish-阳性的乳腺癌或胃癌；her2测试必须在美国病理学学院(cap)认可的实验室中使用fda-批准或验证的测定法进行。4. ecog表现状态0至1，并且预期存活时间大于3个月；5. 受试者必须具有下述限值内的实验室值：anc ≥1.5 x 109/l；血小板计数≥100 x 109/l；血红蛋白≥9 g/dl；血清肌酐在正常范围内或肌酐清除率≥60 ml/分钟；血清总胆红素≤1.5 x uln(具有吉尔伯特综合征的受试者中高达3 x uln)；ast (sgot)和alt (sgpt) ≤ 2.5 x uln(或对于具有肝转移的受试者，≤5 x uln)；pt/inr和aptt ≤1.5 x uln；6. 疾病可测量性：1a期：可测量或可评估的疾病；1b期：疾病必须是可测量的(根据recist 1.1)；7. wocbp必须在进入研究前具有阴性妊娠测试；8. wocbp和男性受试者必须同意从进入研究到最后一剂研究药物后至少12周使用足够的避孕措施；9. 近来已经接受抗肿瘤全身疗法的受试者需要清除时段。受试者计划的第一剂dp303c之前的时段必须为至少28天或5个半衰期，以较短者为准。这适用于研究和批准的疗法。抗肿瘤疗法包括化学疗法、免疫疗法、靶向疗法、内分泌疗法、放射疗法(除了用于疼痛
缓解的局部放射疗法，治疗后14天)。
[0368]
受试者在筛选和研究治疗时段期间禁止接受以下疗法：抗癌全身化学疗法、激素疗法或免疫疗法；根据与申办者协商，在与医学监察员讨论后进行选择性手术/牙科治疗；dp303c以外的研究药剂；放射疗法(除了用于疾病相关疼痛的姑息性放射疗法，并咨询申办者的医学监察员)；放射性/毒素免疫缀合物。
[0369]
符合以下标准中的任一种的受试者将没有资格参与该研究：1. 孕妇或哺乳期妇女；2. 拒绝使用有效的避孕方法(对于详情，参见纳入标准)；3. 还没有从由于先前施用的药剂或放射疗法导致的除脱发外的ae恢复(即，≤1级或在基线)；4. 在接受曲妥珠单抗疗法的同时心脏功能障碍《40%的病史；5. 具有对dp303c的任何组分(曲妥珠单抗类似物、mmae、柠檬酸钠二水合物、柠檬酸盐一水合物、聚山梨醇20、蔗糖等)的过敏史的受试者；6. 与恶性肿瘤相关的不稳定中枢神经系统(cns)转移或癫痫病症的病史；然而，针对先前的cns转移治疗并且在停用类固醇和抗惊厥药的同时已经无症状最少4周的时段的受试者可以参与该研究；7. 间质性肺病、先前或活动性肺部感染或炎症(肺炎)的病史；8. 需要补充氧气；9. 充血性心力衰竭、不稳定性心绞痛、不稳定性心房颤动或心律失常的病史。在登记时具有以下类型的心脏损伤的受试者：纽约心脏协会iii或iv类心脏病；登记前6个月内不受控制的心绞痛、充血性心力衰竭或心肌梗塞；通过超声心动图(echo)或多门控采集(muga)扫描得到的lvef《50%；qt间期延长(男性中》450 ms，女性中》470 ms)；10. 在研究的前90天，蒽环类药物累计剂量 ≥360mg/m2多柔比星或等效物；11. 周围神经病变≥2级或更高(nci ctcae v 4.03)；12. 不可管控的电解质失衡，包括低钾血症、低钙血症或低镁血症(基于nci ctcae v 4.03，≥2级或更高)；13. 任何无法控制的间发疾病、感染或其他可能限制研究依从性或干扰评价的状况；14. 具有活动性感染的证据的受试者，包括：在登记时针对活动性感染用抗生素治疗的受试者；具有活动性丙型肝炎或慢性活动性乙型肝炎的证据的受试者；已知诊断为人类免疫缺陷病毒(hiv)感染/获得性免疫缺陷综合征(aids)的受试者；15. 在首次给药的14天内用cyp3a抑制剂(使特定cyp底物auc增加≥5倍的药物，诸如咪拉地尔、维拉帕米、地尔硫卓、奈法唑酮、克拉霉素、泰利霉素、醋竹桃霉素、红霉素、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑、泊沙康唑、伏立康唑片剂、埃替拉韦、茚地那韦、洛匹那韦、奈非那韦、利托那韦、沙奎那韦、波普瑞韦、incivo、特拉匹韦、考尼伐坦、艾代拉里斯)或强cyp3a诱导剂(阿伐麦布、苯巴比妥、苯妥英、卡马西平、利福平、利福布汀、恩杂鲁胺、米托坦、贯叶连翘)治疗的患者；16. 其他严重或控制不佳的疾病或情况，其会干扰对关键研究终点的评估，或者研究者认为会使受试者处于不能参与研究的风险中。
[0370]
剂量修改对于以下情况，可以考虑减少剂量和/或延迟：1. 在第1周期期间的dlt或符合dlt标准的ae或在第2周期或之后被研究者认为不可接受的ae的情况下，或者使受试者停止研究或者在随后的周期中、在从dlt恢复至0级、1级或基线后以降低的剂量水平恢复给药。2. 在药物相关ae在21天周期结束时尚未恢复至0级、1级或基线的情况下，如果ae到给药后第42天恢复，则可以以完全或减少的剂量恢复给药。如果ae到第42天尚未恢复，则使受试者停止研究。3. 在由于管理原因(例如，假期期间关闭站点、受试者休假、间发疾病)错过给药的情况下，可以在下一可行时间恢复给药。如果到给药后第42天不能恢复给药，则使受试者停止研究。
[0371]
允许将剂量减少至下一较低的方案规定的剂量水平。登记在最低剂量水平(dl 1：0.6 mg/kg)的患者可以将其剂量降低至0.3 mg/kg。如果受试者不能耐受降低的剂量水平，则他/她应该被停止研究。不允许受试者内剂量递增。
[0372]
研究评价通过第2周期完成后和每隔一个周期结束时的肿瘤反应评价效力，直至研究停止。安全性通过身体检查、生命体征、心电图(ecg)、左心室射血分数(lvef)、肺功能测试和胸部的高分辨率ct的测量值来评价。
[0373]
主要目标的测量值是：不良事件(ae)、严重不良事件(sae)、剂量限制毒性(dlt)、实验室参数距基线的变化、生命体征(vs)和心电图(ecg)。所有ae和sae将从icf签署直至最后一剂dp303c后30 (
±
5)天收集。符合ae定义的事件是：1. 任何异常的实验室测试结果(血液学、临床化学或尿液分析)或其他安全性评价(例如，ecg、放射学扫描、生命体征测量)，包括从基线恶化、在研究者的医学和科学判断中被认为临床上显著(即，与基础疾病的进展无关)的那些。2. 慢性或间歇性的预先存在的疾病的恶化，包括病况的频率和/或强度增加。3. 研究治疗施用后检测或诊断出的新病况，即使它可能在研究开始之前已经存在。4. 疑似药物-药物相互作用的体征、症状或临床后遗症。5. 研究治疗或伴随药物的疑似过量给药的体征、症状或临床后遗症。过量给药本身不会被报告为ae/sae，除非它是可能有自杀/自残意图的故意过量给药。无论后遗症如何，都应当报告此类过量给药。6.
ꢀ“
缺乏效力”或“预期药理作用失败”本身不会被报告为ae或sae。此类情况将被纳入效力评价中。然而，如果由缺乏效力而导致的体征、症状和/或临床后遗症满足ae或sae的定义，则它们将被报告为ae或sae。
[0374]
不符合ae定义的事件是：1. 与基础疾病相关的任何临床上显著的异常实验室发现或其他异常安全性评价，除非被研究者判断为受试者的病况比预期的更严重。2. 所研究的疾病/病症或所研究的疾病/病症的预期进展、体征或症状，除非受试者的病况比预期的更严重。
3. 医学或外科手术(例如，内窥镜检查、阑尾切除术)：导致该手术的状况是ae。4. 未发生不良医疗事件的情况(社会和/或方便入院)。5. 在研究开始时存在或检测到预先存在的疾病或病况的预期日间波动，其未恶化。
[0375]
次要目标的测量值是：基于recist 1.1的最佳总体反应和疾病控制率；反应的持续时间和无进展存活期(pfs)；dp303c施用后指定时间点的个体受试者dp303c血清浓度和其他分析物，以及衍生的pk参数；产生可检测的抗药物抗体(ada)的受试者的数量(%)。药代动力学将通过测量dp303c浓度、血清中的总抗体和血浆中的mmae衍生物和游离mmae浓度来评价。将从所有受试者收集血液样品，用于在第1周期和第2周期的第1、2、4、8、15天和所有后续周期的第1天测量血清或血浆中的dp303c浓度。将在每个治疗周期的第1天收集的血液样品中测量血清中针对dp303c的抗药物抗体。抗肿瘤活性将通过客观反应率(orr)、疾病控制率(dcr)、反应的持续时间和无进展存活期(pfs)进行分析。orr被定义为使用recist 1.1标准的比例([证实的完全反应(cr)+ 证实的部分反应(pr)]/n可评估)。还将提供无需证实要求获得cr或pr的比例。orr将使用描述性统计进行总结。疾病控制率(dcr)[cr+pr+疾病稳定(sd)/n可评估]将类似地总结。反应持续时间和pfs将使用kaplan-meier方法计算。
[0376]
1a期初始结果迄今为止，10名受试者登记于1a期研究中，以评估dp303c治疗在受试者中的安全性和效力。所有登记的受试者都具有her2-阳性癌症，并且在研究前已经接受herceptin
®
治疗。迄今为止，五名受试者已经退出，并且五名受试者仍在参与该研究。对于剂量递增研究设计，向一名受试者施用0.5 mg/kg dp303c，并且向三名受试者各自施用1、2或3 mg/kg dp303c。每三周通过静脉内输注施用剂量一次。
[0377]
评价dp303c相关的毒性。在2 mg/kg剂量下，一名受试者显示伴有视力模糊的2级眼睛毒性。在3 mg/kg剂量下，一名受试者显示伴有视力模糊的3级眼睛毒性。在这两名患者暂停给药(即，他们均跳过一个安排的剂量)后，所有观察到的毒性都解决，并恢复用dp303c治疗。暂停后，之前已经接受3 mg/kg的患者降至2 mg/kg。
[0378]
使用recist 1.1标准评价效力(参见eisenhauer, e.a. 等人eur j cancer. 2009 jan;45(2):228-47)。在1、2和3 mg/kg剂量下，来自每个剂量水平的一名患者表现出部分反应(肿瘤大小减少30%或更高)。毒性和效力结果的总结提供于下表13中，其中“pd”指示疾病进展，“pr”指示部分反应，且“sd”指示疾病稳定。
[0379]
表13：1a期效力和毒性结果的总结
。