专利名称:联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物中的应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物中的应用，尤其是在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用。
背景技术：
当前，酪氨酸激酶已被广泛接受为肿瘤治疗的靶点。人类基因组中大约有90个酪氨酸激酶的基因。在肿瘤中，酪氨酸激酶常有异常。格列卫(英文名为gleevec，或imatinib，或STI571)是由诺华公司开发的一种针对肿瘤中异常酪氨酸激酶的抑制剂。该药可抑制多种肿瘤中异常的酪氨酸激酶，并用于治疗多种肿瘤，如白血病、胃间质瘤、胶质母细胞瘤、肉瘤、肺癌等等。然而格列卫的治疗效果应病人而异，有些病人对该药较敏感，有些病人则不太敏感。其他的酪氨酸激酶抑制药物如吉非替尼、艾罗替尼、艾比特思等等也存在同样的问题。因此，临床上需要能增加酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物。 国外已有一些格列卫增敏剂的研究。
联苯环辛二烯木脂素为五味子木兰科植物五味子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill.或木兰科植物华中五味子Schisandra sphenanthera Rehd.et Wils.的干燥成熟果实中的主要成分，五味子在《神农本草经》中被列为上品，具有收敛、固涩、益气生津、补肾宁心的作用，是中医常用的滋补强壮药，具有多种药理作用，但未见其对格列卫等酪氨酸激酶的抑制药物增敏的报道。
发明内容本发明既是为了提供联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用。
为达到发明目的，本发明采用的技术方案是
联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用。所述的酪氨酸激酶抑制药物为肿瘤冶疗剂或酪氨酸激酶异常的疾病治疗剂。
所述的联苯环辛二烯木脂素结构如式I所示 式中，R1、R2、R5、R6分别为羟基或甲氧基，或者，R1与R2、R5与R6各自不成环或者R1与R2、R5与R6各自组成烷氧环；R3为下列之一①-O-CH3； ②-OH； R4为下列之一①-O-CH3；②-OH；
R7为下列之一①-H；②-OH；
R8、R9各自为下列之一①-H；②-OH；R10为下列之一①-H；②-OH；
或者，R7与R10连成氧桥，R1～R6、R8、R9定义如上所述；或者，R3与R7组成酰氧环，R1、R2、R4～R6、R8～R10定义如上所述。
上述结构式根据各取代基定义，主要包括以下物质 Schisandrin A(五味子素A) Schisandrin B(五味子素B) SchisandrolA(五味子醇A) SchisantherinA(五味子酯A)
Schisandrin C(五味子素C) Schisamherin B
Schisantherin I Schisantherin J Schisantherin K Schisantherin LR1＝OH，R2＝OAngSchisantherin MR1＝OTig，R2＝OangSchisantherin NR1＝OAc，R2＝Oang Schisantherin O Schisandrol B，Schisantherinol B(五味子醇B)
Schisandrol D， Schisantherinol D Schisandrol E，Schisantherinol E Methylschisandrol E Angelogomisin PR＝AngMethylschisantherirnol E Tiglogomisin PR＝Tig
kadasutherin isokadsuranin neokadsuranin5，8-epoxy-6，7-dimethyl2′，3′，2″，3″-dimethylenedioxy-4′，1″-dimethoxy-1，23，4-dibenzo-1，3-cyclootadiene 进一步，所述的联苯环辛二烯木脂素结构式如下
式中，R1、R2、R5、R6分别为羟基或甲氧基，或者，R1与R2、R5与R6各自不成环或者R1与R2、R5与R6各自组成烷氧环；R7为下列之一①-H；②-OH；
R8、R9各自为下列之一①-H；②-OH；R10为下列之一①-H；
优选的，所述的联苯环辛二烯木脂素为下式之一
①五味子素A；②五味子素B；③五味子素C；④五味子酯A；⑤五味子酯B；⑥五味子酯C；⑦五味子酯D；⑧五味子酯E；⑨五味子醇A⑩五味子醇B。
所述的抗肿瘤酪氨酸激酶抑制药物为下列之一格列卫(gleevec，或imatinib，或STI571)、吉非替尼(gefinitib，Iressa，ZD1839)、埃罗替尼(erlotinib，Tarceva)、艾比特思(cetuximab，Erbitux)、搓杜滋美(trastuzumab)、SU5416(semaxinib)、SU-5402、PTK787(vatalanib)、SU11248(sutent)、BAY43-9006(sorafenib)、SU101(leflunomide)、GW-572016(lapatinib)、CI-1033(canertinib)、AZD6474、PK1166、SKBR3、BT-474、SU6668、CI-1033、PKC412、MLN518、CEP-701、PD0173074、SMS-354825、D816X、ABX-EGF、2C4、CT52923、Bevacizumab、PD180970、PD173955、SK1606、BMS354825、AZD0530、AP23464、CGP76030、AMN107。
所述的增敏药物还含有药物赋形剂或载体，可制成下列之一的剂型①针剂；②片剂；③胶囊剂；④颗粒剂；⑤缓释剂。
所述的所述增敏药物可为所述的联苯环辛二烯木脂素的单体，也可为所述的联苯环辛二烯木脂素的混合物。
本发明进一步明确了联苯环辛二烯木脂素对酪氨酸激酶抑制药物的增敏作用，具有良好的临床应用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此实施例1联苯环辛二烯木脂素增强格列卫杀白血病细胞的药效实验方法五味子素A，五味子素B，五味子素C，五味子酯A，五味子醇A，五味子醇B，分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。人白血病细胞株Ku812和K562(美国ATCC公司)。K562或Ku812分别培养在含有10％的小牛血清的RPMI-1640培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为4万个细胞，然后加入某种一定量的联苯环辛二烯木脂素，再各自加入不同浓度的格列卫。培养3天后，用细胞流式仪(FACScan，美国Becton Dickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出半数抑制浓度IC50。
实验结果Ku812和K562为慢性髓系白血病细胞株，具有异常的酪氨酸(Bcr-abl)激酶。格列卫抑制细胞内的异常酪氨酸激酶，因此可杀死白血病细胞。
Ku812慢性髓系白血病细胞株，分成四组，各组每孔分别各加入五味子素B0μg/ml，5μg/ml，10μg/ml，20μg/ml，在相同的五味子素浓度下各孔再各自加入格列卫至终浓度为0、6、12、25、50、100ng/ml，求得各自的半数抑制浓度IC50，结果说明，联苯环辛二烯木脂素可显著增强格列卫对Ku812和K562的药效。
表1和表2说明，五味子素B增强格列卫对Ku812的药效。
表1、五味子素B增强格列卫对Ku812的药效呈剂量依赖性
*与对照组相比有显著差异，p＜0.05.
以下的实验是取42孔Ku812慢性髓系白血病细胞株，分成7组，一组为空白对照，另六组分别各加入终浓度10μg/ml的五味子素A、五味子素B、五味子素C、五味子酯A五味子醇A、五味子醇B，在同样的联苯环辛二烯木脂素组内各孔再各自加入格列卫至终浓度为0、6、12、25、50、100 ng/ml，求得各自的半数抑制浓度IC50。
表2、联苯环辛二烯木脂素增强格列卫对Ku812的药效
*与对照组相比有显著差异，p＜0.05.
K562慢性髓系白血病细胞株，分成7组，一组为空白对照，另六组分别各加入10μg/ml的五味子素A、五味子素B、五味子素C、五味子酯A五味子醇A、五味子醇B，在同样的联苯环辛二烯木脂素组内再各自加入格列卫至终浓度为0、6、12、25、50、100ng/ml，求得各自的半数抑制浓度IC50。
表3、联苯环辛二烯木脂素增强格列卫对K562的药效
*与对照组相比有显著差异，p＜0.05.
实施例2联苯环辛二烯木脂素增强格列卫对抗药细胞的药效实验方法如实施例1，不同的是所用细胞为Ku812/r和K562/r，这2株细胞对格列卫均有抗性，格列卫浓度为0，0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8μg/ml。不同的联苯环辛二烯木脂素的用量如表中所示，实验结果表4和表5的数据表明联苯环辛二烯木脂素增强格列卫对抗药细胞的药效。
表4、联苯环辛二烯木脂素增强格列卫对Ku812/r的药效
*与对照组相比有显著差异，p＜0.05.
表5、联苯环辛二烯木脂素增强格列卫对K562/r的药效
*与对照组相比有显著差异，p＜0.05.
实施例3、联苯环辛二烯木脂素增强吉非替尼(gefinitib，Iressa，ZD1839)对KB细胞的药效实验方法五味子素A，五味子素B，五味子素C，五味子酯A，五味子醇A，五味子醇B，分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。KB细胞(美国ATCC公司)培养在含有10％的小牛血清和10ng/ml的表皮生长因子的DMEM培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为4万个细胞，然后加入一种联苯环辛二烯木脂素，加入量如表6所示，再加入不同浓度的吉非替尼。培养3天后，用细胞流式仪(FACScan，美国BectonDickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出半数抑制浓度IC50。
实验结果KB细胞分成七组，一组为空白对照，另六组分别在各孔加入终浓度10μg/ml的五味子素A、五味子素B、五味子素C、五味子酯A、五味子醇A、五味子醇B，在同样的联苯环辛二烯木脂素组内再各自加入吉非替尼至终浓度为0、12、25、50、100、200ng/ml，求得各自的半数抑制浓度IC50，结果说明，联苯环辛二烯木脂素可显著增强吉非替尼对KB细胞的药效。
结果见表6，表6说明，各种联苯环辛二烯木脂素均能显著增强吉非替尼的药效。
表6、联苯环辛二烯木脂素增强吉非替尼对KB细胞的药效
*与对照组相比有显著差异，p＜0.05.
实施例4联苯环辛二烯木脂素增强吉非替尼对KB实体瘤的药效裸鼠(雌性)腋下接种KB细胞(2×106)，10天后，分成7组，每组10只。组1为空白对照，组2为吉非替尼，组3为吉非替尼加五味子素A，组4为吉非替尼加五味子素B，组5为吉非替尼加五味子素C，组6为吉非替尼加五味子酯A，组7为吉非替尼加五味子醇A，组8为吉非替尼加五味子醇B。组2的吉非替尼剂量为每天200mg/kg，组3-8的吉非替尼剂量与组2一致，再加上100mg/kg的相应的联苯环辛二烯木脂素。14天后处死小鼠，称取瘤重。
实验结果结果见表7，表7说明，各种联苯环辛二烯木脂素均能增加吉非替尼的药效。
表7、各种联苯环辛二烯木脂素增强吉非替尼对KB实体瘤的药效
1(对照组瘤重一实验组瘤重)除以对照组瘤重×100％；*与对照组相比有显著性差异，p＜0.05；**与吉非替尼组相比有显著性差异，p＜0.05。
实施例5联苯环辛二烯木脂素增强埃罗替尼(erlotinib，Tarceva)对KB细胞的药效实验方法五味子素A，五味子素B，五味子素C，五味子酯A，五味子醇A，五味子醇B，分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。口腔鳞癌KB细胞(美国ATCC公司)培养在含有10％的小牛血清的DMEM培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为4万个细胞，然后加入一种联苯环辛二烯木脂素，再加入不同浓度的埃罗替尼。培养3天后，用细胞流式仪(FACScan，美国Becton Dickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出半数抑制浓度IC50。
实验结果KB细胞，分成七组，一组为空白对照，另六组分别在各孔加入终浓度为l0μg/ml的五味子素A、五味子素B、五味子素C、五味子酯A、五味子醇A、五味子醇B，在同样的联苯环辛二烯木脂素组内再各自加入埃罗替尼至终浓度为0、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4、12.8、25.6μg/ml，求得各自的半数抑制浓度IC50，结果说明，联苯环辛二烯木脂素可显著增强埃罗替尼对KB细胞的药效。
表8说明，联苯环辛二烯木脂素可显著增强埃罗替尼对KB细胞的药效表8、联苯环辛二烯木脂素增强埃罗替尼对KB细胞的药效
*p＜0.05.
实施例6联苯环辛二烯木脂素增强艾比特思(cetuximab，Erbitux)对Calus3细胞的药效实验方法五味子素A，五味子素B，五味子素C，五味子酯A，五味子醇A，五味子醇B，分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。肺癌细胞Calus3细胞(美国ATCC公司)培养在含有10％的小牛血清的RPMI培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为1万个细胞，然后加入一种联苯环辛二烯木脂素，再加入不同浓度的艾比特思。培养5天后，用细胞流式仪(FACScan，美国Becton Dickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出半数抑制浓度IC50。
肺癌细胞Calus3细胞，分成七组，一组为空白对照，另六组分别各加入10μg/ml的五味子素A、五味子素B、五味子素C、五味子酯A、五味子醇A、五味子醇B，在同样的联苯环辛二烯木脂素组内再各自加入艾比特思至终浓度为0、25，50，100，200nM，求得各自的半数抑制浓度IC50，结果说明，联苯环辛二烯木脂素可显著增强艾比特思对KB细胞的药效。
实验结果表9说明，联苯环辛二烯木脂素可增强艾比特思(cetuximab，Erbitux)的药效。
表9、联苯环辛二烯木脂素增强艾比特思对Calus3细胞的药效
*p＜0.05.
实施例7联苯环辛二烯木脂素增强搓杜滋美(trastuzumab)BT-474细胞的抑制作用实验方法五味子素A，五味子素B，五味子素C，五味子酯A，五味子醇A，五味子醇B，分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。乳腺癌细胞BT-474细胞(美国ATCC公司)培养在含有10％的小牛血清的RPMI培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为1万个细胞，然后各孔加入一种联苯环辛二烯木脂素，终浓度为10μg/ml，再在各孔加入搓杜滋美至终浓度为100nM。组1为空白对照，组2为搓杜滋美，组3为搓杜滋美加五味子素A，组4为搓杜滋美加五味子素B，组5为搓杜滋美加五味子素C，组6为搓杜滋美加五味子酯A，组7为搓杜滋美加五味子醇A，组8为搓杜滋美加五昧子醇B。培养5天后，用细胞流式仪(FACScan，美国Becton Dickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出细胞存活率。
实验结果表10说明，联苯环辛二烯木脂素增强搓杜滋美(trastuzumab)对乳腺癌细胞BT-474细胞的抑制作用。
表10、联苯环辛二烯木脂素增强搓杜滋美(100nM)对BT-474细胞的抑制作用
1药物处理组除以对照组×100％；*与对照组相比有显著差异，p＜0.05.
**与搓杜滋美组比较有显著差异，p＜0.05.
实施例8、联苯环辛二烯木脂素增强SU5416的对人脐带静脉内皮细胞的抑制作用实验方法实验方法五味子素A，五味子素B，五味子素C，五味子酯A，五味子醇A，五味子醇B，分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。人脐带静脉内皮细胞培养在含有10％的小牛血清的DMEM培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为1万个细胞，24小时后，加入VEGF(血管内皮细胞生长因子，至20ng/ml，然后各孔加入一种联苯环辛二烯木脂素，再加入不同浓度的SU5416。培养3天后，用细胞流式仪(FACScan，美国Becton Dickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出半数抑制浓度IC50。
肺癌细胞Calus3细胞，分成七组，一组为空白对照，另六组分别各加入10μg/ml的五味子素A、五味子素B、五味子素C、五味子酯A五味子醇A、五味子醇B，在同样的联苯环辛二烯木脂素组内再各自加入SU5416至终浓度为0、10、20、40、80、160、320、640nM，求得各自的半数抑制浓度IC50，结果说明，联苯环辛二烯木脂素可显著增强SU5416对人脐带静脉内皮细胞的药效。
实验结果表11说明，联苯环辛二烯木脂素可显著增强SU5416对人脐带静脉内皮细胞的抑制作用表11、联苯环辛二烯木脂素增强SU5416对人脐带静脉内皮细胞的抑制作用。
*p＜0.05.
实施例9联苯环辛二烯木脂素增强PTK787对人脐带静脉内皮细胞的抑制作用实验方法五味子素A，五味子素B，五味子素C，五味子酯A，五味子醇A，五味子醇B，分别用DMSO配制成20mg/ml的母液。人脐带静脉内皮细胞培养在含有10％的小牛血清的DMEM培养液中，接种到24孔细胞培养板中，每孔细胞为1万个细胞，24小时后，加入VEGF(血管内皮细胞生长因子，至20ng/ml，然后各孔加入一种联苯环辛二烯木脂素，再加入不同浓度的PTK787。培养3天后，用细胞流式仪(FACScan，美国Becton Dickinson)计数每一孔中的细胞数，然后求出半数抑制浓度IC50。人脐带静脉内皮细胞，分成七组，一组为空白对照，另六组分别各加入10μg/ml的五味子素A、五味子素B、五味子素C、五味子酯A五味子醇A、五味子醇B，在同样的联苯环辛二烯木脂素组内再各自加入PTK787至终浓度为0、10、20、40、80、160、320、640nM，求得各自的半数抑制浓度IC50，结果说明，联苯环辛二烯木脂素可显著增PTK787对人脐带静脉内皮细胞的药效。
实验结果表12说明，联苯环辛二烯木脂素显著增强PTK787对人脐带静脉内皮细胞的抑制作用。
表12、联苯环辛二烯木脂素显著增强PTK787对人脐带静脉内皮细胞的抑制作用
*p＜0.05.
实施例1～9的实验结果说明，联苯环辛二烯木脂素可以增强各种酪氨酸激酶抑制药物的药效，说明联苯环辛二烯木脂素可以作为酪氨酸激酶抑制剂的增敏剂。
权利要求
1.联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用。
2.如权利要求
1所述的联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的酪氨酸激酶抑制药物为肿瘤冶疗剂。
3.如权利要求
2所述的联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的酪氨酸激酶抑制药物为酪氨酸激酶异常的疾病的治疗剂。
4.如权利要求
1～3之一所述的联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的联苯环辛二烯木脂素结构如式I所示 式中，R1、R2、R5、R6分别为羟基或甲氧基，或者，R1与R2、R5与R6各自不成环或者R1与R2、R5与R6各自组成烷氧环；R3为下列之一①-O-CH3；②-OH； R4为下列之一①-O-CH3；②-OH；
R7为下列之一①-H；②-OH；
R8、R9各自为下列之一①-H；②-OH；R10为下列之一①-H；②-OH； 或者，R7与R10连成氧桥，R1～R6、R8、R9定义如上所述；或者，R3与R7组成酰氧环，R1、R2、R4～R6、R8～R10定义如上所述。
5.如权利要求
4所述的联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的联苯环辛二烯木脂素结构式如下 式中，R1、R2、R5、R6分别为羟基或甲氧基，或者，R1与R2、R5与R6各自不成环或者R1与R2、R5与R6各自组成烷氧环；R7为下列之一①-H；②-OH；
R8、R9各自为下列之一①-H；②-OH；R10为下列之一①-H；②-OH；
6.如权利要求
5所述的联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的联苯环辛二烯木脂素为下式之一①五味子素A；②五味子素B；③五味子素C；④五味子酯A；⑤五味子醇A；⑥五味子醇B。
7.如权利要求
1～3之一所述的联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的酪氨酸激酶抑制药物为下列之一格列卫、吉非替尼、埃罗替尼、艾比特思、搓杜滋美、SU5416、SU-5402、PTK787、SU11248、BAY43-9006、SU101、GW-572016、CI-1033、AZD6474、PK1166、SKBR3、BT-474、SU6668、CI-1033、PKC412、MLN518、CEP-701、PD0173074、SMS-354825、D816X、ABX-EGF、2C4、CT52923、Bevacizumab、PD180970、PD173955、SKI606、BMS354825、AZD0530、AP23464、CGP76030、AMN107。
8.如权利要求
1～3之一所述的联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的增敏药物还含有药物赋形剂或载体。
9.如权利要求
8所述的联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述的增敏药物可制成下列之一的剂型①针剂；②片剂；③胶囊剂；④颗粒剂；⑤缓释剂。
10.如权利要求
1～3之一所述的联苯环辛二烯木脂素在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用，其特征在于所述增敏药物为所述的联苯环辛二烯木脂素的单体或混合物。
专利摘要
本发明提供了联苯环辛二烯木脂素的新用途，即在制备酪氨酸激酶抑制药物的增敏药物中的应用。所述的酪氨酸激酶抑制药物为肿瘤冶疗剂或酪氨酸激酶异常的疾病治疗剂。所述的所述增敏药物可为所述的联苯环辛二烯木脂素的单体，也可为所述的联苯环辛二烯木脂素的混合物。本发明所述的联苯环辛二烯木脂素在制备治疗肿瘤药物中的应用，进一步明确了联苯环辛二烯木脂素对酪氨酸激酶抑制药物的增敏作用，具有良好的临床应用前景。
文档编号A61P35/00GK1994289SQ200610048905
公开日2007年7月11日 申请日期2006年1月5日
发明者胡汛 申请人:胡汛, 宁波英诺药业科技有限公司导出引文BiBTeX, EndNote, RefMan