重楼皂苷II在诱导KLF9表达水平上的应用

本发明涉及肿瘤治疗领域，具体涉及重楼皂苷ii在诱导klf9表达水平上的应用。

背景技术：

1、原发性肝癌是目前我国第4位常见恶性肿瘤及第2位肿瘤致死病因，严重威胁我国人民的生命和健康。肝癌治疗领域的特点是多学科参与、多种治疗方法共存。传统中药来源的有效单体成分是原创新药研发的重要资源，大多具有良好的抗癌活性，具有成分结构清楚，来源丰富，易于研究，活性多样等特点，更加符合精准医疗和靶向治疗的观点。

2、重楼皂苷是抗癌中药七叶一枝花的主要活性成分，重楼皂苷ii(polyphyllin ii，ppii)是一种抗肿瘤活性很强的小分子化合物，前期实验结果证实重楼皂苷ii诱导的肝癌细胞死亡方式为细胞焦亡。细胞焦亡(pyroptosis)是一种促炎性的程序性死亡形式，与细胞凋亡和细胞坏死有一定的区别。焦亡主要依赖于效应蛋白gasdermin家族成员的切割，形成质膜孔，导致细胞不断胀大直至膜发生破裂，并伴有大量炎症因子的释放。

3、krüppel样因子9(krüppel-like factor 9；klf9)能够特异地结合基本转录元件，所以被称作基本转录元件结合蛋白，是sp/klf(specifieity protein/krüppel-likefactor)转录因子家族成员之一。klf9基因位于人类基因组的第9号染色体，含有2个外显子，其编码区有735个碱基，最终翻译形成含有244个氨基酸的蛋白。基于启动子区域的结合研究和寡核苷酸筛选，klf9含有一个保守的α-螺旋基序aa/vxxl，该基序介导其与组蛋白去乙酰酶依赖性共阻遏物(sin3a)结合并作为转录抑制因子发挥作用。klf9在正常肝脏组织中表达量较高，但肿瘤细胞中表达量较低。有研究表明，通过特异性提高klf9的蛋白表达水平，能够有效抑制肝癌细胞的生长和诱导肝癌细胞死亡，这提示klf9作为肿瘤抑制因子在肝癌发生发展过程中起抑制作用。klf9能够通过细胞因子调节炎症反应，但其本身也受炎症因子的调控。

4、但是重楼皂苷ii能否影响klf9的表达以及转录因子klf9诱导肝癌细胞焦亡效应蛋白gsdme的活化机制尚不明确。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服上述问题，深入阐明重楼皂苷ii通过转录因子klf9诱导肝癌细胞焦亡效应蛋白gsdme的活化机制，为肝癌的治疗提供新的潜在靶点，从而为开发基于细胞焦亡的抗癌新药提供理论和实验依据。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

2、重楼皂苷ii在诱导klf9表达水平上的应用，具体为：控制重楼皂苷ii浓度改变klf9的蛋白表达水平。

3、作为改进，增加使用所述重楼皂苷ii的浓度，以增加klf9的蛋白表达水平。

4、作为改进，所述重楼皂苷ii通过调整klf9的蛋白表达水平诱导肝癌细胞焦亡效应蛋白gsdme的活化，进而促使肝癌细胞发生焦亡。

5、作为改进，所述肝癌细胞为hepg2或huh7细胞。

6、作为改进，敲低所述klf9基因抑制重楼皂苷ii诱导的gsdme的活化。

7、作为改进，所述转录因子klf9结合在细胞焦亡关键基因gsdme转录起始位点上游183bp-198bp和1375bp-1390bp区域。

8、作为改进，所述重楼皂苷ii用于制作通过改变klf9表达水平治疗肝癌的药物。

9、作为改进，所述药物为针剂或口服药。

10、作为改进，所述重楼皂苷的浓度为1.5-30μmol/l。

11、本发明的优点在于：

12、本发明公开了重楼皂苷ii通过转录因子klf9诱导肝癌细胞焦亡效应蛋白gsdme的活化机制，为肝癌的治疗提供新的潜在靶点，从而为开发基于细胞焦亡的抗癌新药提供理论和实验依据。

技术特征：

1.重楼皂苷ii在诱导klf9表达水平上的应用，其特征在于，控制重楼皂苷ii浓度改变klf9的蛋白表达水平。

2.根据权利要求1所述重楼皂苷ii在诱导klf9表达水平上的应用，其特征在于，增加使用所述重楼皂苷ii的浓度，以增加klf9的蛋白表达水平。

3.根据权利要求1所述重楼皂苷ii在诱导klf9表达水平上的应用，其特征在于，所述重楼皂苷ii通过调整klf9的蛋白表达水平诱导肝癌细胞焦亡效应蛋白gsdme的活化，进而促使肝癌细胞发生焦亡。

4.根据权利要求2所述重楼皂苷ii在诱导klf9表达水平上的应用，其特征在于，所述肝癌细胞为hepg2或huh7细胞。

5.根据权利要求2所述重楼皂苷ii在诱导klf9表达水平上的应用，其特征在于，敲低所述klf9基因抑制重楼皂苷ii诱导的gsdme的活化。

6.根据权利要求2所述重楼皂苷ii在诱导klf9表达水平上的应用，其特征在于，所述转录因子klf9结合在细胞焦亡关键基因gsdme转录起始位点上游183bp-198bp和1375bp-1390bp区域。

7.根据权利要求1所述重楼皂苷ii在诱导klf9表达水平上的应用，其特征在于，所述重楼皂苷ii用于制作通过改变klf9表达水平治疗肝癌的药物。

8.根据权利要求7所述重楼皂苷ii在诱导klf9表达水平上的应用，其特征在于，所述药物为针剂或口服药。

9.根据权利要求7所述的重楼皂苷ii在诱导klf9表达水平上的应用，其特征在于，所述重楼皂苷的浓度为1.5-30μmol/l。

10.一种基于权利要求3所述的细胞焦亡诱导剂，其特征在于，所述诱导剂使用重楼皂苷ii制作。

技术总结
本发明公开了重楼皂苷II在诱导KLF9表达水平上的应用。本发明使用重楼皂苷II促进转录因子KLF9的表达，进而与GSDME的启动子区域结合发挥转录调控作用，诱导肝癌细胞焦亡效应蛋白GSDME的活化，引起肝癌细胞发生焦亡。本发明公开了转录因子KLF9介导重楼皂苷II诱导肝癌细胞焦亡效应蛋白GSDME的活化机制，为肝癌的治疗提供新的潜在靶点，从而为开发基于细胞焦亡的抗癌新药提供理论和实验依据。

技术研发人员：何志巍,吴隆吉,孔霞
受保护的技术使用者：广东医科大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/14