本发明属于天然产物提取
技术领域：
，具体涉及一种从菜豆中提取香豆素类化合物的方法。
背景技术：
：芸豆学名菜豆（俗称二季豆或四季豆），豆科科菜豆属。芸豆原产美洲的墨西哥和阿根廷。荚果长10～20厘米，形状直或稍弯曲，横断面圆形或扁圆形，表皮密被绒毛；嫩荚呈深浅不一的绿、黄、紫红（或有斑纹）等颜色，成熟时黄白至黄褐色。随着豆荚的发育，其背、腹面缝线处的维管束逐渐发达，中、内果皮的厚壁组织层数逐渐增多，鲜食品质因而降低。故嫩荚采收要力求适时。每荚含种子4～8粒，种子肾形，有红、白、黄、黑及斑纹等颜色；千粒重0.3～0.7千克。1820年，vogel从圭亚那零陵香豆（黄香草木犀）中获得第一种香豆素。从此，香豆素类化合物引起了研究者们极大的兴趣，多种香豆素相继被发现。香豆素是由顺式邻羟基桂皮酸脱水而形成的内酯，具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗微生物、抗凝血等生物活性。随着现代分离提取技术的快速发展，香豆素类物质在染料、荧光探针及杀虫剂等方面也有广泛应用。目前，国内外对香豆素类化合物的研究主要集中在香豆素类化合物的分离鉴定与提纯、药理作用以及人工合成方法的改进等方面。尽管我国拥有十分丰富的植物资源，但由于这方面的研究起步较晚，对植物中香豆素类化合物资源的鉴定和影响香豆素形成的生理生态条件的研究尚不系统、深入，香豆素提取和分离纯化技术体系尚不成熟，尚未大规模开发利用。香豆素的提取工艺，比较常用的主要有有机溶剂提取法，超临界二氧化碳萃取法等，其中有机溶剂的提取法由于工艺简单，操作方便，反应条件较易控制等有点，目前仍是最广泛的一种提取方法，但是有机溶解提取通常需要较高的温度和大量的有机溶剂，从而在一定程度上影响了目标产物的活性，且香豆素的纯度也会受到影响，二氧化碳超临界提取方法对设备的要求比较高。技术实现要素：解决的技术问题：为了解决现有提取方法香豆素纯度低的技术问题，本发明采用硫酸镁、柠檬酸钠和烟酰胺加热提取有效物质的方法，不仅可以极大的提高香豆素类化合物纯度，还可以增加得率。技术方案：一种从菜豆中提取香豆素类化合物的方法，包括以下步骤：步骤1，取菜豆，去皮后将种子加至70-120倍重量份的水中，打浆，得到浆液；步骤2，以重量份计，在所得浆液100份中加入硫酸镁4-9份、柠檬酸钠1-4份和烟酰胺0.5-1.2份，加热至70-90℃提取2-4h，冷却后经微滤膜过滤得到提取液；步骤3，将步骤2所得提取液导入离子交换树脂进行吸附，再用3-5wt.%的氯化钠溶液洗脱，得到洗脱液；步骤4，将步骤3所得洗脱液用纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液；步骤5，将步骤4的浓缩液蒸发浓缩至体积缩小为原体积的10-15%，加入乙醇水溶液，搅拌后静置，得上清；步骤6，将步骤5的上清蒸发浓缩至体积缩小为原体积的15-25%，然后冷却结晶，将结晶滤出后，烘干，即得。进一步地，步骤2中提取过程的压力为0.08-0.1mpa。进一步地，步骤2中微滤膜的平均孔径在300-500nm。进一步地，步骤3中离子交换树脂为d113阳离子交换树脂。进一步地，步骤3中吸附步骤的料液的流速是1-3bv/h，洗脱步骤的料液的流速是0.8-1.5bv/h。进一步地，步骤4中乙醇水溶液的浓度为85-95v/v%。进一步地，步骤6中烘干温度为80-100℃，烘干时间为2-4h。进一步地，步骤2中在浆液中还需要加入纤维素酶0.2-0.6份。有益效果：本发明先将菜豆种子打成浆液再加入硫酸镁、柠檬酸钠和烟酰胺加热提取，使其中的有效物质更多地析出，提取液经过离子交换树脂吸附洗脱除去杂质后，再经过乙醇水溶液提取，可以极大的提高香豆素类化合物纯度。在提取过程中加入纤维素酶，可以进一步促进有效物质的析出，从而提高香豆素类化合物的产量。具体实施方式实施例1一种从菜豆中提取香豆素类化合物的方法，包括以下步骤：步骤1，取菜豆，去皮后将种子加至70倍重量份的水中，打浆，得到浆液；步骤2，以重量份计，在所得浆液100份中加入硫酸镁4份、柠檬酸钠1份和烟酰胺0.5份，加热至70℃提取4h，冷却后经微滤膜过滤得到提取液；步骤3，将步骤2所得提取液导入离子交换树脂进行吸附，再用3wt.%的氯化钠溶液洗脱，得到洗脱液；步骤4，将步骤3所得洗脱液用纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液；步骤5，将步骤4的浓缩液蒸发浓缩至体积缩小为原体积的10%，加入乙醇水溶液，搅拌后静置，得上清；步骤6，将步骤5的上清蒸发浓缩至体积缩小为原体积的25%，然后冷却结晶，将结晶滤出后，烘干，即得。其中，步骤2中提取过程的压力为0.08mpa，微滤膜的平均孔径在300-500nm；步骤3中离子交换树脂为d113阳离子交换树脂，吸附步骤的料液的流速是1bv/h，洗脱步骤的料液的流速是0.8bv/h；步骤4中乙醇水溶液的浓度为85v/v%；步骤6中烘干温度为80℃，烘干时间为4h。每100g的菜豆中，可以提取得到香豆素类化合物85mg，纯度为82.4%。实施例2一种从菜豆中提取香豆素类化合物的方法，包括以下步骤：步骤1，取菜豆，去皮后将种子加至75倍重量份的水中，打浆，得到浆液；步骤2，以重量份计，在所得浆液100份中加入硫酸镁6份、柠檬酸钠2份和烟酰胺0.7份，加热至75℃提取4h，冷却后经微滤膜过滤得到提取液；步骤3，将步骤2所得提取液导入离子交换树脂进行吸附，再用4wt.%的氯化钠溶液洗脱，得到洗脱液；步骤4，将步骤3所得洗脱液用纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液；步骤5，将步骤4的浓缩液蒸发浓缩至体积缩小为原体积的15%，加入乙醇水溶液，搅拌后静置，得上清；步骤6，将步骤5的上清蒸发浓缩至体积缩小为原体积的20%，然后冷却结晶，将结晶滤出后，烘干，即得。其中，步骤2中提取过程的压力为0.1mpa，微滤膜的平均孔径在300-500nm；步骤3中离子交换树脂为d113阳离子交换树脂，吸附步骤的料液的流速是2bv/h，洗脱步骤的料液的流速是1.2bv/h；步骤4中乙醇水溶液的浓度为90v/v%；步骤6中烘干温度为90℃，烘干时间为3h。每100g的菜豆中，可以提取得到香豆素类化合物88mg，纯度为80.3%。实施例3一种从菜豆中提取香豆素类化合物的方法，包括以下步骤：步骤1，取菜豆，去皮后将种子加至90倍重量份的水中，打浆，得到浆液；步骤2，以重量份计，在所得浆液100份中加入硫酸镁8份、柠檬酸钠3份和烟酰胺0.9份，加热至80℃提取4h，冷却后经微滤膜过滤得到提取液；步骤3，将步骤2所得提取液导入离子交换树脂进行吸附，再用3wt.%的氯化钠溶液洗脱，得到洗脱液；步骤4，将步骤3所得洗脱液用纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液；步骤5，将步骤4的浓缩液蒸发浓缩至体积缩小为原体积的15%，加入乙醇水溶液，搅拌后静置，得上清；步骤6，将步骤5的上清蒸发浓缩至体积缩小为原体积的15%，然后冷却结晶，将结晶滤出后，烘干，即得。其中，步骤2中提取过程的压力为0.1mpa，微滤膜的平均孔径在300-500nm；步骤3中离子交换树脂为d113阳离子交换树脂，吸附步骤的料液的流速是3bv/h，洗脱步骤的料液的流速是1.5bv/h；步骤4中乙醇水溶液的浓度为95v/v%；步骤6中烘干温度为100℃，烘干时间为4h。每100g的菜豆中，可以提取得到香豆素类化合物94mg，纯度为82.6%。实施例4一种从菜豆中提取香豆素类化合物的方法，包括以下步骤：步骤1，取菜豆，去皮后将种子加至120倍重量份的水中，打浆，得到浆液；步骤2，以重量份计，在所得浆液100份中加入硫酸镁9份、柠檬酸钠4份和烟酰胺1.2份，加热至90℃提取2h，冷却后经微滤膜过滤得到提取液；步骤3，将步骤2所得提取液导入离子交换树脂进行吸附，再用5wt.%的氯化钠溶液洗脱，得到洗脱液；步骤4，将步骤3所得洗脱液用纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液；步骤5，将步骤4的浓缩液蒸发浓缩至体积缩小为原体积的10%，加入乙醇水溶液，搅拌后静置，得上清；步骤6，将步骤5的上清蒸发浓缩至体积缩小为原体积的25%，然后冷却结晶，将结晶滤出后，烘干，即得。其中，步骤2中提取过程的压力为0.08mpa，微滤膜的平均孔径在300-500nm；步骤3中离子交换树脂为d113阳离子交换树脂，吸附步骤的料液的流速是1bv/h，洗脱步骤的料液的流速是0.8bv/h；步骤4中乙醇水溶液的浓度为95v/v%；步骤6中烘干温度为100℃，烘干时间为2h。每100g的菜豆中，可以提取得到香豆素类化合物79mg，纯度为80.4%。实施例5本实施例与实施例3的区别在于：步骤2中在浆液中还需要加入纤维素酶0.2-0.6份。一种从菜豆中提取香豆素类化合物的方法，包括以下步骤：步骤1，取菜豆，去皮后将种子加至90倍重量份的水中，打浆，得到浆液；步骤2，以重量份计，在所得浆液100份中加入硫酸镁8份、柠檬酸钠3份、烟酰胺0.9份和纤维素酶0.2份，加热至80℃提取4h，冷却后经微滤膜过滤得到提取液；步骤3，将步骤2所得提取液导入离子交换树脂进行吸附，再用3wt.%的氯化钠溶液洗脱，得到洗脱液；步骤4，将步骤3所得洗脱液用纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液；步骤5，将步骤4的浓缩液蒸发浓缩至体积缩小为原体积的15%，加入乙醇水溶液，搅拌后静置，得上清；步骤6，将步骤5的上清蒸发浓缩至体积缩小为原体积的15%，然后冷却结晶，将结晶滤出后，烘干，即得。其中，步骤2中提取过程的压力为0.1mpa，微滤膜的平均孔径在300-500nm；步骤3中离子交换树脂为d113阳离子交换树脂，吸附步骤的料液的流速是3bv/h，洗脱步骤的料液的流速是1.5bv/h；步骤4中乙醇水溶液的浓度为95v/v%；步骤6中烘干温度为100℃，烘干时间为4h。每100g的菜豆中，可以提取得到香豆素类化合物106mg，纯度为83.6%。实施例6本实施例中步骤5所采用的乙醇水溶液的浓度为80v/v%、85v/v%、90v/v%、95v/v%和100v/v%。一种从菜豆中提取香豆素类化合物的方法，包括以下步骤：步骤1，取菜豆，去皮后将种子加至90倍重量份的水中，打浆，得到浆液；步骤2，以重量份计，在所得浆液100份中加入硫酸镁8份、柠檬酸钠3份和烟酰胺0.9份，加热至80℃提取4h，冷却后经微滤膜过滤得到提取液；步骤3，将步骤2所得提取液导入离子交换树脂进行吸附，再用3wt.%的氯化钠溶液洗脱，得到洗脱液；步骤4，将步骤3所得洗脱液用纳滤膜进行浓缩，得到浓缩液；步骤5，将步骤4的浓缩液蒸发浓缩至体积缩小为原体积的15%，加入乙醇水溶液，搅拌后静置，得上清；步骤6，将步骤5的上清蒸发浓缩至体积缩小为原体积的15%，然后冷却结晶，将结晶滤出后，烘干，即得。其中，步骤2中提取过程的压力为0.1mpa，微滤膜的平均孔径在300-500nm；步骤3中离子交换树脂为d113阳离子交换树脂，吸附步骤的料液的流速是3bv/h，洗脱步骤的料液的流速是1.5bv/h；步骤4中乙醇水溶液的浓度为80v/v%、85v/v%、90v/v%、95v/v%和100v/v%；步骤6中烘干温度为100℃，烘干时间为4h。每100g的菜豆中，可以提取得到香豆素类化合物重量和纯度如下所示：乙醇浓度80v/v%85v/v%90v/v%95v/v%100v/v%重量/mg6585889462纯度/%74.282.480.382.670.7当前第1页12