一种苯丙素类化合物在制备治疗炎症性疾病的药物中的应用
【专利摘要】本发明涉及医药技术领域，公开了一种苯丙素类化合物在制备治疗炎症性疾病的药物中的应用。所述苯丙素类化合物显示出可以抑制细胞炎症因子TNF?α，IL?1β，IL?6的表达作用，进而具有抗炎活性，为炎症性疾病，如宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或关节炎等疾病的治疗药物的开发提供方向。
【专利说明】
一种苯丙素类化合物在制备治疗炎症性疾病的药物中的应用
技术领域
[0001] 本发明属于医药领域，具体涉及一种苯丙素类化合物在制备治疗炎症性疾病的药 物中的应用。
【背景技术】
[0002] 从天然药物中提取分离得到的成分结构多样、活性显著，对其进行分离纯化、结构 修饰、改造和全合成，一直是新药研发的一个主要思路。
[0003] TNF-α:是一种能够直接杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无明显毒性的细胞因子，是迄 今为止所发现的直接杀伤肿瘤作用最强的生物活性因子之一，然而其毒副作用也非常严 重。
[0004] IL-Ιβ:在局部低浓度时协同刺激APC和T细胞活化，促进B细胞增殖和分泌抗体，进 行免疫调节。大量产生时有内分泌效应:诱导肝脏急性期蛋白合成，引起发热和恶病质。
[0005] IL-6:人类IL-6基因位于第7号染色体上；IL-6分子量在21~30KD之间。主要由单 核巨噬细胞、Th2细胞、血管内皮细胞、成纤维细胞产生。能够刺激活化B细胞增殖，分泌抗 体;刺激T细胞增殖及CTL活化;刺激肝细胞合成急性期蛋白，参与炎症反应;促进血细胞发 育。
[0006] IL-6可由多种细胞合成，包括活化的T细胞和B细胞、单核一巨噬细胞、内皮细胞、 上皮细胞以及成纤维细胞等。IL-6作用的靶细胞很多，包括巨噬细胞、肝细胞、静止的T细 胞、活化的B细胞和浆细胞等;其生物效应也十分复杂。
[0007] 因此，寻求新的化合物，以抑制细胞炎症因子TNF-a，IL-Ιβ，IL-6的表达作用，应 用于炎症性疾病的治疗，是非常有必要的。
[0008] 千斤拔药材为豆科（Leguminosae)千斤拔属（Flemingl .Roxb.或Moghania)植 物大叶千斤拔（logAa/jia (Willd.) O.Kuntze)的干燥根，在我国主要分布 于东南部地区。该植物在中国植物志（1995，41:313)、中国台湾植物志（1977，3:258)、海 南植物志（1965，2: 311 )、《中国高等植物图鉴》（1972，2:510)、中国主要植物图说（1955， pp707)和广州植物志（1956，pp361)中均有收录。千斤拔药材为广西地区的道地药材，史 载于《植物名实图考》，有着广泛的民间用药基础。其性味甘，微涩，平，具有清热除湿等功 效，主要用于治疗风湿骨痛、跌打损伤、慢性肾炎、痛经和白带多等妇科疾病。该药材目前已 收载入2005年版《中国药典》附录。
[0009] 大叶千斤拔已报道的成分主要有黄酮类、甾类、萜类、蒽醌类、挥发油类成分，均具 有一定的药理活性，其药理活性多样，报道较多的有神经保护作用，抗炎、抗氧化作用，对病 原微生物的驱虫作用、类激素作用、细胞毒作用，抗菌作用以及免疫增强作用、抗疲劳作用。
[0010] 千斤拔目前广泛应用于妇科、风湿痹痛等类型的中成药生产，如妇科千金片、妇科 千金胶囊、金鸡冲剂、金鸡胶囊等，此类中成药主要用于妇科病（痛经、子宫寒冷不孕、子宫 下垂、盆腔炎、乳腺炎、白带多、产后血虚、关节痛、产后腰膝痛、缺乳和乳疮等），虚弱贫血 (妇女贫血，气血虚弱和病后气虚等）。近年来，临床报道较多的是妇科千金片在治疗妇科炎 症方面的作用。
[0011]目前，在千斤拔的文献中，报道苯丙素类化合物的文献极少，寻找有效的苯丙素类 新化合物，对其进行分离纯化、结构修饰和合成，开发新药，应用于炎症性疾病的治疗，意义 重大。
【发明内容】
[0012] 本发明要解决的技术问题是，寻找一种有效成分，其能抑制细胞炎症因子TNF-a， IL-li3，IL_6的表达作用，能应用于制备治疗炎症性疾病的药物中。本发明提供一种苯丙素 类化合物，其可以抑制细胞炎症因子TNF-a，IL-liUL_6的表达作用，进而具有抗炎活性，为 抗炎药物的开发提供方向，用于治疗相关炎症性疾病，如宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、乳腺 炎、咽喉炎和/或关节炎等。
[0013] 本发明的目的是提供一种苯丙素类化合物的医药应用。
[0014] 提供一种苯丙素类化合物作为制备治疗炎症性疾病的药物中的应用，所述苯丙素 类化合物的结构式如式（I)所示： (I)0
[0015]优选地，所述苯丙素类化合物在制备抑制细胞炎症因子TNF-a，IL-Ιβ，IL-6表达 的药物中的应用，应用于治疗炎症性疾病的药物中。
[0016] 优选地，所述炎症性疾病为宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或关 节炎。
[0017] 所述药物包含有药学上允许的辅料和/或载体。
[0018] 优选地，所述药物还含有其他药效成分。
[0019] 优选地，所述药物还含有金樱根、单面针、鸡血藤、功劳木、穿心莲、当归、党参中的 一种或几种。
[0020] 优选地，所述药物还含有金樱根、单面针、鸡血藤、功劳木、穿心莲、当归、党参中的 一种或几种的提取物。
[0021] 所述提取物为按专利公告号 CN1078079C、CN1170549C、CN1158087C、CN1330335C、 〇附296071(：、0附321631(：、0附296072(：、0价296073(：的任意一件或几件专利文件中所述的提 取方法制备得到。
[0022] 所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、注 射剂、软膏剂、栓剂或喷雾剂。
[0023] 本发明的目的是从传统的中药处方中，通过从妇科千金片及妇科千金胶囊的处方 中，通过溶剂提取、柱层析分离、制备液相分离、纯化制得一种新化合物，并通过实验证实， 其可以应用于炎症性疾病，如宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或关节炎等 疾病的治疗。
[0024]具体地，发明人通过从妇科千金片、妇科千金胶囊的处方中，选取大叶千斤拔的干 燥根，通过溶剂提取、柱层析分离、制备液相分离、纯化，得到本发明所述苯丙素类化合物， 然后对该化合物进行细胞试验，测定其对细胞炎症因子TNF-α，IL-Ιβ，IL-6的抑制程度，实 验表明，该化合物在浓度(7.50-13.5(^ 8/1^)范围内对1^5刺激引起的1^界264.7细胞炎症因 子TNF-a含量有明显的抑制作用(p < 0.05 )，并且表现出明显的剂量依赖关系;在浓度13.50 yg/mL下对炎症因子IL-Ιβ含量有明显的抑制作用（p<0.05);在浓度（10.50-13.50yg/mL) 范围内对炎症因子IL-6含量均有明显的抑制作用(p<0.05)，表现出明显的剂量依赖关系。 [0025]本发明的有益效果： 本发明从传统中药处方角度出发，从传统中药妇科千金片、妇科千金胶囊中提取、分 离、纯化得到一种苯丙素类化合物，经实验证明，该化合物显示出可以抑制细胞炎症因子 TNF-a，IL-li3，IL_6的表达作用，为炎症性疾病，如宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽 喉炎和/或关节炎等疾病的治疗药物的开发提供了方向。
[0026] 本发明提供的新的苯丙素化合物结构简单、纯度高，且提取分离方法简便、易于合 成，可适应新药的产业化应用。
【附图说明】
[0027] 图1为本发明所述苯丙素类化合物的核磁共振氢谱图。
[0028] 图2为本发明所述苯丙素类化合物的核磁共振碳谱图。
[0029]图3为本发明所述苯丙素类化合物对细胞活性的影响图。
[0030]图4为本发明所述苯丙素类化合物对NO的抑制作用图。
[0031]图5为本发明所述苯丙素类化合物对TNF-a的抑制作用图。
[0032]图6为本发明所述苯丙素类化合物对IL-I邱勺抑制作用图。
[0033]图7为本发明所述苯丙素类化合物对IL-6的抑制作用图。
[0034]图8为本发明所述苯丙素类化合物对OH的抑制作用图。
【具体实施方式】
[0035]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明 做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试 剂、方法和设备。除非特别说明，本实施例所用的原料和设备均为本技术领域常规市购的原 料和设备。
[0036]本发明的化合物是所述式（I)所示的苯丙素类化合物。该化合物可以采用本发明 提供的以大叶千斤拔为原料提取的方法制备得到，也可以根据本发明提供的结构式结合采 用本领域的化学合成等方法制备得到。
[0037] 本发明化合物，可用作如宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔炎、乳腺炎、咽喉炎和/或关节 炎等炎症性疾病的治疗药物。
[0038] 本发明化合物可以与药学上允许的辅料和/或载体一起用作药物组合物，也可以 在加入药学上允许的辅料和/或载体的情况下与金樱根、单面针、鸡血藤、功劳木、穿心莲、 当归、党参中的一种或几种中药材或提取物的组合用作药物组合物，本发明化合物还可以 与其他药学上可接受的药效成分一起用作药物组合物。
[0039] 作为药物组合物，可以是片剂、胶囊剂、散剂、颗粒剂、丸剂、溶液剂、混悬剂、糖浆 剂、注射剂、软膏剂、栓剂、喷雾剂等。
[0040] 进一步地，片剂可以是在添加药学上允许的辅料和/或载体的情况下制成的糖衣 片、薄膜衣片、肠溶性包衣片或双层片、多层片。
[0041 ]本发明的辅料和/或载体可以如下： 制成固体制剂，可以使用添加剂，例如蔗糖、乳糖、纤维素糖、麦芽糖醇、葡萄糖、淀粉 类、琼脂、海藻酸盐类、甲壳素、壳聚糖类、果胶类、阿拉伯树胶类、明胶类、胶原类、酪蛋白、 白蛋白、磷酸钙、山梨糖醇、甘氨酸、甘油、聚乙二醇、碳酸氢钠、滑石等。
[0042]制成半固体制剂，可以使用动植物性油脂(橄榄油、玉米油、蓖麻油等）、矿物性油 月旨(凡士林、白凡士林、固态石蜡等）、蜡类(霍霍巴油、巴西棕榈蜡、蜂蜡等）、部分合成或全 合成的甘油脂肪酸酯（月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸等)等。
[0043]制成液体制剂，可使用添加剂，例如氯化钠、葡萄糖、山梨糖醇、甘油、橄榄油、丙二 醇、乙醇等。尤其制成注射剂的情况下，可以使用无菌水溶液，例如生理盐水、等渗液、油性 液，如麻油、大豆油。另外，还可以根据需要，并用适当的助悬剂，如羧甲基纤维素钠，非离子 表面活性剂、助溶剂，如苯甲酸苄酯、苯甲醇等。
[0044]这些制剂的有效成分的量为制剂的0.01~80重量％，适宜为1~50重量％，给药量根据 患者的症状、体重、年龄等不同而变化。
[0045] 实施例1苯丙素类化合物的制备 本实施例提供式(I)所示苯丙素类化合物的一种制备方法，包括如下步骤： 51. 取大叶千斤拔50kg，以根部为原料，干燥，切成小块。经8倍量60%的乙醇回流提取3 次，每次2小时，将提取液合并，浓缩至无醇味，得浸膏备用； 52. 将步骤Sl中浓缩后的浸膏溶于IOL水中，采用DlOl大孔吸附树脂柱对其进行洗脱， 洗脱剂为水，洗脱3个柱体积，收集洗脱液，命名为MM-I，备用； 53. 将步骤S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱层析进行洗脱，洗脱剂为甲醇-水系统， 其体积比为25:75，洗脱18个柱体积，按每3个柱体积收集一个流分的洗脱液，按顺序收集6 个流分，分别命名为:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16备用； 54. 将步骤S3中的收集到的流分MM-12用制备液相分离，制备液相色谱柱为:YMC，20mm* 250mm，流速:5ml/min，流动相为甲醇-水-乙酸系统，甲醇:水：乙酸的体积比为25:75:0.01， 按出峰顺序收集洗脱液，共收集7个流分，分别命名为MM-121，MM-122,丽-123，MM-124,丽-125，丽-126，丽-127，备用； 55. 将步骤S4中收集到的流分MM-122用制备液相纯化，制备液相色谱柱为:YMC，20mm* 250mm，流速:5ml/min，流动相为甲醇-水-乙酸系统，甲醇:水：乙酸的体积比为15:85:0.01， 收集洗脱液，重结晶后得到所述苯丙素类化合物。
[0046] 实施例2苯丙素类化合物的制备 本实施例提供式(I)所示苯丙素类化合物的一种制备方法，包括如下步骤： Sl.取大叶千斤拔40kg，以根部为原料，干燥，切成小块。经6倍量50%的乙醇回流提取2 次，每次1小时，将提取液合并，浓缩至无醇味，得浸膏备用； 52. 将步骤SI中浓缩后的浸膏溶于5L水中，采用DlOl大孔吸附树脂柱对其进行洗脱，洗 脱剂为乙醇与水的体积比为15:85,洗脱3个柱体积，收集洗脱液，命名为MM-I，备用； 53. 将步骤S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱层析进行洗脱，洗脱剂为甲醇-水系统， 其体积比为20:80，洗脱18个柱体积，按每3个柱体积收集一个流分的洗脱液，按顺序收集6 个流分，分别命名为:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16备用； 54. 将步骤S3中的收集到的流分MM-12用制备液相分离，制备液相色谱柱为:YMC，20mm* 250mm，流速：lOml/min，流动相为甲醇-水-乙酸系统，甲醇：水：乙酸的体积比为35 : 65 : O . 01，按出峰顺序收集洗脱液，共收集7个流分，分别命名为MM-121，丽-122，^-123，MM-124，MM-125，MM-126，MM-127,备用； 55. 将步骤S4中收集到的流分MM-122用制备液相纯化，制备液相色谱柱为:YMC，20mm* 250mm，流速:5ml/min，流动相为甲醇-水-乙酸系统，甲醇:水：乙酸的体积比为15:85:0.0 l， 收集洗脱液，重结晶后得到所述苯丙素类化合物。
[0047]实施例3苯丙素类化合物的制备 本实施例提供式(I)所示苯丙素类化合物的一种制备方法，包括如下步骤： 51. 取大叶千斤拔60kg，以根部为原料，干燥，切成小块。7倍量70%的乙醇回流提取4次， 每次3小时，将提取液合并，浓缩至无醇味，得浸膏备用； 52. 将步骤Sl中浓缩后的浸膏溶于8L水中，采用DlOl大孔吸附树脂柱对其进行洗脱，洗 脱剂为乙醇与水的体积比为10:90，洗脱3个柱体积，收集洗脱液，命名为MM-I，备用； 53. 将步骤S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱层析进行洗脱，洗脱剂为甲醇-水系统， 其体积比为30:70，洗脱18个柱体积，按每3个柱体积收集一个流分的洗脱液，按顺序收集6 个流分，分别命名为:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16备用； 54. 将步骤S3中的收集到的流分MM-12用制备液相分离，制备液相色谱柱为:YMC，20mm* 250mm，流速：lOml/min，流动相为甲醇-水-乙酸系统，甲醇：水：乙酸的体积比为30 : 70 : O . 01，按出峰顺序收集洗脱液，共收集7个流分，分别命名为MM-121，丽-122，^-123，MM-124，MM-125，MM-126，MM-127,备用； 55. 将步骤S4中收集到的流分MM-122用制备液相纯化，制备液相色谱柱为:YMC，20mm* 250mm，流速:5ml/min，流动相为甲醇-水-乙酸系统，甲醇:水：乙酸的体积比为15:85:0.0 l， 收集洗脱液，重结晶后得到所述苯丙素类化合物。
[0048]实施例4苯丙素类化合物的制备 本实施例提供式(I)所示苯丙素类化合物的一种制备方法，包括如下步骤： 51. 取大叶千斤拔50kg，以根部为原料，干燥，切成小块。8倍量60%的乙醇回流提取2次， 每次1.5小时，将提取液合并，浓缩至无醇味，得浸膏备用； 52. 将步骤Sl中浓缩后的浸膏溶于6L水中，采用DlOl大孔吸附树脂柱对其进行洗脱，洗 脱剂为乙醇与水的体积比为5:95,洗脱3个柱体积，收集洗脱液，命名为MM-I，备用； 53. 将步骤S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱层析进行洗脱，洗脱剂为甲醇-水系统， 其体积比为25:75，洗脱18个柱体积，按每3个柱体积收集一个流分的洗脱液，按顺序收集6 个流分，分别命名为:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16备用； 54. 将步骤S3中的收集到的流分MM-12用制备液相分离，制备液相色谱柱为:YMC，20mm* 250mm，流速：lOml/min，流动相为甲醇-水-乙酸系统，甲醇：水：乙酸的体积比为25 : 75 : O . OI，按出峰顺序收集洗脱液，共收集7个流分，分别命名为MM-121，丽-122，^-123，MM-124，MM-125，MM-126，MM-127,备用； S5.将步骤S4中收集到的流分MM-122用制备液相纯化，制备液相色谱柱为:YMC，20mm* 250mm，流速:5ml/min，流动相为甲醇-水-乙酸系统，甲醇:水：乙酸的体积比为15:85:0.01， 收集洗脱液，重结晶后得到所述苯丙素类化合物。
[0049] 实施例5苯丙素类化合物的制备 本实施例提供式(I)所示苯丙素类化合物的一种制备方法，包括如下步骤： 51. 取大叶千斤拔50kg，以根部为原料，干燥，切成小块。8倍量80%的乙醇回流提取2次， 每次1.5小时，将提取液合并，浓缩至无醇味，得浸膏备用； 52. 将步骤Sl中浓缩后的浸膏溶于6L水中，采用DlOl大孔吸附树脂柱对其进行洗脱，洗 脱剂为乙醇与水的体积比为10:90，洗脱3个柱体积，收集洗脱液，命名为MM-I，备用； 53. 将步骤S2中收集到的流分MM-I用反相ODS柱层析进行洗脱，洗脱剂为甲醇-水系统， 其体积比为28:72，洗脱18个柱体积，按每3个柱体积收集一个流分的洗脱液，按顺序收集6 个流分，分别命名为:MM-II，MM-12，MM-13，MM-14，MM-15，MM-16备用； 54. 将步骤S3中的收集到的流分MM-12用制备液相分离，制备液相色谱柱为:YMC，20mm* 250mm，流速：lOml/min，流动相为甲醇-水-乙酸系统，甲醇：水：乙酸的体积比为10 : 90 : O . 01，按出峰顺序收集洗脱液，共收集7个流分，分别命名为MM-121，丽-122，^-123，MM-124，MM-125，MM-126，MM-127,备用； 55. 将步骤S4中收集到的流分MM-122用制备液相纯化，制备液相色谱柱为:YMC，20mm* 250mm，流速:5ml/min，流动相为甲醇-水-乙酸系统，甲醇:水：乙酸的体积比为15:85:0.0 l， 收集洗脱液，重结晶后得到所述苯丙素类化合物。
[0050] 将实施例1至实施例5制备得到的化合物进行质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱 的检测，结果证明所得化合物为:4_葡萄糖基-11-甲基-8,9-苯己烯。其结构式如式（I)所 示： (I)0
[0051 ]其质谱、核磁共振氢谱、核磁共振碳谱的谱图数据如下： HR-ES頂S显示[M+Na]+为m/z 375.1984，结合核磁特征，可得分子式为C19H28O6，不饱和 度为6。
[0052] 1H-NMR (600 MHz, CD3OD): 6.89(d，/= 1.8 Hz，2H)，5.82(d，/= 1.8Hz，2H)， 4.94 (d，/=7.6Hz，lH)，4.86(d，2H)，2.71 (t，/=7.0 Ηζ，2Η)，2·44 (t，/=7.0 Hz， 2H)，2.40(s， 3H), 1.95 (m，lH)，1.17(s，3H)，3.30-4.00 (glc-H)。
[0053] 13C-NMR (150MHz，CD3OD): 141.4 (C-4)，130.2(C-1)，119.6(02)，115.4 (C- 3)，114.4(C-5)，111.3(C-6)，101.3(C-1'），109.3(C-9)，102.5(C-8)，61.5-77.8(C2''-C6' '），45.0(C-7)，28.8(C-10)，18.7(C-11)，17.3(C-12)，14.5(-CH3)。
[0054]实验例6应用试验 本发明所述化合物对LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞氧化应激与炎症的影响。（为了实 验过程中记录方便，以下将本发明式（I)所示的苯丙素类化合物标号为:药物MM-122,即本 发明中所述的药物MM-122即是指本发明式(I)所示苯丙素类化合物。） 1材料与方法 1.1药品及仪器 脂多糖（lipopolysaccharide，LPS)，MTT购自 Sigma公司；小鼠巨细胞Raw 264 · 7购 自湘雅细胞库;PBS; DMEM高糖培养基、胎牛血清、青霉素与链霉素;全自动酶标仪;恒温C02 培养箱。
[0055] 小鼠白介素 l-f3(IL-1-f3)ELISA检测试剂盒，批号：2014/06(96T);小鼠白介素6 (IL-6)ELISA检测试剂盒，批号：2014/06(96T);小鼠肿瘤坏死因子-a(TNF-a)ELISA检测试 剂盒，批号：2014/06(96T);小鼠一氧化氮(NO) ELISA检测试剂盒，批号：2014/10(96T);小 鼠羟基自由基(OH) ELISA检测试剂盒，批号:2014/10(96T)。
[0056] 1.2药物制备 首先用少量DMSO溶解，然后用DMEM稀释至一定的浓度，使终浓度中DMSO含量少于1%〇。 [0057] 1.3细胞培养 小鼠巨噬细胞Raw 264.7培养于含10%热灭活(56°(：，3〇1^11)的胎牛血清汗83)、101]/11^ 青霉素钠、I〇〇yg/mL链霉素的DMEM培养基中，37°C、5%C02恒温培养箱中孵育生长。
[0058] 1.4细胞活力测定 细胞活力通过MTT法来测定。将细胞制成细胞悬液接种于96孔板（I X 104个/孔)孵育 24h，再同步化24h，然后将不同浓度的药物作用于细胞2h，然后再加入LPS(30yg/mL)刺激 24h，吸弃原培养基，每孔加入IOOyL的MTT(0.5mg/mL)继续孵育4h，吸弃培养基，每孔加入 150yL的DMSO，摇床振摇IOmin，在490nm处测定吸光度。
[0059] 1.5 NO含量测定 Raw 264.7细胞接种于96孔板24h，再同步化24h，然后将不同浓度的药物作用于细胞 2h，然后再加入LPS(30yg/mL)刺激24h，最后收集上清液，并于1000 Orpm离心5min，分装上清 并置于-80°C保存备用。通过小鼠 NO试剂盒测定NO含量。
[0060] 1.6 炎症因子TNF-a, IL-Ιβ, IL-6测量 样品取1.5制备好的样品用于后续炎症因子测定。细胞产生TNF-a，IL-Ιβ，IL-6的量 通过小鼠 TNF-a，IL-Ιβ，IL-6试剂盒来测定。
[0061] 1.7 OH含量测定 样品取1.5制备好的样品用于OH因子测定。通过OH试剂盒测定含量。
[0062] 1.8统计分析 采用SPSS17.0软件，实验数据以x±s表示;所得数据通过用单因素方差分析，方差齐性 用LSD检验，方差不齐用Dunnett T3检验。
[0063] 2实验结果 2.1细胞活力 药物对细胞活力的影响通过MTT法来评价。如图3所示，药物MM-122在1.50-13.50yg/mL 浓度范围内对Raw 264.7细胞活力没有显著影响；因此在此范围浓度下的药物浓度对于后 续实验是合适的。
[0064] 2.2药物抑制NO的产生 如图4所示，通过LPS刺激Raw 264.7细胞，其产生NO (65.81±2.93 IU/mL)含量与正常 组N0(33.61±2.19IU/mL)相比明显升高(p<0.01)。药物MM-122在该浓度下对LPS引起的炎 症模型中，对NO含量升高没有明显的抑制作用。
[0065] 2.3 药物抑制TNF-a, IL-Ιβ, IL-6的产生 如图5至图7所示，通过LPS刺激Raw 264.7细胞，Raw 264.7细胞炎症因子TNF-a (132.16±5.28pg/mL)，IL-10 (358·80±24·64 pg/mL)，IL-6 (198·39±5·97 pg/mL)含 量与正常组TNF-a(65.41±6.29 pg/mL), IL-10(172.67±lO.O6pg/mL), IL-6(103.34土 2.88pg/mL)相比含量明显升高(p<0.01);说明LPS能够刺激Raw 264.7细胞产生大量炎症 因子。
[0066] 药物MM-122在浓度(7.50-13.50yg/mL)范围内对LPS刺激引起的Raw 264.7细胞炎 症因子TNF-α含量有明显的抑制作用(p<0.05)，并且表现出明显的剂量依赖关系；在浓度 13.50yg/mL下对炎症因子IL-Ιβ含量有明显的抑制作用(p<0.05);在浓度（10.50-13.50μ g/mL)范围内对炎症因子IL-6含量有明显的抑制作用(ρ<0.05)，表现出明显的剂量依赖关 系。
[0067] 2.4药物抑制OH的产生 如图8所示，通过LPS刺激Raw 264.7细胞，其产生0H( 113.58±6.03 ng/mL)含量与正常 组0Η(63·40±1 · 19ng/mL)相比明显升高（ρ<0·01)。
[0068] 药物ΜΜ-122在各浓度下对LPS引起的OH含量升高没有明显的抑制作用。
[0069] 本实验经体外培养，研究了药物ΜΜ-122对小鼠巨噬细胞NO, TNF-a，IL-Ιβ，IL-6, OH生成的影响。
[0070] 药物丽-122对因子NO的产生无明显抑制作用，但在中高浓度下显著抑制TNF-a， IL-Ιβ，IL-6含量，说明其主要影响的是TNF-a，IL-Ιβ，IL-6的途径，从而发挥抗炎效果， 其对OH无抑制效果明显，说明其基本无抗氧化活性。
[0071] 实施例7 片剂的制备:按实施例1方法先制得式（I)所示的苯丙素类化合物，按其与赋形剂重量 比为1:10的比例加入赋形剂，制粒压片。
[0072] 实施例8 散剂的制备:按实施例1方法先制得式（I)所示的苯丙素类化合物，按常规散剂制法制 成散剂。
[0073] 实施例9 胶囊剂或颗粒剂的制备:按实施例1方法先制得式（I)所示的苯丙素类化合物，按其与 赋形剂重量比为1:10的比例加入赋形剂，制成胶囊剂或颗粒剂。
[0074] 实施例10 注射剂的制备:按实施例1方法先制得式(I)所示的苯丙素类化合物，按常规注射用水， 精滤，灌封灭菌制成注射剂。
[0075] 实施例12 一种药物组合物，含有实施例1方法制得式(I)所示的苯丙素类化合物，以及金樱根、单 面针、鸡血藤、功劳木、穿心莲、当归、党参制成的粉末，和辅料。
[0076] 实施例13 一种药物组合物，含有实施例1方法制得式(I)所示的苯丙素类化合物，以及金樱根、单 面针、鸡血藤、功劳木、穿心莲、当归、党参的提取物，和辅料。提取物是按专利公告号 CN1078079C、CN1170549C、CN1158087C、CN1330335C、CN1296071C、CN1321631C、CN1296072C、 CN1296073C的任意一件或几件专利文件中提取方法制备得到。
[0077]以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优势。本领域的技术 人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本 发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这对本 领域技术人员而言是显而易见的，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发 明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
【主权项】
1. 一种苯丙素类化合物在制备治疗炎症性疾病的药物中的应用，所述苯丙素类化合物 的结构式如式(I)所示：(I)。2. 根据权利要求1所述应用，其特征在于，是在制备抑制细胞炎症因子TNF-a，^-ie, IL-6表达的药物中的应用。3. 根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述炎症性疾病为宫颈炎、子宫内膜炎、盆腔 炎、乳腺炎、咽喉炎和/或关节炎。4. 根据权利要求1至3任一项所述的应用，其特征在于，所述药物含有药学上允许的辅 料和/或载体。5. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物还含有金樓根、单面针、鸡血藤、 功劳木、穿屯、莲、当归、党参中的一种或几种。6. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物还含有金樓根、单面针、鸡血藤、 功劳木、穿屯、莲、当归、党参中的一种或几种的提取物。7. 根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型为片剂、胶囊剂、散剂、颗 粒剂、丸剂、溶液剂、混悬剂、糖浆剂、注射剂、软膏剂、栓剂或喷雾剂。
【文档编号】A61P15/00GK106074579SQ201610153537
【公开日】2016年11月9日
【申请日】2016年3月17日 公开号201610153537.0, CN 106074579 A, CN 106074579A, CN 201610153537, CN-A-106074579, CN106074579 A, CN106074579A, CN201610153537, CN201610153537.0
【发明人】龚云, 刘逆夫, 夏博候, 彭开锋, 李亚梅, 佘娜, 白璐
【申请人】株洲千金药业股份有限公司