一种抗疲劳的中药有效部位组合物及其制备方法与应用与流程

1.本发明涉及一种中药组合物，尤其涉及一种抗疲劳的中药有效部位组合物及其制备方法与应用，属于中药研究技术领域。


背景技术：

2.疲劳为一个主观感觉症状，是指一种倦怠、精力不够或周身精疲力竭的感觉。有人将疲劳分为脑力疲劳与体力疲劳两个方面，脑力疲劳是一种缺乏动机与警觉的主观感觉，表现为头脑昏沉，做事不易集中注意力甚至思考困难，健忘，欲望下降，工作中易出错，工作效率下降等。体力疲劳是感觉到肌肉缺乏能量或力量，常表现为进行一定的体力活动后容易疲劳，或疲劳不易消失，甚至不同程度地影响日常生活及工作。在临床上，体力疲劳和脑力疲劳相互影响，疲劳是一个常见的、非特异的、涉及范围很广的症状，可为多种疾病的主要症状或很多疾病的伴随症状。由于疲劳的存在，会导致影响日常生活、工作和学习的机体障碍，同时可产生一系列的临床症状：体力和精力或心理负荷过重所导致的精神困倦、体力不支、心中烦躁、肌肉酸痛、腰背疼痛、胸部不适、头昏脑胀、头痛失眠、烦躁易怒、抑郁焦虑、思想难集中、健忘、性功能减退等。
3.现代生物科学对体力性疲劳的认识已经深入到了组织、细胞、分子水平，精细地揭示了运动疲劳的病理过程与机制，在微观研究方面已硕果满枝。但在运动性疲劳的预防和恢复方面，由于受到局部论、外因论与单纯因果线性关系等因素的限制，有时难以考虑生命机体固有的整体有序性和系统关联性，无法摆脱局部论与外因论的束缚，难以标本兼顾，虽然化学药品和生物制品在提高运动能力、延缓疲劳发生和消除疲劳方面确有较好的效果，但同时由于其副作用给机体造成的危害、以及某些药物中含有兴奋剂成分等不利因素也引起了人们的重视；而中国传统中医药安全有效，并且十分强调辨证施治及整体观念，重视调节人体自身的抗疲劳能力，通过调补结合，促进机体达到新的平衡而达到消除疲劳，提高运动能力的目的，因此在消除体力性疲劳方面有着得天独厚的优势。
4.但是由于中药饮片有效部位含量低，服用量大，不方便，药味苦，所以不易被患者接受，但经过现代科学工艺的提取，使得有效部位含量提高，用量减少，服用方便，而且良药不再苦口，增加了接受的人群，但是，面对现代消费者的产品需求，现有中药制剂的有效部位含量和抗疲劳效果仍有待提高。


技术实现要素：

5.本发明针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种抗疲劳的中药有效部位组合物及其制备方法与应用，本发明的中药有效部位组合物具有显著的协同效应，对于抗疲劳效果显著。
6.为实现以上目的，所采用的技术方案是：
7.本发明的目的之一在于提供一种抗疲劳的中药有效部位组合物，包括多糖提取物和总黄酮提取物，所述的多糖提取物提取自松花粉、葫芦巴；所述的总黄酮提取物提取自枸
骨根、三白草根。
8.进一步，按照重量份数计，所述抗疲劳的中药有效部位组合物包括多糖提取物3～10份和总黄酮提取物2～7份。
9.再进一步，按照重量份数计，所述抗疲劳的中药有效部位组合物包括多糖提取物6份和总黄酮提取物4份。
10.进一步，所述松花粉:葫芦巴的重量比为(1～3):(2～5)。
11.进一步，所述枸骨根:三白草根的重量比为(1～3):(3～7)。
12.进一步，所述的多糖提取物中多糖的含量不低于70wt％，所述的总黄酮提取物中的总黄酮的含量不低于60wt％。
13.本发明的目的之二在于提供一种上述的中药有效部位组合物的制备方法，包括如下步骤：
14.(1)多糖提取物的制备：以松花粉、葫芦巴为原料，其中葫芦巴经超微粉碎获得超微粉，松花粉经破壁处理，两者进行混合，加入重量10～25倍的水，回流浸提3～6h，反复提取3次，收集水提液，浓缩至原有体积的1/3，然后加入乙醇进行醇沉6h，减压回收乙醇，浓缩，获得富含粗多糖成分的浓缩液，加入复合酶，酶解温度45℃～55℃，ph值为5～6.5，酶解时间1-3h，获得酶解粗多糖液，浓缩干燥获得多糖干燥物；
15.(2)总黄酮提取物的制备：以枸骨根、三白草根为原料，分别进行超微粉碎获得超微粉，将所获超微粉进行混合，加入重量15～30倍的热水，超声提取1-3h，反复提取3次，合并提取液，减压浓缩至原有体积的1/3体积后，经膜过滤(5000da)处理，获得截留液，减压浓缩，并采用正丁醇萃取两次，第一次采用5倍萃取，第二次采用3倍萃取，将两次萃取液合并，减压获得萃取浓缩液，加入3～5倍的乙醇进行醇沉，获得料液，干燥获得总黄酮提取物。
16.本发明的目的之三在于提供一种上述的中药有效部位组合物在制备抗疲劳产品领域的应用。
17.进一步，上述的应用是指以所述的中药有效部位组合物为有效部位，不加辅料或加入药剂学常规辅料，制成药学上可以接受的剂型，如片剂、颗粒剂、硬胶囊剂、丸剂、滴丸、或软胶囊等。
18.再进一步，所述辅料为各种药学上常用的辅料和/或赋形剂，包括但不限于糖类(如乳糖、葡萄糖和蔗糖)，淀粉(如玉米淀粉和土豆淀粉)，麦芽糊精、纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素)，黄蓍胶粉末，麦芽，明胶，滑石，固体润滑剂(如硬脂酸和硬脂酸镁)，硫酸钙，植物油(如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油、可可油)，多元醇(如丙二醇、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇、聚乙二醇)，海藻酸，乳化剂(如tween)，润湿剂(如月桂基硫酸钠)，着色剂，调味剂，压片剂，稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无热原水，等渗盐溶液，磷酸盐缓冲液等。辅料可根据需要提高配方的稳定性、活性及生物有效性等，或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。
19.与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
20.松花粉：为松科植物马尾松pinus massoniana lamb.油松pinus tabuli formis carr.或同属数种植物的干燥花粉，健脾益气，含有人体必需的多种矿物质元素和维生素，有益于人体健康。
21.葫芦巴：拉丁学名：trigonella foenum-graecum l.，是豆科胡卢巴属植物胡卢巴
的习称，补肾阳，祛寒湿，温肾助阳，散寒止痛。
22.枸骨根：冬青科植物枸骨ilex cornuta lindl.ex paxt.的根部，补肝肾，清风热，治腰膝痿弱，关节疼痛，坚强筋骨，填补髓脏，固敛精血。
23.三白草根：三白草科植物三白草saururus chinensis(lour.)baill.的干燥根茎，清热解毒之效，治筋骨及妇人调经多用之用(《植物名实图考》)。
24.在配方中，松花粉健脾益气、葫芦巴益肾补气，枸骨根滋阴益精，三白草根，清热，调和配方性热。本方中各药物相辅相成，缺一不可，共奏抗疲劳疗效，起到很好的抵抗疲劳的作用。
25.本发明产品成分明确，疗效稳定，服用量小，安全性高，符合传统中医药组方原则，本发明以松花粉、葫芦巴为提取对象，进行多糖类有效部位富集；以枸骨根、三白草根为提取对象，进行黄酮类有效部位富集，将提取得到多糖类有效部位和黄酮类有效部位，进行调配，并适当添加常规辅料，制备成适宜人体服用的有效剂型，整个过程提取效率高，周期较短，并通过动物试验证明，其抗疲劳效果好，满足了现代消费者的产品需求。
具体实施方式
26.以下结合实例对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。实际生产中的用量不仅限于实例中的药物用量，可以用吨、千克、克等计量单位，但是各原料药物的用量配比仍依据本方明的技术方案。
27.其中，多糖的检测方法，采用硫酸-苯酚法显色分光光度法测定多糖含量；总黄酮的检测方法采用sn/t 4592-2016的方法进行检测。
28.实施例1
29.一种抗疲劳的中药有效部位组合物，按照重量份计，其组成为多糖提取物7份、总黄酮提取物3份。
30.制备步骤如下：
31.(1)多糖提取物的制备：取松花粉2份、葫芦巴3份，其中葫芦巴经超微粉碎获得超微粉，松花粉经破壁处理，两者进行混合，加入重量为松花粉和葫芦巴总重量15倍的水，回流浸提5h，反复提取3次，收集水提液，浓缩至原有体积的1/3，然后加入乙醇进行醇沉6h，减压回收乙醇，浓缩，获得富含粗多糖成分的浓缩液，加入复合酶，酶解温度50℃，ph值为6，酶解时间2h，获得酶解粗多糖液，收集，浓缩干燥获得多糖干燥物，测得其中的多糖含量为75.6％。
32.(2)总黄酮提取物的制备：取枸骨根2份、三白草根5份，分别进行超微粉碎获得超微粉，将所获超微粉进行混合，加入重量20倍的热水，超声提取2h，反复提取3次，合并提取液，减压浓缩至原有体积的1/3体积后，经膜过滤(5000da)处理，获得截留液，减压浓缩，并采用正丁醇萃取两次，第一次采用5倍萃取，第二次采用3倍萃取，将两次萃取液合并，减压获得萃取浓缩液，加入3倍的乙醇进行醇沉，获得料液，干燥获得总黄酮提取物。测得其中的黄酮含量为68.3％。
33.(3)剂型制法：按照处方取上述各有效部位提取物多糖组分126g，总黄酮组分54g，粉碎，混合，混入微晶纤维素120g，混匀，制粒，将所得装入1号胶囊，每粒硬胶囊含内容物1g，即得。
34.实施例2
35.一种抗疲劳的中药有效部位组合物，按照重量份计，其组成为多糖提取物3份、总黄酮提取物2份。
36.制备步骤如下：
37.(1)多糖提取物的制备：取松花粉3份、葫芦巴5份，其中葫芦巴经超微粉碎获得超微粉，松花粉经破壁处理，两者进行混合，加入重量为松花粉和葫芦巴总重量25倍的水，回流浸提6h，反复提取3次，收集水提液，浓缩至原有体积的1/3，然后加入乙醇进行醇沉6h，减压回收乙醇，浓缩，获得富含粗多糖成分的浓缩液，加入复合酶，酶解温度55℃，ph值为6.5，酶解时间3h，获得酶解粗多糖液，收集，浓缩干燥获得多糖干燥物，测得其中的多糖含量为82.4％。
38.(2)总黄酮提取物的制备：取枸骨根2份、三白草根7份，分别进行超微粉碎获得超微粉，将所获超微粉进行混合，加入重量30倍的热水，超声提取3h，反复提取3次，合并提取液，减压浓缩至原有体积的1/3体积后，经膜过滤(5000da)处理，获得截留液，减压浓缩，并采用正丁醇萃取两次，第一次采用5倍萃取，第二次采用3倍萃取，将两次萃取液合并，减压获得萃取浓缩液，加入5倍的乙醇进行醇沉，获得料液，干燥获得总黄酮提取物。测得其中的黄酮含量为72.3％。
39.(3)剂型制法：按照处方取上述各有效部位提取物，多糖组分108g，总黄酮组分72g，粉碎，混合，加入麦芽糊精120g，混匀，制粒，灌装，制成颗粒剂，每袋1g，即得。
40.实施例3
41.一种抗疲劳的中药有效部位组合物，按照重量份计，其组成为多糖提取物10份、总黄酮提取物8份。
42.制备步骤如下：
43.(1)多糖提取物的制备：取松花粉1份、葫芦巴2份，其中葫芦巴经超微粉碎获得超微粉，松花粉经破壁处理，两者进行混合，加入重量为松花粉和葫芦巴总重量10倍的水，回流浸提3h，反复提取3次，收集水提液，浓缩至原有体积的1/3，然后加入乙醇进行醇沉6h，减压回收乙醇，浓缩，获得富含粗多糖成分的浓缩液，加入复合酶，酶解温度45℃，ph值为5，酶解时间1h，获得酶解粗多糖液，收集，浓缩干燥获得多糖干燥物，测得其中的多糖含量为71.2％。
44.(2)总黄酮提取物的制备：取枸骨根1份、三白草根3份，分别进行超微粉碎获得超微粉，将所获超微粉进行混合，加入重量15倍的热水，超声提取1h，反复提取3次，合并提取液，减压浓缩至原有体积的1/3体积后，经膜过滤(5000da)处理，获得截留液，减压浓缩，并采用正丁醇萃取两次，第一次采用5倍萃取，第二次采用3倍萃取，将两次萃取液合并，减压获得萃取浓缩液，加入4倍的乙醇进行醇沉，获得料液，干燥获得总黄酮提取物。测得其中的黄酮含量为62.5％。
45.(3)剂型制法：按照处方取上述各有效部位提取物，多糖组分100g，总黄酮组分80g，粉碎，混合，加入糖浆、糊精等辅料120g，混匀，制粒压片，每片1g，即得。
46.对比例1
47.取松花粉51.2g、葫芦巴74.8g、枸骨根18g、三白草根36g，将各种中药材原料粉碎、混合，形成组合物，然后加入微晶纤维素至300g，装入1号胶囊，每粒内容物1.0g，制成硬胶
囊剂。
48.对比例2
49.取实施例1制得的多糖提取物180g、加入微晶纤维素至300g，装入1号胶囊，每粒内容物1.0g，制成硬胶囊剂。
50.对比例3
51.取实施例1制得的总黄酮提取物180g，微晶纤维素至300g，装入1号胶囊，每粒内容物1.0g，制成硬胶囊剂。
52.对比例4
53.取实施例1制得的多糖提取物160g和总黄酮提取物20g，粉碎，混合，混入微晶纤维素120g，混匀，制粒，将所得装入1号胶囊，每粒内容物1g，制成硬胶囊剂。
54.对比例5
55.取实施例1制得的多糖提取物126g，总黄酮提取物54g，其中多糖提取物来自松花粉：葫芦巴比例为5:1；总黄酮提取物来自枸骨根：三白草根比例为1:2；混入微晶纤维素120g，混匀，制粒，将所得装入1号胶囊，每粒内容物1g，制成硬胶囊剂。
56.实验
57.为进一步验证本发明的药理作用，用本发明的片剂进行动物功效学实验，验证其对抗疲劳效果。
58.实验动物：
59.icr种小白鼠，雄性，体重20
±
2g，由长春市亿斯实验动物技术有限责任公司提供。
60.剂量设计、分组及受试物给予方式：
61.实验共设置：
62.样品组1：实施例2所获得的组分。
63.样品组2～6：为对比例1～5获得的组分。
64.阳性对照组：西洋参胶囊。国药准字z20027557，生产单位：广州大光制药有限公司0.5g/粒，每次3粒、每天2次。
65.溶媒对照组：10ml/kg(溶媒)。
66.给药前，剂量设计：
67.本产品的人体推荐剂量为3g/60kg，即0.05g/kg。药物配制方法：取2g样品，加0.5％cmc-na至20ml，即得10％浓度的混悬液。阳性对照药物选用的西洋参胶囊，取四粒胶囊内容物约2.0g加0.5％cmc-na至20ml，即得10％浓度的西洋参胶囊混悬液。置于4℃冰箱保存3天以内。
68.主要仪器与试剂
69.仪器：t-200型动物电子天平；uv-2800紫外可见分光光度计；ja1003b型电子天平；游泳箱(大小约50*50*40cm)；cs-600b型分析仪；ldz5-2型离心机；sba-40e型生物传感分析仪。
70.试剂：尿素氮测定试剂盒，硫酸；肝/肌糖原试剂盒；葡萄糖标准液；缓冲剂；血糖血乳酸溶血剂。
71.实验方法
72.1、小鼠负重游泳试验方法
73.取雄性icr小鼠120只，适应环境3天，游泳筛选。隔天随机等分为五组，每组15只，第一组为溶媒对照组，第二组为阳性对照药1g/kg(相当于人体推荐摄入量20倍，下同)，第三、四、五、六、七、八组分别为样品1组、对比例1～5组(样品2-6组)1g/kg(相当于人体推荐摄入量20倍，下同)。灌胃给予受试样品，每日一次，连续45日，溶媒对照组给予0.5％cmc-na，体积均为10ml/kg。每周称量体重两次，并适时调整给药剂量。于末次给予受试样品30min后，将小鼠鼠尾根部负荷5％体重的铅丝，置于游泳箱(500*500*400cm)中游泳。水深30cm，水温25℃
±
1.0℃。记录小鼠自放入水中至沉入水底再无力浮起时间，作为小鼠负重游泳时间。
74.实验结果如表1所示：
75.表1.小鼠负重游泳时间的影响(n＝15)
[0076][0077]
2、小鼠血清尿素氮试验方法：
[0078]
取雄性icr小鼠120只，适应环境3天，游泳筛选。隔天随机等分为五组，每组15只，第一组为溶媒对照组，第二组为阳性对照药1g/kg，第三、四、五、六、七、八组分别为样品组、对比例1～5组,1g/kg。灌胃给予受试样品，每日一次，连续45日，溶媒对照组给予0.5％cmc-na，体积均为10ml/kg。每周称量体重两次，并适时调整给药剂量。高尿素模型的建立及标本制备：末次给受试样品30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min，休息60min后小鼠摘除眼球采全血约0.5ml(不加抗凝剂)，置4℃冰箱约3h，血凝固后2000prn/min离心15min，血清备用。采用cs-600b型分析仪测定。
[0079]
实验结果如表2所示：
[0080]
表2.小鼠血清尿素氮含量的影响(n＝15)
[0081][0082]
3、小鼠肝糖原试验方法：
[0083]
取雄性icr小鼠120只，适应环境3天，游泳筛选。隔天随机等分为五组，每组15只，第一组为溶媒对照组，第二组为阳性对照药1g/kg，第三、四、五、六、七、八组分别为样品1组、对比例1～5组(样品2-6组)，1g/kg。灌胃给予受试样品，每日一次，连续45日，溶媒对照组给予0.5％cmc-na，体积均为10ml/kg。每周称量体重两次，并适时调整给药剂量。末次给予受试样品后30min，脱臼处死动物，取肝脏经生理盐水漂洗后，用滤纸吸干，精确称取肝脏75mg，加入225μl碱溶液，沸水浴煮20min，流水冷却。加双蒸馏水7.2ml(制成糖原检测液)。采用肝糖原试剂盒测定。
[0084]
实验结果如表3所示：
[0085]
表3.小鼠肝糖原含量的影响(n＝15)
[0086][0087][0088]
4、小鼠血乳酸试验方法：
[0089]
取雄性icr小鼠120只，适应环境3天，游泳筛选。隔天随机等分为五组，每组15只，第一组为溶媒对照组，第二组为阳性对照药1g/kg，第三、四、五、六、七、八组分别为样品1
组、对比例1～5组(样品2-6组)，1g/kg。灌胃给予受试样品，每日一次，连续45日，溶媒对照组给予0.5％cmc-na，体积均为10ml/kg。每周称量体重两次，并适时调整给药剂量。末次给样30min后采血，然后不负重在温度30℃的水中游泳10min后停止，采血20μl加入40μl破膜液中振荡；采用sba-40e型生物传感分析仪测定乳酸含量。
[0090]
实验结果如表4所示：
[0091]
表4.小鼠血乳酸含量的影响(n＝15)
[0092][0093]
通过以上小鼠负重游泳试验方法、小鼠血清尿素氮试验方法、小鼠肝糖原试验方法、小鼠血乳酸试验方法，可判定本技术实施例制备的样品具有缓解体力疲劳的作用，都远远优于其他样品组，说明所选择的有效部位组合物效果显著，产生了显著的协同效应。
[0094]
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。