一种药物组合及其用途的制作方法

1.本发明属于医药领域，具体涉及一种包含胚胎外胚层发育(eed)抑制剂和一种或多种抗癌剂的药物组合物，以及该组合物治疗疾病的用途，本发明还涉及包含该组合的药物组合物或试剂盒。


背景技术：

2.增殖性疾病对现代社会构成严重威胁。癌性生长由于其独特的特征，无法控制的细胞增殖、侵入局部甚至远程组织的能力、缺乏分化、缺乏可检测的症状以及缺乏有效的治疗和预防，对现代医学提出了严峻的挑战。全世界每年有超过1000万人被诊断出患有癌症，癌症每年导致600万人死亡，占全球死亡人数的12％。
3.已经开发了许多针对不同靶点的癌症治疗药物，包括靶向药物(例如，针对胚胎外胚层发育(eed)的药物、alk、cdk4/6、mek、mdm2、hdac、pd-1、parp、vegf、bcr-abl、bcl-2抑制剂等)，然而，对于哪些特定的靶向药物和哪些特定结构的化合物在癌症治疗中更有效，仍然存在很大的不确定性。此外，一些单独使用的药物往往存在药效不足、剂量过大、耐药问题等问题。与单独使用药物相比，药物组合物具有许多潜在的优势。特别是针对多个不同靶点的药物组合可以减少每种药物的剂量，避免出现单药耐药，经过精心筛选的组合可以进一步产生协同效应，从而提高癌症治疗的有效性。
4.因此，克服靶向药物以及其他抗癌试剂的耐药性，提高疗效是药物研发的主要目标，癌症治疗领域持续的迫切需要提高单药和药物组合物的疗效和/或降低耐药性。


技术实现要素：

5.一方面，本发明提供了一种药物组合，其包含胚胎外胚层发育(eed)抑制剂和一种或多种抗癌剂。
6.另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明的药物组合，以及任选的药学上可接受的载体。
7.另一方面，本发明提供了一种用于治疗或抑制个体的癌症、降低其严重性、降低其风险或抑制其转移的方法，包括给予个体治疗有效量的eed抑制剂，以及任选地治疗有效量的一种或多种抗癌剂。
8.另一方面，本发明提供了单独使用eed抑制剂或与一种或多种抗癌试剂组合使用，用于治疗或抑制癌症、降低其严重性、降低其风险或抑制其在个体中的转移。
9.另一方面，本发明提供了单独使用eed抑制剂或与一种或多种抗癌试剂组合使用eed抑制剂在制备用于治疗或抑制癌症、降低其严重性、降低其风险或抑制其在个体中的转移的药物中的应用。
10.另一方面，本发明提供了一种试剂盒，包括：
11.(a)第一容器中的第一组分，所述第一组分包含一种eed抑制剂，以及任选的药学上可接受的载体；
12.(b)第二容器中的第二组分，该第二组分包含抗癌试剂，以及任选的药学上可接受的载体；和
13.(c)任选的，说明书。
14.优选地，上述的一种或多种抗癌试剂选自alk抑制剂、bcr-abl抑制剂、mdm2抑制剂、bcl-2抑制剂及其他抑制剂。
附图说明
15.图1显示化合物73在bap1 mut间皮瘤pdx模型中显示出抗肿瘤活性。
16.图2显示了在bap1突变的间皮瘤pdx模型中，化合物73与化合物a-1组合的协同抗肿瘤作用。
17.图3显示了化合物73与化合物2-5组合在bap1突变间皮瘤pdx模型中的协同抗肿瘤作用。
18.图4显示化合物73在nci-h226(bap1
mut
、cdkn2a
del
、fgfr
high
)异种移植模型中表现出抗肿瘤活性。
19.图5显示了化合物73与化合物2-5组合在nci-h226(bap1
mut
,cdkn2a
del
,fgfr
high
)异种移植模型中的协同抗肿瘤作用。
20.图6显示了化合物73联合化合物c在皮下恶性胸膜间皮瘤(mpm)pdx模型(fgfr1
high
；bap1
mut
)中的协同抗肿瘤作用。
21.图7显示在皮下恶性胸膜间皮瘤(mpm)pdx模型(fgfr1
high
；bap1
mut
)中，在化合物73和化合物c治疗下小鼠的体重变化(g)。
22.图8显示了化合物73与化合物c组合在皮下bap1突变间皮瘤pdx模型中的协同抗肿瘤作用。
23.图9显示了经化合物73和化合物c处理后皮下bap1突变间皮瘤pdx模型中小鼠的体重变化(％)。
24.图10显示了化合物73和化合物c在h226(bap1mut,uhrf1high,tp53wt cdkn2adel,fgfrhigh)皮下间皮瘤异种移植模型中的体内抗肿瘤活性。
25.图11显示了经化合物73和化合物c处理后h226(bap1mut、uhrf1high、tp53wt、cdkn2adel、fgfrhigh)皮下间皮瘤异种移植模型中小鼠的体重变化(％)。
26.图12显示了化合物c和化合物73在nci-h28(x1)(bap1
mut
,uhrf1
high
,tp53
wt
,cdkn2a
del
,fgfr
low
,nf2
wt
)皮下间皮瘤异种移植模型中的体内抗肿瘤活性。
27.图13显示了化合物c和化合物73在皮下22rv1前列腺异种移植模型中的体内抗肿瘤活性。
28.图14显示经化合物c和化合物73处理后在皮下22rv1前列腺异种移植模型小鼠的体重变化(％)。
29.图15显示了化合物c和化合物73在皮下lncap前列腺异种移植模型中的体内抗肿瘤活性。
30.图16显示了化合物73和化合物4在ezh2突变bcl2易位dlbcl细胞系(karpas-422)中的体外抗增殖活性。
31.图17显示了化合物73和化合物4在ezh2突变bcl2易位dlbcl细胞系(su-dhl-6)中
的体外抗增殖活性。
32.图18显示了化合物73和化合物4在karpas-422皮下dlbcl异种移植模型中的体内抗肿瘤活性。
具体实施方式
33.除非下文另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的相同含义。对本文所用技术的引用旨在指代本领域中普遍理解的技术，包括对于本领域技术人员而言的那些明显的变化或技术的等效替换。尽管相信以下术语为本领域技术人员所熟知，但提出以下定义以更好地解释本发明。
34.如本文所用，术语“包括(including)”、“包含(comprising)”、“具有(having)”或“包含(containing)”及其他变体是包含性或开放性的，并且不排除其他未列出的元素或方法步骤。
35.在描述本发明的上下文中(尤其是在权利要求书的上下文中)使用的术语“一个(a)”、“一个(an)”、“该(the)”和类似的术语应被解释为涵盖单数和复数，除非另有说明。除非本文另有说明，否则本文中数值范围的列举仅意在用作单独提及落入该范围内的每个单独值的速记方法，并且每个单独的值被并入说明书中，就好像其在本文中单独列举一样。本文提供的任何以及所有实施例或示例性语言(例如，“例如”)的使用旨在更好地说明本发明，而不是对本发明范围的限制，除非另有声明。说明书中的任何语言都不应被解释为指示任何未要求保护的元素对于本发明的实践是必不可少的。
36.如本文所用，“eed”是指胚胎外胚层发育蛋白，其在许多癌症中过表达，包括但不限于乳腺癌、前列腺癌和肝细胞癌。参见moritz and trievel,j.biol.chem.293(36):13805
–
13814(2018)。
37.如本文所用，“alk”是指间变性淋巴瘤激酶，“alk抑制剂”是指对alk具有抑制作用的制剂。在一些实施方案中，alk抑制剂还对一种或多种其他靶标(例如，fak(粘附斑激酶)和/或ros1(人体内由ros1原癌基因编码的酪氨酸蛋白激酶))具有抑制作用。
38.如本文所用，“bcr-abl抑制剂”是指靶向阿贝尔森小鼠白血病(abl)和断点簇区(bcr)融合基因的药剂。
39.如本文所用，“mdm2抑制剂”是指靶向鼠双微体2(mdm2)蛋白的药剂。
40.如本文所用，“bcl-2”是调节bcl-2蛋白家族的创始成员，其通过诱导(促凋亡)或抑制(抗凋亡)凋亡来调节细胞死亡(凋亡)。
41.如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”、“治疗(treatment)”等是指消除、减少或改善疾病或病症，和/或与之相关的症状。尽管不排除，但治疗疾病或病症并不需要完全消除与之相关的疾病、病症或症状。术语“治疗(treat)”和同义词考虑向需要这种治疗的受试者施用治疗有效量的本公开化合物。治疗可以针对症状进行，例如，抑制症状，可以在短期内生效，可以在中期进行，或者可以是长期治疗，例如在维持治疗的背景下。
42.如本文所用，术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”和“预防(prevention)”是指预防疾病或病症和/或其伴随症状的发作或阻止受试者获得疾病的方法。如本文所用，“预防(prevent)”、“预防(preventing)”和“预防(prevention)”还包括延迟疾病和/或其伴随症状的发作和降低受试者患疾病的风险。术语“预防(prevent)”、“预防(preventing)”和“预防(prevention)”可以包括“预防性治疗”，其是指降低在受试者中再次发展疾病或病症或先前控制的疾病或病症复发的可能性，在没有、但有风险或易患疾病或病症、或疾病或病症复发的受试者中。
43.如本文所用，术语“协同作用”是指两种治疗剂的作用，例如，减缓增殖性疾病，特别是癌症或其症状的疾病进展，其大于所施用的每种药物单用的简单相加。例如，可以使用本领域公知的各种方法，例如在本发明的实施例中列出的那些来计算协同效应。
44.如本文所用的术语“卤素”本身或作为另一基团的一部分是指-cl、-f、-br或-i。
45.如本文所用的术语“硝基”本身或作为另一基团的一部分是指-no2。
46.如本文所用的术语“氰基”本身或作为另一基团的一部分是指-cn。
47.如本文所用的术语“羟基”本身或作为另一基团的一部分是指-oh。
48.如本文所用的术语“烷基”，单独或作为另一基团的一部分，是指含有1至12个碳原子(即c
1-12
烷基)或指定数目的碳原子的未取代的直链或支链脂肪烃，例如，c1烷基如甲基、c2烷基如乙基、c3烷基如正丙基或异丙基、c
1-3
烷基如甲基、乙基、正丙基或异丙基等。在一个实施方案中，烷基是c
1-4
烷基，c
1-12
烷基的非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、异丁基、3-戊基、己基、庚基、辛基、壬基和癸基。c
1-4
烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基和异丁基。
49.如本文所用的术语“烯基”本身或作为另一基团的一部分是指含有一个、两个或三个碳-碳双键的烷基。在一个实施方案中，烯基是c
2-c6烯基。在另一个实施方案中，烯基是c
2-c4烯基。在另一个实施方案中，烯基具有一个碳-碳双键，非限制性示例性烯基包括乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、仲丁烯基、戊烯基和己烯基。
50.如本文所用的术语“炔基”本身或作为另一基团的一部分是指含有一个、两个或三个碳-碳三键的烷基。在一个实施方案中，炔基是c
2-c6炔基。在另一个实施方案中，炔基是c
2-c4炔基。在另一个实施方案中，炔基具有一个碳-碳三键。非限制性示例性炔基包括乙炔基、丙炔基、丁炔基、2-丁炔基、戊炔基和己炔基。
51.如本文所用的术语“卤代烷基”本身或作为另一基团的一部分是指被一个或多个氟、氯、溴和/或碘原子取代的烷基。在一个实施方案中，烷基被一个、两个或三个氟和/或氯原子取代。在另一个实施方案中，烷基被一个、两个或三个氟原子取代。在另一个实施方案中，烷基是c
1-c6烷基。在另一个实施方案中，烷基是c
1-c4烷基。在另一个实施方案中，烷基是c1或c2烷基。非限制性示例性卤代烷基包括氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、五氟乙基、1,1-二氟乙基、2,2-二氟乙基、2,2,2-三氟乙基、3,3,3-三氟丙基、4,4,4-三氟丁基和三氯甲基基团。
52.如本文所用的术语“烷氧基”本身或作为另一基团的一部分是指连接到末端氧原子的烷基。在一个实施方案中，烷基是c
1-c6烷基并且所得烷氧基因，此被称为“c
1-c6烷氧基”。在另一个实施方案中，烷基是c
1-c4烷基。非限制性示例性烷氧基包括甲氧基、乙氧基和叔丁氧基。
53.如本文所用的术语“环烷基”，单独或作为另一基团的一部分，是指饱和或部分不饱和(含有一个或两个双键)环状脂肪烃，其包含1或2个具有3至12个碳原子的环或标明碳原子数(即，c
3-12
环烷基)。在一个实施方案中，环烷基具有两个环。在一个实施方案中，环烷基具有一个环。在另一个实施方案中，环烷基选自c
3-8
环烷基。在另一个实施方案中，环烷基
选自c
3-6
环烷基。环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、降冰片基、十氢萘基、金刚烷基、环己烯基和环戊烯基。
54.如本文所用的术语“杂环”或“杂环基”，单独或作为另一基团的一部分，是指饱和或部分不饱和(例如，包含一个或两个双键)环状基团，其包含1、2或3个具有3至14个环成员(即3至14元杂环基)，其中环之一的至少一个碳原子被杂原子取代。每个杂原子独立地选自氧原子、硫原子(包括亚砜和砜)和/或氮原子(可以被氧化或季铵化)。术语“杂环基”旨在包括其中环中的-ch
2-被-c(＝o)-取代的基团，例如环状脲基(例如2-咪唑烷酮)和环状酰胺基(例如β-内酰胺,γ-内酰胺,δ-内酰胺,ε-内酰胺)和哌嗪-2-酮。在一个实施方案中，杂环基是包含1个环和1或2个氧和/或氮原子的3至8元环状基团。在一个实施方案中，杂环基是包含1个环和1或2个氧和/或氮原子的4、5或6元环状基团。在一个实施方案中，杂环基是包含1个环和1或2个氧和/或氮原子的4或6元环状基团。杂环基可以通过任何可用的碳或氮原子连接到分子的其余部分。杂环基的非限制性实例包括二恶烷基、四氢吡喃基、2-氧代吡咯烷-3-基、哌嗪-2-酮、哌嗪-2,6-二酮、2-咪唑啉酮、哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基和二氢吲哚基。
55.如本文所用的术语“芳基”本身或作为另一基团的一部分是指具有六至十四个碳原子的芳环系统，例如，c
6-c
14
芳基。非限制性的示例性芳基包括苯基(缩写为“ph”)、萘基、菲基、蒽基、茚基、薁基、联苯基、联苯烯基和芴基。在一个实施方案中，芳基是苯基或萘基。在另一个实施方案中，芳基是苯基。
56.如本文所用的术语“杂芳基”本身或作为另一基团的一部分是指具有5至14个环成员的单环和双环芳环系统，例如，一个5至14元杂芳基，包括一个、两个、三个或四个杂原子。每个杂原子独立地是氧、硫或氮。在一个实施方案中，杂芳基具有三个杂原子。在另一个实施方案中，杂芳基具有两个杂原子。在另一个实施方案中，杂芳基具有一个杂原子。在另一个实施方案中，杂芳基是5至10元杂芳基。在另一个实施方案中，杂芳基具有5个环原子，例如噻吩基，一种具有四个碳原子和一个硫原子的5元杂芳基。在另一个实施方案中，杂芳基具有6个环原子，例如吡啶基，即具有五个碳原子和一个氮原子的6元杂芳基。非限制性示例性杂芳基包括噻吩基、苯并[b]噻吩基、萘并[2,3-b]噻吩基、噻蒽基、呋喃基、苯并呋喃基、吡喃基、异苯并呋喃基、苯并恶唑基、色烯基、呫吨基、2h-吡咯基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、异吲哚基、3h-吲哚基、吲哚基、吲唑基、嘌呤基、异喹啉基、喹啉基、酞嗪基、萘啶基、肉桂基、喹唑啉基、蝶啶基、4a h-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、菲啶基、吖啶基、嘧啶基、菲咯啉基、吩嗪基、噻唑基、异噻唑基、吩噻唑基、异恶唑基、呋喃基和吩恶嗪基。在一个实施方案中，杂芳基选自噻吩基(例如，噻吩-2-基和噻吩-3-基)、呋喃基(例如，2-呋喃基和3-呋喃基)、吡咯基(例如，1h-吡咯-2-基和1h-吡咯-3-基)、咪唑基(例如2h-咪唑-2-基和2h-咪唑-4-基)、吡唑基(例如1h-吡唑-3-基、1h-吡唑-4-基和1h-吡唑-5-基),吡啶基(例如,吡啶-2-基,吡啶-3-基和吡啶-4-基),嘧啶基(例如，嘧啶-2-基、嘧啶-4-基和嘧啶-5-基)、噻唑基(例如噻唑-2-基、噻唑-4-基和噻唑-5-基)、异噻唑基(例如异噻唑-3-基、异噻唑-4-基和异噻唑-5-基)、恶唑基(例如，恶唑-2-基、恶唑-4-基和恶唑-5-基)和异恶唑基(例如，异恶唑-3-基、异恶唑-4-基和异恶唑-5-基)。术语杂芳基还包括n氧化物。非限制性示例性n-氧化物是吡啶基n-氧化物。
[0057]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“羧基”是指式-c(＝o)oh的基团。
[0058]
单独使用或作为另一基团的一部分使用的术语“氨基”是指式-nr
55ar55b
的基团，其中r
55a
和r
55b
独立地为氢、任选取代的烷基、卤代烷基、(羟基)烷基、(烷氧基)烷基，(氨基)烷基、杂烷基、任选取代的环烷基、任选取代的杂环、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、(芳基)烷基、(环烷基)烷基、(杂环)烷基或(杂芳基)烷基。
[0059]
本发明的组合包括通过使一个或多个原子被具有不同原子质量或质量数的原子取代而被同位素标记(即，放射性标记)的任何本发明化合物。可以结合到所公开化合物中的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素，例如分别为2h(或者氘(d)),3h,
11
c,
13
c,
14
c,
15
n,
18
o,
17
o,
31
p,
32
p,
35
s,
18
f,和
36
cl,例如,3h,
11
c,和
14
c.在一个实施方案中，提供了一种化合物，其中在本发明化合物内的一个位置处的基本上所有原子都被具有不同原子质量或质量数的原子取代。在另一个实施方案中，提供了一种化合物，其中在本发明的化合物内的一个位置处的基本上所有原子都被氘原子取代，例如-ch3基团的所有氢原子被氘原子取代以得到-cd3。在另一个实施方案中，提供了一种化合物，其中本发明化合物内的一个位置处的部分原子被替换，即本发明化合物在一个位置富集具有不同原子质量或质量数的原子。在另一个实施方案中，提供了一种化合物，其中本发明化合物的原子没有被具有不同原子质量或质量数的原子取代。本发明的同位素标记的化合物可以通过本领域已知的方法制备。
[0060]
本发明组合中的化合物可以含有一个或多个不对称中心，因此可以产生对映异构体、非对映异构体和其他立体异构形式。本发明包括使用所有这些可能的形式，以及它们的外消旋和拆分形式及其混合物。本发明可以根据本领域已知的方法分离单独的对映异构体。当本文所述的化合物包含烯属双键或其他几何不对称中心时，除非另有说明，否则它们旨在包括e和z几何异构体。本发明还包括所有互变异构体。
[0061]
如本文所用，术语“立体异构体”是单个分子的所有异构体的通用术语，其仅在原子的空间上方向不同。它包括具有多个手性中心但彼此不是镜像的化合物的对映异构体和异构体(非对映异构体)。
[0062]
术语“手性中心”或“不对称碳原子”是指连接有四个不同基团的碳原子。
[0063]
术语“对映异构体(enantiomer)”和“对映异构体(enantiomeric)”是指不能叠加在其镜像上并因此具有光学活性的分子，其中对映异构体使偏振光平面沿一个方向旋转，其镜像化合物使偏振光平面沿相反方向旋转。
[0064]
术语“外消旋”是指等份对映异构体的混合物并且该混合物是光学惰性的。
[0065]
术语“绝对构型”是指手性分子实体(或基团)的原子的空间排列及其立体化学描述，例如r或s。
[0066]
说明书中使用的立体化学术语和惯例同pure&appl.chem68:2193(1996)，除非另有说明。
[0067]
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”包括化合物的酸加成盐和碱加成盐。
[0068]
合适的酸加成盐由形成无毒盐的酸形成。实例包括乙酸盐、己二酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、碳酸氢盐/碳酸盐、硫酸氢盐/硫酸盐、硼酸盐、樟脑磺酸盐、柠檬酸盐、环己基氨基磺酸盐、乙二磺酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、富马酸盐、葡庚糖酸盐、葡糖酸盐、葡萄糖醛酸盐、六氟磷酸盐、苯甲酸盐、盐酸盐/氯化物、氢溴酸盐/溴化物、氢碘酸盐/碘酸盐、羟乙基磺酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、甲基硫酸盐、萘酸盐、
2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、乳清酸盐、草酸盐、棕榈酸盐、双羟萘酸盐、磷酸盐/磷酸氢盐/磷酸二氢盐、焦谷氨酸盐、醛糖酸盐、硬脂酸盐、琥珀酸盐、单宁酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐、三氟乙酸盐和异叶酸盐。
[0069]
合适的碱加成盐由形成无毒盐的碱形成。实例包括铝盐、精氨酸盐、苄青霉素盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、甘氨酸盐、赖氨酸盐、镁盐、葡甲胺盐、乙醇胺盐、钾盐、钠盐、氨丁三醇盐和锌盐.
[0070]
有关合适盐的综述，请参见stahl and wermuth(wiley-vch,2002)“handbook of pharmaceutical salts:properties,selection,and use”。制备本发明化合物的药学上可接受的盐的方法是本领域技术人员已知的
[0071]
如本文所用，术语“溶剂化物”是通过本发明化合物与溶剂分子例如二溶剂化物、单溶剂化物或半溶剂化物的组合、物理结合和/或溶剂化形成的物质，其中溶剂分子与本发明化合物的比例分别为约2:1、约1:1或约1:2。这种物理键合在不同程度上涉及离子化和共价键合(包括氢键合)。在某些情况下(例如，当一种或多种溶剂分子结合到结晶固体的晶格中时)，可以分离溶剂化物。因此，溶剂化物包括溶液相和可分离的溶剂化物。本发明的化合物可以与药学上可接受的溶剂(例如水、甲醇和乙醇)呈溶剂化形式，并且本技术旨在涵盖本发明化合物的溶剂化和非溶剂化形式。
[0072]
一种溶剂化物是水合物。“水合物”涉及特定的溶剂合物子集，其中溶剂分子是水。溶剂化物通常以药理学等效物的形式起作用。溶剂化物的制备是本领域已知的，参见例如，m.caira et al,j.pharmaceut.sci.,93(3):601-611(2004)，其描述了氟康唑与乙酸乙酯和水的溶剂化物的制备。van tonder et al,aaps pharm.sci.tech.,5(1):article 12(2004)和a.l.bingham et al,chem.commun,603-604(2001),描述了制备溶剂化合物、半溶剂化物、水合物等的类似方法。用于制备溶剂合物的代表性且非限制性方法包括将本发明的化合物在高于20℃至约25℃的温度下溶解在所需溶剂(有机溶剂、水或其混合物)中，然后将溶液以足以形成结晶的速度冷却，通过过滤等公知的方法分离结晶。分析技术如红外光谱可用于确认溶剂化物晶体中溶剂的存在。
[0073]
本发明上下文中的“药学上可接受的载体”是指与治疗剂一起给药的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体，并且适用于经合理的医学判断范围内接触人类和/或其他动物的组织，没有过度的毒性、刺激性、过敏反应或其他与合理的利益/风险比相对应的问题或并发症。
[0074]
可用于本发明的药物组合物或试剂盒的药学上可接受的载体包括但不限于无菌液体，例如水和油，包括衍生自石油、动物、蔬菜或合成来源的那些油，例如，花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当静脉内施用药物组合物时，水是示例性的载体，也可以使用生理盐水和葡萄糖和甘油的水溶液作为液体载体，特别是用于注射。合适的药用赋形剂包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽糖、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石粉、氯化钠、脱脂奶粉、甘油、丙二醇、水、乙醇等。根据需要，药物组合物还可以含有少量的润湿剂、乳化剂或ph缓冲剂。口服制剂可包含标准载体，例如药用级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。合适的药学上可接受的载体的例子如remington’s pharmaceutical sciences(1990)中所述。
[0075]
本发明的药物组合物和试剂盒的组分可以全身和/或局部起作用。为此目的，它们可以通过合适的途径给药，例如通过注射(例如，静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、肌肉内给
药，包括滴注)或透皮给药；或通过口服、口腔、鼻腔、经粘膜局部给药，以眼用制剂的形式或通过吸入给药。
[0076]
对于这些给药途径，本发明的药物组合物和试剂盒的组分可以以合适的剂型给药。
[0077]
剂型包括但不限于片剂、胶囊剂、锭剂、硬糖、粉剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、水性混悬剂、注射液、酏剂、糖浆剂。
[0078]
如本文所用，术语“容器”是指用于容纳药物成分的容器。该容器可用于制备、储存、运输和/或独立/批量销售，旨在包括瓶子、罐头、小瓶、烧瓶、注射器、管子(例如，用于奶油产品的那些)或任何其他用于制备、容纳、储存或分配药品的容器。
[0079]
如本文所用，术语“说明书/说明(specification/instruction)”是指插入物、标签(a tag)、标签(a label)等，其记录药物成分的信息，位于容器中。记录的信息通常由管理产品销售区域的监管机构(例如美国食品和药物管理局)确定。优选地，包装说明书具体列出了批准使用药物成分的适应症。包装说明书可以由任何材料制成，可以从中读取其中或上面的信息。优选地，包装传单是可印刷材料(例如，纸、塑料、纸板、箔、粘性纸或塑料等)，在其上可以形成(例如，印刷或应用)所需信息。
[0080]
如本文所用，术语“有效量”是指在给药后将在一定程度上缓解所治疗病症的一种或多种症状的活性成分的量。
[0081]
如本文所用，“个体”包括人类或非人类动物。示例性人类个体包括患有疾病(例如本文所述的疾病)的人类个体(称为患者)或正常个体。本发明中的“非人动物”包括所有脊椎动物，例如非哺乳动物(例如鸟类、两栖动物、爬行动物)和哺乳动物，例如非人灵长类动物、家养动物和/或驯养动物(例如绵羊、狗、猫、牛、猪等)。
[0082]
如本文所用，“癌症转移”是指癌症从其原始部位扩散(转移)到身体的另一个区域。几乎所有的癌症都有转移的可能性。是否会发生转移取决于多种肿瘤细胞因素(包括癌症类型、肿瘤细胞的成熟度(分化)、癌症的位置和年龄以及其他尚未完全了解的因素)之间的复杂相互作用。转移有三种方式：从肿瘤局部扩散到周围组织，通过血流到达远处，或通过淋巴系统到达邻近或远处的淋巴结。每种癌症都具有代表性的扩散途径。肿瘤根据其原发部位命名(例如，已转移至大脑的乳腺癌称为转移至大脑的转移性乳腺癌)。
[0083]
如本文所用，“抗性”是指癌细胞对化学疗法有抗性。癌细胞可能通过一系列机制获得对化疗的耐药性，包括药物靶标的突变或过表达、药物失活或药物从细胞中清除。
[0084]
如本文所用，术语“约”包括所述数字
±
10％，因此，“大约10”意味着9到11。
[0085]
药物组合和用途
[0086]
在一个实施方案中，本发明提供了一种在个体中治疗或抑制癌症、降低其严重性、降低其风险或抑制其转移的方法，包括向个体施用治疗有效量的eed抑制剂。
[0087]
在一个实施方案中，本发明提供了eed抑制剂在个体中用于治疗或抑制癌症、降低其严重性、降低其风险或抑制其转移的用途。
[0088]
在一个实施方案中，本发明提供了eed抑制剂在制备用于治疗或抑制癌症、降低其严重性、降低其风险或抑制其在个体中的转移的药物中的用途。
[0089]
在一个实施方案中，本发明提供了一种药物组合，其包含胚胎外胚层发育(eed)抑制剂和一种或多种抗癌试剂。
[0090]
在一个优选的实施方案中，一种或多种抗癌剂选自alk抑制剂、bcr-abl抑制剂、mdm2抑制剂、bcl-2抑制剂和其他抑制剂。
[0091]
在一个优选的实施方案中，eed抑制剂是式i的化合物：
[0092][0093]
其中：
[0094]
r1是芳烷基；
[0095]
r2选自氢和c
1-c4烷基；
[0096]
r3和r4与它们所连接的碳原子一起形成式i-a、i-b或i-c的基团：
[0097][0098]
x选自-c(r
5a
)(r
5b
)-,-c(＝o)-,和-s(＝o)
2-；
[0099]r5a
和r
5b
独立的选自氢和c
1-c4烷基；
[0100]
y选自-c(r
6a
)(r
6b
)-,-s-,-o-,以及-n(r7)-；
[0101]
或者
[0102]
x和y一起形成5元亚杂芳基；
[0103]
z为-c(r
6c
)(r
6d
)
m-；
[0104]r6a
和r
6b
独立的选自氢和c
1-c4烷基；
[0105]
每个r
6c
和r
6d
独立的选自氢和c
1-c4烷基；
[0106]
m是0,1,或2；
[0107]
r7选自氢、c
1-c6烷基、c
1-c6卤代烷基、任选取代的c
3-c8环烷基、任选取代的c
4-c8杂环基、羟烷基、(烷氧基)烷基、(环烷基)烷基和(杂环)烷基；
[0108]r8a
,r
8b
和r
8c
独立地选自氢、卤素、c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、c
1-c4烷氧基、甲酰胺基、任选取代的c
3-c8环烷基、任选取代的4-至8-元杂环、(杂环)c
1-c4烷基和烷基磺酰基；
[0109]
是稠合苯基、稠合5元杂芳基或稠合6元杂芳基；
[0110]
是任选取代的稠合3至8元环烷基或任选取代的稠合4至8元杂环基；
[0111]
是任选取代的稠合4至8元杂环；和
[0112]
用表示的键连接在式i的r3位置，用“*”表示的键连接在式i的r4位置；和
[0113]
是单键或双键，
[0114]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0115]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i的化合物，其中：
[0116]
x选自-c(r
5a
)(r
5b
)-,-c(＝o)-,和-s(＝o)
2-；
[0117]
y选自-c(r
6a
)(r
6b
)-,-s-,-o-,和-n(r7)-；和
[0118]r8a
、r
8b
和r
8c
独立地选自氢、卤素、c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基、c
1-c4烷氧基和烷基磺酰基，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0119]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中r3和r4与它们所连接的碳原子一起形成式i-a、i-b或i-c的基团。
[0120]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式ii化合物：
[0121][0122]
其中r1、r2、r
8a
、r
8b
、r
8c
、x、y、z、和如式i所定义，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0123]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式iii化合物：
[0124][0125]
其中l选自-c(r
8b
)＝和-n＝；r1、r2、r
8a
、r
8b
、r
8c
、x、y和z如式i所定义，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0126]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式iv化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0127][0128]
其中l选自-c(r
8b
)＝和-n＝；r1、r2、r
8a
、r
8b
、r
8c
、x、y和z如式i所定义。
[0129]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式v化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0130][0131]
其中l选自-c(r
8b
)＝和-n＝；r1、r2、r
8a
、r
8b
、r
8c
、x、y和z如式i所定义。
[0132]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式vi化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0133][0134]
其中l选自-c(r
8b
)＝和-n＝；r1、r2、r
8a
、r
8b
、r
8c
、x、y和z如式i所定义。
[0135]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式iii-vi中任一个的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中l是-c(r
8b
)＝。
[0136]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式iii-vi中任一个的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中l是-n＝。
[0137]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-vi中任何一个化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中r
8a
、r
8b
和r
8c
独立地选自氢、c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基和c
3-c6环烷基。
[0138]
在另一个实施方案中，r
8a
选自-chf2、-cf3、-ch3、-cd3和环丙基；r
8b
和r
8c
是氢。
[0139]
在另一个实施方案中，r
8a
选自-cf3或-ch3；r
8b
和r
8c
是氢。
[0140]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-vi中任一项的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中r
8a
选自c
1-c4烷基、4至8元杂环和(杂环)c
1-c4烷基；r
8b
和r
8c
是氢。在另一个实施方案中，r
8a
是c
1-c4烷基。在另一个实施方案中，r
8a
是4至8元杂环。在另一个实施方案中，r
8a
是(杂环)c
1-c4烷基。在另一个实施方案中，r
8a
选自：
[0141][0142]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式vii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0143][0144]
其中：
[0145]
l1选自-s-,-o-和-n(r
8a
)-；
[0146]
l2选自-c(r
8b
)＝和-n＝；
[0147]
l3选自-c(r
8c
)＝和-n＝；
[0148]r8a
选自氢和c
1-c4烷基；
[0149]r8b
选自氢,c
1-c4烷基和c
1-c4卤烷基；
[0150]r8c
选自氢,c
1-c4烷基和c
1-c4卤烷基；和
[0151]
r1、r2、x、y和z如式i所定义。
[0152]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式viii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0153][0154]
其中：
[0155]
l1选自-s-,-o-和-n(r
8a
)-；
[0156]
l2选自-c(r
8b
)＝和-n(r
8a
)-；
[0157]
l3选自-c(r
8c
)＝和-n＝；
[0158]r8a
选自氢和c
1-c4烷基；
[0159]r8b
选自氢,c
1-c4烷基和c
1-c4卤烷基；
[0160]r8c
选自氢,c
1-c4烷基和c
1-c4卤烷基；和
[0161]
r1、r2、x、y和z如式i所定义。
[0162]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式ix的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0163][0164]
其中：
[0165]
l1选自-s-,-o-和-n(r
8a
)-；
[0166]r8a
选自氢和c
1-c4烷基；
[0167]r8b
选自氢,c
1-c4烷基和c
1-c4卤烷基；
[0168]r8c
选自氢,c
1-c4烷基和c
1-c4卤烷基；和
[0169]
r1、r2、x、y和z如式i所定义。
[0170]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式x的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0171][0172]
其中r1、r2、x、y、z、和如式i所定义。
[0173]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xi的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0174][0175]
其中：
[0176]r8d
、r
8e
和r
8f
独立地选自氢、卤素和c
1-c4烷基；
[0177]
n是1、2或3；和
[0178]
r1、r2、x、y和z如式i所定义。
[0179]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xi-a的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0180][0181]
其中r1、r2、r
8d
、r
8e
、r
8f
、n、x、y和z如结合式xi所定义。
[0182]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xi-b的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0183][0184]
其中r1、r2、r
8d
、r
8e
、r
8f
、n、x、y和z如式xi所定义。
[0185]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0186][0187]
其中：
[0188]
l4选自-s-、-o-和-n(r
8g
)-；
[0189]r8g
选自氢、c
1-c4烷基、任选取代的c
3-c6环烷基和任选取代的4至8元杂环；
[0190]
o是0、1、2或3；
[0191]
p是0、1、2或3；
[0192]
其中o和p之和为1、2、3、4或5；和
[0193]
r1、r2、x、y和z如式i所定义。
[0194]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xii-a的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0195][0196]
其中r1、r2、l4、o、p、x、y和z如式xii所定义。
[0197]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xii-b的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0198][0199]
其中r1、r2、l4、o、p、x、y和z如式xii所定义。
[0200]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xiii的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0201][0202]
其中r1、r2、x、y、z和如式i所定义。
[0203]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xiii-a的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0204][0205]
其中r1、r2、x、y、z和如结合式i所定义。
[0206]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xiii-b的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0207][0208]
其中r1、r2,、x、y、z和如式i所定义。
[0209]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xiv的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0210][0211]
其中：
[0212]r8d
、r
8e
和r
8f
独立地选自氢和c
1-c4烷基；
[0213]
q为1、2或3；和
[0214]
r1、r2、x、y和z如式i所定义。
[0215]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xiv-a的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0216][0217]
其中r1、r2、r
8d
、r
8e
、r
8f
、q、x、y和z如式xiv所定义。在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xiv-b的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0218][0219]
其中r1、r2、r
8d
、r
8e
、r
8f
、q、x、y和z如式xiv所定义。在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xv的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0220][0221]
其中：
[0222]
l5选自-s-、-o-和-n(r
8h
)-；
[0223]r8h
选自氢、c
1-c4烷基、任选取代的c
3-c6环烷基、任选取代的4至8元杂环、-c(＝o)r
14a
和-s(＝o)2r
14b
；
[0224]r14a
和r
14b
独立地选自c
1-c6烷基和任选取代的c
3-c8环烷基；
[0225]
r为1、2或3；
[0226]
s为1、2或3；和
[0227]
r1、r2、x、y和z如式i所定义。
[0228]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xv-a的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0229][0230]
其中r1、r2、l5、r、s、x、y和z如式xv所定义。
[0231]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式xv-b的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0232][0233]
其中r1、r2、l5、r、s、x、y和z如式xv所定义。
[0234]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中z是-ch
2-。
[0235]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，或其药学上可接受的
盐或溶剂化物，其中x是-ch
2-。
[0236]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中x是-c(＝o)-。
[0237]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中x是-s(＝o)
2-。
[0238]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中y是-o-。
[0239]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中y是-n(r7)-。在另一个实施方案中，r7选自c
1-c6烷基、c
1-c6卤代烷基和任选取代的c
3-c8环烷基，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0240]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中z是-ch
2-,x是-c(＝o)-,和y是-n(r7)-在另一个实施方案中，r7选自c
1-c6烷基、c
1-c6卤代烷基和任选取代的c
3-c8环烷基。在另一个实施方案中，r7是c
1-c4烷基。在另一个实施方案中，r7选自甲基、乙基、丙基或异丙基。
[0241]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中r2是氢。
[0242]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。其中：
[0243]
r1是r
1-1:
[0244][0245]r12a
、r
12b
和r
12c
各自独立地选自氢、卤素、c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基和c
1-c4烷氧基；
[0246]
w选自-ch
2-和-c(＝o)-；和
[0247]
t是1或2。
[0248]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b，其中r1是r
1-1，r
12a
是氟；r
12b
和r
12c
独立地选自氢和氟。在另一个实施方案中，r
12a
是氟；r
12b
和r
12c
是氢。
[0249]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个的化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：
[0250]
r1是r
1-2:
[0251][0252]r12a
、r
12b
和r
12c
各自独立地选自氢、卤素、c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基和c
1-c4烷氧基；和
[0253]
t是1或2。
[0254]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，其中r1是r
1-2，r
12a
是氟；r
12b
和r
12c
独立地选自氢和氟。在另一个实施方案中，r
12a
是氟；r
12b
和r
12c
是氢。
[0255]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：
[0256]
r1是r
1-3:
[0257]
和
[0258]r12a
、r
12b
和r
12c
各自独立地选自氢、卤素、c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基和c
1-c4烷氧基。
[0259]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，其中r1是r
1-3，r
12a
是氟；r
12b
和r
12c
独立地选自氢和氟。在另一个实施方案中，r
12a
是氟；r
12b
和r
12c
是氢。
[0260]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中：
[0261]
r1是r
1-4:
[0262]
和
[0263]r12a
、r
12b
和r
12c
各自独立地选自氢、卤素、c
1-c4烷基、c
1-c4卤代烷基和c
1-c4烷氧基。
[0264]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，其中r1是r
1-4，r
12a
是氟；r
12b
和r
12c
独立地选自氢和氟。在另一个实施方案中，r
12a
是氟；r
12b
和r
12c
是氢。
[0265]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，其中r1选自：
[0266][0267]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0268]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，其中r1选自：
[0269][0270]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0271]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是式i-xi、xi-a、xi-b、xii、xii-a、xii-b、xiii、xiii-a、xiii-b、xiv、xiv-a、xiv-b、xv、xv-a或xv-b中任一个化合物，其中r1选自：
[0272][0273]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0274]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是表1中列出的任何一种或多种化合物，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0275]
表1
[0276]
[0277]
[0278]
[0279]
[0280]
[0281]
[0282]
[0283]
[0284]
[0285]
[0286]
[0287]
[0288]
[0289]
[0290]
[0291]
[0292]
[0293]
[0294]
[0295]
[0296]
[0297]
[0298]
[0299][0300]
在另一个实施例中，本公开的化合物为选自由以下组成的群组的式i化合物：
[0301]
4-乙基-12-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-7-(三氟甲基)-4,5-二氢-3h-2,4,8,11,12a-五氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-3-酮；
[0302]
12-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-4-(2,2,2-三氟乙基)-7-(三氟甲基)-4,5-二氢-3h-2,4,8,11,12a-五氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-3-酮；
[0303]
4-环丙基-12-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-7-(三氟甲基)-4,5-二氢-3h-2,4,8,11,12a-五氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-3-酮；
[0304]
12-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-4-异丙基-7-(三氟甲基)-4,5-二氢-3h-2,4,8,11,12a-五氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-3-酮；和
[0305]
11-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-6-甲基-4h-3-硫杂-2,5,10,11a-四氮杂二苯并[cd,f]薁3,3-二氧化物，
[0306]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0307]
在另一个实施方案中，eed抑制剂是如下化合物73：
[0308][0309]
12-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-4-异丙基-7-(三氟甲基)-4,5-二氢-3h-2,4,8,11,12a-五氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-3-酮，或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0310]
在一个优选的实施方案中，alk抑制剂是式(1)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0311][0312]
其中：
[0313]r1a
和r
1b
独立地选自氢、c
1-6
烷基和c
3-8
环烷基；
[0314]r2a
和r
2b
独立地选自氢、c
1-6
烷基和c
3-8
环烷基；
[0315]
r3选自氢、c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基和4-8元杂环基；
[0316]
r4选自c
1-4
烷基和c
3-6
环烷基；
[0317]
r5为卤素；
[0318]
r6选自c
1-4
烷基和c
3-6
环烷基；并且
[0319]
r7选自氢、c
1-4
烷基和c
3-6
环烷基；
[0320]
条件是当r
1a
、r
1b
、r
2a
和r
2b
各自为氢时，则r3选自c
3-6
环烷基和4-8元杂环基。
[0321]
在一个优选的实施方案中，alk抑制剂为下表2中的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0322]
表2
[0323]
[0324]
[0325]
[0326]
[0327]
[0328]
[0329][0330]
在一个优选的实施方案中，alk抑制剂是如下化合物2-5：
[0331][0332]
5-氯-n
2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯基)-n
4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)嘧啶-2,4-二胺或其药学上可接受的盐或溶剂合物。
[0333]
在一个优选的实施方案中，bcr-abl抑制剂是式(a)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0334][0335]
其中，
[0336]
r1是氢、c
1-c4烷基、c
3-c6环烷基、c
1-c4烷氧基或苯基；r2是氢、c
1-c4烷基、c
3-c6环烷基或卤素。
[0337]
在一个优选的实施方案中，bcr-abl抑制剂是具有以下结构的化合物a-1，包括任何互变异构体形式，或其药学上可接受的盐或溶剂化物：
[0338][0339]
在一个优选的实施方案中，mdm2抑制剂是下式(vi)的化合物或其药学上可接受的盐：
[0340][0341]
其中
[0342]
是
[0343]
b是
[0344]r61
是h,或未取代的c
1-4
烷基；
[0345]
n3是0,1,or 2；
[0346]r62
,r
63
,r
64
,r
65
,r
67
,r
68
,r
69
,以及r
70
独立地选自h,f,cl,ch3,和cf3；
[0347]r66
是和
[0348]r6c
和r
6d
是环b的一个碳原子上的取代基，其中
[0349]r6c
是h、c
1-3
烷基、c
1-3
亚烷基-or
6a
,or
6a
,或卤代；
[0350]r6d
是h、c
1-3
烷基、c
1-3
亚烷基-or
6a
,or
6a
,或卤代；
[0351]r6e
是—c(＝o)or
6a
,—c(＝o)nr
6ar6b
,或—c(＝o)nhso2ch3；
[0352]r6a
是h或未取代的c
1-4
烷基；并且
[0353]r6b
是h或未取代的c
1-4
烷基。
[0354]
在一些实施方案中，n3是0或1。
[0355]
在一些实施方案中，r
61
是h或ch3。
[0356]
在一些实施方案中，是h、ch3或ch2ch3。
[0357]
在一些实施方案中，r
62
是h,r
63
是f或cl,并且r
64
和r
65
是h。
[0358]
在一些实施方案中，r
67
是氟,r
68
,r
69
,以及r
70
是h,r
6c
是h、ch3、oh或卤代,并且r
6d
是h、ch3、oh或卤代。
[0359]
在一些实施方案中，mdm2抑制剂选择由下述化合物或者其药学上可接受的盐组成的组：
[0360]
[0361][0362]
在一些实施方案中，mdm2抑制剂是下式化合物或其药学上可接受的盐：
[0363][0364]
在一个优选的实施方案中，bcl-2抑制剂是下式(v)的化合物或其药学上可接受的盐：
[0365]
[0366]
或其药学上可接受的盐或溶剂合物，其中：
[0367]
a3是
[0368]
e3是n原子以及是单键；
[0369]
x
31
、x
32
和x
33
各自独立地选自由-cr
38
＝和-n＝组成的组；
[0370]r31a
和r
31b
与它们所连接的碳原子一起形成3、4或5元环烷基；
[0371]r32
选自-no2、-so2ch3和-so2cf3；
[0372]r32a
选自氢和卤素；
[0373]r33
选自-n(r
34a
)(r
34b
)；
[0374]r34a
选自任选取代的c
1-6
烷基、任选取代的c
3-6
环烷基、杂环、杂烷基、(环烷基)烷基和(杂环)烷基；
[0375]r34b
选自氢和c
1-4
烷基；
[0376]r38
选自氢和卤素。
[0377]
在一个优选的实施方案中，bcl-2抑制剂选自：
[0378][0379]
或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0380]
在一个优选的实施方案中，bcl-2抑制剂是化合物4：
[0381][0382]
在一个优选的实施方案中，所述药物组合物用于治疗或抑制癌症、降低其严重性、降低其风险或抑制其在个体中的转移，并且所述癌症优选选自膀胱癌、乳腺癌、宫颈癌、结肠癌(包括结直肠癌)、食管癌、食管鳞状细胞癌、头颈癌、肝癌、肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、肺鳞状细胞癌、间皮瘤、黑色素瘤、骨髓瘤、横纹肌肉瘤、炎性肌纤维母细胞瘤、神经涡轮增压瘤(neuroturbo chargeoma)、胰腺癌、前列腺癌、肾癌(kidney cancer)、肾细胞癌(renal cell carcinoma)、肉瘤(包括骨肉瘤)、皮肤癌、鳞状细胞癌、梭形细胞癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌、间皮瘤、神经母细胞瘤、胆管癌、平滑肌肉瘤、脂肪肉瘤、鼻咽癌肿瘤、神经内分泌癌、卵巢癌、唾液腺癌、梭形细胞癌引起的转移、间变性大细胞淋巴瘤、甲状腺未分化癌、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤和血液系统恶性肿瘤，如急性髓性白血病(aml)、急性淋巴细胞白血病(all)、弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)、滤泡性淋巴瘤(fl)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、慢性粒细胞白血病(cml)、葡萄膜黑色素瘤、胸膜间皮瘤、腹膜间皮瘤。
[0383]
在一个优选的实施方案中，癌症是间皮瘤、神经母细胞瘤、非小细胞肺癌、肺腺癌(luad)和肺鳞状细胞癌、卵巢癌、葡萄膜黑色素瘤、结肠癌和肝癌。
[0384]
在一个优选的实施方案中，癌症是间皮瘤(包括胸膜间皮瘤、腹膜间皮瘤、具有野生型bap1的间皮瘤和具有突变bap1的间皮瘤)、前列腺癌和弥漫性大b细胞淋巴瘤(dlbcl)(包括ezh2突变的dlbcl和ezh2突变bcl-2易位的dlbcl)。
[0385]
在一个优选实施例中，所述eed抑制剂与所述一种或多种抗癌剂的重量比为0.005-5000:0.005-5000，例如0.05-1500:0.005-5000、0.1-6:0.005-4、100:0.5-400、100:1-350、100:2-300、100:5-200、100:10-150、100:10-100、100:10-90或100:20-80。
[0386]
在一个优选实施例中，所述eed抑制剂与所述一种或多种抗癌剂的摩尔比为10-1:1-10，例如10:1、9:1、8:1、7:1、6:1、5:1、4:1、3:1、2:1、1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10，并且还包括任何上述值之间的范围。
[0387]
在一个优选实施例中，eed抑制剂是化合物73：
[0388]
12-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-4-异丙基-7-(三氟甲基)-4,5-二氢-3h-2,4,8,11,12a-五氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-3-酮，或其药学上可接
受的盐或溶剂化物。
[0389]
alk抑制剂是化合物2-5：
[0390]
5-氯-n
2-(2-异丙氧基-5-甲基-4-(1-(四氢-2h-吡喃-4-基)-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)苯基)-n
4-(2-(异丙基磺酰基)苯基)嘧啶-2,4-二胺或其药学上可接受的盐或溶剂合物；和/或
[0391]
bcr-abl抑制剂为具有如下结构的化合物a-1或其药学上可接受的盐或溶剂合物：
[0392][0393]
mdm2抑制剂为下式化合物c或其药学上可接受的盐：
[0394][0395]
bcl-2抑制剂为下式化合物4或其药学上可接受的盐：
[0396][0397]
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，其包含本发明的任何药物组合，以及任选的药学上可接受的载体。
[0398]
在一个优选的实施方案中，所述药物组合物可以为任何形式，例如，所述组合物为片剂、胶囊剂、颗粒剂、糖浆剂、散剂、锭剂、香囊剂、扁囊剂、酏剂、混悬剂、乳剂、溶液剂、气雾剂、软膏剂、乳膏剂和注射剂。
[0399]
药物组合通常与药物载体混合给药，以得到根据预期给药途径和标准药物实践选择的药物组合物，根据本发明使用的药物组合物以常规方式使用一种或多种生理上可接受
的载体配制，所述载体包括促进药物组合加工的赋形剂和/或助剂。
[0400]
这些药物组合物可以例如通过常规的混合、溶解、制粒、糖衣丸制造、乳化、包封、包埋或冻干工艺来制造。适当的配方取决于所选择的给药途径。当口服给药治疗有效量的药物组合时，组合物通常为片剂、胶囊、散剂、溶液或酏剂的形式。当以片剂形式给药时，组合物还可以含有固体载体，例如明胶或佐剂。片剂、胶囊剂和散剂含有约0.01％至约95％，优选约1％至约50％的药物组合。当以液体形式给药时，可以添加液体载体，例如水、石油或动物或植物来源的油。组合物的液体形式可进一步包含生理盐水溶液、葡萄糖或其他糖类溶液，或乙二醇。当以液体形式给药时，组合物含有按重量计约0.1％至约90％，优选约1％至约50％的药物组合。
[0401]
当治疗有效量的药物组合通过静脉内、皮肤或皮下注射给药时，该组合物为无热原、肠胃外可接受的水溶液形式。适当考虑ph、等渗性、稳定性等的此类肠胃外可接受溶液的制备在本领域技术范围内。用于静脉内、皮肤或皮下注射的优选组合物通常包含等渗载体。
[0402]
药物组合可以容易地与本领域熟知的药学上可接受的载体组合，标准药物载体记载于remington's pharmaceutical sciences,mack publishing co.,easton,pa,19th ed.1995。这样的载体能够将活性剂配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液、悬浮液等，以供待治疗的受试者口服摄入。口服使用的药物制剂可以通过将药物组合加入固体赋形剂中，任选研磨所得混合物，并加工颗粒混合物，如果需要，在加入合适的助剂后，获得片剂或糖衣丸芯。合适的赋形剂包括例如填充剂和纤维素制剂。如果需要，可以添加崩解剂。
[0403]
可以将药物组合配制成通过注射，例如通过快速推注或连续输注进行肠胃外给药。注射用制剂可以以单位剂型存在，例如，在安瓿或多剂量容器中，并添加防腐剂。组合物可以采取诸如在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且可以包含配方剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。
[0404]
用于肠胃外给药的药物组合物包括水溶性形式的活性剂水溶液。此外，可以将药物组合的悬浮液制备成合适的油性注射悬浮液。合适的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油或合成脂肪酸酯。水性注射悬浮液可以包含增加悬浮液粘度的物质。任选地，悬浮液还可以包含合适的稳定剂或用于增加化合物溶解度并允许制备高浓度溶液的试剂。或者，本发明的组合物可以是粉末形式，用于在使用前与合适的载体(例如，无菌无热原水)混合。
[0405]
药物组合还可以配制成直肠组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，例如，含有常规栓剂基质。除了前面描述的制剂，本公开的化合物也可以配制成长效制剂。这种长效制剂可以通过植入(例如，皮下或肌内)或通过肌内注射给药。因此，例如，本公开的化合物可以与合适的聚合或疏水材料(例如，作为可接受油中的乳液)或离子交换树脂一起配制。
[0406]
特别地，药物组合可以以含有赋形剂如淀粉或乳糖的片剂形式，或以单独或与赋形剂混合的胶囊或卵形剂形式，或以酏剂或含有调味剂或着色剂的悬浮液形式口服、含服或舌下给药。这种液体制剂可以用药学上可接受的添加剂如悬浮剂来制备。药物组合也可以肠胃外注射，例如静脉内、肌肉内、皮下或冠状动脉内。对于肠胃外给药，药物组合通常以无菌水溶液的形式使用，该水溶液可以包含其他物质，例如盐或单糖，例如甘露醇或葡萄糖，以使溶液与血液等渗。
[0407]
在一个优选的实施方案中，本发明提供了一种在个体中治疗或抑制癌症、降低其严重性、降低其风险或抑制其转移的方法，包括向个体施用治疗有效量的eed抑制剂，并且任选地给予治疗有效量的一种或多种抗癌剂。
[0408]
在一个优选的实施方案中，一种或多种抗癌试剂选自alk抑制剂、bcr-abl抑制剂、mdm2抑制剂、bcl-2抑制剂和其他抑制剂。
[0409]
在一个优选的实施方案中，eed、alk、bcr-abl、mdm2和/或bcl-2抑制剂如上所定义并且癌症如上所定义。
[0410]
在一个优选的实施方案中，eed抑制剂以约0.005mg/日至约5000mg/日的量施用，例如约0.005,0.05,0.5,5,10,20,30,40,50,100,150,200,250,300,350,400,450,500,550,600,650,700,750,800,850,900,950,1000,1500,2000,2500,3000,3500,4000,4500或5000mg/日。
[0411]
在一个优选实施例中，eed抑制剂以约1ng/kg至约200mg/kg、约1μg/kg至约100mg/kg或约1mg/kg至约50mg/kg每单位剂量施用，例如，以约1μg/kg、约10μg/kg、约25μg/kg、约50μg/kg、约75μg/kg、约100μg/kg、约125μg/kg、约150μg/kg、约175μg/kg、约200μg/kg、约225μg/kg、约250μg/kg、约275μg/kg、约300μg/约325μg/kg、约350μg/kg、约375μg/kg、约400μg/kg、约425μg/kg、约450μg/kg、约475μg/kg、约500μg/kg、约525μg/kg、约550μg/kg、约575μg/kg、约600μg/kg、约625μg/kg、约650μg/kg、约675μg/kg、约700μg/kg、约725μg/kg、约750μg/kg、约775μg/kg、约800μg/kg、约825μg/kg、约850μg/kg、约875μg/kg、约900μg/kg、约925μg/kg、约950μg/kg、约975μg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约60mg/kg、约70mg/kg、约80mg/kg、约90mg/kg、约100mg/kg、约125mg/kg、约150mg/kg、约175mg/kg、约200mg/kg每单位剂量，并且每天以一个或多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)单位剂量给药。
[0412]
在一个优选的实施方案中，一种或多种抗癌剂以0.005mg/日至约5000mg/日的量施用，例如约0.005,0.05,0.5,5,10,20,30,40,50,100,150,200,250,300,350,400,450,500,550,600,650,700,750,800,850,900,950,1000,1500,2000,2500,3000,3500,4000,4500或5000mg/日.
[0413]
在一个优选的实施方案中，一种或多种抗癌剂以约1ng/kg至约200mg/kg、约1μg/kg至约100mg/kg的量施用，或每单位剂量约1mg/kg至50mg/kg，例如，以约1μg/kg、约10μg/kg、约25μg/kg、约50μg/kg，约75μg/kg、约100μg/kg、约125μg/kg、约150μg/kg、约175μg/kg、约200μg/kg、约225μg/kg、约250μg/kg、约275μg/kg、约300μg/kg、约325μg/kg、约350μg/kg、约375μg/kg、约400μg/kg、约425μg/kg、约450μg/kg、约475μg/kg、约500μg/kg、约525μg/kg、约550μg/kg、约575μg/kg、约600μg/kg、约625μg/kg、约650μg/kg、约675μg/kg，约700μg/kg、约725μg/kg、约750μg/kg、约775μg/kg、约800μg/kg、约825μg/kg、约850μg/kg、约875μg/kg、约900μg/kg，约925μg/kg，约950μg/kg，约975μg/kg，约1mg/kg、约5mg/kg、约10mg/kg、约15mg/kg、约20mg/kg、约25mg/kg、约30mg/kg、约35mg/kg、约40mg/kg、约45mg/kg、约50mg/kg、约60mg/kg、约70mg/kg、约80mg/kg、约90mg/kg、约100mg/kg、约125mg/kg、约150mg/kg、约175mg/kg、约200mg/kg每单位剂量施用，并且每天以一种或多种(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、或10)单位剂量给药。
[0414]
在一个优选的实施方案中，eed抑制剂和一种或多种抗癌剂一起、同时、顺序或交
替施用。
[0415]
在一个优选的实施方案中，eed抑制剂和所述一种或多种抗癌剂连续施用至少3天，至少4天，至少5天、至少6天、至少7天，至少8天，至少9天，至少10天，至少11天，至少12天，至少13天，至少14天，至少15天，至少16天，至少17天，至少18天，至少19天，至少20天，至少21天，至少22天，至少23天，至少24天，至少25天，至少28天，至少30天、至少35天、至少40天、至少45天或至少50天
[0416]
在一个优选的实施方案中，eed抑制剂和所述一种或多种抗癌剂被施用1个或多个(例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)疗程，其中每个疗程持续至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天，至少11天、至少12天、至少13天、至少14天、至少15天、至少16天、至少17天、至少18天、至少19天、至少20天、至少21天、至少22天、至少23天、至少24天、至少25天、至少30天、至少35天、至少40天、至少45天、或至少50天；每两个疗程间隔0天、1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、2周、3周或4周。
[0417]
在一个优选的实施方案中，当有多个疗程时，在每个疗程中施用的eed抑制剂和/或抗癌剂的量相同或不同。在一个更优选的实施方案中，alk抑制剂和/或抗癌剂在之前的治疗过程中的给药量为1-10倍，优选1-5倍，例如1.5、2、2.5、3、3.5、4、4.5或5倍随后的治疗过程中给药的量。
[0418]
在一个优选的实施方案中，eed抑制剂和一种或多种抗癌剂通过相同的(例如口服)或不同的途径(例如分别口服和肠胃外(例如注射))施用。
[0419]
在一个优选的实施方案中，与单独施用或不施用一种或多种eed抑制剂时的抗癌试剂的剂量相比，以较低的剂量施用抗癌试剂。
[0420]
在一个优选的实施方案中，eed抑制剂增强抗癌试剂治疗癌症的疗效和/或降低抗癌试剂治疗癌症的副作用。
[0421]
在一个优选的实施方案中，eed抑制剂和一种或多种抗癌试剂(例如，选自alk抑制剂、bcr-abl抑制剂、mdm2抑制剂、bcl-2抑制剂和其他抑制剂)实现协同作用(协同)治疗癌症和/或减少抗癌试剂治疗癌症的副作用。
[0422]
在一个优选的实施方案中，本发明提供了单独使用eed抑制剂或与一种或多种抗癌试剂(例如，选自alk抑制剂、bcr-abl抑制剂、mdm2抑制剂、bcl-2抑制剂和其他抑制剂)用于治疗或抑制癌症、降低其严重程度、降低其风险或抑制其在个体中的转移的应用。
[0423]
在一个优选的实施方案中，eed、alk、bcr-abl、mdm2和/或bcl-2抑制剂如上所定义并且癌症如上所定义。
[0424]
在一个优选的实施方案中，个体患有晚期癌症。
[0425]
在一个优选的实施方案中，个体患有难治性癌症、复发性癌症或耐药性癌症。
[0426]
在一个优选的实施方案中，本发明提供了单独使用eed抑制剂或与一种或多种抗癌试剂(例如，选自alk抑制剂、bcr-abl抑制剂、mdm2抑制剂、bcl-2抑制剂和其他抑制剂)在制造用于治疗或抑制癌症、降低其严重性、降低其风险或抑制其在个体中转移的药物中的应用。
[0427]
在一个优选的实施方案中，eed、alk、bcr-abl、mdm2和/或bcl-2抑制剂如上所定义并且癌症如上所定义。
[0428]
在一个优选的实施方案中，个体患有晚期癌症。
[0429]
在一个优选的实施方案中，个体患有难治性癌症、复发性癌症或耐药性癌症。
[0430]
在另一个实施方案中，本发明提供了一种试剂盒，包括：
[0431]
(a)第一容器中的第一组分，所述第一组分包含一种eed抑制剂，以及任选的药学上可接受的载体；
[0432]
(b)第二容器中的第二组分，该第二组分包含抗癌试剂，以及任选的药学上可接受的载体；和
[0433]
(c)任选的，说明书。
[0434]
实施例
[0435]
为使本发明的目的和技术方案更加清楚，下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。应当理解，这些实施例并非旨在限制本发明的范围。此外，以下实施例中未提及的具体实验方法按照常规实验方法进行。
[0436]
具体而言，以下实施例1-13说明了本发明eed抑制剂的合成和表征，实施例14-27说明了eed抑制剂和本发明组合物的生物学测定。
[0437]
实施例1
[0438]
合成12-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-3h,5h-4-氧杂-2,6,11,12a-四氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-3-酮(第12号化合物)
[0439][0440]
在0℃下，将2-(二苯基亚甲基氨基)乙酸乙酯(18.4g，69mmol)于dmso(50ml)中的溶液逐滴添加到nah(60％)(5.0g，125.5mmol)于70ml无水dmso中的悬浮液中。反应混合物
立即变为橙色。5分钟后，逐滴添加含2-((二苯基亚甲基)氨基)乙酸乙酯(15g，62.7mmol)的50ml dmso。将混合物在室温下搅拌2小时。此后，通过小心地添加nh4cl水溶液来淬灭反应混合物。随后将混合物用乙酸乙酯萃取，用盐水洗涤，干燥并浓缩，并用作下一步骤的粗物质。lc-ms:[m+h]+＝470.01。
[0441]
在0℃下，向化合物e12-2(粗物质，5.0g，10.6mmol)于thf(50ml)中的溶液中添加10ml 3n hcl水溶液。将混合物在室温下搅拌1小时，并将反应混合物浓缩，随后用na2co3水溶液碱化到ph 8～9。将混合物用dcm萃取，用盐水洗涤。减压浓缩，随后通过快速色谱(0-100％etoac/己烷)纯化，以80％的总产率得到所需化合物e12-3。lc-ms:[m+h]+＝305.95。
[0442]
将hcooh(4ml)和ac2o(4ml)的混合物在50℃下加热1小时。将反应混合物冷却到室温，并添加到2-氨基-2-(甲硫基)嘧啶-4-基)乙酸乙酯(化合物e12-3，2.0g，6.55mmol)于20ml dcm中的溶液中。将混合物在室温下搅拌2小时。反应完成后，将混合物浓缩。将混合物用dcm(2
×
50ml)萃取，依次用水(20ml)和盐水(10ml)洗涤。将有机相干燥(na2so4)，过滤并浓缩，得到呈油状的粗标题化合物e12-4，其未经进一步纯化即用于下一步骤。lc-ms:[m+h]+＝334.05。
[0443]
向化合物e12-4(2.0g，粗物质)于二噁烷(20ml)中的溶液中逐滴添加pocl3(1.5ml)。将反应混合物在回流下加热4小时。将混合物冷却到室温并浓缩。添加冰冷却的水(50ml)，并将混合物用饱和的nahco3水溶液调节到ph 8。将混合物用dcm(2
×
50ml)萃取，用盐水(10ml)洗涤，干燥(na2so4)并过滤。浓缩滤液，并通过硅胶柱色谱(用50-100％etoac/己烷)洗脱纯化残余物，以70％的总产率分两步得到呈白色固体状的标题化合物e12-5(1.42g，4.59mmol)。lc-ms:[m+h]+＝315.70。1h nmr(400mhz,dmso d6):8.67(s,1h),7.99(s,1h),4.33(q,2h),2.76(s,3h),1.34(t,3h)。
[0444]
在0℃下，向化合物e12-5(567mg，1.8mmol，1.0eq.)于dcm(18ml)中的溶液中添加m-cpba(464mg，2.7mmol，≤77％，1.5eq.)。45分钟后，在0℃下添加et3n(1ml，7.6mmol，4eq.)并搅拌2分钟，随后添加化合物a.1(300mg，1.8mmol)。随后将反应混合物在室温下搅拌3小时。此后，浓缩反应混合物并通过硅胶柱色谱(用50-100％etoac/己烷洗脱)纯化残余物，以55％的产率得到e12-7(429mg，0.99mmol)。lc-ms:[m+h]+＝434.03。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.75(s,1h),8.65(t,j＝5.1hz,1h),7.68(s,1h),6.94(t,j＝9.5hz,1h),6.70(dd,j＝8.7,3.9hz,1h),4.68(d,j＝5.0hz,2h),4.54(t,j＝8.7hz,2h),4.29(q,j＝7.1hz,2h),3.27(t,j＝8.8hz,2h),1.32(t,j＝7.1hz,3h)。
[0445]
将乙酸钯(ii)(70mg，0.31mmol，0.1eq.)和catacxium a(221mg，0.62mmol，0.2eq.)在dme(2.0ml，脱气)中混合在一起，并在70℃下，经由移液管将所得溶液添加到化合物e12-7(1.34g，3.1mmol，1.0eq.)、化合物b.1(1.86g，6.2mmol，2.0eq.)、双频哪醇根基二硼(1.6g，6.2mmol，2.0eq.)和k2co3(1.71g，12.4mmol，4.0eq.)于dme/h2o(10:1，22ml，脱气)中的搅拌溶液中。搅拌反应混合物12小时。此后，将反应混合物浓缩并用乙酸乙酯(2
×
50ml)萃取，用水和盐水洗涤，并随后经na2so4干燥。浓缩混合物，并通过hplc纯化残余物，得到所需化合物，其经tfa/dcm处理，以50％的产率得到呈白色固体状的所需化合物e 12-8(719mg，1.55mmol)。lc-ms:[m+h]+＝464.16。
[0446]
将e12-8(40mg，0.090mmol，1eq.)和lioh(20mg，0.90mmol，10eq.)于thf(4ml)和水(1.0ml)中的混合物在70℃下加热过液。在0℃下逐滴添加3nhcl水溶液直到ph 2-3。浓缩混
合物，并通过hplc纯化残余物，以90％的产率得到呈白色固体状的标题化合物e 12-9(35mg，0.081mmol)。lc-ms:[m+h]+＝436.13。
[0447]
经由套管向2,4,6-三氯苯甲酰氯(24mg，0.01mmol，1.5eq.)、dipea(85mg，0.66mmol，10.0eq.)和dmap(4mg，0.033mmol，0.5eq.)于甲苯(2ml)中的混浊混合物中缓慢地添加开环酸e12-9(31mg，0.066mmol)于甲苯(1ml)中的澄清溶液。2小时后，浓缩反应混合物。将粗产物用乙酸乙酯(2
×
10ml)萃取，在盐水中洗涤并经na2so4干燥。浓缩混合物，并通过hplc纯化残余物，以60％的产率得到呈白色固体状的第12号化合物(16mg，0.039mmol)。lc-ms:[m+h]+＝418.12。1h nmr(400mhz,丙酮-d6)δ8.77(s,1h),8.66(d,j＝4.7hz,1h),8.20(s,1h),8.04(d,j＝7.9hz,1h),7.75(s,1h),7.56(dd,j＝8.0,4.6hz,1h),6.90(t,j＝9.4hz,1h),6.67(dd,j＝8.6,3.8hz,1h),6.04(s,1h),5.08(s,1h),4.90(s,2h),4.59(t,j＝8.6hz,2h),3.49(t,j＝8.6hz,2h)。
[0448]
实施例2
[0449]
12-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-4,5-二氢-3h-2,4,6,11,12a-五氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-3-酮(第16号化合物)：
[0450][0451]
将乙酸钯(ii)(70mg，0.31mmol，0.1eq.)和catacxium a(221mg，0.62mmol，0.2eq.)在dme(2.0ml，脱气)中混合在一起，并在70℃下，经由移液管将所得溶液添加到化合物e10-7(1.34g，3.1mmol，1.0eq.)、化合物b.2(1.77g，6.2mmol，2.0eq.)、双频哪醇根基二硼(1.6g，6.2mmol，2.0eq.)和k2co3(1.71g，12.4mmol，4.0eq.)于dme/h2o(10:1，22ml，脱气)中的搅拌溶液中。搅拌反应混合物12小时。此后，将反应混合物浓缩并用乙酸乙酯(2
×
50ml)萃取，用水和盐水洗涤，并随后经na2so4干燥。浓缩混合物，并通过hplc纯化残余物，以50％的产率得到呈白色固体状的标题化合物e16-1(871mg，1.55mmol)。lc-ms:[m+h]+＝563.16。
[0452]
在室温下将化合物e 16-1用25％tfa/dcm处理1小时，此后真空去除挥发物。将粗物质用乙酸乙酯稀释，用饱和na2co3水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。有机层经na2so4并真空浓缩，得到化合物e 16-2，其用作下一步的粗物质。
[0453]
将e16-2(40mg，0.09mmol，1eq.)和lioh(20mg，0.90mmol，10eq.)于thf(4ml)和水(1.0ml)中的混合物在70℃下加热过液。在0℃下逐滴添加3nhcl水溶液直到ph 2-3。浓缩混合物，并通过hplc纯化残余物，以90％的产率得到呈白色固体状的第16号化合物。lc-ms:[m+h]+＝416.14。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.82(s,1h),8.65(t,j＝5.1hz,1h),8.54(dd,j＝4.8,1.6hz,1h),8.47(s,1h),7.92(dd,j＝7.8,1.6hz,1h),7.53-7.48(m,2h),6.96(dd,j＝10.3,8.7hz,1h),6.72(dd,j＝8.7,3.9hz,1h),4.98-4.94(m,1h),4.75(s,2h),4.57-4.53(m,2h),4.03(m,1h),3.35(t,j＝8.7hz,2h)。
[0454]
实施例3
[0455]
合成11-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-2,4,10,11a-四氮杂二苯并[cd,f]薁-3(4h)-酮(第3号化合物)：
[0456][0457]
将乙酸钯(ii)(70mg，0.31mmol，0.1eq.)和catacxium a(221mg，0.62mmol，0.2eq.)在dme(2.0ml，脱气)中混合在一起，并在70℃下，经由移液管将所得溶液添加到化合物e10-7(1.34g，3.1mmol，1.0eq.)、化合物b.3(1.05g，6.2mmol，2.0eq.)、双频哪醇根基二硼(1.6g，6.2mmol，2.0eq.)和k2co3(1.71g，12.4mmol，4.0eq.)于dme/h2o(10:1，22ml，脱气)中的搅拌溶液中。搅拌反应混合物12小时。此后，将反应混合物浓缩并用乙酸乙酯(2
×
50ml)萃取，用水和盐水洗涤，并随后经na2so4干燥。浓缩混合物，并通过hplc纯化残余物，以50％的产率得到呈白色固体状的标题化合物e 3-1(692mg，1.55mmol)。lc-ms:[m+h]+＝563.16。
[0458]
将e 3-1(40mg，0.090mmol，1eq.)和lioh(20mg，0.90mmol，10eq.)于thf(4ml)和水(1.0ml)中的混合物在70℃下加热过液。在0℃下逐滴添加3nhcl水溶液直到ph 2-3。浓缩混合物，并通过hplc纯化残余物，以90％的产率得到呈白色固体状的第3号化合物(32mg，0.081mmol)。lc-ms:[m+h]+＝402.13。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.50(s,1h),8.67(s,1h),8.53(t,j＝5.1hz,1h),7.99(s,1h),7.88-7.80(m,1h),7.19(dd,j＝6.1,1.6hz,2h),7.02(ddd,j＝8.3,6.1,2.4hz,1h),6.96(dd,j＝10.3,8.7hz,1h),6.71(dd,j＝8.6,3.9hz,1h),4.73(d,j＝4.8hz,2h),4.56(t,j＝8.7hz,2h),3.31(d,j＝8.5hz,2h)。
[0459]
实施例4
[0460]
合成4-环丙基-12-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-7-(三氟甲基)-4,5-二氢-3h-2,4,8,11,12a-五氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-3-酮(第36号化合物)
[0461][0462]
将(5-溴-2-(三氟甲基)吡啶-4-基)甲醇(e 36-1)的等分试样溶解于无水dcm(～0.2m)中，随后向此溶液中添加1.5eq.dess-martin高碘烷，并使反应混合物搅拌1小时，经由tlc监测。完成后，用饱和nh4cl溶液淬灭，随后用dcm萃取并用水和盐水洗涤。收集有机层并合并，用盐水洗涤，经无水na2so4干燥，并真空浓缩。在硅胶正相柱色谱上用增加量的乙酸乙酯/己烷进行纯化，得到所需醛e 36-2(产率～90％)。
[0463]
在冰浴下，向获得的醛中添加甲醇(～0.2m)，随后添加2.2eq.环丙胺、2eq.na(cn)bh3和2eq.乙酸。随后去除冰浴并使反应混合物搅拌3小时，经由tlc监测。完成后，浓缩反应混合物，并通过hplc纯化残余物，以70％的产率得到标题化合物e 36-3。lc-ms:[m+h]+＝294.99。
[0464]
向获得的仲胺中添加1.5eq.由无水dcm(～0.2m)溶解的(boc)2o，随后添加3eq tea，使反应混合物搅拌1小时，经由tlc监测。完成后，将其用饱和nh4cl溶液淬灭，随后用dcm萃取并用盐水洗涤。收集有机层并合并，经无水na2so4干燥，并真空浓缩。在硅胶正相柱色谱上用增加量的乙酸乙酯/己烷进行纯化，得到boc保护的仲胺e 36-4(产率～90％)。lc-ms:[m+h]+＝395.10。
[0465]
将乙酸钯(ii)(0.1eq.)和catacxium a(0.2eq.)在dme(0.5ml，脱气)中混合在一起，并在70℃下，经由移液管将所得溶液添加到8-溴-5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)
甲基)氨基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲酸乙酯(1eq.)、boc保护的仲胺e 36-4(2eq.)、双频哪醇根基二硼(2.0eq.)和k2co3(4.0eq.)于dme/h2o(10:1，10ml，脱气)中的混合物中。搅拌反应混合物12小时。此后，将反应混合物浓缩并用乙酸乙酯(2
×
50ml)萃取，用水和盐水洗涤，并随后经na2so4干燥。浓缩混合物，并通过hplc纯化残余物，以40％的产率得到标题化合物e 36-5。lc-ms:[m+h]+＝671.25。
[0466]
将化合物e 36-5在0℃下用25％tfa/dcm处理1小时，此后真空去除挥发物，用作下一步的粗物质(e 36-6)。lc-ms:[m+h]+＝571.25。
[0467]
将化合物e 36-6(1eq.)和lioh(10eq.)于thf(10ml/mmol)和水(5ml/mmol)中的混合物在70℃下加热过液。浓缩混合物，并随后通过制备型hplc纯化残余物，以～1:1的比率得到e 36和化合物e36-7。
[0468]
向化合物e 36-7(1eq.)和hatu(2eq.)于dmf(5ml/mmol)中的混合物中添加dipea(5eq.)。使反应混合物搅拌过液。随后将其浓缩，并通过制备型hplc纯化残余物，得到第36号化合物。两种化合物的组合产率为～90％。lc-ms:[m+h]+＝525.15。1h nmr(400mhz,甲醇-d4)δ8.84(s,1h),8.74(s,1h),7.86(s,1h),7.70(s,1h),6.86(t,j＝9.6hz,1h),6.65(dd,j＝8.7,4.0hz,1h),5.42(d,j＝14.7hz,1h),4.81(d,j＝6.1hz,2h),4.59(t,j＝8.9hz,2h),4.37(d,j＝14.9hz,1h),3.42(t,j＝8.7hz,2h),2.55(s,1h),1.16(s,1h),1.00(d,j＝5.5hz,2h),0.94-0.77(m,1h)。
[0469]
实施例5
[0470]
合成n-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-3h,5h-4-氧杂-2,6,11,12a-四氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-12-胺(第2号化合物)
[0471][0472]
在0℃下用lah(0.2ml 1m lah于thf中的溶液)处理2ml thf中的化合物e10-8(25mg，0.053mmol)。此后，将温度升高到50℃并搅拌过液。冷却到室温后，将反应物用0℃的饱和na2so4缓慢淬灭。随后将其过滤并用乙酸乙酯洗涤数次。通过快速色谱(0-10％meoh/dcm)纯化，以50％的产率得到第2号化合物(10mg，0.024mmol)。lc-ms:[m+h]+＝404.14。
[0473]
实施例6
[0474]
合成11-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-6-甲基-4h-3-硫杂-2,5,10,11a-四氮杂二苯并[cd,f]薁3,3-二氧化物(第95号化合物)
[0475][0476]
合成8-(2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-6-甲基吡啶-3-基)-n-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(e95-1)：
[0477]
在n2气氛下，将8-溴-n-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(795mg，2.19mmol)、3-溴-2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-6-甲基吡啶(1.393g，4.38mmol)、乙酸钯(ii)(0.1eq.)、catacxium a(0.2eq.)、双频哪醇根基二硼(2.0eq.)和k2co3(5.0eq.)在dme:水(10:1，17.4ml，脱气)中混合在一起。将反应混合物在70℃下搅拌12小时。此后，将反应混合物浓缩并用乙酸乙酯(2
×
200ml)萃取，用水和盐水洗涤，并随后经na2so4干燥。浓缩混合物，并通过hplc纯化残余物，以38％的产率得到标题化合物e 95-1(304mg，0.585mmol)。lc-ms:[m+h]+＝520.30。
[0478]
合成8-(2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-6-甲基吡啶-3-基)-n-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-1-碘咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(e 95-2)：
[0479]
在0℃下，向8-(2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-6-甲基吡啶-3-基)-n-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(304mg，0.585mmol)于dmf(5ml)中的溶液中添加nis(125mg，0.95mmol)，并在室温下搅拌15分钟。将混合物用ea(4
×
50ml)萃取，用盐水(30ml)洗涤，干燥(na2so4)并过滤。浓缩滤液，并通过柱色谱(硅胶，用20-80％etoac/己烷)洗脱纯化残余物，得到呈黄色固体状的e 95-2(190mg，0.29mmol，
50％)。lc-ms:[m+h]+＝646.21。
[0480]
合成(3-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-1-碘咪唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-6-甲基吡啶-2-基)甲醇(e 95-3)：
[0481]
向8-(2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-6-甲基吡啶-3-基)-n-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-1-碘咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(190mg，0.29mmol)于thf(6ml)中的溶液中添加tbaf(3ml)，并在室温下搅拌过液。完成后，将混合物用ea(3
×
60ml)萃取，用盐水(30ml)洗涤，经na2so4干燥并过滤。浓缩滤液，并通过柱色谱(硅胶，用0-15％meoh/dcm洗脱)纯化残余物，得到e 95-3(125mg，0.24mmol，80％)。lc-ms:[m+h]+＝532.19。
[0482]
合成s-((3-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-1-碘咪唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-6-甲基吡啶-2-基)甲基)硫乙酸酯(e 95-4)：
[0483]
在0℃下，将含mscl(41mg，0.352mmol)的thf(0.5ml)逐滴添加到(3-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-1-碘咪唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-6-甲基吡啶-2-基)甲醇(125mg，0.24mmol)和et3n(36mg，0.352mmol)于thf(2ml)中的溶液中。立即形成白色的et3n盐酸盐沉淀。将反应混合物搅拌2-3小时，完成后，添加含硫代乙酸钾(81mg，0.704mmol)的dmf(1.0ml)，产生橙色溶液，其在数小时后变成红色。经由uplc监测反应，完成后将反应混合物停止并浓缩，随后溶解于dcm中。将此混合物溶液用饱和licl洗涤两次，随后用水和盐水洗涤。将饱和licl、盐水和水洗涤液合并，并分别用乙酸乙酯反萃取。将所有有机层合并，经na2so4干燥，过滤并浓缩成深色油状物。快速色谱(硅胶，用20-100％etoac/己烷洗脱)，得到呈黄色固体状的e 95-4(78mg，0.13mmol，56％)。lc-ms:[m+h]+＝590.03。
[0484]
合成8,8'-((二硫烷二基双(亚甲基))双(6-甲基吡啶-2,3-二基))双(n-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-1-碘咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺)(e 95-5)：
[0485]
在n2气氛下，向s-((3-(5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-1-碘咪唑并[1,5-c]嘧啶-8-基)-6-甲基吡啶-2-基)甲基)硫乙酸酯(78mg，0.13mmol)于甲醇(5.0ml，脱气)中的溶液中添加0.9eq.naome(7mg，0.12mmol)。将反应混合物在80℃下回流一小时。快速色谱(硅胶，用20-100％etoac/己烷洗脱)，得到呈黄色固体状的e95-5(57mg，0.052mmol，79％)。lc-ms:[m/2+h]+＝547.14。
[0486]
合成n-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-6-甲基-4h-3-硫杂-2,5,10,11a-四氮杂二苯并[cd,f]薁-11-胺(e 95-6)：
[0487]
在n2气氛下，向8,8'-((二硫烷二基双(亚甲基))双(6-甲基吡啶-2,3-二基))双(n-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-1-碘咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺)(57mg，0.052mmol)于dmf(3.0ml，脱气)中的溶液中添加1.2eq.tcep(18mg，0.0626mmol)。将反应混合物在室温下搅拌24小时。通过uplc监测反应。完成后，将其通过反相hplc纯化，得到呈淡黄色固体状的e 95-6(38mg，0.091mmol，87％)。lc-ms:[m+h]+＝420.15。
[0488]
合成11-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-6-甲基-4h-3-硫杂-2,5,10,11a-四氮杂二苯并[cd,f]薁3,3-二氧化物(e 95)：
[0489]
向n-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-6-甲基-4h-3-硫杂-2,5,10,11a-四氮杂二苯并[cd,f]薁-11-胺(38mg，0.091mmol)于meoh:h2o:thf(4.0ml，5:5:10)中的溶液中添加5eq.过硫酸氢钾(279mg，0.45mmol)。将反应混合物搅拌5小时。完成后，反相hplc得
到呈淡黄色固体状的第95号化合物(17mg，0.038mmol，41％)。lc-ms:[m+h]+＝452.25。
[0490]
实施例7
[0491]
合成12-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-7-(甲基-d3)-4-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢-3h-2,4,6,11,12a-五氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-3-酮(第e19号化合物)：
[0492][0493]
向火焰干燥的烧瓶中添加3-溴-6-甲基吡啶甲酸(1g，4.67mmol)，随后添加叔丁醇钾(1.0g，9.34mmol)和dmso-d6(12ml)，并将混合物在室温下在氩气下搅拌12小时。将反应混合物用冷水(10ml)稀释并用乙酸乙酯(20ml)萃取。将乙酸乙酯层用盐水(20ml
×
2)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩，以90％的产率产生粗产物(e 19.1)。lc-ms:[m+h]+＝215.95。
[0494]
将h2so4(1.0eq.)添加到3-溴-6-(甲基-d3)吡啶甲酸-d(e 19.1，5.0g，23.3mmol，1.0eq.)于meoh(50ml)中的溶液中。将所得溶液搅拌14小时，同时在油浴中维持回流的温度。将混合物冷却到室温并真空浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯(50ml)中，并用水和饱和nacl水溶液(2
×
100ml)洗涤，经无水na2so4干燥并真空浓缩。通过硅胶柱色谱纯化并用etoac/己烷(1:5)洗脱残余物，以90％的产率产生3-溴-6-甲基吡啶甲酸甲酯(e 19.2，4.7gm)。lc-ms[m+h]
+
＝232.99。
[0495]
在-60℃下，向3-溴-6-(甲基-d3)吡啶甲酸甲酯(e 19.2，520mg，2.15mmol)于dcm(15ml)中的溶液中逐滴添加dibal-h(4.6ml，4.60mmol，1m于环己烷中)。将反应混合物维持在-60℃至-15℃下30分钟，使其升温到室温并再搅拌12小时。将反应混合物再次冷却到0℃，并用饱和nh4cl水溶液(50ml)淬灭。将所得混合物用dcm(3
×
100ml)萃取，用盐水(50ml)洗涤，干燥(na2so4)，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱纯化并用etoac/己烷(1:3)洗脱残余物，得到呈无色液体状的e19.3(1.36mmol，273mg，60％)。lc-ms[m+h]+＝204.99。
[0496]
将(3-溴-6-(甲基-d3)吡啶-2-基)甲醇(e 19.3)的等分试样溶解于无水dcm(～0.2m)中。向此溶液中添加1.5eq.dmp，并使反应混合物搅拌1小时(通过tlc监测)。完成后，
将反应物用饱和nh4cl溶液淬灭，用dcm萃取，并用水和盐水洗涤。收集有机层并合并，用盐水洗涤，经无水na2so4干燥，并真空浓缩。在硅胶正相柱色谱上用增加量的乙酸乙酯/己烷进行纯化，得到所需醛。
[0497]
在0℃下，向醛中添加甲醇(～0.2m)，随后添加2.2eq.三氟乙-1-胺、2eq.na(cn)bh3和2eq.乙酸。去除冰浴并使反应混合物搅拌3小时。完成后，浓缩反应混合物并通过hplc纯化残余物，以70％的产率得到e19.4。lc-ms:[m+h]+＝286.01。
[0498]
将乙酸钯(ii)(0.1eq.)和catacxium a(0.2eq.)在dme(0.5ml，脱气)中混合在一起，并在70℃下，经由移液管将所得溶液添加到8-溴-5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲酸乙酯(1eq.)、仲胺e19.4(2eq.)、双频哪醇根基二硼(2.0eq.)和k2co3(4.0eq.)于dme/h2o(10:1，10ml，脱气)中的混合物中。搅拌反应混合物12小时。将反应混合物浓缩并用乙酸乙酯(2
×
50ml)萃取，用水和盐水洗涤，并经na2so4干燥。浓缩混合物并通过hplc纯化残余物，以50％的产率得到e19.5。lc-ms:[m+h]+＝561.21。
[0499]
将化合物e19.5(1eq.)和lioh(10eq.)于thf(10ml/mmol)和水(5ml/mmol)中的混合物在70℃下加热过液。浓缩混合物，并随后通过制备型hplc纯化残余物，以80％的产率得到e19.6。lc-ms:[m+h]+＝534.18。
[0500]
向化合物e19.6(1eq.)和hatu(2eq.)于dmf(5ml/mmol)中的混合物中添加dipea(5eq.)。使反应混合物搅拌过液，并浓缩。通过制备型hplc纯化残余物，以90％的产率得到第e19号化合物。lc-ms:[m+h]
+
＝516.17。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.85(s,1h),8.71(t,j＝5.1hz,1h),7.93(d,j＝8.0hz,1h),7.54(s,1h),7.44(d,j＝8.1hz,1h),6.96(dd,j＝10.3,8.6hz,1h),6.71(dd,j＝8.7,3.9hz,1h),5.46(d,j＝15.0hz,1h),4.75(d,j＝4.5hz,2h),4.71-4.61(m,1h),4.56(t,j＝8.8hz,2h),4.19(d,j＝15.0hz,1h),4.08(dq,j＝15.2,9.0hz,1h),3.34(t,j＝8.7hz,2h),2.57(s,3h)。
[0501]
实施例8
[0502]
合成8-(6-环丙基吡啶-3-基)-5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-1-(甲基磺酰基)咪唑并[1,5-a]吡啶-6-甲腈(第e 26号化合物)
[0503][0504]
使5-溴-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈(e 26.1，120mg，0.55mmol)和dipea(145mg，1.14mmol)于pocl3(2.0ml)中的混合物回流3小时。真空蒸发所得棕色混合物，并添加10ml etoac和5mlnahco3水溶液。将混合物用etoac(20ml
×
3)萃取，干燥(na2so4)，过滤并浓缩。通过快速色谱(硅胶，用pe/ea＝1/3～1/5洗脱)纯化残余物，得到呈白色固体状的e 26.2(70mg,54％产率)。lc-ms:[m+h]+＝230.1。
[0505]
在室温下，向5-溴-2-氯-6-甲基烟腈(4.46g，19.4mmol)和nbs(3.79mg，21.3mmol)于ccl4(80ml)中的溶液中添加bpo(469mg，1.94mmol)。将所得混合物脱气并在80℃下在氮气下搅拌4小时。过滤反应混合物，用盐水洗涤，干燥(na2so4)，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱(用10％etoac/石油醚洗脱)纯化粗产物，得到呈黄色油状的5-溴-6-(溴甲基)-2-氯烟腈(e 26.3)(4.1g，74％)。lc-ms:[m+h]+＝308.83。
[0506]
向5-溴-6-(溴甲基)-2-氯烟腈(4.46g，14.5mmol)于dmf(50ml)中的溶液中添加nan3(1.89g，29mmol)。将混合物在室温下搅拌2小时，倒入水中，并用etoac(30ml
×
3)萃取。用盐水洗涤合并的有机层，干燥(na2so4)，过滤并浓缩，得到呈黄色油状的6-(叠氮基甲基)-5-溴-2-氯烟腈(3.4g，产率：87％)，其直接用于下一步骤。lc-ms:[m+h]+＝271.92。
[0507]
向6-(叠氮基甲基)-5-溴-2-氯烟腈(3.4g，12.6mmol)于thf(50ml)和h2o(5ml)中的溶液中添加pph3(4.93g，18.9mmol)。将所得混合物在50℃下加热1小时，并浓缩。将残余物溶解于50mlhcl水溶液中，并用dcm(20ml
×
2)洗涤。通过添加naoh水溶液将水层碱化到ph～8，并用etoac(30ml
×
3)萃取。将有机层干燥(na2so4)，过滤并浓缩，得到呈黄色油状的所需产物6-(氨基甲基)-5-溴-2-氯烟腈(2.28g，74％)。lc-ms:[m+h]+＝245.93。
[0508]
向6-(氨基甲基)-5-溴-2-氯烟腈(2.25g，9.3mmol)于甲酸乙酯(40ml)中的溶液中添加nahco3(391mg，4.6mmol)。将混合物在室温下搅拌24小时并过滤。浓缩滤液，得到呈棕色油状的所需化合物(2.1g，90％)，其直接用于下一步骤。lc-ms:[m+h]+＝273.93。
[0509]
向粗化合物于二噁烷(30ml)中的溶液中添加pocl3(2.59g，16.8mmol)。使混合物回流3小时。将反应混合物用nahco3水溶液淬灭并用etoac(30
×
3)萃取。有机层用盐水洗涤，干燥(na2so4)，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱(10％etoac/石油)纯化粗物质，得到呈淡黄色固体状的所需化合物(e.26.6)(1.6g，83％)。lc-ms:[m+h]+＝255.91。
[0510]
将8-溴-5-氯咪唑并[1,5-a]吡啶-6-甲腈(60mg，0.24mmol)、(6-环丙基吡啶-3-基)硼酸(50mg，0.31mmol)、pd(dppf)cl2(12mg，0.015mmol)和na2co3(81mg，0.77mmol)于h2o(0.5ml)和二噁烷(1.5ml)中的混合物在110℃下在n2下加热1小时。将反应混合物过滤并浓缩。通过制备型hplc纯化粗产物，得到5-氯-8-(6-环丙基吡啶-3-基)咪唑并[1,5-a]吡啶-6-甲腈(e 26.7，74mg，产率：90％)。lc-ms:[m+h]+＝295.06。
[0511]
在室温下，向5-氯-8-(6-环丙基吡啶-3-基)咪唑并[1,5-a]吡啶-6-甲腈(38mg，0.13mmol)和(5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲胺(65mg，0.39mmol)于nmp(0.5ml)中的溶液中添加三乙胺(39mg，0.39mmol)。通过微波将所得溶液在130℃下加热1小时。浓缩反应混合物并通过硅胶柱色谱(用pe:ea＝1:1洗脱)纯化，得到黄色固体(e26.8，66％)。lc-ms(m/z):426.16[m+h]+。
[0512]
在0℃下，向n-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-8-苯基咪唑并[1,5-c]嘧啶-5-胺(500mg，1.38mmol)于dmf(10ml)中的溶液中添加nis(278mg，1.24mmol)。将混合物在室温下搅拌15分钟。将混合物用dcm(4
×
50ml)萃取，用盐水(30ml)洗涤，干燥(na2so4)并过滤。浓缩滤液，并通过柱色谱(硅胶，用20-50％etoac/己烷洗脱)纯化残余物，得到呈黄色固体状的标题化合物(e 26.9)(610mg，1.26mmol，70％)。lc-ms:[m+h]+＝552.06。
[0513]
将化合物e 26.9(50mg，0.09mmol)、meso2na(30mg.0.3mmol)和cui(57mg，0.3mmol)于dmso(2ml)中的混合物用n2鼓泡5分钟，随后将密封管在微波反应器中在120℃下加热20分钟，并随后在100℃下加热3小时。浓缩混合物，并通过hplc纯化残余物，以50％的产率得到第e 26号化合物(25mg，0.05mmol)。lc-ms:[m+h]+＝504.14。
[0514]
实施例9
[0515]
合成n-((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)-5-甲基-8-(三氟甲基)-6h-2,3,5a,9,12,13a-六氮杂苯并[4,5]环戊并[7,8]环辛并[1,2,3-cd]茚-13-胺(第e10号化合物)
[0516][0517]
向配备有搅拌棒、冷凝器和氮气入口的500ml圆底烧瓶中装入38.9g(144mmol)5-溴-2-三氟甲基-异烟酸(e 10.1)。向固体中添加250ml无水dcm，随后添加13.2ml(151mmol，1.05eq.)乙二酰氯。向混合物中添加0.5ml无水dmf，并将混合物在环境温度下搅拌2小时。真空去除溶剂。在冰浴中向配备有搅拌棒的1升锥形瓶中装入500mlnh4oh水溶液。向冷却的溶液中逐滴添加粗酰氯。残余物用少量乙腈转移。添加后将混合物搅拌20分钟。通过过滤收集所得沉淀物并用水洗涤。滤饼在45℃下真空干燥，得到呈灰白色固体状的5-溴-2-三氟甲基-异烟酰胺(e 10.2，118mmol，31.52g，82％产率)。lc-ms[m+h]+＝269.95。
[0518]
向配备有搅拌棒、冷凝器和氮气入口的100ml圆底中装入5.2g(19.3mmol)5-溴-2-三氟甲基异烟酰胺(e 10.2)。用12ml pocl3稀释固体。将混合物在70℃下加热3小时。将混合物冷却到室温，并倒于冰上。通过小心添加50％氢氧化钠中和混合物。通过过滤收集所得灰白色固体，用水洗涤并在50℃下真空干燥18小时。由此以94％的产率得到4.5g呈灰白色固体状的5-溴-2-三氟甲基-异烟腈(e 10.3，4.53g，18.1mmol)。lc-ms[m+h]+＝250.95。1h nmr(cdcl3):δ,9.03(s,1h),7.91(s,1h)。
基)-4-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢-3h-2,4,6,11,12a-五氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-3-酮(第e 45号化合物)
[0528][0529]
向5-溴-2-(四氢-2h-吡喃-4-基)吡啶(5.00g，20.65mmol)于dcm(100ml)中的溶液中缓慢地添加1.5eq mcpba(5.35g，30.97mmol)。4小时后，将反应混合物用2.0eq ca(oh)2(3.90g，41.3mmol)淬灭，并将所得沉淀物搅拌30分钟。将沉淀物过滤并用3:1dcm/甲醇洗涤。真空浓缩滤液，以粗制固体形式得到5-溴-2-(四氢-2h-吡喃-4-基)吡啶1-氧化物，其未经进一步纯化即用于后续反应。
[0530]
向前一步骤获得的粗物质5-溴-2-(四氢-2h-吡喃-4-基)吡啶1-氧化物(4.00g，15.63mmol)于乙腈(78ml，0.2m)中的溶液中添加6.0eq氰化三甲基硅烷(tmscn)(9.48g，94.00mmol)和4.5eq三乙胺(5.26g，70.34mmol)。将反应物在100℃下加热过液。冷却到室温后，真空浓缩溶剂，并通过hplc(乙腈/h2o，从25％acn开始，在42％acn/h2o获得化合物)纯化残余物，得到3-溴-6-(四氢-2h-吡喃-4-基)吡啶甲腈(1.60g，5.97mmol，2步产率为29％)。lc-ms[m+h]+＝266.97/268.96。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.30(d,j＝8.4hz,1h),7.64(d,j＝8.4hz,1h),3.96-3.93(m,2h),3.46-3.40(m,2h),3.05-2.98(m,1h),1.79-1.68(m,4h)。
[0531]
将3-溴-6-(四氢-2h-吡喃-4-基)吡啶甲腈(1.60g，5.97mmol)溶解于50ml无水dcm中并冷却到-78℃。在搅拌溶液的同时，逐滴添加2eq dibal-h的甲苯溶液(12ml，11.94mmol)。将混合物搅拌5小时，通过缓慢添加饱和罗谢尔盐(酒石酸钠钾)水溶液淬灭，升温到室温，用乙酸乙酯稀释并搅拌，直到形成两个易于分离的透明层。hplc纯化得到呈液体状的(3-溴-6-(四氢-2h-吡喃-4-基)吡啶-2-基)甲胺(1.12g，4.12mmol，69％)。lc-ms[m+h]+＝271.04/273.03。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.29(s,宽峰,2h),8.07(d,j＝8.4hz,1h),7.29(d,j＝8.4hz,1h),4.53-4.22(m,2h),3.48-3.42(m,2h),3.00-2.93(m,1h),1.91-1.69
(m,4h)。
[0532]
向(3-溴-6-(四氢-2h-吡喃-4-基)吡啶-2-基)甲胺(181mg，0.67mmol)于dcm(10ml)中的溶液中添加2.0eq 4-甲基苯磺酸2,2,2-三氟乙酯(311mg，1.34mmol)和2.0eq dipea(173mg，1.34mmol)。3小时后，将反应混合物用tfa和h2o淬灭，随后hplc纯化，得到n-((3-溴-6-(四氢-2h-吡喃-4-基)吡啶-2-基)甲基)-2,2,2-三氟乙-1-胺。lc-ms:[m+h]+＝354.01。
[0533]
在经由冻干冷冻干燥之后，将化合物在室温下与2eq(boc)2o(292mg，1.34mmol)和3eq et3n(2.01mmol，203mg)在4ml dcm中搅拌5小时。完成后，通过combi-flash柱色谱使用0-100％etoac/己烷纯化残余物，得到化合物((3-溴-6-(四氢-2h-吡喃-4-基)吡啶-2-基)甲基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯(85mg，0.19mmol，2步产率为28％)。lc-ms[m+h]+＝454.07。
[0534]
将乙酸钯(ii)(0.2eq.)和catacxium a(0.4eq.)在dme(0.5ml，脱气)中混合在一起，并在70℃下，经由移液管将所得溶液添加到8-溴-5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲酸乙酯(1eq.)、((3-溴-6-(四氢-2h-吡喃-4-基)吡啶-2-基)甲基)(2,2,2-三氟乙基)氨基甲酸叔丁酯(83mg，0.18mmol，1.2eq.)、双频哪醇根基二硼(2eq.)和k2co3(5eq.)于dme/h2o(10:1，5.0ml，脱气)中的混合物中。将反应混合物搅拌过液。随后，将其浓缩并用乙酸乙酯(2
×
30ml)萃取，用水和盐水洗涤，并经无水na2so4干燥。浓缩混合物，随后制备型hplc纯化，得到e-2211.1。lc-ms:[m+h]+＝729.29。去除e-2211.1的boc保护基，得到e-2211.2。lc-ms:[m+h]+＝629.21。
[0535]
将化合物e-2211.2(1eq.)和lioh(10eq.)于thf(10ml/mmol)和水(5ml/mmol)中的混合物在80℃下加热过液。浓缩混合物，并随后通过制备型hplc纯化残余物，以50％的产率分3步得到e-2211.3。
[0536]
向化合物e-2211.3(1eq.)和hatu(2eq.)于dmf(5ml/mmol)中的混合物中添加dipea(5eq.)。使反应混合物搅拌2小时，并浓缩。通过制备型hplc纯化残余物，以定量产率得到第e 45号化合物。lc-ms:[m+h]+＝583.09。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.83(s,1h),8.68(t,j＝4.8hz,1h),7.90(d,j＝8.4hz,1h),7.54(s,1h),7.43(d,j＝8.4hz,1h),6.95(dd,j＝9.6,8.8hz,1h),6.72(dd,j＝8.8,4.0hz,1h),5.47(d,j＝14.8hz,1h),4.74(d,j＝4.8hz,2h),4.70-4.63(m,1h),4.55(t,j＝8.8hz,2h),4.16(d,j＝14.8hz,1h),4.07-4.03(m,4h),3.45-3.51(m,2h),3.33(t,j＝8.4hz,2h),2.97-3.05(m,1h),1.75-1.84(m,4h)。
[0537]
实施例11
[0538]
合成7-(叔丁基)-12-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-4-(2,2,2-三氟乙基)-4,5-二氢-3h-2,4,8,11,12a-五氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-3-酮(第e 46号化合物)
[0539][0540]
将h2so4(0.5ml，9.69mmol，1.0eq.)添加到5-溴-2-(叔丁基)异烟酸(2.5g，9.69mmol，1.0eq.)于meoh(25ml)中的溶液中。将所得溶液在回流下搅拌14小时。将混合物冷却到室温并真空浓缩。将残余物溶解于乙酸乙酯(50ml)中，用水和饱和nacl水溶液(2
×
50ml)洗涤，经无水na2so4干燥，并真空浓缩。残余物通过硅胶柱色谱纯化，用etoac/己烷洗脱，得到5-溴-2-(叔丁基)异烟酸甲酯。
[0541]
在-78℃下，向5-溴-2-(叔丁基)异烟酸甲酯于dcm(50ml)中的溶液中逐滴添加dibal-h(18ml，18.90mmol，1.05m于甲苯中)。将反应混合物维持在-78℃至-15℃下30分钟，随后升温到室温并再搅拌12小时。将反应混合物冷却到0℃，并用饱和nh4cl水溶液(50ml)淬灭。所得混合物用dcm(3
×
250ml)萃取，用盐水(150ml)洗涤，经无水(na2so4)干燥，过滤并浓缩。残余物通过硅胶柱色谱纯化，用etoac/己烷洗脱，得到(5-溴-2-(叔丁基)吡啶-4-基)甲醇(1.78g，7.28mmol，75％，分2步)。lc-ms[m+h]+＝243.98/245.99。
[0542]
将(5-溴-2-(叔丁基)吡啶-4-基)甲醇(1.78g，7.28mmol)的等分试样溶解于无水dcm(～0.2m)中，随后向此溶液中添加1.3eq.dess-martin高碘烷(4.11g，9.46mmol)，并使反应混合物搅拌1小时，经由tlc监测。完成后，用饱和nh4cl溶液淬灭，随后用dcm萃取。收集有机层并合并，用盐水洗涤，经无水na2so4干燥，并真空浓缩。在硅胶正相柱色谱上用增加量的乙酸乙酯/己烷进行纯化，得到所需5-溴-2-(叔丁基)异烟醛。
[0543]
在冰浴下，向5-溴-2-(叔丁基)异烟醛中添加甲醇(～0.2m)，随后添加2.2eq.2,2,2-三氟乙-1-胺、2eq.na(cn)bh3和2eq.乙酸。去除冰浴并使反应混合物搅拌3小时，经由tlc监测。完成后，浓缩反应混合物，并通过hplc纯化残余物，得到n-((5-溴-2-(叔丁基)吡啶-4-基)甲基)-2,2,2-三氟乙-1-胺(800mg，2.27mmol，31％，分2步)。lc-ms:[m+h]+＝324.89/326.86。
[0544]
将乙酸钯(ii)(0.1eq.)和catacxium a(0.2eq.)在dme(0.5ml，脱气)中混合在一
起，并在70℃下，经由移液管将所得溶液添加到8-溴-5-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)咪唑并[1,5-c]嘧啶-1-甲酸乙酯(1eq.)、n-((5-溴-2-(叔丁基)吡啶-4-基)甲基)-2,2,2-三氟乙-1-胺(2eq.)、双频哪醇根基二硼(2eq.)和k2co3(5eq.)于dme/h2o(10:1，22ml，脱气)中的混合物中。将反应混合物搅拌过液。将反应混合物浓缩并用乙酸乙酯(2
×
50ml)萃取，用水和盐水洗涤，并经na2so4干燥。浓缩混合物并通过hplc纯化残余物，以～15％的产率得到e-2189.1。lc-ms:[m+h]+＝601.20。
[0545]
将化合物e-2189.1(1eq.)和lioh(10eq.)于thf(10ml/mmol)和水(5ml/mmol)中的混合物在80℃下加热过液。浓缩混合物，并通过制备型hplc纯化残余物，以～5:1的比率得到e-2189.2和第e 46号化合物。lc-ms:[m+h]+＝573.15。
[0546]
向化合物e-2189.2(1eq.)和hatu(2eq.)于dmf(5ml/mmol)中的混合物中添加dipea(5eq.)。使反应混合物搅拌2小时。浓缩反应混合物，并通过制备型hplc纯化残余物，以～90％的组合产率得到第e 46号化合物。lc-ms:[m+h]+＝555.10。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.85(s,1h),8.72(t,1h),8.65(d,j＝2.4,1h),7.91(d,j＝7.8hz,1h),7.58(d,j＝1.6hz,1h),6.96(t,j＝8.8hz,1h),6.71(dd,j＝8.8,4.0hz,1h),5.34(d,j＝14.8hz,1h),4.75(d,j＝4.0hz,2h),4.56(t,j＝8.8hz,2h),4.29(d,j＝14.8hz,1h),4.06-4.12(m,1h),3.34(t,j＝8.8hz,2h),1.40(s,9h)。
[0547]
实施例12
[0548]
合成4-(2,2-二氟乙基)-12-(((5-氟-2,3-二氢苯并呋喃-4-基)甲基)氨基)-7-异丙基-4,5-二氢-3h-2,4,6,11,12a-五氮杂苯并[4,5]环辛并[1,2,3-cd]茚-3-酮(第e 47号化合物)
[0549][0550]
向5-溴-2-异丙基吡啶(1.00g，5.00mmol)于dcm(20ml)中的溶液中添加1.5eq mcpba。4小时后，将反应混合物用2.0eq ca(oh)2淬灭，并将所得沉淀物搅拌30分钟。将沉淀
3.33(m,1h),3.33(t,j＝8.8hz,2h),3.10-3.03(m,2h),1.29-1.22(m,6h)。
[0558]
实施例13
[0559]
化合物表征
[0560]
表3的化合物使用实例1-12中所述，参见例如“合成方法”栏并且所属领域中已知的方法来制备。所有化合物均以tfa盐形式通过质谱分析和/或1h nmr来表征。
[0561]
表3
[0562]
[0563]
[0564]
[0565]
[0566]
[0567]
[0568]
[0569]
[0570]
[0571]
[0572]
[0573]
[0574]
[0575]
[0576]
[0577]
[0578]
[0579]
[0580]
[0581]
[0582]
[0583]
[0584]
[0585][0586]
生物分析
[0587]
实施例14：eed alpha筛选结合测定和抗增殖活性(ic
50
值)测定
[0588]
细胞增殖分析：
[0589]
人类b细胞淋巴瘤细胞karpas422购自美国菌种保藏中心(atcc)，并使用标准细胞培养条件在补充有10％fbs(invitrogen，目录号10099-141)的rpmi-1640(invitrogen，目录号11875)中在37℃、5％co2的含湿气培育箱中培养。为了评定prc2抑制对细胞生长的影响，将细胞以2000-3000个细胞/孔的密度接种于96孔细胞培养板的200μl培养基中，并在37℃下在5％co2的气氛中用连续稀释的化合物处理7天。使用tecan infinite m1000多模式微量板读取器(tecan，morrisville，nc)，通过基于乳酸脱氢酶的wst-8分析(dojindo molecular technologies)评估细胞生长。将wst-8试剂添加到培养板，培育1-4小时，并在450nm下读取。将读数相对于经dmso处理的细胞归一化，并使用graphpad prism 6软件通过非线性回归分析来计算ic
50
。
[0590]
通过alphascreen(α-筛选)进行eed-h3k27me3肽竞争结合分析：
[0591]
为了评定在eed-h3k27me3竞争结合分析中的效力，将本公开的代表性化合物在dmso中连续稀释3倍，以获得总共十二个浓度。将每一浓度的化合物(各2.5μl)转移到384孔
perkin elmer optiplate-384白色培养板中。将5μl在缓冲液(25mm hepes，ph 8，0.02％tween-20，0.5％bsa)中含有20nm eed(1-441)-his蛋白的溶液添加到孔中，并随后与化合物培育15分钟。将2.5μl在缓冲液(25mm hepes，ph 8，0.02％tween-20，0.5％bsa)中含有20nm生物素-h3k27me3(19-33)肽的溶液添加到孔中，并随后与化合物培育30分钟。alphascreen探测珠粒混合物在即将使用的前通过将镍螯合剂受体珠粒和抗生蛋白链菌素供体珠粒以1:1的比率(perkin elmer，产品编号6760619c/m/r)混合到上述缓冲液中来制备。随后将10μl探测珠粒混合物添加到培养板，并在黑暗中在室温下培育1小时。供体和受体珠粒的最终浓度各为10μg/ml。在680nm激发样品后，使用适合于用615nm滤光片进行最佳信号探测的alphascreen设置，在clariostar板读取器(bmg labtech)上读取培养板。615nm处的发射信号用于量化化合物抑制。基于来自阳性(最大信号对照)和阴性对照(最小信号对照)的读数对alphascreen信号进行归一化，得到剩余活性的百分比。随后将数据拟合到剂量反应方程式，得到ic
50
值。结果列于表4a和4b。
[0592]
表4a
[0593]
[0594]
[0595]
[0596]
[0597][0598]
表4b
[0599]
ic
50
定义：a＝《10nm；b＝》10nm-《100nm；并且c＝》100nm
[0600]
[0601]
[0602][0603]
实施例15-27
[0604]
体内药理实验评价方法
[0605]
通过细胞接种建立人肿瘤免疫缺陷小鼠皮下异种移植瘤模型：收集对数生长期的肿瘤细胞，计数后重悬于1
×
pbs中，调整细胞悬液浓度至2.5～5
×
107/ml。将肿瘤细胞用1ml注射器(4号针头)以5-10
×
106/0.2ml/小鼠皮下接种于免疫缺陷小鼠的右侧。所有动物实验均严格按照吉玛基因股份有限公司和苏州亚盛制药有限公司的实验动物使用和管理规范进行。相关参数的计算参考中国国家药品监督管理局“细胞毒抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则”。
[0606]
实验期间每周两次测量动物体重和肿瘤大小。每天观察动物的状态和有无死亡。定期监测肿瘤的生长和治疗对动物正常行为的影响，具体包括实验动物的活动、进食和饮水、体重增加或减少、眼睛、被毛等异常情况。实验期间观察到的死亡和临床症状记录在原始数据中。所有给药和测量小鼠体重和肿瘤体积的操作均在洁净工作台上进行。根据实验方案的要求，在末次给药结束后采集血浆和肿瘤组织，称重并拍照。血浆和肿瘤样品在-80℃冷冻备用。
[0607]
肿瘤体积(tv)计算为：tv＝a
×
b2/2，其中a和b分别代表待测肿瘤的长度和宽度。
[0608]
相对肿瘤体积(rtv)计算为：rtv＝vt/v1，其中v1为分组给药开始时的肿瘤体积，vt为给药后第t天测得的肿瘤体积。
[0609]
抗肿瘤活性的评价指标为肿瘤相对增殖率t/c(％)，其计算公式为：肿瘤相对增殖率t/c(％)＝(t
rtv
/c
rtv
)
×
100％，t
rtv
为治疗组rtv，c
rtv
为溶剂对照组rtv。
[0610]
肿瘤缓解率(％)计算为：治疗后出现sd(疾病稳定)、pr(肿瘤部分消退)和cr(肿瘤完全消退)的荷瘤小鼠数/本组小鼠总数
×
100％。
[0611]
动物体重变化(％)＝(实测体重-分组开始时体重)/分组开始时体重
×
100％。
[0612]
疗效评价标准：根据中国nmpa“细胞毒性抗肿瘤药物非临床研究技术指导原则”(2006年11月)，当t/c(％)值≤40％，统计分析p《0.05，确认疗效。如果小鼠体重减少20％以上或与药物有关的死亡数超过20％，则认为该剂量的药物具有严重毒性。
[0613]
根据clarke r.的描述，乳腺癌和其他模型体内实验性细胞毒药物研究中的实验
设计和终点分析[j].breast cancer research&treatment,1997,46(2-3):255-278,协同作用使用以下公式进行评估:协同分数＝((a/c)
×
(b/c))/(ab/c)；a＝药物a单药组的rtv值；b＝药物b单药组的rtv值；c＝溶剂对照组的rtv值，ab＝ab联合用药的rtv值。协同分数》1表示实现协同作用；协同分数＝1表示叠加效应；协同分数《1表示具有拮抗作用。
[0614]
使用mrecist(gao et al.,2015)测量的肿瘤反应包括疾病稳定(sd)、部分肿瘤消退(pr)和完全消退(cr)，通过比较第t天的肿瘤体积变化与其基线来确定：肿瘤体积变化(％)＝(vt-v1)/v1。bestresponse是t≥10时肿瘤体积变化的最小值(％)。对于每个时间t，还计算了从t＝1到t的肿瘤体积变化的平均值。bestavgresponse定义为t≥10的该平均值的最小值，响应标准(mrecist)改编自recist标准(gao et al.,2015；therasse et al.,2000)，定义如下：mcr，bestresponse《-95％和bestavgresponse《-40％；mpr，bestresponse《-50％和bestavgresponse《-20％；msd，bestresponse《35％和bestavgresponse《30％；mpd，未另行分类。sd、pr和cr被认为是响应者并用于计算响应率(％)。疾病控制率(dcr)是根据mrecist显示cr、pr或sd的动物比例计算的；总反应率(orr)是根据mrecist显示cr或pr的动物比例计算的。同时监测动物的体重。基于给药第一天的动物体重计算体重变化。肿瘤体积和体重变化(％)表示为平均值
±
平均值的标准误差(sem)。
[0615]
细胞活力测定(ctg)
[0616]
按照制造商的说明，使用celltiter-发光细胞活力测定法(promega)或wst测定法(cc-8试剂盒，中国上海李记生物)测定细胞活力。计算细胞活力＝(样品平均rlu-空白平均rlu)/(细胞对照rlu-空白rlu)
×
100。使用graphpad prism计算ic
50
值。通过calcusyn软件(biosoft，uk)计算组合指数(ci)值。ci《0.9表示协同组合效应，ci《0.1标记为5+，表示协同组合效果非常强；ci介于0.1和0.3之间，标记为4+，表示协同组合效果较强；ci在0.3和0.7之间，标记为3+表示协同组合效果中等。
[0617]
描述的评估方法用于以下实施例15-27。
[0618]
实施例15.在bap1 mut间皮瘤pdx模型中用化合物73治疗。
[0619]
本实验建立bap1 mut间皮瘤pdx模型(lide biotech)，评价化合物73的抗肿瘤作用。给药方案如下：
[0620]
化合物73：50mg/kg，口服，每天一次，共28天；
[0621]
化合物73：100mg/kg，口服，每天一次，共28天；
[0622]
如图1所示，给药28天后，化合物73(50mg/kg)和化合物73(100mg/kg)的t/c(％)值分别为69.7％和60％。
[0623]
因此，化合物73单药显示出剂量依赖性抗肿瘤活性。当化合物73分别以50mg/kg和100mg/kg给药时，t/c值分别为69.7％和60.0％。
[0624]
表5 bap1突变pdx模型遗传信息(genetic information)
[0625][0626]
实施例16.用化合物73和化合物a-1在bap1 mut间皮瘤pdx模型中联合治疗
[0627]
本实验建立bap1 mut间皮瘤pdx模型(lide biotech)，评价化合物73与化合物a-1联合的抗肿瘤作用。给药方案如下：
[0628]
化合物a-1：10mg/kg，口服，隔日一次，共28天；
[0629]
化合物73：50mg/kg，口服，每天一次，共28天；
[0630]
组合给药方案中各药物的给药方案与单药给药方案相同。
[0631]
如图2所示，化合物73和化合物a-1单药表现出中等抗肿瘤活性，研究结束时t/c值分别为69.7％和74.8％。联合给药进一步将t/c值降低到35％，协同分数为1.49，表明具备协同效应。
[0632]
实施例17.在bap1 mut间皮瘤pdx模型中用化合物73和化合物2-5联合治疗
[0633]
本实验建立bap1 mut间皮瘤pdx模型(lide biotech)，评价化合物73与化合物2-5联合的抗肿瘤作用。给药方案如下：
[0634]
化合物2-5：50mg/kg，口服，每天一次，共28天；
[0635]
化合物73：50mg/kg，口服，每天一次，共28天；
[0636]
组合给药方案中各药物的给药方案与单药给药方案相同。
[0637]
如图3所示，化合物2-5对抑制肿瘤生长无效，化合物73表现出中等的抗肿瘤活性，研究结束时t/c值为69.7％。联合给药进一步将t/c值降低至45％，协同因子为1.6，表明具有协同效应。
[0638]
实施例18.在nci-h226(bap1mut、cdkn2adel、fgfr high)异种移植模型中用化合物73治疗。
[0639]
本实验建立nci-h226(bap1mut,cdkn2adel,fgfr high)异种移植模型，评价化合物73的抗肿瘤作用。给药方案如下：
[0640]
化合物73：50mg/kg，口服，每天一次，共35天。
[0641]
如图4所示，给药35天后，化合物73的t/c(％)值为48.6％，所有小鼠均达到疾病稳定(sd)。
[0642]
实施例19.在nci-h226(bap1mut、cdkn2adel、fgfrhigh)异种移植模型中用化合物73和化合物2-5的组合治疗。
[0643]
本实验建立nci-h226(bap1mut,cdkn2adel,fgfr high)异种移植模型，评价化合物73联合化合物2-5的抗肿瘤作用。给药方案如下：
[0644]
化合物2-5：50mg/kg，口服，每天一次，共35天；
[0645]
化合物73：50mg/kg，口服，每天一次，共35天。
[0646]
组合给药方案中各药物的给药方案与单药给药方案相同。
[0647]
如图5所示，化合物2-5几乎没有抑制肿瘤生长的效果，化合物73表现出中等的抗肿瘤活性，研究结束时t/c值为48.6％。联合给药进一步将t/c值降低至28.5％，协同分数为1.4，表明具有协同效应。
[0648]
实施例20.在皮下恶性胸膜间皮瘤(mpm)pdx模型(fgfr1
high
；bap1
mut
)中用化合物73和化合物c联合治疗
[0649]
本实验建立皮下恶性胸膜间皮瘤(mpm)pdx模型(fgfr1 high；bap1mut)，评价化合物73联合化合物c的抗肿瘤作用。给药方案如下：
[0650]
化合物c：50mg/kg，口服，隔日一次，共76天；
[0651]
化合物73：100mg/kg，口服，隔日一次，共76天。
[0652]
组合给药方案中各药物的给药方案与单药给药方案相同。
[0653]
如图6和表6所示，化合物73和化合物c的单药表现出中等的抗肿瘤活性，研究结束时t/c值分别为53％和60％。联合给药进一步将t/c值降低至31％，协同分数为1.02，表明具有协同效应。
[0654]
如图7所示，在所有治疗期间，联合治疗并未导致体重减轻。
[0655]
表6化合物73联合化合物c对皮下恶性胸膜间皮瘤(mpm)pdx模型的抗肿瘤作用(fgfr1 high；bap1mut)
[0656][0657]
实施例21.在皮下bap1 mut间皮瘤pdx模型中用化合物73和化合物c联合治疗
[0658]
本实验建立皮下bap1突变间皮瘤pdx模型(lide biotech)，评价化合物73联合化合物c的抗肿瘤作用。给药方案如下：
[0659]
化合物c：50mg/kg，口服，隔日一次，共36天；
[0660]
化合物73：100mg/kg，口服，每天一次，共36天。
[0661]
组合给药方案中各药物的给药方案与单药给药方案相同。
[0662]
如图8和表7所示，化合物c单药抗肿瘤活性适中，第36天t/c值为55.17％。化合物73单药抗肿瘤活性强，第36天t/c值为37.22％。联合给药显著增强肿瘤抑制，t/c值为28.07％。
[0663]
如图9所示，在所有治疗期间，联合给药并未导致体重减轻。
[0664]
表7化合物73联合化合物c在皮下bap1突变间皮瘤pdx模型中的抗肿瘤作用
[0665]
给药方案rtv@d36t/c(％)@d36对照组14.58-化合物73 100mg/kg5.4337.22化合物c 50mg/kg8.0455.17化合物73+化合物c4.0928.07
[0666]
实施例22.化合物73和化合物c在h226(bap1mut,uhrf1high,tp53wt,cdkn2adel,fgfrhigh)皮下间皮瘤异种移植模型中的体内抗肿瘤活性
[0667]
本实验建立h226(bap1mut、uhrf1high、tp53wt、cdkn2adel、fgfrhigh)皮下间皮瘤异种移植模型，评价化合物73与化合物c联合应用的抗肿瘤作用。给药方案如下：
[0668]
化合物c：50mg/kg，口服，隔日一次，共39天；
[0669]
化合物73：50mg/kg，口服，每天一次，共39天；
[0670]
化合物73：100mg/kg，口服，每天一次，共39天。
[0671]
如图10所示，化合物c和化合物73的单一药剂显示出中等的抗肿瘤活性。
[0672]
如表8所示，第39天，联合给药组的t/c(％)值为41.05％(化合物c 50mg/kg+化合物73 50mg/kg)和34.79％(化合物c 50mg/kg+化合物73 100mg/kg)，化合物c(50mg/kg)的t/c值为49.45％，化合物73(50mg/kg)的t/c值为67.7％，化合物73(100mg/kg)单剂组的t/c值为59.73％。
[0673]
如图11所示，在所有治疗期间，联合治疗并未导致体重减轻。
[0674]
表8化合物73与化合物c联合给药在h226(bap1mut、uhrf1high、tp53wt cdkn2adel、fgfrhigh)皮下间皮瘤异种移植模型中的抗肿瘤作用
[0675][0676][0677]
实施例23.化合物c和化合物73在nci-h28(x1)(bap1mut、uhrf1high、tp53wt、cdkn2adel、fgfrlow、nf2wt)皮下间皮瘤异种移植模型中的体内抗肿瘤活性
[0678]
本实验建立nci-h28(x1)(bap1mut,uhrf1high,tp53wt,cdkn2adel,fgfrlow,nf2wt)皮下间皮瘤异种移植模型，评价化合物73联合化合物c的抗肿瘤作用。给药方案如下：
[0679]
化合物c：50mg/kg，口服，隔日一次，共28天；
[0680]
化合物73：100mg/kg，口服，每天一次，共28天；
[0681]
如图12和表9所示，化合物c单药抗肿瘤活性适中，第29天t/c值为92.16％。化合物73单药抗肿瘤活性强，第29天t/c值为33.06％。联合给药显著增强肿瘤抑制，t/c值为14.77％，协同因子为2.06，表明具有协同效应。
[0682]
表9化合物73与化合物c组合在nci-h28(x1)(bap1mut,uhrf1high,tp53wt,cdkn2adel,fgfrlow,nf2wt)皮下间皮瘤异种移植模型中的抗肿瘤作用
[0683][0684][0685]
实施例24.化合物c和化合物73在皮下22rv1前列腺异种移植模型中的体内抗肿瘤活性。
[0686]
本实验建立皮下22rv1前列腺异种移植模型，评价化合物73联合化合物c的抗肿瘤作用。给药方案如下：
[0687]
化合物c：100mg/kg，口服，隔日一次，共28天；
[0688]
化合物73：100mg/kg，口服，每天一次，共28天；
[0689]
联合用药给药方案中各药物给药方案与单药给药方案相同，共28天。
[0690]
如图13和表10所示，化合物c和化合物73单药显示中等抗肿瘤活性，第26天t/c值分别为93.39％和49.89％。联合治疗显著增强肿瘤抑制作用，t/c值33.22％，协同分数1.40，表明具有协同效应。
[0691]
如图14所示，在所有治疗期间，联合治疗并未导致体重减轻。
[0692]
表10化合物73与化合物c联合在皮下22rv1前列腺异种移植模型中的抗肿瘤作用
[0693][0694][0695]
实施例25.化合物c和化合物73在皮下lncap前列腺异种移植模型中的体内抗肿瘤活性。
[0696]
本实验建立皮下lncap前列腺异种移植模型，评价化合物73联合化合物c的抗肿瘤作用。给药方案如下：
[0697]
化合物c：100mg/kg，口服，第1天-第9天，隔日一次；50mg/kg，口服，第10天至第28天，隔日一次；
[0698]
化合物73：100mg/kg，口服，每天一次，共28天；
[0699]
联合用药给药方案中各药物给药方案与单药给药方案相同，共28天。
[0700]
如图15和表11所示，化合物c和化合物73单药显示中等抗肿瘤活性，第17天t/c值分别为57.46％和91.30％。联合治疗显著增强肿瘤抑制作用，t/c值18.86％，协同分数2.81，表明具有协同效应。
[0701]
表11化合物73与化合物c联合在皮下lncap前列腺异种移植模型中的抗肿瘤作用
[0702]
[0703][0704]
实施例26.化合物73和化合物4在ezh2 mut bcl2易位dlbc细胞系中的体外抗增殖活性。
[0705]
dlbcl细胞与化合物73、化合物4及其组合孵育6天，通过ctg测定确定细胞活力。如图16和图17所示，化合物73和化合物4的组合在携带突变的ezh2和易位的bcl-2的karpas-422和su-dhl-6细胞中显示出比其单一药剂更强的抗增殖活性。计算和评分组合指数(ci)以确定协同作用的水平。在大多数浓度组合中，ci评分为3+、4+和5+，分别表明协同作用中等、强和非常强。
[0706]
实施例27.化合物73和化合物4在karpas-422皮下dlbcl异种移植模型中的体内抗肿瘤活性。
[0707]
本实验建立karpas-422皮下dlbcl异种移植模型，评价化合物73联合化合物4的抗肿瘤作用。给药方案如下：
[0708]
化合物73：30mg/kg，口服，每天一次，共28天；
[0709]
化合物4：50mg/kg，口服，每天一次，共28天；
[0710]
联合用药给药方案中各药物给药方案与单药给药方案相同，共28天。
[0711]
如图18所示，在karpas-422异种移植模型中，化合物73和化合物4的组合显示出比其单一药剂更强的抗肿瘤活性。治疗8天后观察到协同抗肿瘤活性，协同分数为1.18，治疗22天后协同分数达到1.47。
[0712]
现在已经完全描述了本文中的方法、化合物和组合物，本领域技术人员将理解，可以在广泛且等效的条件、配方和其他参数范围内执行相同的操作，而不影响本发明的提供的方法、化合物和组合物或其任何实施方案的范围。
[0713]
本文引用的所有专利、专利申请和出版物均以全文引用的方式并入本文。