本发明属于天然产物提取纯化技术领域，具体涉及一种五味子总木脂素的制备方法。
背景技术：
五味子为木兰科植物五味子(schisandrachinesnsis(turcz.)baill)的干燥成熟果实。五味子性温，具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心的功效。研究表明，五味子含有多种木脂素成分：五味子素(schizandrin)、五味子甲素(schizandrina)、五味子乙素(schizandrinb)、五味子醇甲、醇乙(schizandrola，b)、五味子丙素(schizandrinc)等。木脂素成分是五味子中主要保肝有效成分，这类成分在护肝药品、保健食品开发方面有广泛应用，对其提取制备工艺有必要进一步进行研究。
在现有的提取方法中，工艺相对比较复杂，成本较高，不利于工业化生产。申请号为200910264455.3(申请日：2009.12.23，公开号：cn101757111，公开日：2010.6.30)的中国专利公开了以一种五味子总木脂素的制备方法。工艺步骤包括将南五味子粉碎，加入80-95％乙醇，回流提取2-3次，每次1.5-2小时。提取液加溶剂0.2-0.5％活性炭，搅拌脱色1-2小时，脱色液泵入硅胶中压柱，以石油醚-丙酮混合液分段洗脱，用45-50℃丙酮结晶3-5次，干燥得到产品。该方法操作步骤较多，并且需要中压柱，成本较高。申请号为201010119871(申请日：2010.2.24，公告号：cn101744886a，公开日：2012.7.4)公开了一种高纯度五味子总木脂素的提取方法,包括以下步骤：(1)将五味子果实用水浸泡；浸泡后的五味子果实过滤,滤渣烘干粉碎，备用；(2)粉碎后的滤渣采用超临界co2进行萃取。该方法由于应用超临界co2成本较高，并且产量很小，不能满足工业化生产需要。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种五味子总木脂素的制备方法，解决了现有方法中存在的步骤多、成本高、产量小的问题。
本发明所采用的技术方案是，一种五味子总木脂素的制备方法，具体步骤如下：
步骤1，提取
五味子粉碎后加入乙醇提取2-3次，合并提取液经真空减压浓缩，回收乙醇，直至浓缩液中无乙醇气味为止；
步骤2，大孔树脂层析
将步骤1得到的浓缩液用大孔树脂d101柱层析，分别采用不同浓度的乙醇水冲洗，并收集冲洗后的部分乙醇水，合并后浓缩，得到浸膏；
步骤3，硅胶层析柱上样
将步骤2得到的浸膏用甲醇溶解后与硅胶混合，搅拌均匀分散，干燥后加入装填有硅胶的层析柱；
步骤4，层析柱洗脱
将步骤3中的层析柱分别用不同体积比的石油醚-丙酮混合液冲洗，并收集冲洗后的部分石油醚-丙酮混合液，浓缩，得到总木脂素。
本发明的特点还在于：
步骤1中乙醇的添加量为五味子质量的3-5倍、乙醇浓度为70％。
步骤1中每次提取是在50℃下提取2-3小时。
步骤2具体为：将步骤1得到的浓缩液用大孔树脂d101柱层析，分别采用浓度为0、20-25％、50-55％、80-85％的乙醇水冲洗，收集冲洗后的浓度为20-25％和50-55％乙醇水，合并，浓缩，得到浸膏。
步骤4具体为：将步骤3中的层析柱分别用体积比为1︰0、5.0-5.3︰1、3.0-3.2︰1、2.0-2.2︰1的石油醚-丙酮混合液冲洗，并收集冲洗后的体积比为3.0-3.2︰1和2.0-2.2︰1的石油醚-丙酮混合液，合并，浓缩，得到总木脂素。
本发明的有益效果是，本发明五味子总木脂素的制备方法，只需要通过乙醇提取，大孔树脂乙醇水洗脱，再经过硅胶柱层析3个步骤就能得到纯度大于60％总木脂素，其工艺流程简单，便于操作。使用的分离纯化材料为大孔树脂和硅胶，其中用量较大的大孔树脂可以回收多次使用，硅胶用量较少，并且分离纯化过程中使用的有机溶剂可以回收多次使用，所以本发明的总木脂素纯化工艺操作成本较低。另外，本发明得到的总木脂素纯度可以达到60％，相对纯度较高。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。
本发明五味子总木脂素的制备方法，具体步骤如下：
步骤1，提取
五味子粉碎后加入其质量3-5倍、浓度为70％的乙醇，在50℃下提取2-3小时，提取2-3次，合并提取液经真空减压浓缩，回收乙醇，直至浓缩液中无乙醇气味为止；
步骤2，大孔树脂层析
将步骤1得到的浓缩液用大孔树脂d101柱层析，分别采用浓度为0、20-25％、50-55％、80-85％的乙醇水冲洗，收集冲洗后的浓度为20-25％和50-55％乙醇水，合并，浓缩，得到浸膏；
步骤3，硅胶层析柱上样
步骤2得到的浸膏用甲醇溶解后与硅胶混合，搅拌均匀分散，干燥后加入装填有硅胶的层析柱；
步骤4，层析柱洗脱
将步骤3中的层析柱分别用体积比为1︰0、5.0-5.3︰1、3.0-3.2︰1、2.0-2.2︰1的石油醚-丙酮混合液冲洗，并收集冲洗后的体积比为3.0-3.2︰1和2.0-2.2︰1的石油醚-丙酮混合液，合并，浓缩，得到总木脂素。
本发明五味子总木脂素的制备方法只需要通过乙醇提取，大孔树脂乙醇水洗脱，再经过硅胶柱层析3个步骤就能得到纯度大于60％总木脂素，其工艺流程简单，便于操作。使用的分离纯化材料为大孔树脂和硅胶，其中用量较大的大孔树脂可以回收多次使用，硅胶用量较少，并且分离纯化过程中使用的有机溶剂可以回收多次使用，所以本发明的总木脂素纯化工艺操作成本较低。另外，本发明得到的总木脂素纯度可以达到60％，相对纯度较高。
实施例1
步骤1，提取
五味子粉碎后加入其质量3倍、浓度为70％的乙醇，在50℃下提取32小时，提取2次，合并提取液经真空减压浓缩，回收乙醇，直至浓缩液中无乙醇气味为止；
步骤2，大孔树脂层析
将步骤1得到的浓缩液用大孔树脂d101柱层析，分别采用浓度为0、20％、50％、80％的乙醇水冲洗，收集冲洗后的浓度为20％和50％乙醇水，合并，浓缩，得到浸膏；
步骤3，硅胶层析柱上样
步骤2得到的浸膏用甲醇溶解后与硅胶混合，搅拌均匀分散，干燥后加入装填有硅胶的层析柱；
步骤4，层析柱洗脱
将步骤3中的层析柱分别用体积比为1︰0、5.0︰1、3.0︰1、2.0︰1的石油醚-丙酮混合液冲洗，并收集冲洗后的体积比为3.0︰1和2.0︰1的石油醚-丙酮混合液，合并，浓缩，得到总木脂素。
采用紫外分光光度法测定实施例1的得到的总木脂素的纯度
1、对照品溶液的制备
山奈酚对照品溶液制备精密称取山奈酚对照品1.01mg，置于10ml量瓶中，加甲醇至刻度，精密移取0.5ml溶液置于10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度既得。
2、供试品溶液的制备
取总木脂素粉末(过4号筛)约0.4g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70％甲醇40ml，称重，超声(功率120w，频率40khz)45min，放冷，再次称重，用70％甲醇补足减失重，摇匀，滤过，精密吸取续滤液1ml，置于25ml量瓶中，加70％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。
3、总木脂素含量测定
制备的供试品溶液以甲醇为空白对照，在292，392nm处测定吸光度，并计算其含量(n＝3)。
测得其总木脂素纯度为63％。
实施例2
步骤1，提取
五味子粉碎后加入其质量4倍、浓度为70％的乙醇，在50℃下提取2小时，提取3次，合并提取液经真空减压浓缩，回收乙醇，直至浓缩液中无乙醇气味为止；
步骤2，大孔树脂层析
将步骤1得到的浓缩液用大孔树脂d101柱层析，分别采用浓度为0、22％、55％、82％的乙醇水冲洗，收集冲洗后的浓度为22％和55％乙醇水，合并，浓缩，得到浸膏；
步骤3，硅胶层析柱上样
步骤2得到的浸膏用甲醇溶解后与硅胶混合，搅拌均匀分散，干燥后加入装填有硅胶的层析柱；
步骤4，层析柱洗脱
将步骤3中的层析柱分别用体积比为1︰0、5.2︰1、3.1︰1、2.1︰1的石油醚-丙酮混合液冲洗，并收集冲洗后的体积比为3.1︰1和2.1︰1的石油醚-丙酮混合液，合并，浓缩，得到总木脂素。
实施例3
步骤1，提取
五味子粉碎后加入其质量5倍、浓度为70％的乙醇，在50℃下提取2.5小时，提取2次，合并提取液经真空减压浓缩，回收乙醇，直至浓缩液中无乙醇气味为止；
步骤2，大孔树脂层析
将步骤1得到的浓缩液用大孔树脂d101柱层析，分别采用浓度为0、25％、53％、85％的乙醇水冲洗，收集冲洗后的浓度为25％和53％乙醇水，合并，浓缩，得到浸膏；
步骤3，硅胶层析柱上样
步骤2得到的浸膏用甲醇溶解后与硅胶混合，搅拌均匀分散，干燥后加入装填有硅胶的层析柱；
步骤4，层析柱洗脱
将步骤3中的层析柱分别用体积比为1︰0、5.3︰1、3.2︰1、2.2︰1的石油醚-丙酮混合液冲洗，并收集冲洗后的体积比为3.2︰1和2.2︰1的石油醚-丙酮混合液，合并，浓缩，得到总木脂素。