大狼毒中具有强抗皮肤癌和抗炎活性的二萜化合物的制备方法和应用

本发明属于天然产物化学，具体涉及大狼毒中三种具有强抗皮肤癌和抗炎活性的二萜化合物的制备方法和应用。

背景技术：

1、据世界卫生组织的报道，癌症是世界第二大致死疾病，每年都造成大量的人口死亡。到目前为止，很多抗癌药物的药效不能让人满意，我们仍然缺乏高效、无明显毒副作用的抗癌药物，而天然药物的抗癌活性研究却显现了广阔的运用前景。因此，开发活性更佳、治疗效果更好的癌症治疗药物是研究人员亟需解决的问题。

2、l-nmma（l-单甲基精氨酸）是一种非特异的nos抑制剂，能阻止关体内 nos的合成，间接抑制no的产生，从而抑制炎症，因此，研究抗no产生的化合物对于开发抗炎药物具有重要的意义。

3、本发明旨在提供一种从大狼毒中分离得到的具有抗皮肤癌和抗炎活性的二萜化合物。

技术实现思路

1、本发明的第一目的是提供大狼毒中三种二萜化合物的应用，本发明的第二目的是提供所述三种二萜化合物的制备方法。

2、本发明的第一目的是这样实现的，一种二萜化合物或含有该二萜化合物的药物组合物在制备抗癌药物或抗炎药物中的应用，所述二萜化合物具有式1、式2和式3所示的结构：

3、。所述二萜化合物的制备方法，具体包括以下步骤：

4、(1) 有机溶剂加热超声提取：将大狼毒全草晒干，粉碎至30-90目，在55℃-60℃下用第一有机溶剂浸泡后超声提取5-7次，每次60-80分钟，合并提取液，浓缩后得到浸膏a；

5、(2) 有机溶剂萃取：将所述浸膏a倒入分液漏斗中，加入浸膏重量2-3倍的水和第二有机溶剂，搅拌均匀后摇动，充分静置，待溶液分液后取有机溶剂层，反复3-4次，合并有机溶剂层，减压蒸馏得到浸膏b；

6、(3) 正相色谱法分离：将所述浸膏b 用硅胶柱层析分离，用体积比为1:0，9:1，7:1，4:1，2:1，1:1和0:1的石油醚/乙酸乙酯进行梯度洗脱，经薄层色谱和紫外光谱分析检测后合并相似组分得到5个组分a-e。其中组分a主要由石油醚/乙酸乙酯1:0制备，b主要由石油醚/乙酸乙酯9:1和7:1制备，c主要由石油醚/乙酸乙酯4:1制备，d主要由石油醚/乙酸乙酯2:1制备，e由石油醚/乙酸乙酯1:1和0:1制备；

7、(4) 制备hplc纯化：将组分b经制备hplc分离纯化，即得化合物1、化合物2和化合物3。

8、本发明的有益效果为：

9、本发明首次从大狼毒中分离得到三种具有抗癌和抗炎活性的二萜化合物，即ingenol-20-dodecanoate、ingenol-20-palmitate和ingenol-20-pentadecanoate，为这三个二萜化合物的制备提供了新的制备途径，本制备方法操作简单，获得的二萜ingenol-20-dodecanoate、ingenol-20-palmitate和ingenol-20-pentadecanoate纯度均高达98%-99%；另外，本发明首次发现ingenol-20-dodecanoate、ingenol-20-palmitate和ingenol-20-pentadecanoate具有很好的抗皮肤癌、抗结肠癌和抗炎活性，通过抗癌活性筛选，ingenol-20-dodecanoate、ingenol-20-palmitate和ingenol-20-pentadecanoate对人类黑色素瘤细胞系a2058有很强的细胞毒活性，ic50值分别为2.13、2.82和2.11 μμ，均强于抗癌药顺铂；ingenol-20-palmitate和ingenol-20-pentadecanoate对人结肠癌细胞系sw480 的ic50值分别14.73和14.41 μμ，强于抗癌药顺铂；在抗炎活性实验中，这三个二萜的活性分别为4.72、4.51和4.21 μμ，均强于nos抑制剂l-单甲基精氨酸。这三个二萜可作为抗皮肤癌和抗炎药物的先导性化合物的研发，在抗癌和抗炎药物研究领域开发有很好的应用前景，也为此类二萜化合物类物质的提取以及药用研究提供了基础及新思路。

技术特征：

1.一种二萜化合物或含有该二萜化合物的药物组合物在制备抗癌药物或抗炎药物中的应用，其特征在于，所述二萜化合物具有式1、式2和式3所示的结构：

2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述抗癌药物为用于治疗皮肤癌的药物。

3.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述抗癌药物为用于治疗结肠癌的药物。

4.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述药物剂型为片剂、胶囊剂、口服液、口含片、 颗粒剂、混悬剂、栓剂、注射剂、粉针剂、滴丸、缓释剂、控释剂或靶向制剂。

5.权利要求1所述二萜化合物的制备方法，其特征在于，具体按以下步骤实现：

6.根据权利要求5所述两种三萜化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤1中，第一有机溶剂为85%-99%的乙醇或85%-99%的甲醇。

7.根据权利要求5所述三种二萜化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤2中，第二有机溶剂为85%-99%的二氯甲烷或85%-99%的乙酸乙酯。

8.根据权利要求5所述三种二萜化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤6中，所述制备hplc采用的流动相是45%-98%的甲醇/水溶液或34%-85%的乙腈/水溶液，制备柱是30×250 mm，5 μm的月旭 ultimate xb-c18，dad检测器波长为204 nm、210 nm、254 nm和306 nm，流速为15-40 ml/min，进样量为0.5 -3.0 ml。

9.根据权利要求5所述三种二萜化合物的制备方法，其特征在于，所述步骤3中，硅胶柱的装柱方法如下：将浸膏b用85%-99%的二氯甲烷搅拌均匀，加入样品量1-3倍量的80-100目的硅胶晾干，用样品量12-69倍的100-200目的硅胶安装色谱柱。

技术总结
本发明公开了一种大狼毒中具有强抗癌和抗炎活性的二萜化合物的制备方法和应用，所述二萜化合物具有式1、2和3的结构式：。所述二萜化合物的应用为在制备抗癌药物或抗炎药物中的应用；所述三个二萜化合物的制备方法是以大狼毒全草为原料，用化学溶剂提取、萃取，经过正相柱色谱分离，然后制备HPLC分离获得。本发明首次从大狼毒全草中分离得到ingenol‑20‑dodecanoate、ingenol‑20‑palmitate和ingenol‑20‑pentadecanoate三个二萜化合物。本制备方法简单，纯化度高，产率高；所述三个二萜化合物具有很强的抗皮肤癌、抗结肠癌和抗炎活性，为此类二萜化合物类物质的提取以及药用研究提供了基础及新思路。

技术研发人员：刘文星
受保护的技术使用者：云南民族大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15