专利名称：雷醇内酯的制备方法及抗生育用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及雷醇内酯的制备方法及抗生育用途。
从中药雷公藤(Tripterygium Wilfordii Hook.f.)的根部提取出的化合物雷醇内酯，其化学结构已在《植物学报》1985年第27卷第5期上发表，结构式如下
但其制备方法麻烦且得率低，药理作用未有过报道。现有的雄性抗生育药物棉酚，有一定的毒副作用在抗生育剂量下，全部服用者均可引起血钾降低，其中1-10%服药者在半年内可发生低血钾症及瘫痪;1/4服药者生育力改变为不可逆;可引起30%服药者不同程度肾小管损害，病理亦有同样表现，在国际上基本否定其作为雄性抗生育药物的应用。因此，研制新的雄性抗生育化合物已成为当务之急。雷公藤多甙(含雷醇内酯)用类风湿性关节炎治疗量的1/4-1/3，临床尚未发现明显副作用，动物实验在光镜、电镜下均未见病理改变;回顾性研究约200例，停药后生育力都能恢复。
本发明的目的是提供出雷醇内酯的制备方法及它在雄性抗生育方面的应用。
其制备方法如下将雷公藤根皮或其他部位用有机溶剂提取，提取物在两相溶剂中分配，溶出物用柱层析分离，再以有机溶剂洗脱，收集含内酯的部分，再次层析分离，然后进行重结晶，即可得雷醇内酯纯品。以上有机溶剂可以是氯仿，甲醇-氯仿，丙酮-氯仿，乙酸乙酯-氯仿，乙醇-氯仿，环己烷-氯仿，丙酮-苯，环己烷-丙酮等。
该化合物的药理作用如下1、初筛昆明种健康雄性小鼠，27.6±0.5克，每组10只，每日灌胃给药0.6、0.3、0.15mg/kg一次，连续32天，第26天与正常成年雌性小鼠1∶1合笼，第33天解剖雄鼠取一侧输精管全长，用0.5ml生理盐水冲洗精子于试管内，在白细胞计数板上观察精子活力及作精子相对计数。分笼后8天解剖雌鼠，观察胚胎数(活胎及吸收胎)。结果表明三个给药组均使睾丸减重、精子计数减少及活力降低，呈量效关系，并皆导致不育。(见表1)表1 药物对小鼠生殖参数的影响(X±SE)组别 睾丸重量 精子活力(%) 精子总数 胚胎数(mg/kg)(mg/100g) 活动 死亡 万/条输精管 活胎 死胎0.6 148.8 18.2 81.8 3.1 0 0±6.8 ±5.6 ±5.3 ±1.90.3 190.4 15.0 85.0 10.22 0 0±14.9 ±6.5 ±6.1 ±6.80.15 243.3 19.0 81.0 25.7 0 0±50 ±7.0 ±6.6 ±9.4对照 660.1 80.9 19.1 439.9 8.7 0.39±33.8 ±2.0 ±2.0 ±86.4 ±2.3 ±0.33
2、复筛雄性成熟SD大鼠，每日经口灌服雷醇内酯0.1mg/kg，每周6次，6-7周后交配试验表明，所有大鼠均不育，附睾尾精子密度和活力明显下降(表2)。此剂量对体重、性行为、血清睾酮、各种副性腺重量均无明显影响。个别鼠睾丸曲细精管近基膜处偶见卵圆形空缺;1鼠少数曲细精管细胞疏松、排列紊乱，有些精子细胞表现退行性改变，偶见仅剩一层支持细胞与精源细胞的曲细精管。附睾上皮正常，管腔见脱落精子细胞。心、肝、脾、肺、肾等身体脏器均与对照无异，共进行两批实验，每批20鼠(给药及对照各半)，结果基本一致。还表明，该化合物明显降低大鼠附睾头及尾的肉毒碱含量，提示作用于附睾。
表2 雷醇内酯对大鼠生育的影响(X±SD)附睾尾精子 交配雌鼠组别(n)密度10%ml，活度% 怀孕率 活胎仔/鼠 死胎仔/鼠对照(10) 97±5 86±3 10/10 12.8±1.5 0给药(10) 10±1＊ 3.6±6 0/10＊ 0＊ 0＊ P＜0.001，与对照组相比本化合物作为人类抗生育药物使用时，可口服或注射给药。
本发明所提供的化合物具有明确的雄性抗生育作用，同时在抗生育剂量下没有明显的细胞毒性，没有其他副作用，有较好的药用前景。本发明提供的制备方法，得率较文献方法高，易于实施。
以下为制备实施例。
将雷公藤根皮用乙醇提取，提取物在氯仿-水中分配，氯仿溶出物用硅胶柱层析，乙醇-氯仿洗脱，收集相同的内酯部分，再用硅胶两次层析，在氯仿中重结晶得纯品。
以上柱层析亦可用中性氧化铝;提取、分配及洗脱的溶剂亦可用其他有机溶剂，如乙酸乙酯-石油醚，甲醇-氯仿，丙酮-氯仿，环己烷-丙酮或丙酮-苯。
权利要求
1.雷醇内酯的制备方法，其特征是将雷公藤根皮或其他部位用有机溶剂提取，提取物在两相溶剂中分配，溶出物用柱层析分离，再以有机溶剂洗脱，收集含内酯的部分，再次层析分离，然后进行重结晶，其有机溶剂为氯仿，乙醇-氯仿，甲醇-氯仿，丙酮-氯仿，乙酸乙酯-石油醚，环己烷-氯仿或环己烷-丙酮，丙酮-苯。
2.由权利要求1规定的雷醇内酯制备方法，其特征是具体工艺如下将雷公藤根皮用乙醇提取，提取物在氯仿-水中分配，氯仿溶出物用硅胶柱层析，乙醇-氯仿洗脱，收集相同内酯部分，用硅胶两次层析，氯仿中重结晶得纯品。
3.雷醇内酯的用途，其特征是将该化合物作为雄性抗生育药物。
全文摘要
本发明提供化合物雷醇内酯的制备方法和抗生育用途。其方法为将雷公藤根皮用有机溶剂提取，在两相溶剂中分配，溶出物层析分离，再以有机溶剂洗脱。再次层析分离、结晶即得纯品。该化合物用于雄性抗生育时，无明显细胞毒性，亦无现有雄性抗生育药物棉酚的致低血钾等副作用，本化合物的抗生育作用是明确可逆的，是有前景的药物。
文档编号A61K31/335GK1052861SQ8910543
公开日1991年7月10日 申请日期1989年12月22日 优先权日1989年12月22日
发明者钱绍祯, 郑家润, 吕燮余, 许烨, 陈沄, 马鹏程, 张崇璞, 顾克显 申请人:中国医学科学院皮肤病研究所