一种新的异香豆素类化合物及其制备方法和医药用图
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及从干燥的桂枝中分离得到的一种具有血管保 护作用的异香豆素类化合物及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 桂枝为樟科植物肉桂Cinnamomum cassia Presl的干燥嫩枝，是常用的解表中药 之一，主产于广东、广西、云南等省区。始载于《神农本草经》，味辛、甘，性温，具有散寒解表、 温通经脉、通阳化气之功效。临床上多用于风寒感冒、脘腹冷痛、血寒经闭、关节痹痛、痰饮、 水肿、心悸、奔豚等病症。
[0003] 桂枝为散风寒、逐表邪、止咳嗽、去肢节风痛之要药，自汉代张仲景《伤寒论》以来， 为历代医家所常用。据统计，桂枝在经方中的使用频率仅次于甘草，在《伤寒论》和《金匮要 略》中多使用桂枝组方。因此，在临床实践过程中形成系列以桂枝为主药的经典方剂，如桂 枝汤、麻黄汤、葛根汤、桂枝茯苓丸、黄芪桂枝五物汤等，广泛应用于临床各科疾病的治疗。
[0004] 研究表明桂枝中含有以桂皮醛为主的挥发性成分，尚含有有机酸类、縣质类、糖 类、甾体类、香豆素类等成分。
[0005] 药理学研究证实，桂枝具有缓和肠胃刺激、强心、解热、扩张皮肤血管、促进血液循 环、解表、发散(汗）、镇痛、抗真菌、抗血小板凝集、抗肿瘤等作用，且毒副作用低。桂枝中所 含肉桂酸具有抗菌、升高白细胞、利胆、抗突变、诱导人肺癌细胞恶性表型逆转和抗侵袭等 药理作用。桂皮醛有明显的镇静、镇痛作用，并能兴奋唾液及胃液分泌而健胃，兴奋汗腺而 解热，舒张支气管平滑肌而平喘，同时改善外周循环。原儿茶酸即3,4_二羟基苯甲酸，是植 物中抗炎、抗菌的活性成分。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供一种从干燥的桂枝中分离得到的一种具有血管保护作用的 异香豆素类化合物及其制备方法。
[0007] 本发明的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：
[0008] 具有下述结构式的化合物(I)，
[0009]
[0010] 所述的化合物（I)的制备方法，包含以下操作步骤：（a)将干燥的桂枝粉碎，用75~ 85%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正 丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步骤(a)中乙酸乙 酯萃取物用大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用75%乙醇洗脱10个柱体积， 收集75%乙醇洗脱液，减压浓缩得75%乙醇洗脱物浸膏；（c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏 用正相硅胶分离，依次用体积比为75:1、45 :1、20:1、12:1和1:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱 得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为20:1、12:1和5: 1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；（e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相 硅胶分离，用体积百分浓度为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10~12个柱体积洗脱液，洗 脱液减压浓缩得到纯的化合物(I)。
[0011] 进一步地，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。
[0012] 进一步地，所述用乙醇热回流提取采用的乙醇浓度为80%。
[0013] -种药物组合物，其中含有治疗有效量的所述的化合物（I)和药学上可接受的载 体。
[0014] 所述的化合物(I)在制备血管保护的药物中的应用。
[0015] 所述的药物组合物在制备血管保护的药物中的应用。
[0016] 本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。
[0017] 该药物组合物含有治疗有效量的本发明化合物（I)，其余为药物学上可接受的、对 人和动物无毒和惰性的可药用载体和/或赋形剂。
[0018] 所述的可药用载体或赋形剂是一种或多种选自固体、半固体和液体稀释剂、填料 以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明药物可 通过口服或注射的形式施用于需要治疗的患者。用于口服时，可将其制成片剂、缓释片、控 释片、胶囊、滴丸、微丸、混悬剂、乳剂、散剂或颗粒剂、口服液等;用于注射时，可制成灭菌的 水性或油性溶液、无菌粉针、脂质体或乳剂等。
【附图说明】
[0019] 图1为化合物(I)结构式；
[0020]图2为化合物（I)理论E⑶值与实验E⑶值比较。
【具体实施方式】
[0021]下面结合实施例进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此限定本发明保护范 围。尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对 本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
[0022]实施例1:化合物(I)分离制备及结构确证
[0023] 试剂来源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷为分析纯，购自上海凌峰化 学试剂有限公司，甲醇，分析纯，购自江苏汉邦化学试剂有限公司。
[0024]制备方法：（a)将干燥的桂枝（10kg)粉碎，用80%乙醇热回流提取（25LX3次），合 并提取液，浓缩至无醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水饱和的正 丁醇(3LX3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物(431g)和正丁醇萃取物；（b) 步骤(a)中乙酸乙酯萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用10%乙醇洗脱8个柱体积，再用 75 %乙醇洗脱10个柱体积，收集75 %乙醇洗脱液，减压浓缩得75 %乙醇洗脱物浸膏（157g); (c)步骤(b)中75%乙醇洗脱浸膏用正相硅胶分离，依次用体积比为75:1(8个柱体积）、45:1 (8个柱体积）、20:1 (8个柱体积）、12:1 (8个柱体积)和1:1 (5个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脱得到5个组分；（d)步骤(c)中组分4(49g)用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为 20:1(8个柱体积）、12:1(10个柱体积)和5:1(8个柱体积）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3 个组分；（e)步骤(d)中组分2(25g)用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度 为75 %的甲醇水溶液等度洗脱，收集10-12个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到纯的化合 物（I)(35mg)。
[0025] 结构确证：HR-ESIMS显示[M+Na]+为m/z425.1622,结合核磁特征可得分子式为 C22H2607 ,不饱和度为 10。核磁共振氢谱数据 SH(ppm，DMS0-d6,500MHz):H-2(5.19，m)，H-3 (4.27，m)，H-5(2.87，s)，H-7(5.79，s)，H-9(2.94，m)，H-ll(1.65，m)，H-ll(1.41，m)，H-12 (4.67，t)，H-14(2.65，d，J=16.0)，H-14(2.23，d，J=16.0)，H-15(5.79，dd，J = 17.8， 11.2)，H-16(5.11，d，J=11.2)，H-16(4.96，d，J=17.8)，H-17(1.01，s)，H-19(1.38，s)，H-20(1 · 07，s)，12-0Ac(2 · 07，s);核磁共振碳谱数据δ。(ppm，DMS〇-d6，125MHz): 210 · 7(C，1 -C)， 75.6(CH，2-C)，69.1(CH，3-C)，46.1(C，4-C)，58.2(CH，5-C)，193.7(C，6-C)，126.3(CH，7-C)，155.2(C，8-C)，47.1(CH，9-C)，41.6(C，10-C)，11.7(CH2，11-C)，76.4(CH，12-C)，41.1 (C，13-C)，42.8(CH2，14-C)，138.9(CH，15-C)，116.3(CH2，16-C)，25.0(CH 3，17-C)，175.1(C， 18-C)，12.1(CH3，19-C)，17.1(CH3,20-C)，170.3(C，12-0Ac)，20.7(CH 3，12-0Ac);碳原子标 记参见图1。该化合物在229nm处有紫外吸收带，说明含有α，β-不饱和酮羰基基团。4和 13C-NMR 谱显示了三个甲基[δHl·01(H-17)，l·38(H-19)和l·07(H-20);δC25·0(C-17)，12·l(C-l9)和17·l(C-20)]，一个2，18-内酯结构[δH5·19(H-2) ;δC75·6(C-2)和175·l(C-18)]，一个 〇，0-不饱和酮羰基[5!15.79(!1-7)4(：193.7((：-6)，126.3((：-7)和155.2((：-8)]，一个酮羰基 [30210.7(01)]，乙烯基[3!15.79(!1-15)，5.11(!1-16)和4.96(!1-16) ;3(：138.9((：-15)和 116.3(016)]，一个乙酰氧基[δΗ2.07( 12-0Ac)jC170.3( 12-0Ac)和 20.7( 12-0Ac)]。含氧 碳信号SC69.1以及氢质子信号δΗ4.27表明C-3位连有一个羟基。HMBC谱中，质子信号δΗ4.67 与相应酯羰基碳δ(：170.3的相关性表明C-12(SC76.4)位连有一个乙酰氧基。此外，N0ESY谱 中H-9与Η-3，Η-12，Η-11β和Me-17的相关性表明这些质子为β构型。综合氢谱、碳谱、HMBC谱 和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如图1所示，立体构型进 一步通过E⑶试验确定，理论值与实验值基本一致(图2)。
[0026]实施例2:化合物（I)药理作用试验 [0027] 一、材料和仪器
[0028]血管内皮细胞(ECV-304)由山东大学医学院免疫教研室馈赠。化合物（I)自制，制 备方法见实施例1，HPLC归一化纯度大于98 %。RPMI-1640干粉培养基、胰蛋白酶购于美国 Gibeo公司。胎牛血清购于天津TBD公司。MTT、琼脂糖、AnnexinV-FITC购于美国Sigma公司。 0)!1、10^、500、65!?^测定试剂盒购于南京建成生物工程研究所。0150购于中国医药(集团） 上海化学试剂有限公司。苏木素购于福州迈新生物技术有限公司。Rhodaminel23购于美国 Solarbic公司。阳性药川考嗪购自上海源叶生物科技有限公司。
[0029] 倒置光学显微镜（日本OlymPus公司），二氧化碳培养箱(美国Forma Scientific公 司），电子分析天平(ER-182A型）（日本A&D公司），超净工作台（ZHJH-1209型）（上海智城分析 仪器制造有限公司），流式细胞仪(FACS Vantage型）（美国Beeton Diehnson公司），恒温振 荡器（江苏太仓市实验设备厂），1420Vietor3多标记分析仪（美国PerkinElmer Lifescience公司），721型可见紫外光栅分光光度计(上海精密科学有限公司），电热恒温水 浴箱(上海医疗仪器三厂生产），酶联免疫检测仪(11(3 11111^81^111)(上海1'1161'1]1〇]^385^七6111 分析仪器公司）。
[0030] 二、试验方法
[0031] 1、细胞培养
[0032] ECV-304细胞以RPMI-1640培养基于37°C，5%⑶2培养箱中传代培养。镜下观察，待 细胞汇合率达到70%以上时用胰蛋白酶消化传代，以生长稳定的第3-5代细胞制备细胞悬 液。
[0033] 2、细胞分组及处理
[0034]取生长良好的ECV-304细胞制成细胞悬液，接种于96孔、24孔、6孔细胞培养板或培 养皿中，37°C，5%C02培养24h。随机分为六组:①正常组;②