Tiki2作为靶点在制备用于治疗骨关节炎药物中的应用

本发明涉及骨关节炎治疗，具体而言，涉及tiki2作为靶点在制备用于治疗骨关节炎药物中的应用。

背景技术：

1、骨关节炎是一类关节退行性疾病，在中老年人群中发病率很高，严重影响病人行动，是中老年人致残的重要因素之一。骨关节炎主要表现为关节软骨退化、软骨下骨硬化和增生、以及滑膜炎症等。目前治疗骨关节炎的方法包括消炎和镇痛等缓解症状的疗法，以及对于终末端病程患者进行人工关节置换。这些疗法不能从根本上改变病程和治疗疾病。因此，急需开发治疗骨关节炎的新型药物。

2、鉴于此，特提出本发明。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供tiki2作为靶点在制备用于治疗骨关节炎药物中的应用，从而为开发治疗骨关节炎的新型药物提供潜在有效的治疗靶点以及有效的防治方法。

2、本发明是这样实现的：

3、第一方面，本发明提供了tiki2作为靶点在制备用于治疗骨关节炎药物中的应用，该药物能够促进tiki2蛋白的表达。

4、发明人研究发现了一种治疗骨关节炎的新靶点——tiki2，可以用于制备治疗骨关节炎药物。

5、wnt信号通路在骨关节炎疾病发生和发展过程中起重要作用，tiki2蛋白是一类wnt信号通路抑制分子。发明人发现tiki2基因高表达于关节软骨细胞中，并且其在软骨细胞中的表达量与骨关节炎的病程呈负相关。在小鼠软骨细胞中特异性敲除tiki2基因加重dmm(小鼠膝关节炎手术)手术诱导的小鼠膝关节关节炎症状。利用重组病毒注射小鼠膝关节腔可以缓解dmm手术诱导的关节炎症状。这些研究结果表明，tiki2蛋白可以作为骨关节炎的治疗靶点，增加tiki2蛋白在关节软骨细胞中的表达有望治疗骨关节炎。

6、目前治疗骨关节炎的主要手段为消炎镇痛以减轻症状和人工关节置换等，尚无可以改变病程的药物。针对tiki2蛋白研发的药物将有可能从根本上减缓并逆转骨关节炎病程。例如，利用腺相关病毒制备基因治疗药物注射关节腔补充关节软骨细胞中的tiki2蛋白，有望成为改变骨关节炎病程的新型治疗手段。

7、在本发明应用较佳的实施方式中，骨关节炎为膝关节骨关节炎、肘关节骨关节炎、肩关节骨关节炎、髋关节骨关节炎、胯关节骨关节炎、脊椎关节病、颈椎骨关节炎和腰椎骨关节炎。

8、在一种可选的实施方式中，膝关节骨关节炎选自创伤性膝骨关节炎或退行性膝骨关节炎。

9、在本发明应用较佳的实施方式中，上述应用包括如下至少一种作用：促进软骨形成、减缓骨关节炎进展、逆转软骨丢失和逆转软骨退变。

10、需要说明的是，软骨丢失包括不限于：表层纤维化，表层番红染色丢失；软骨下骨外露；或软骨全层的丢失。

11、在一种可选的实施方式中，减缓骨关节炎进展为减缓软骨降解。

12、在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物的剂型为片剂、胶囊剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、散剂、颗粒剂、注射剂、冻干粉针剂、搽剂、涂剂、涂膜剂、软膏剂、洗剂、栓剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂、软膏剂、硬膏剂、巴布剂或贴剂。

13、在一种可选的实施方式中，药物的剂型为注射剂。

14、在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物还包括药学上可接受的添加剂或辅料。

15、在一种可选的实施方式中，药学上可接受的添加剂或辅料选自如下一种或多种：溶剂、缓冲液、乳化剂、悬浮剂、分解剂、崩解剂、分散剂、黏结剂、赋形剂、安定剂、螯合剂、稀释剂、胶凝剂、防腐剂、润湿剂、润滑剂、吸收延迟剂、香味剂、甜味剂、色素以及脂质体。

16、在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物为注射剂时，药物注射于关节腔。发明人发现，将药物注射于关节腔中，可以有效延缓骨关节疾病进程。

17、在一种可选的实施方式中，药物还包括联用药物，联用药物选自有机二磷酸盐、化疗药剂、放射性药剂、tnf-拮抗剂、非类固醇抗炎药剂、类固醇、抗氧化剂、血管生成抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、维生素、选择性雌激素受体调节剂、雌激素-孕酮、雄激素、降血钙素、抗生素、组织蛋白酶k抑制剂、抑制素、整合素受体拮抗剂、造骨细胞合成代谢剂、选择性血清素再吸收抑制剂、葡糖胺和透明质酸中的至少一种。

18、在本发明应用较佳的实施方式中，药物还包括药学上可接受的盐。

19、合适的药学可接受盐包括无机酸的盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸和硫酸，以及有机酸的盐，所述有机酸例如甲磺酸、富马酸、马来酸、乙酸、草酸、琥珀酸、苹果酸、酒石酸、扁桃酸、乳酸、柠檬酸、谷氨酸、乙酰水杨酸、烟酸、氨苯甲酸、d-酸、马尿酸、磷酸和门冬氨酸。优选的盐是盐酸盐或磷酸盐。

20、赋形剂可以是例如：水、乙醇、2-丙醇、甘油、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、右旋糖、糖蜜、淀粉、改性淀粉、明胶、山梨醇、肌醇、甘露醇、微晶纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙酸纤维素、虫胶、鲸蜡醇、聚乙烯基吡咯烷酮、石蜡、蜡、天然和合成橡胶、阿拉伯胶、海藻酸盐、右旋糖酐、饱和和不饱和脂肪酸、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸钠、食用油、芝麻油、椰子油、花生油、大豆油、卵磷脂、乳酸钠、聚氧乙烯脂肪酸酯和聚氧丙烯脂肪酸酯、山梨聚糖脂肪酸酯、山梨酸、苯甲酸、柠檬酸、抗坏血酸、鞣酸、氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、氧化镁、氧化锌、二氧化硅、氧化钛、二氧化钛、硫酸镁、硫酸锌、硫酸钙、碳酸钾、磷酸钙、磷酸二钙、溴化钾、碘化钾、滑石、高岭土、果胶、交聚维酮、琼脂和膨润土。

21、一种重组病毒在制备治疗骨关节炎药物中的应用，重组病毒是将编码tiki2蛋白的核苷酸序列导入病毒载体得到重组病毒载体，然后将重组病毒载体、包装质粒、辅助质粒共转染到宿主细胞中，完成病毒包装和扩增；

22、编码tiki2蛋白的核苷酸序列如seq id no.1所示。

23、发明人研究发现了一种治疗骨关节炎的新靶点——tiki2，并基于该靶点开发出治疗骨关节炎的重组病毒，可以用于制备治疗骨关节炎药物。

24、wnt信号通路在骨关节炎疾病发生和发展过程中起重要作用，tiki2蛋白是一类wnt信号通路抑制分子。发明人发现tiki2基因高表达于关节软骨细胞中，并且其在软骨细胞中的表达量与骨关节炎的病程呈负相关。在小鼠软骨细胞中特异性敲除tiki2基因加重dmm(小鼠膝关节炎手术)手术诱导的小鼠膝关节关节炎症状。利用重组病毒注射小鼠膝关节腔可以缓解dmm手术诱导的关节炎症状。这些研究结果表明，tiki2蛋白可以作为骨关节炎的治疗靶点，增加tiki2蛋白在关节软骨细胞中的表达有望治疗骨关节炎。

25、目前治疗骨关节炎的主要手段为消炎镇痛以减轻症状和人工关节置换等，尚无可以改变病程的药物。针对tiki2蛋白研发的药物将有可能从根本上减缓并逆转骨关节炎病程。例如，利用腺相关病毒制备基因治疗药物注射关节腔补充关节软骨细胞中的tiki2蛋白，有望成为改变骨关节炎病程的新型治疗手段。

26、在本发明应用较佳的实施方式中，病毒载体选自逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体以及慢病毒载体中的任一种。

27、在一种可选的实施方式中，病毒载体选自腺相关病毒载体。

28、在一种可选的实施方式中，腺相关病毒选自aav1～13中的任意一种或多种。

29、在一种可选的实施方式中，腺相关病毒包括至少2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13种不同血清型的腺相关病毒。

30、在一种可选的实施方式中，腺相关病毒选自aav5。

31、在本发明应用较佳的实施方式中，骨关节炎为膝关节骨关节炎、肘关节骨关节炎、肩关节骨关节炎、髋关节骨关节炎、胯关节骨关节炎、脊椎关节病、颈椎骨关节炎和腰椎骨关节炎。

32、在一种可选的实施方式中，膝关节骨关节炎选自创伤性膝骨关节炎或退行性膝骨关节炎。

33、在本发明应用较佳的实施方式中，上述应用包括如下至少一种作用：促进软骨形成、减缓骨关节炎进展、逆转软骨丢失和逆转软骨退变。

34、需要说明的是，软骨丢失包括不限于：表层纤维化，表层番红染色丢失；软骨下骨外露；或软骨全层的丢失。

35、在一种可选的实施方式中，减缓骨关节炎进展为减缓软骨降解。

36、在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物的剂型为片剂、胶囊剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、散剂、颗粒剂、注射剂、冻干粉针剂、搽剂、涂剂、涂膜剂、软膏剂、洗剂、栓剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂、软膏剂、硬膏剂、巴布剂或贴剂。

37、在一种可选的实施方式中，药物的剂型为注射剂。

38、在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物还包括药学上可接受的添加剂或辅料。

39、在一种可选的实施方式中，药学上可接受的添加剂或辅料选自如下一种或多种：溶剂、缓冲液、乳化剂、悬浮剂、分解剂、崩解剂、分散剂、黏结剂、赋形剂、安定剂、螯合剂、稀释剂、胶凝剂、防腐剂、润湿剂、润滑剂、吸收延迟剂、香味剂、甜味剂、色素以及脂质体。

40、在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物为注射剂时，药物注射于关节腔。发明人发现，将药物注射于关节腔中，可以有效延缓骨关节疾病进程。

41、在一种可选的实施方式中，药物还包括联用药物，联用药物选自有机二磷酸盐、化疗药剂、放射性药剂、tnf-拮抗剂、非类固醇抗炎药剂、类固醇、抗氧化剂、血管生成抑制剂、基质金属蛋白酶抑制剂、维生素、选择性雌激素受体调节剂、雌激素-孕酮、雄激素、降血钙素、抗生素、组织蛋白酶k抑制剂、抑制素、整合素受体拮抗剂、造骨细胞合成代谢剂、选择性血清素再吸收抑制剂、葡糖胺和透明质酸中的至少一种。

42、在本发明应用较佳的实施方式中，药物还包括药学上可接受的盐。

43、合适的药学可接受盐包括无机酸的盐，所述无机酸例如盐酸、氢溴酸和硫酸，以及有机酸的盐，所述有机酸例如甲磺酸、富马酸、马来酸、乙酸、草酸、琥珀酸、苹果酸、酒石酸、扁桃酸、乳酸、柠檬酸、谷氨酸、乙酰水杨酸、烟酸、氨苯甲酸、d-酸、马尿酸、磷酸和门冬氨酸。优选的盐是盐酸盐或磷酸盐。

44、赋形剂可以是例如：水、乙醇、2-丙醇、甘油、乙二醇、丙二醇、聚乙二醇、聚丙二醇、葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖、右旋糖、糖蜜、淀粉、改性淀粉、明胶、山梨醇、肌醇、甘露醇、微晶纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、乙酸纤维素、虫胶、鲸蜡醇、聚乙烯基吡咯烷酮、石蜡、蜡、天然和合成橡胶、阿拉伯胶、海藻酸盐、右旋糖酐、饱和和不饱和脂肪酸、硬脂酸、硬脂酸镁、硬脂酸锌、硬脂酸甘油酯、月桂基硫酸钠、食用油、芝麻油、椰子油、花生油、大豆油、卵磷脂、乳酸钠、聚氧乙烯脂肪酸酯和聚氧丙烯脂肪酸酯、山梨聚糖脂肪酸酯、山梨酸、苯甲酸、柠檬酸、抗坏血酸、鞣酸、氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、氧化镁、氧化锌、二氧化硅、氧化钛、二氧化钛、硫酸镁、硫酸锌、硫酸钙、碳酸钾、磷酸钙、磷酸二钙、溴化钾、碘化钾、滑石、高岭土、果胶、交聚维酮、琼脂和膨润土。

45、第二方面，本发明还提供了一种重组病毒，包括能够使哺乳动物细胞表达外源基因的病毒载体和编码tiki2蛋白的核苷酸序列，其中，编码tiki2蛋白的核苷酸序列如seqid no.1所示。

46、在本发明应用较佳的实施方式中，上述病毒载体选自逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体以及慢病毒载体中的任一种；

47、在一种可选的实施方式中，病毒载体选自腺相关病毒载体；

48、在一种可选的实施方式中，腺相关病毒选自aav1～13中的任意一种或多种；

49、在一种可选的实施方式中，腺相关病毒选自aav5。

50、第三方面，本发明还提供了一种治疗骨关节炎的药物，其包括上述的重组病毒。

51、在本发明应用较佳的实施方式中，上述药物的剂型为片剂、胶囊剂、混悬剂、溶液剂、乳剂、散剂、颗粒剂、注射剂、冻干粉针剂、搽剂、涂剂、涂膜剂、软膏剂、洗剂、栓剂、气雾剂、喷雾剂、粉雾剂、软膏剂、硬膏剂、巴布剂或贴剂。

52、在一种可选的实施方式中，药物的剂型为注射剂。

53、本发明具有以下有益效果：

54、本发明研究发现了一种治疗骨关节炎的新靶点——tiki2，并基于该靶点开发出治疗骨关节炎的重组病毒，可以用于制备治疗骨关节炎药物。

55、目前治疗骨关节炎的主要手段为消炎镇痛以减轻症状和人工关节置换等，尚无可以改变病程的药物。针对tiki2蛋白研发的药物将有可能从根本上减缓并逆转骨关节炎病程。例如，利用腺相关病毒制备基因治疗药物注射关节腔补充关节软骨细胞中的tiki2蛋白，有望成为改变骨关节炎病程的新型治疗手段。