专利名称:五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用。
背景技术：
当前，酪氨酸激酶已被广泛接受为肿瘤治疗的靶点。人类基因组中大约有90个酪氨酸激酶的基因。在肿瘤中，酪氨酸激酶常有异常。格列卫(英文名为gleevec，或imatinib，或STI571)是由诺华公司开发的一种针对肿瘤中异常酪氨酸激酶的抑制剂。该药可抑制多种肿瘤中异常的酪氨酸激酶，并用于治疗多种肿瘤，如白血病、胃间质瘤、胶质母细胞瘤、肉瘤、肺癌等等。然而格列卫的治疗效果应病人而异，有些病人对该药较敏感，有些病人则不太敏感。其他的酪氨酸激酶抑制药物如吉非替尼、艾罗替尼、艾比特思等等也存在同样的问题。因此，临床上需要能增加酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物。国外已有一些格列卫增敏剂的研究。
五味子，木兰科植物五味子Schisandra chihensis(Turcz.)Baill.或木兰科植物华中五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.的干燥成熟果实，五味子在《神农本草经》中被列为上品，具有收敛、固涩、益气生津、补肾宁心的作用，是中医常用的滋补强壮药，具有多种药理作用，但未见其对酪氨酸激酶抑制药物药效增敏的报道。
发明内容本发明既是为了提供五味子制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用。
为达到发明目的，本发明采用的技术方案是五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用。所述的酪氨酸激酶抑制药为肿瘤治疗药或为耐药肿瘤治疗药，也可为治疗酪氨酸激酶异常的疾病的药物。
所述的五味子的提取物为五味子的有机溶剂的提取物或用超临界方法获得的提取物。所述的有机溶剂为含1～6个碳原子的醇溶液。
优选的，所述的五味子的提取物为五味子的乙醇提取物，所述的提取物可用乙醇回流提取，也可用渗漉法提取。
所述的抗肿瘤酪氨酸激酶抑制药物为下列之一格列卫(gleevec，或imatinib，或STI571)、吉非替尼(gefinitib，Iressa，ZD1839)、埃罗替尼(erlotinib，Tarceva)、艾比特思(cetuximab，Erbitux)、搓杜滋美(trastuzumab)、SU5416(semaxinib)、SU-5402、PTK787(vatalanib)、SU11248(sutent)、BAY43-9006(sorafenib)、SU101(leflunomide)、GW-572016(lapatinib)、CI-1033(canertinib)、AZD6474、PK1166、SU6668、CI-1033、PKC412、MLN518、CEP-701、PD0173074、SMS-354825、D816X、ABX-EGF、2C4(pertuzumab，Omnitarg)、CT52923、Bevacizumab、PD180970、PD173955、SKI606、BMS354825、AZD0530、AP23464、CGP76030、AMN107。
所述的增敏药物还可含有药物赋形剂或载体，可制成下列之一的剂型①注射液；②片剂；③胶囊剂；④颗粒剂；⑤汤剂。
本发明进一步明确了五味子尤其是五味子乙醇提取物对酪氨酸激酶抑制药物的增敏作用，具有良好的临床应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此实施例1五味子乙醇提取物的制备渗漉法取5000g五味子粉末用6倍质量90％乙醇渗漉，渗漉速度15ml/min。回收乙醇沥出液，减压回收乙醇至无乙醇味，浓缩得比重为1.15g/ml的浸膏，得五味子提取物备用。以上提取中用的的乙醇也可用甲醇、丙醇等各种醇代替，醇浓度可为75～95％之间；也可用其他有机溶剂如乙酸乙酯、醚类溶剂等代替。
实施例2超临界提取超临界提取将五味子样品1000g粉碎成粗粉(过40目筛)，置1L超临界CO2萃取釜中，调节压力25MPa，温度45℃，流量30kg/h，提取时间2h。收集得到褐色萃取物。
实施例3五味子提取物增强格列卫杀白血病细胞的药效。
实验方法五味子乙醇提取物和超临界提取物分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。人白血病细胞株Ku812和K562(美国ATCC公司)。K562或Ku812培养在含有10％的小牛血清的RPMI-1640培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为4万个细胞，然后在各孔中加入实施例1或实施例2所得五味子提取物，在相同五味子乙醇提取物浓度的孔中的分别加入格列卫至终浓度为0、6、12、25、50、100ng/ml。培养3天后，用细胞流式仪(FACScan，美国Becton Dickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出半数抑制浓度IC50。
实验结果Ku812和K562为慢性髓系白血病细胞株，具有异常的酪氨酸激酶。格列卫抑制细胞内的异常酪氨酸激酶，因此可杀死白血病细胞。
以下的实验结果说明，五味子提取物可显著增强格列卫对Ku812和K562的药效。
表1和表2说明，五味子提取物增强格列卫的药效呈剂量依赖性。
表1、五味子乙醇提取物增强格列卫对Ku812的药效呈剂量依赖性
*p＜0.05.
表2、五味子超临界提取物增强格列卫对Ku812的药效呈剂量依赖性
*p＜0.05.
表3说明，五味子提取物能显著增强格列卫对K562的药效。
表3、五味子提取物增强格列卫对K562的药效
*p＜0.05.
实施例4五味子提取物增强格列卫对抗药细胞的药效实验方法五味子提取物如实施例1和实施例2，实验方法如实施例3，不同的是所用细胞为Ku812/r和K562/r，这2株细胞对格列卫均有抗性，格列卫浓度为0，0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8μg/ml.
实验结果表4和表5的数据表明五味子提取物增强格列卫对抗药细胞的药效。
表4、五味子提取物增强格列卫对Ku812/r的药效
*p＜0.05.
表5、五味子提取物增强格列卫对K562/r的药效
*p＜0.05.
实施例5五味子提取物增强吉非替尼(gefinitib，Iressa，ZD1839)对KB细胞的药效实验方法五味子乙醇提取物如实施例1和五味子超临界提取物如实施例2，分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。KB细胞(美国ATCC公司)培养在含有10％的小牛血清和10ng/ml的表皮生长因子的DMEM培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为4万个细胞，然后加入五味子提取物(分3组，第一组为对照不加五味子提取物，第二组各孔加五味子乙醇提取物、第三组各孔加五味子超临界提取物，每孔加入的五味子提取物的终浓度如表中所示)，再加入吉非替尼至终浓度为0、12、25、50、100、200ng/ml。培养3天后，用细胞流式仪(FACScan，美国Becton Dickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出半数抑制浓度IC50。
实验结果结果见表6，表6说明，五味子提取物能显著增强吉非替尼的药效。
表6五味子提取物增强吉非替尼对KB细胞的药效
*p＜0.05.
实施例6五味子提取物增加吉非替尼对KB实体瘤的药效五味子乙醇提取物如实施例1及五味子超临界提取物如实施例2，裸鼠(雌性)腋下接种KB细胞(2×106)，10天后，分成7组，每组10只。组1为对照，组2为吉非替尼，组3为吉非替尼加五味子乙醇提取物，组4为吉非替尼加五味子超临界提取物。组2每只的吉非替尼剂量为每天200mg/kg，组3、组4的吉非替尼的剂量与组2一致，每只再分别加上剂量为400mg/kg的相应的五味子提取物。14天后处死小鼠，称取瘤重。
实验结果结果见表7，表7说明，五味子提取物能增加吉非替尼的药效。
表7、各种五味子提取物增强吉非替尼对KB实体瘤的药效
1(对照组瘤重-试验组瘤重)除以对照组瘤重×100％；*与对照组相比有显著性差异，p＜0.05；**与吉非替尼组相比有显著性差异，p＜0.05。
实施例7五味子提取物可增强埃罗替尼(erlotinib，Tarceva)药效实验方法按实施例1方法所得五味子乙醇提取物和实施例2方法所得五味子超临界提取物分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。口腔鳞癌KB细胞(美国ATCC公司)培养在含有10％的小牛血清的DMEM培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为4万个细胞，然后加入五味子提取物(分3组，第一组为对照不加五味子提取物，第二组加五味子乙醇提取物、第三组加五味子超临界提取物)，再加入埃罗替尼至终浓度为0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8、25.6μg/ml。培养3天后，用细胞流式仪(FACScan，美国Becton Dickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出半数抑制浓度IC50。
实验结果表8说明，五味子提取物可显著增强埃罗替尼对KB细胞的药效表8、五味子提取物增强埃罗替尼对KB细胞的药效
*p＜0.05.
实施例8五味子提取物增强艾比特思(cetuximab，Erbitux)药效实验方法按实施例1方法所得五味子乙醇提取物和按实施例2方法所得五味子超临界提取物分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。肺癌细胞Calus3细胞(美国ATCC公司)培养在含有10％的小牛血清的RPMI培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为1万个细胞，然后加入五味子提取物(分3组，第一组为对照不加五味子提取物，第二组加五味子乙醇提取物、第三组加五味子超临界提取物，每孔加入的五味子提取物的终浓度如表中所示)，再加入艾比特思至终浓度为0、25，50，100，200nM。培养5天后，用细胞流式仪(FACScan，美国Becton Dickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出半数抑制浓度IC50。
实验结果表9说明，五味子提取物增强艾比特思(cetuximab，Erbitux)的药效。
表9、五味子提取物增强艾比特思对Calus3细胞的药效
*p＜0.05.
实施例9五味子提取物增强搓杜滋美(trastuzumab)药效实验方法按实施例1方法所得五味子乙醇提取物和按实施例2方法所得五味子超临界提取物分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。乳腺癌细胞BT-474细胞(美国ATCC公司)培养在含有10％的小牛血清的RPMI培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为1万个细胞，然后加入五味子提取物(分4组，第一组为空白对照，第二组加搓杜滋美，第三组加搓杜滋美和五味子乙醇提取物、第四组加搓杜滋美和五味子超临界提取物，每孔加入的五味子提取物的终浓度20μg/ml)，第2～4组所加搓杜滋美终浓度为均100nM。培养5天后，用细胞流式仪(FACScan，美国Becton Dickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出细胞存活率。
实验结果表10说明，五味子提取物增强搓杜滋美(trastuzumab)对乳腺癌细胞BT-474细胞的抑制作用。
表10、五味子提取物(20μg/ml)增强搓杜滋美(100nM)对BT-474细胞的抑制作用
1药物处理组除以对照组×100％；*与对照组相比有显著性意义，p＜0.05.**与搓杜滋美组比较有显著性意义，p＜0.05.
实施例10五味子提取物增强SU5416(无中文翻译)的药效实验方法按实施例1方法所得五味子乙醇提取物和按实施例2方法所得五味子超临界提取物分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。人脐带静脉内皮细胞培养在含有10％的小牛血清的DMEM培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为1万个细胞，24小时后，加入VEGF(血管内皮细胞生长因子)至20 ng/ml，然后加入五味子提取物(分3组，第一组为对照不加五味子提取物，第二组加五味子乙醇提取物、第三组加五味子超临界提取物，每孔加入的五味子提取物的终浓度如表中所示)，各孔再分别加入SU5416至终浓度为0、10、20、40、80、160、320、640nM。培养3天后，用细胞流式仪(FACScan，美国Becton Dickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出半数抑制浓度IC50。
实验结果表11说明，五味子提取物可显著增强SU5416对人脐带静脉内皮细胞的抑制作用表11、五味子提取物增强SU5416对人脐带静脉内皮细胞的抑制作用
*p＜0.05.
实施例11、五味子提取物增强PTK787(无中文翻译)的药效实验方法按实施例1方法所得五味子乙醇提取物和按实施例2方法所得五味子超临界提取物分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。人脐带静脉内皮细胞培养在含有10％的小牛血清的DMEM培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为1万个细胞，24小时后，加入VEGF(血管内皮细胞生长因子)至20ng/ml，然后加入五味子提取物(分3组，第一组为对照不加五味子提取物，第二组加五味子乙醇提取物、第三组加五味子超临界提取物，每孔加入的五味子提取物的终浓度如表中所示)，各孔再分别加入PTK787至终浓度为0、10、20、40、80、160、320、640nM。培养3天后，用细胞流式仪(FACScan，美国Becton Dickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出半数抑制浓度IC50。
实验结果表12说明，五味子提取物显著增强PTK787对人脐带静脉内皮细胞的抑制作用。
表12、五味子提取物增强PTK767对人脐带静脉内皮细胞的抑制作用
*p＜0.05.
实施例1～11的结果说明，五味子提取物可以增强各种酪氨酸激酶抑制药物的药效，说明五味子提取物可以作为酪氨酸激酶抑制药物的增敏剂。
权利要求
1.五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用。
2.如权利要求
1所述的五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的酪氨酸激酶抑制药为肿瘤治疗药。
3.如权利要求
1所述的五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的酪氨酸激酶抑制药为治疗酪氨酸激酶异常的疾病的治疗剂。
4.如权利要求
1所述的五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的酪氨酸激酶抑制药为耐药肿瘤治疗药。
5.如权利要求
1～4之一所述的五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的五味子的提取物为五味子的有机溶剂的提取物或用超临界方法获得的提取物。
6.如权利要求
5所述的五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的有机溶剂为含1～6个碳原子的醇溶液。
7.如权利要求
5所述的五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的五味子的提取物为五味子的乙醇提取物。
8.如权利要求
5所述的五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的酪氨酸激酶抑制药为下列之一格列卫、吉非替尼、埃罗替尼、艾比特思、搓杜滋美、SU5416、SU-5402、PTK787、SU11248、BAY43-9006、SU101、GW-572016、CI-1033、AZD6474、PK1166、SU6668、CI-1033、PKC412、MLN518、CEP-701、PD0173074、SMS-354825、D816X、ABX-EGF、2C4、CT52923、Bevacizumab、PD180970、PD173955、SKI606、BMS354825、AZD0530、AP23464、CGP76030、AMN107。
9.如权利要求
1～4之一所述的五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的增敏药物还含有药物赋形剂或载体。
10.如权利要求
1～4之一所述的五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的增敏药物制成下列之一的剂型①注射液；②片剂；③胶囊剂；④颗粒剂；⑤汤剂。
专利摘要
本发明提供了五味子的新用途，即五味子在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用。所述的酪氨酸激酶抑制药为肿瘤治疗药或为耐药肿瘤治疗药，也可为治疗酪氨酸激酶异常的疾病的药物。本发明进一步明确了五味子尤其是五味子乙醇提取物对酪氨酸激酶抑制药物的增敏作用，具有良好的临床应用前景。
文档编号A61P35/00GK1994391SQ200610048904
公开日2007年7月11日 申请日期2006年1月5日
发明者胡汛 申请人:胡汛, 宁波英诺药业科技有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan