落新妇苷在制备用于治疗息肉药物中的应用的制作方法

1.本发明属于医药领域，涉及天然产物的新用途，具体涉及一种落新妇苷在治疗息肉中的应用。


背景技术：

2.息肉是人或哺乳动物组织表面长出的赘生物，传统意义上的息肉包括腺瘤、异型增生、锯齿状病变和错构瘤等，均属于上皮性肿瘤分类中的癌前病变。组织学分类可分为肿瘤性和非肿瘤性息肉，肿瘤性息肉包括腺瘤性息肉和非腺瘤性息肉。按病理性质分包括腺瘤性、炎症性、错构性、增生性等。
3.腺瘤性息肉包括管状腺瘤、绒毛状腺瘤及管状绒毛状腺瘤。息肉多呈息肉状，常见于胃肠粘膜，更多在结肠；炎症性息肉指粘膜长期慢性炎症引起的息肉样芽肿，多见于溃疡性结肠炎、慢性血吸虫病等病变肠道中；增生性息肉，又称化生性息肉，多发生在直肠，息肉的数目虽多，但无明显的症状，且无癌变倾向。错构瘤性息肉的特征性表现为正常细胞过度生长和组织结构紊乱，目前已知的消化道错构瘤性息肉病主要为peutz-jeghers综合征， cronkhite-canada综合征和幼年性息肉病等，其中大多数具有发展为消化道恶性肿瘤和(或) 合并其他恶性肿瘤的危险性。
4.息肉临床表现多见炎性息肉、腺瘤性息肉和某些胃肠道息肉病综合征。按其发病部位可分为肠道息肉病、子宫息肉、宫颈息肉、喉息肉、鼻息肉、大肠息肉、胃息肉、结肠息肉、胆囊息肉等。尽管息肉发病部位不一，但均表现为正常细胞过度增殖和组织结构紊乱，临床上特征性表现为多发、难愈并且有可能恶化癌变。
5.腺瘤性息肉上皮增殖活跃，多伴有上皮内瘤变，可以恶变为腺癌。腺瘤性息肉发病率随年龄的增高而上升，50岁以后明显升高。一般认为多发性息肉的癌变率高于单发者，腺瘤存在时间越长，癌变危险性越大。肠息肉，尤其是大肠腺瘤性息肉被认为是结直肠癌的癌前病变，不同方式的手术切除为目前主要治疗手段，但仍存在复发率高和癌变的风险。目前有报道的配合手术治疗的药物主要为阿司匹林、非甾体消炎药塞来昔布、二甲双胍及叶酸等，但仍无法彻底解决息肉切除后复发率高的问题，因此现有治疗手段尚不能满足临床需求。
6.肠息肉病因学相关研究发现吸烟、饮酒、高脂肪高蛋白、低纤维等是饮食习惯中的危险因素。伴随我国经济发展，饮食结构变化及步入老龄化，息肉的发病率会日益增加，对治疗息肉的药物诉求会更强烈，因此研发有效治疗息肉的药物具有重要的临床意义。
7.落新妇苷(astilbin，asb)系二氢黄酮醇苷类化合物，其化学名为(2r，3r)5，7，3
′
，4
′‑
四羟基二氢黄酮醇-3-o-α-l-吡喃鼠李糖苷，化学式为c
21h22o11
。分子量为450.39，cas号为29838-67-3，结构式为：
[0008][0009]
落新妇苷药理活性广泛，现有药理研究显示落新妇苷具有免疫抑制、抑制排异反应、抗炎、镇痛、保肝、护肾、抗菌及糖尿病等多种药理活性。落新妇苷植物来源广泛，目前世界范围内共有12科15属26种植物中均可分离出落新妇苷，主要存在于藤黄科、金丝桃科、核桃科、百合科、桑寄生科、虎耳草科、葡萄科多种植物中。基于我国中药及植物资源分布及蕴藏情况，黄杞、土茯苓及葡萄可作为落新妇苷的主要来源。


技术实现要素：

[0010]
本发明的一个目的是提供一种落新妇苷及其制剂在预防和或治疗人或哺乳动物息肉中的应用，优选为预防和或治疗人类息肉中的应用。所述的预防和或治疗人类息肉，包括阻断或延缓息肉术后复发。
[0011]
本发明所述息肉是指生长在人体或哺乳动物黏膜表面的赘生物。本发明所述息肉按其发病部位分，包括消化道息肉、子宫内膜息肉、宫颈息肉、喉息肉、鼻息肉等。本发明所述息肉是指胃肠道息肉病综合征。本发明所述的胃肠道息肉病综合征为cronkhite-canada综合征。
[0012]
本发明所述的息肉优选消化道息肉，最优选胃肠道息肉。消化道息肉是指发生在消化道全段的单发或多发性息肉，包括：食管息肉、胃息肉、小肠息肉、大肠息肉(结肠息肉、直肠息肉)、肛门息肉、胆囊息肉；本发明所述消化道息肉亦可以为同时发生在胃和小肠和或大肠(含结直肠、肛门)的多发性息肉，此类息肉在本技术中亦称为胃肠道息肉。
[0013]
特别有益的是，本发明的所提供的落新妇苷的应用，可以药物组合物的形式供临床使用。
[0014]
本发明提供了一种含有落新妇苷的药物组合物在预防和治疗人或哺乳动物息肉中的应用。
[0015]
本发明所述含有落新妇苷的药物组合物，可以是包括第一活性剂落新妇苷和第二活性剂组成。所述第二活性剂，包括糖皮质激素、免疫抑制剂、抗生素、抑酸药和从其他中药、天然药物或植物中获得的化合物中的一种或一种以上的组合。本发明所述的糖皮质激素包括泼尼松、泼尼松龙、布地奈德、强的松、氢化可的松、地塞米松、倍他米松等。本发明所述免疫抑制剂包括6-巯嘌呤、来氟米特、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤、环孢素、吗替麦考酚酯、托法替尼、奥拉替尼、巴瑞替尼、td-1473、雷帕霉素、依维莫司、他克莫司等。本发明所述抗生素包括临床常用的β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类、林可霉素类、多肽类、喹诺酮类、磺胺类、抗结核药、抗真菌药及其他抗生素。本发明所述抑酸药包括质子泵抑制剂如奥美拉唑、兰索拉唑、泮托拉唑、雷贝拉唑、埃索美拉唑等，h2受体拮抗剂如西咪替丁、雷尼替丁、法莫替丁、尼扎替丁、罗沙替丁等。本发明所述其他中药、天然药物或植物中获得的化合物包括绿原酸、马钱苷、连翘苷、连翘酯苷a、连翘脂素、党参炔苷等。
[0016]
本发明所述含有落新妇苷的药物组合物，也可以是含有落新妇苷的中药提取物，
或含有落新妇苷的中药提取物与糖皮质激素、免疫抑制剂、抗生素、抑酸药和从其他中药、天然药物或植物中获得的化合物中的一种或一种以上的组合。所述中药提取物是指采用常规提取方法从中药、天然药物或植物中获得的以落新妇苷为主要活性成分或指标成分的组合物。所述常规提取方法包括但不限于水煎煮法、浸渍法、渗滤法、改良明胶法、回流法、溶剂提取法、水蒸气蒸馏法、升华法、超临界流体萃取法、膜分离技术、超微粉碎技术、中药絮凝分离技术、半仿生提取法、超声提取法、旋流提取法、加压逆流提取法、酶法、大孔树脂吸附法、超滤法、分子蒸馏法等。
[0017]
本发明的另一目的是提供一种包括落新妇苷的药物组合物的药物制剂形式，特征在于该药物制剂形式为胃肠道给药制剂。所述的胃肠道给药制剂是指口服固体制剂、口服液体制剂或灌肠给药制剂，优选口服固体制剂包括但不限于片剂、胶囊剂、散剂、滴丸剂、微丸剂、颗粒剂等。片剂包括素片、包衣片、缓释片，胶囊剂包括硬胶囊、软胶囊、微囊剂、缓释胶囊等。最优选片剂、胶囊剂、微囊剂、软胶囊剂、微丸剂、滴丸剂。可药用辅料可以选自填充剂或稀释剂、粘合剂、崩解剂、润湿剂、润滑剂其中的一种或一种以上，特别有益的是还可以根据临床需求加入着色剂，甜味剂等。
[0018]
按照制剂需要加入医药可接受的辅料及保健食品可接受的辅料，所述辅料包括润滑剂、分散剂、粘合剂、稀释剂、矫味剂等；所述的润滑剂包括硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸钙、液状石蜡、石蜡、单硬脂酸甘油酯、单棕榈酸甘油酯、硼酸、苯甲酸钠、醋酸钠、氯化钠、聚氧乙烯单硬脂酸酯、聚氧乙烯月桂醇醚、dl-亮氨酸、月桂醇硫酸钠、月桂醇硫酸镁、聚乙二醇4000或6000、聚氧乙烯单硬脂酸酯和聚氧乙烯月桂醇醚等；所述的分散剂包括白蜂蜡、倍半油酸山梨坦、泊洛沙姆、单硬脂酸山梨坦、蛋黄卵磷脂、司盘85、司盘60、蔗糖硬脂酸酯、羟乙甲纤维素、羟丙甲纤维素、氧化铝等；所述粘合剂包括聚丙烯酸树脂i、iv、聚维酮、聚维酮k30、聚维酮k90、羟丙甲纤维素(60rt50、e50、k100、100cps)、阿拉伯胶、海藻酸、甲基纤维素、角豆胶、卡波姆、壳聚糖、氢化植物油、液体葡萄糖、菊粉、葵花油、羟乙甲纤维素等。所述稀释剂包括甘露醇、麦芽糊精、木糖醇、乳糖、微晶纤维素、氧化锌、磷酸钙、磷酸氢钙、麦芽糖醇、麦芽糖、蔗糖粉、拉克替醇、环糊精、葵花油、α-乳糖、葡聚糖、玉米淀粉、藻酸铵等；所述矫味剂包括薄荷脑、丙二酸二乙酯、丙酸乙酯、单糖浆、谷氨酸钠、水杨酸甲酯、无水枸橼酸、蔗糖、枸橼酸钠、海藻糖等。
[0019]
本发明所述的口服药物制剂可以采用制药领域的常规技术和设备制备。
[0020]
本发明的再一个目的是提供落新妇苷以及包含落新妇苷的药物组合物治疗息肉的临床有效量，人有效剂量为0.01mg/kg～120mg/kg，优选1mg/kg～20mg/kg，20mg/kg～80mg/kg， 80mg/kg～120mg/kg，最优选20mg/kg～80mg/kg。
[0021]
本发明所述的落新妇苷是指化学名为(2r，3r)5，7，3
′
，4
′‑
四羟基二氢黄酮醇-3-o-α-l
‑ꢀ
吡喃鼠李糖苷的化合物。本发明落新妇苷主要来源中土茯苓为百合科植物光叶菝葜smilaxglabra roxb.的干燥根茎。黄杞为胡桃科黄杞engelhardtia roxburghiana wall.[e.chrysolepishance]，以黄杞叶中落新妇苷含量较高。葡萄为葡萄科植物葡萄vitis vinifera l.，落新妇苷存在于浆果(皮、汁、籽)部位。
[0022]
本发明优势如下：
[0023]
解决临床息肉尤其是胃肠道息肉基本没有药物可用的问题，发掘落新妇苷新的药用价值，落新妇苷组合物可显著减少息肉数目及改善肠息肉症状，可用于治疗和预防息肉，
包括阻断或延缓息肉术后复发。
[0024]
落新妇苷组合物药理作用强，用于治疗肠息肉功效显著，且安全性佳，可长期服用，具有良好药用前景。
[0025]
落新妇苷来源丰富，制备工艺简单，且易制成各种剂型，易于推广。
附图说明
[0026]
图1为落新妇苷对小鼠结直肠部息肉个数及大小的影响。小鼠肠息肉个数和大小统计图(mean
±
sd，n＝6，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001)。
[0027]
图2为落新妇苷对小鼠胸腺指数及脾脏指数的影响。受试药对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响(mean
±
sd，n＝6)。
[0028]
图3为落新妇苷对apcmin/+小鼠肠息肉个数及大小的影响。apcmin/+小鼠肠息肉个数和大小统计图(mean
±
sd，n＝6，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001)。
[0029]
图4为落新妇苷与马钱苷联合使用对小鼠结直肠部息肉个数及大小的影响。小鼠肠息肉个数和大小统计图(mean
±
sd，n＝6，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001)。
具体实施方式
[0030]
以下通过实施例形式再对本发明的内容作进一步的详细说明，但不应就此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下实施例。在不脱离本发明上述技术措施前提下，根据本邻域普通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本发明的范围内。
[0031]
实施例1含落新妇苷提取物制备颗粒剂
[0032]
土茯苓饮片购自亳州市京皖中药饮片厂，将土茯苓饮片加入10倍量水常温浸泡2h后，加热回流提取2h，收集水提液。残渣继续用水提取2h，合并两次提取液，经过滤后，浓缩至每毫升含3g生药的浸膏，浸膏中落新妇苷含量为8.12％。将浸膏与适量辅料混合后，过20目尼龙筛制粒，经烘干、整粒后既得。
[0033]
实施例2落新妇苷片剂的制备
[0034]
称取落新妇苷30g、糖粉20g、乳糖40g、羧甲基淀粉钠45g，将以上材料充分混合后过100目筛，加入5％pvp-k30水溶液制成软材，20目尼龙筛制粒。干燥后，应用外部润滑装置用硬脂酸镁将颗粒剂压片，得到片重约150mg片剂约1000片。
[0035]
实施例3落新妇苷胶囊剂的制备
[0036]
将落新妇苷与10％淀粉浆混合均匀后，制成软材，过20目尼龙筛制粒。颗粒经烘干、整粒后，填充胶囊得落新妇苷胶囊剂。
[0037]
实施例4建立aom联合dss诱导的肠息肉小鼠模型并评价落新妇苷药效
[0038]
1实验材料
[0039]
1.1动物
[0040]
balb/c小鼠，spf级，体重18-22g，雄性，北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号码：scxk(苏)2016-0003。小鼠分笼饲养于南京中医药大学动物实验中心，饲养许可证：syxk2018-0049，光照适度，室温22～25℃，湿度50～60％。
[0041]
1.2药物与试剂
[0042]
受试药配置：
[0043]
将落新妇苷用吐温80充分溶解后，用生理盐水稀释至所需浓度，配成混悬液，每次给药前充分混匀。给药体积0.1ml/10g，给药剂量为25mg/kg和50mg/kg。造模试剂：aom(氧化偶氮甲烷)，sigma，批号：slcc0424。dss(葡聚糖硫酸钠盐)，mpbiomedicals，批号：q1723。
[0044]
2实验方法
[0045]
2.1动物分组、造模及给药
[0046]
分组：小鼠适应性饲养后，按照体重分层随机分为空白组、模型组、受试药低剂量组、受试药高剂量组。
[0047]
建立aom联合dss三循环模型：除空白组外，各组小鼠在第1周第1天给予腹腔注射aom 10mg/kg，并同时连续给予2.5％dss饮用水1周，小鼠自由饮用，再予普通饮用水自由饮用2周，共3周为一个循环。同第一循环，在第4周、第7周第1天腹腔注射10mg/kg 剂量的aom，并分别给予2周的2.5％dss饮用，其余时间给予普通饮用水，共9周3个循环。空白组小鼠在模型组腹腔注射的同一天腹腔注射生理盐水，从实验开始至实验结束均给予普通饮用水白由饮用。
[0048]
给药：从第1周第1天开始，给药组小鼠灌胃给予受试药，每日1次，造模期间持续灌胃9周，造模完成后继续灌胃给药1周，共计给药10周。
[0049]
2.2指标检测：
[0050]
造模期间密切观察记录小鼠体重、饮食、排便等情况，于第10周最后一天取胸腺、脾脏计算胸腺指数、脾脏指数；自盲肠末端至肛门获取小鼠整段结直肠，沿肠管纵向剖开，生理盐水清洗肠道粪便，以肠粘膜朝上置于解剖台，观察肠粘膜组织有无炎症反应及有无息肉产生，记录息肉发生数目、位置、大小等。
[0051]
2.3统计学方法：
[0052]
数据结果用均数
±
标准差(mean
±
sd)表示，各组间的差异比较采用graphpad prism 7 软件的one-way anova分析方法，组间比较采用dunnett’s检验，p《0.05有统计学意义。
[0053]
3实验结果：
[0054]
经过aom联合dss造模，模型小鼠大肠部位明显形成一定数量息肉，而给予受试药均能显著抑制息肉的生成，明显减少息肉个数，缩小息肉体积。低剂量和高剂量受试药抑制率分别为44.78％和52.24％。同时，受试药对小鼠胸腺指数、脾脏指数无明显影响(表1和图 1、2)。
[0055]
表1：受试药对小鼠大肠息肉个数的影响
[0056]
[0057]
###
p《0.001与空白组相比；
**
p《0.01，
***
p《0.001与模型组相比。
[0058]
实施例5apc
min/+
自发性息肉小鼠模型评价受试物药效
[0059]
1实验材料
[0060]
1.1动物
[0061]
品系名称:b6/jgpt-apc
em1cin(minc)
/gpt小鼠，spf级，6周龄，雄性。野生型c57/b6j小鼠， spf级，6周龄，雄性。购自江苏集萃药康生物科技股份有限公司，许可证号码：scxk(苏) 2018-0008。小鼠分笼饲养于南京中医药大学动物实验中心，饲养许可证：syxk2018-0049，光照适度，室温22～25℃，湿度50～60％。
[0062]
1.2受试药配置：
[0063]
将落新妇苷用吐温80充分研磨混匀后，用生理盐水稀释至所需浓度，配成混悬液，每次给药前充分混匀。给药体积0.1ml/10g，给药剂量为25mg/kg和50mg/kg。
[0064]
2实验方法
[0065]
2.1动物分组及给药：
[0066]
apc
min/+
小鼠适应性饲养1周后，按照体重分层随机分为模型组、落新妇苷低剂量组(25 mg/kg)、落新妇苷高剂量组(50mg/kg)。给药组小鼠灌胃给予相应剂量落新妇苷，每日1次，共计给药10周，野生型对照小鼠和apc
min/+
模型组小鼠灌胃等体积生理盐水。期间各组小鼠自由摄取饲料。
[0067]
2.2指标检测：
[0068]
给药期间密切观察记录小鼠体重、饮食、排便等情况，末次给药24小时后取小鼠整段肠段，沿肠管纵向剖开，生理盐水清洗肠道内容物，以肠粘膜朝上置于解剖台，观察肠粘膜组织有无炎症反应及有无息肉发生，记录息肉发生数目及大小。
[0069]
2.3统计学方法：
[0070]
数据结果用均数
±
标准差(mean
±
sd)表示，各组间的差异比较采用graphpad prism 7 软件的one-way anova分析方法，组间比较采用dunnett’s检验，p《0.05有统计学意义。
[0071]
3实验结果：
[0072]
apc
min/+
小鼠肠部位明显形成一定数量息肉，而给予受试药落新妇苷能显著明显减少息肉个数，缩小息肉体积。低剂量和高剂量受试药抑制率分别为27.19％和44.74％(表2、图3)。
[0073]
表2：受试药对apc
min/+
小鼠肠息肉个数的影响
[0074]
[0075]
###
p《0.001与野生型对照组相比；
*
p《0.05，
***
p《0.001与模型组相比。
[0076]
实施例6评价落新妇苷与马钱苷联合使用对小鼠肠息肉形成的影响
[0077]
1实验材料
[0078]
1.1动物
[0079]
balb/c小鼠，spf级，体重18-22g，雄性，北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号码：scxk(苏)2016-0003。小鼠分笼饲养于南京中医药大学动物实验中心，饲养许可证：syxk2018-0049，光照适度，室温22～25℃，湿度50～60％。
[0080]
1.2药物与试剂
[0081]
受试药配置：
[0082]
将落新妇苷及马钱苷分别用吐温80充分溶解后，用生理盐水稀释至所需浓度，配成混悬液，每次给药前充分混匀。给药体积0.1ml/10g，给药剂量为50mg/kg。
[0083]
造模试剂：aom(氧化偶氮甲烷)，sigma，批号：slcc0424。dss(葡聚糖硫酸钠盐)，mpbiomedicals，批号：q1723。
[0084]
2实验方法
[0085]
2.1动物分组、造模及给药
[0086]
分组：小鼠适应性饲养后，按照体重分层随机分为空白组、模型组、落新妇苷50mg/kg 组、落新妇苷50mg/kg+马钱苷50mg/kg组。
[0087]
建立aom联合dss三循环模型：除空白组外，各组小鼠在第1周第1天给予腹腔注射 aom 10mg/kg，并同时连续给予2.5％dss饮用水1周，小鼠自由饮用，再予普通饮用水自由饮用2周，共3周为一个循环。同第一循环，在第4周、第7周第1天腹腔注射10mg/kg 剂量的aom，并分别给予2周的2.5％dss饮用，其余时间给予普通饮用水，共9周3个循环。空白组小鼠在模型组腹腔注射的同一天腹腔注射生理盐水，从实验开始至实验结束均给予普通饮用水白由饮用。从第1周第1天开始，给药组小鼠灌胃给予受试药，每日1次，造模期间持续灌胃9周，造模完成后继续灌胃给药1周，共计给药10周。
[0088]
2.2指标检测：
[0089]
造模期间密切观察记录小鼠体重、饮食、排便等情况，于第10周最后一天自盲肠末端至肛门获取小鼠整段结直肠，沿肠管纵向剖开，生理盐水清洗肠道粪便，以肠粘膜朝上置于解剖台，观察肠粘膜组织有无炎症反应及有无息肉产生，记录息肉发生数目及大小。
[0090]
2.3统计学方法：
[0091]
数据结果用均数
±
标准差(mean
±
sd)表示，各组间的差异比较采用graphpad prism 7 软件的one-way anova分析方法，组间比较采用dunnett’s检验，p《0.05有统计学意义。
[0092]
3实验结果
[0093]
经过aom联合dss造模，模型组小鼠大肠部位明显形成一定数量息肉，而给予落新苷或联合给予落新妇苷和马钱苷均能显著抑制息肉的生成，明显减少息肉个数，缩小息肉体积。落新妇苷对息肉抑制率为54.84％，落新妇苷和马钱苷联合使用后对息肉抑制率为64.52％(表 3和图4)。
[0094]
表3：受试药对小鼠大肠腺瘤个数的影响
[0095][0096]
###
p《0.001，与空白组相比；
*
p《0.05，
**
p《0.01与模型组相比。