[0051] (9)夹心酶联免疫吸附测定（Danielpour 等人，Growth Factors2:61-71 (1989)); 和
[0052] (IO)Singh 等人，Bioorg. Med. Chem. Lett. 13(24) :4355-4359(2003)中描述的细 胞测定法。
[0053] 可以用于评估体内TGF-β活性的方法的例子包括评估SMAD2磷酸化和/或核定 位。
[0054] 可以使用的TGF-β拮抗物的例子包括但不限于：针对一种或多种TGF-β同 种型的单克隆和多克隆抗体（美国专利号5, 571，714 ;W0 97/13844 ;W0 00/66631 ; TO 05/097832 ;W0 05/101149 ;W0 06/086469);显性失活的可溶性 TGF-β 受体或直接 针对 TGF-β 受体的抗体（Flavell 等人，Nat. Rev. Immunol. 2:46-53(2002);美国专利 号5,693,607 ;美国专利号6,001,969 ;美国专利号6,008,011 ;美国专利号6,010,872 ; WO 92/00330 ;W0 93/09228;W0 95/10610;和 WO 98/48024 ;LAP(W0 91/08291);结合 LAP的TGF-f3(W0 94/09812);结合TGF-β的糖蛋白/蛋白聚糖如胎球蛋白（美国专利 号5, 821，227);饰胶蛋白聚糖、β聚糖、纤调蛋白、腔蛋白聚糖和内皮糖蛋白（美国专利 号5, 583, 103 ;美国专利号5, 654, 270 ;美国专利号5, 705, 609 ;美国专利号5, 726, 149 ; 美国专利号5, 824, 655 ;美国专利号5, 830, 847 ;美国专利号6, 015, 693 ;W0 91/04748 ; WO 91/10727 ;W0 93/09800;和 WO 94/10187);甘露糖-6-磷酸或甘露糖-1-磷酸（美 国专利号5, 520, 926);促乳素（W0 97/40848);胰岛素样生长因子II (W0 98/17304); 植物、真菌和细菌的提取物（EU 813875 JP 8119984;和美国专利号5, 693,610);反义 寡核苷酸（美国专利号5, 683, 988 ;美国专利号5, 772, 995 ;美国专利号5, 821，234 ;美 国专利号5, 869, 462;和WO 94/25588);以及保留了抑制TGF-β的生物活性能力的上 述分子的任何突变体、片段或衍生物。许多可用的小分子TGF-β拮抗物也为本领域技 术人员所熟知，包括但不限于 WO 02/62753 ;W0 02/62776 ;W0 02/62787 ;W0 02/62793; WO 02/62794 ；W0 02/66462 ；W0 02/94833 ；W0 03/87304 ；W0 03/97615 ；W0 03/97639 ；W0 04/10929 ;W0 04/21989 ;W0 04/22054 ;W0 04/24159 ;W0 04/26302 ;W0 04/26871 ;美国专 利号 6, 184, 226 ;W0 04/16606 ;W0 04/47818 ;W0 04/48381 ;W0 04/48382 ;W0 04/48930 ; WO 04/50659 ；W0 04/56352 ；W0 04/72033 ；W0 04/87056 ；W0 05/10049 ；W0 05/032481 ；W0 05/065691 ;TO 05/92894 ;TO 06/026305 ;TO 06/026306;和 TO 06/052568 中所描述的那 止匕 -、ο
[0055] 在一些实施方案中，TGF-β拮抗物为TGF-β的直接拮抗物，例如阻断TGF-β与 其受体结合的抗体。
[0056] 本文所使用的术语"抗体"指免疫球蛋白或其部分，包括任何包含抗原结合部位的 多肽，而无论其来源、制备方法和其他特征。该术语包括但不限于多克隆、单克隆、单一特异 性、多特异性、人源化、人、单链、嵌合、合成、重组、杂合、突变和CDR移植抗体。术语"抗原结 合结构域"指抗体分子的部分，其包含与部分或整个抗原特异性结合或互补的区域。当抗原 很大时，抗体可能仅与抗原的特定部分结合。"表位"或"抗原决定簇"为抗原分子的部分， 其负责与抗体的抗原结合结构域特异性相互作用。抗原结合结构域可以包含抗体轻链可变 区（')和抗体重链可变区（V h)。抗原结合结构域可以由一种或多种抗体可变结构域提供 (例如Fd抗体片段由Vh结构域组成，Fv抗体片段由V為构域和V j吉构域组成，或scFv抗 体片段由接头连接的％结构域和Vj吉构域组成）。术语"抗TGF-β抗体"或"针对至少一 种TGF-β同种型的抗体"指特异性结合至少一种TGF-β表位的任何抗体。术语"TGF-β 受体的抗体"和"针对TGF-β受体的抗体"指特异性结合TGF-β受体（例如I型、II型、 或III型）的至少一种表位的任何抗体。
[0057] 用于本发明方法的抗体与至少一种TGF-β同种型或至少一种TGF-β受体的胞外 结构域特异性结合。本文所使用的术语"特异性相互作用"或"特异性结合"或其同类词指 两种分子在生理条件下形成相对稳定的复合物。特异性结合的特征在于高亲和力和低到中 等的容量（capacity)。非特异性结合通常具有低亲和力和中等到高的容量。通常，当亲和 常数K a高于10 6M^或优选高于IO8M-1时视为特异性结合。
[0058] 在其他一些实施方案中，抗TGF-β抗体特异性结合选自TGF-β 1、TGF-I3 2和 TGF-0 3的至少一种TGF-β同种型。在另一些实施方案中，抗TGF-β抗体至少特异性结 合：（a) TGF- β UTGF- β 2 和 TGF- β 3 ("泛中和抗体"）；（b) TGF- β 1 和 TGF- β 2 ; (c) TGF- β 1 和TGF-β 3 ;或（d)TGF-f3 2和TGF-β 3。在不同实施方案中，TGF-β抗体对于其特异性结 合的至少一种TGF- β同种型的亲和常数心优选高于10 6M4，IOl1，IO8M4，IO 9M4，IOiqM4， IO11M4或10 12M'预期用于人的还有中和一种或多种哺乳动物TGF-β同种型的非人抗体 的人源化抗体和全人形式抗体及（抗体）衍生物。制备此类抗体的方法为本领域技术人 员所熟知（见例如 Antibody Engineering，Borrebaeck 编，第二版，Oxford University PreSS(1995))。在非限制性的示例性实施方案中，抗TGF-β抗体为由杂交瘤1D11. 16(保 藏于美国典型培养物保藏中心（ATCC)，其位于10801University Boulevard，Manassas， Virginia，20110,美国，ATCC 保藏号 HB 9849,在美国专利号第 5, 571，714 号；第 5, 772, 998 号；和第5, 783, 185号中有所描述）产生的鼠单克隆抗体1D11。IDll重链可变区序列可 用登录号AAB46787得到。因此，在相关的实施方案中，抗TGF-β抗体为IDll的衍生物，例 如包含与AAB46787中的重链⑶R相同的⑶R序列的抗体，如人源化抗体。在其他实施方案 中，抗TGF-β抗体为人抗体，通过IDll定向选择从噬菌体呈现文库中分离得到。
[0059] 在非限制性实施方案中，抗TGF-β抗体为人泛特异性抗体，如PCT申请WO 06/086469 中公开的 PET1073G12、PET1074B9 或 PET1287A10。
[0060] 施用方法
[0061] 利用本文提供的教导和本领域中关于不同TGF-β拮抗物的特征，包括其效价和 亲和力的丰富信息，熟练的临床医生可以容易地确定对于任何给定的TGF-β拮抗物应使 用的准确剂量和使用方案。例如，当TGF-β拮抗物为抗体时，可以用选定的提供与IDll抗 体相同的中和效价的剂量，以〇. 1到l〇mg/kg患者体重的剂量施用。相似地，抗TGF-β受 体抗体、可溶性TGF-β受体或另一 TGF-β拮抗物的治疗有效量可以在提供相当中和效价 的范围内选择。一般而言，可以对母亲施用较高的剂量以在胎儿得到有效剂量的TGF-β拮 抗物；直接对胎儿或婴儿肺递送时，可以施用较低剂量的TGF-β拮抗物。
[0062] "施用"不限于任何特定的制剂、递送系统或路径，可以包括例如肠胃外（包括皮 下、静脉内、髓内、关节内、肌内或腹膜内注射）直肠、局部、经皮或口服（例如胶囊、混悬剂 或片剂）。对个体施用可以为单剂量、快速浓注剂量（bolus dose)或重复施用，以及以众多 药物组合物中的任何一种施用，所述药物组合物含有生理学上可接受的盐形式，和/或可 药用载体和/或添加剂作为药物组合物的部分。生理学上可接受的盐形式和标准的药物配 制技术及赋形剂是已知的（见例如Physicians' Desk Reference? 2003, 57版，Medical Economics Company,2002 ；和 Remington :The Science and Practice of Pharmacy, Gennado 等人编，20 版，Lippincott，Williams&Wilkins，2000)。
[0063] 在一个实施方案中，含TGF-β拮抗物的组合物可以通过肺途径施用，包括以粉状 或液体气溶胶形式的吸入剂施用。气溶胶化（aerosolized)制剂可以是直径小于10 μπι的 小滴或粉状颗粒。例如，拮抗物可以溶于微粒化的疏水/亲水乳剂。这样的吸入剂可以通 过喷雾器、吸入器、气管内路径、口内或鼻内路径施用。用于对呼吸道递送治疗物质的气溶 胶，包括空气动力学上的轻颗粒，在例如美国专利申请公开号2005/0244341中有所描述。
[0064] 对婴儿施用拮抗物可以通过基因治疗的方法完成，其中对患者体内施用编码拮抗 物的核酸序列、或对体外细胞施用而后将所述体外细胞引入患者，再以适当的核酸载体序 列表达拮抗物（例如反义RNA、snRNA、可溶性TGF-β受体）。基因治疗递送TGF-β拮抗 物的方法在（见例如 Fakhrai 等人，Proc. Nat. Acad. Sci.美国，93:2909-2914(1996))和 U. S. 5, 824, 655中有所描述。TGF-β拮抗物的施用是通过用包含编码拮抗物的cDNA的载 体进行基因转移实现的，例如编码TGF-β II型（rsTGFBIIR)或III型受体（rsTGFBIIIR) 胞外结构域的cDNA在例如美国专利申请公开号2003/0180301中有所描述。
[0065] TGF-β拮抗物可以与当前用于或将用于治疗具有罹患BH)风险或已诊断患有BPD 的早产儿的任何其他物质或治疗组合施用于婴儿。在出生后的第一个月中缺乏维生素 A会 显著增加罹患BPD的风险。研宄还发现地塞米松可以增加维生素 A的血浆水平；这可以帮 助婴儿摆脱氧治疗，从而预防BPD。
[0066] 通常使用支气管扩张药通过放松气道周围的肌肉打开肺的气道。在病情更严重的 婴儿中，只用支气管扩张药有时难以控制哮鸣和呼吸窘迫，则使用抗炎药减轻气道肿胀。因 此，可以与本发明的方法组合的BH)治疗包括表面活性剂、氧治疗、呼吸机治疗、类固醇、维 生素 Α、一氧化氮吸入、高卡路里营养制剂、静脉内饲、抗生素、液体限制和利尿药减少肺中 的水囤积、及提高肌肉性能以帮助肺排出粘液的物理疗法。
[0067] 下列实施例提供例示性实施方案。本领域技术人员会认识到，可以进行许多修改 和变更而不改变本发明的精神或范围。这样的修改和变更涵盖在本发明的范围之中。实施 例不以任何方式限制本发明。
【附图说明】
[0068] 图1A-1D为显微照片，显示TGF-β同种型在小鼠幼崽发育中的肺中的表达。在10 日龄小鼠幼崽肺的支气管上皮中（图IA ;箭头）、末端和呼吸性细支气管中（图IB ;分别为 T