一种上焦水饮内停大鼠模型及其构建方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种上焦水饮内停大鼠模型及其构建方法，属于医疗评价、检测技术 领域。
【背景技术】
[0002] 中医认为肺居于上焦，故称"华盖"又称之为"水之上源"。肺的主要生理功能是主 气、司呼吸、主宣发肃降，通调水道。津液的运行敷布与肺的宣降运动有关。"脾气散精，上归 于肺，"肺通过宣发作用将津液敷布到头面诸窍，皮毛腠理。而藉着其肃降作用将津液输送 至其他脏腑，下注膀胱，如此则水精四布，五经并行，脏腑及全身皆得营养。肺为水之上源， 肺气宣降失职，水精不得四布，则留饮与肺中为痰为饮。痰饮蕴肺又能引起肺气郁而不宣或 逆而不降，即所谓"痰因气成，气因痰成"。
[0003] 上焦水饮内停是临床常见证型，许多慢性疾病均伴有上焦水饮内停证。其主要是 由于气道梗阻，外感风寒，淤血阻肺等原因导致肺失宣降，通调失职，聚水为痰饮。《医贯?内 经十二官?形景图记》："喉下为肺，两叶白莹，谓之华盖，以覆诸脏，虚如蜂巢，下元透窍，故 吸之则满，呼之则虚，一呼一吸，本之有源，无有穷也，乃清浊之交运，人身之橐龠"。肺为呼 吸之橐龠，是清气吸入，浊气排出的产所，这一清浊交运是肺宣发肃降的具体表现。气道梗 阻，则有碍于肺宣发肃降的协调共济，导致水湿停聚。《景岳全书》云："风寒之痰以邪自皮 毛，侵袭与肺，肺气不清乃至生痰"。可见风寒外袭，内舍于肺，影响肺之气化，肺津不布，可 凝为痰饮。关幼波老师亦提出"痰与血同属阴，易于胶结凝固，气血流畅则津液并行，无痰以 生，气滞血瘀痰结"是言血行淤阻而生痰。《金匮》心水者，其身少气，不得卧，烦而躁，其人 阴肿。这些描述与心衰临床症状相似。可见心主行血，血行不利，淤血一旦形成，也可影响 肺失宣降，使水湿停聚生痰饮。
[0004] 为进一步深入探讨上焦水饮内停本质及探寻其有效治疗中药，很有必要进行上焦 水饮内停大鼠模型复制的研宄。模型复制时需考虑动物的生物学特性，尽量选择与人生理、 代谢、疾病特点相似，符合试验目的的动物。由于动物症状、体征采集的复杂性，故理性的动 物模型不仅要求在症状体征上与人相近或相同，更需要用量化的客观指标来准确评价。
[0005] 目前，还未见有上焦水饮内停大鼠模型。仅见痰浊蕴肺，寒饮蕴肺，等大鼠模型的 报道，多采用熏烟、气管滴注脂多糖、外加寒冷刺激的方法造模。但病因、表现等符合中医理 论的指导的造模并不多见，中医证候的研宄亟需符合中医症状特点的动物模型。
【发明内容】
[0006] 针对上述现有技术，本发明的目的是提供一种上焦水饮内停大鼠模型及其构建方 法，以肺失宣降水饮内停病机理论为指导，采用大鼠气管插管，结合腹部皮下注射异丙肾上 腺素，外加寒冷刺激模拟肺失宣降，并设计专门时序，用大鼠诱导40天，建立一种上焦水饮 内停大鼠模型。并主要从水湿这一方面进行评价，结果表明该方法可成功复制上焦水饮内 停动物模型，而且该复制方法稳定性、重复性好，简单、客观，符合中医理论的指导。
[0007] 为实现上述目的，本发明采用下述技术方案：
[0008] -种上焦水饮内停大鼠模型的构建方法，包括以下步骤：
[0009] (1)将无特定病原体（SPF)级维斯塔尔（Wistar)大鼠置于独立送回风净化笼 (IVC)中，饲以普通饲料，自由进食、饮水；
[0010] (2)对Wistar大鼠给予异丙肾上腺素腹部皮下注射，第一天20mg/kg、第二天 10mg/kg、第三天5mg/kg、从第四天开始3mg/kg. d，连续20天，观察两周；
[0011] (3)行气管内置管：第34天，使用气管插管装置（包括气管插管外套管、内管，内 置管套于内管顶端）进行气管内置管的置入。大鼠仰卧固定，气道在食道上方，开口器上 挑，可见气道口，声门呈鱼嘴状开合，将插管弧度朝上，把握好大鼠呼吸节奏，趁声门打开瞬 间迅速将准备好的插管装置插入大鼠气管至标记部位，声门下lcm，先将内管抽出，顶端的 气管内置管受外套管阻挡后断开与装置连接，抽出外套管，内置管便被置入动物气管中，保 留7天；
[0012] (4)将行气管内置管后的Wistar大鼠每日置于温度为0°C的冰柜中4小时，接受 寒冷刺激，连续7天。得到上焦水饮内停大鼠模型。
[0013] 造模过程中，观察大鼠一般状况。模型建立结束后，以心肺组织病理学作为评价组 织损伤程度的客观指标，结合其他心肺损伤指标（肺通透指数、肺泡灌洗液回收量、肺湿干 重比W/D、心肺脏器指数、肌酸激酶CK表达）来综合评价上焦水饮内停大鼠模型建立的成功 与否。
[0014] 本发明主要从水湿这一方面对上焦水饮内停大鼠模型进行评价，具体评价指标如 下：
[0015] ①一般状况观察：模型组大鼠出现皮毛干枯晦暗，呼吸急促，伴有喘鸣音，唇舌黏 膜紫暗，鼻部有少量血性分泌物，活动量差等症状；
[0016] ②肺通透指数、肺泡灌洗液回收量：统计学结果表明模型组大鼠肺通透指数明显 升高（P〈0.05)肺泡灌洗液回收量明显升高（P〈0.05);
[0017] ③大鼠脏器指数：统计学结果表明上焦水饮内停模型组大鼠心脏重量及心脏器指 数显著升高（P〈0.01)，肺湿干重比有明显升高（P〈0.05)，肺脏重量、肺脏器指数有上升趋 势；
[0018] ④肌酸激酶CK:统计学结果表明上焦水饮内停模型组大鼠血清中肌酸激酶CK明 显升高（P〈〇. 05);
[0019] ⑤肺组织病理学观察上焦水饮内停模型组大鼠肺组织肺泡间隔水肿增厚，炎性细 胞浸润，肺泡腔内充满粉红色水肿液，呈均质状，有肺水肿存在；
[0020] ⑥心组织病理学观察上焦水饮内停模型组大鼠心肌细胞肥大，部分心肌细胞有嗜 酸性变性和（或）坏死。
[0021] 本发明的有益效果：
[0022] (1)本发明解决了目前没有上焦水饮内停大鼠模型的不足，为规范、标准、科学的 评价中医药提供了一种新方法，具有造模方法简单、易于操作和推广，贴近临床等优点。
[0023] (2)本发明的建模方法稳定性、重复性好，简单、客观，符合中医理论的指导。
[0024] (3)本发明以Wistar大鼠作为建模的试验动物，是动物实验大鼠类最为常用及生 物医学研宄中使用历史最长的品种，广泛应用于生物医学各领域的实验，其症状体征上与 人相近，建模更为理性、客观。
【附图说明】
[0025] 图1大鼠肺组织病理学光学显微镜图；
[0026] 图中，1为空白组大鼠肺组织苏木精一伊红染色X40,2为模型组大鼠肺苏木精一 伊红染色组织X40,3为空白组大鼠肺组织苏木精一伊红染色X100,4为模型组大鼠肺组 织苏木精一伊红染色法X100;
[0027] 图2大鼠心组织病理学光学显微镜图；
[0028] 图中，1为空白组大鼠心组织苏木精一伊红染色X200,2为模型组大鼠心组织苏 木精一伊红染色X 200, 3为空白组大鼠心组织苏木精一伊红染色X 400,4为模型组大鼠心 组织苏木精一伊红染色X 400。
【具体实施方式】
[0029] 结合实施例对本发明作进一步的说明，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本 发明，并不对其内容进行限定。
[0030] 实施例1 :上焦水饮内停大鼠模