专利名称：一种抗肿瘤和抗溃疡活性的异香豆素类化合物的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及一种具有抗肿瘤和抗溃疡活性的异香豆素类化合物，它是从海洋真菌Alternaria tenuis的正丁醇萃取物获得的异香豆素类化合物Sg17-1-4。
背景技术：
异香豆素类化合物Sg17-1-4是一个3，4位还原的AI-77系列异香豆素。此类化合物是微生物特有的次级代谢产物，其结构特殊，并且具有抗肿瘤、抗溃疡、抗菌、抗心血管疾病、以及抗溃疡等生理活性。据文献报道该类化合物PM-94128对多种肿瘤细胞均有明显的细胞毒性，其中对P388，A549，HT29，MEL28的IC50均为0.05μmol/L。这类化合物还具有特殊的抗溃疡活性，对该类化合物的药理学试验表明，此类化合物能够抑制酸性抗炎药物吲哚美辛诱导溃疡、幽门结扎溃疡、水浸诱导的应激性溃疡以及阿斯匹林诱导的溃疡等模型的小鼠的溃疡。
发明内容
本发明的目的在于在海洋微生物中寻找具有抗癌活性物质，通过对从采自舟山群岛海藻上分离得到的海洋真菌Alternaria tenuis进行培养发酵和代谢成分的系统分离，从中获得了一个具有AI-77系列异香豆素母核的化合物Sg17-1-4。这是一个有望成为抗癌和抗溃疡药物先导化合物的物质。
本发明将从采自舟山群岛海藻上分离得到的海洋真菌Alternariatenuis的发酵液过滤后，用正丁醇对水层进行了反复的萃取后，综合利用各种色谱手段对萃取物进行了分离后得到了这个化合物。并利用各种化学和光谱手段，鉴定了该化合物的结构。Sg17-1-4的结构如下所示 对该类化合物抗溃疡活性的构效要求研究表明，异香豆素母核和氨基酸侧链对整个化合物的活性都是不可或缺的部分，对氨基酸侧链的化学修饰，则能很大程度的影响化合物的抗溃疡活性。Sg17-1-4符合这类化合物抗溃疡活性的构效要求，这也是一个具有抗溃疡活性的异香豆素。
本发明的优点是经体外抗肿瘤活性试验，此化合物对Hela人宫颈癌细胞、人黑色素瘤A375-S2的IC50分别为0.3 and 0.05mM。这是一个有望成为抗癌和抗溃疡药物先导化合物的物质。
具体实施例方式本发明化合物是微生物特有的次级代谢产物，其结构特殊，并且具有抗肿瘤、抗溃疡、抗菌、抗心血管疾病、以及抗溃疡等生理活性。现有文献报道该类化合物PM-94128对多种肿瘤细胞均有明显的细胞毒性，其中对P388，A549，HT29，MEL28的IC50均为0.05μmol/L。这类化合物还具有特殊的抗溃疡活性，对该类化合物的药理学试验表明，此类化合物能够抑制酸性抗炎药物吲哚美辛诱导溃疡、幽门结扎溃疡、水浸诱导的应激性溃疡以及阿斯匹林诱导的溃疡等模型的小鼠的溃疡。本发明中化合物其结构表面具有上述化合物的特性，经药理学试验表明对多种肿瘤细胞均有明显的细胞毒性，能够抑制模型小鼠的溃疡。
本发明所用的原料海洋真菌由从采自舟山群岛海藻上分离得到，经国家海洋局第一海洋研究所田黎教授鉴定为Alternaria tenuis。
菌株Sg17-1由2003年4月20日采自舟山群岛海藻上分离得到。纯化后培养在麦麸浸汁培养基上(发酵，固体培养均用该培养基麦麸浸汁200ml，蛋白胨2g，酵母粉1g，葡萄糖10g，NaCl 17g，MgCl26H2O 1.3g，KCl 0.1g，FePO40.01g，蒸馏水1000ml)25℃，150rpm，振荡培养12天，发酵量40L。
菌株在该培养基上菌落黑褐色，分生孢子梗暗色，单枝，屈曲，有多个孢子痕，6.0-127.0×3.5-7.0μm，分生孢子黑褐色至褐色，有纵横隔膜，形状变化较大，大多椭圆至卵圆形，常成链排列，顶端有喙状附属丝，有横隔膜2-9个，纵隔膜1-7个，7.5-70.5×6.5-22.5μm。根据此特征鉴定为细交链孢霉(Alternaria tenuis)。
菌株Alternaria tenuis在15℃，150rpm的摇床，振荡培养10天，大量发酵得到发酵液40L。大量发酵生产菌Alternaria tenuis Sg17-1菌株，得到发酵液20L。过滤得到菌丝体湿重200g，将其置于2000mL容量瓶中，加入1000毫升的丙酮，超声提取1小时，所得提取液减压回收，连续提取直到提取液无色为止(3次)，提取液减压回收得到干燥浸膏3g。水层用等量正丁醇萃取三次，得到干燥浸膏25g，经薄层检验后将两部分合并，以甲醇反复溶解除盐后，进行硅胶柱色谱分离，从氯仿-甲醇10∶1馏分中获得化合物Sg17-1-4。
表1-11H(600MHz)&13C(150MHz)NMR data of Sg17-1-4
a.Recorded in DMSO-d6，coupling constant(Hz)b.Assignments are based on HMQC，HMBC，HHCOSY，NOESY data化合物的理化性质如下及波谱数据如下异香豆素Sg17-1-4白色粉末(甲醇)，茚三酮试剂和三氯化铁试剂显色；mp 147-149℃，[α]20D-110°(c 0.1，MeOH)；ESI-MS m/z 495.1(M+H)+；HR-SIMS m/z495.2334(M+H)+，calcd for 495.2337；UV(MeOH)314nm，246nm，209nm；vmax(KBr)cm-13392，2930，1672，1570；NMR数据见表1-1。
权利要求
1.一种抗肿瘤和抗溃疡活性的异香豆素类化合物，其特征在于从采自海藻上分离得到的海洋真菌Alternaria tenuis的发酵液过滤后，用正丁醇对水层进行萃取后，利用色谱手段对萃取物进行分离后得到的化合物Sg17-1-4，其结构式如下。
2.一种如权利要求1所述的抗肿瘤和抗溃疡活性的异香豆素类化合物的制备方法，其特征在于菌株Sg17-1纯化后培养在麦麸浸汁培养基上，发酵，固体培养均用该培养基麦麸浸汁200ml，蛋白胨2g，酵母粉1g，葡萄糖10g，NaCl 17g，MgCl26H2O 1.3g，KCl 0.1g，FePO40.01g，蒸馏水1000ml；25℃，150rpm，振荡培养12天，发酵量40L；菌株在该培养基上菌落黑褐色，分生孢子梗暗色，单枝，屈曲，有多个孢子痕，6.0-127.0×3.5-7.0μm，分生孢子黑褐色至褐色，有纵横隔膜，形状变化较大，大多椭圆至卵圆形，常成链排列，顶端有喙状附属丝，有横隔膜2-9个，纵隔膜1-7个，7.5-70.5×6.5-22.5μm，根据此特征鉴定为细交链孢霉Alternaria tenuis；菌株Alternaria tenuis在15℃，150rpm的摇床，振荡培养10天，大量发酵得到发酵液40L，大量发酵生产菌Alternaria tenuis Sg17-1菌株，得到发酵液20L，过滤得到菌丝体湿重200g，将其置于2000mL容量瓶中，加入1000毫升的丙酮，超声提取1小时，所得提取液减压回收，连续提取直到提取液无色为止，提取液减压回收得到干燥浸膏3g，水层用等量正丁醇萃取三次，得到干燥浸膏25g，经薄层检验后将两部分合并，以甲醇反复溶解除盐后，进行硅胶柱色谱分离，从氯仿-甲醇10∶1馏分中获得化合物Sg17-1-4。
全文摘要
本发明提供了一种抗肿瘤和抗溃疡活性的异香豆素类化合物Sg17－1－4。它是从采自海藻上分离得到的海洋真菌Alternaria tenuis的发酵液过滤后，用正丁醇对水层进行萃取后，利用色谱手段对萃取物进行分离后得到的化合物，其结构式如下。药理学实验表明，此化合物对Hela人宫颈癌细胞、人黑色素瘤A375－S2的IC
文档编号C12P17/16GK101029047SQ20071000660
公开日2007年9月5日 申请日期2007年1月18日 优先权日2006年7月6日
发明者黄永富, 裴月湖, 田黎 申请人:沈阳药科大学