一种预防猪流行性腹泻疾病的疫苗的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种预防猪流行性腹泻疾病的疫苗。
【背景技术】
[0002] 猪流行性腹泻病毒为猪流行性腹泻疾病（Porcine epidemic diarrhea，PED)的病 原，该病以产房1-7日龄仔猪淡黄色水样腹泻、严重脱水为主，剖检可见仔猪肠道内胀气、 有黄色乳凝块。PEDV主要通过粪-口途径传播，产房仔猪通过消化道摄入病毒后，病毒主要 入侵空肠和回肠部位小肠黏膜上皮细胞，并开始病毒复制。PEDV的感染导致上皮细胞膜表 面的双糖酶（乳糖酶、蔗糖酶、麦芽糖酶）、氨肽酶、碱性磷酸酶的活性下降；同时，肠绒毛上 皮细胞正常结构破坏并发生细胞破碎，造成肠绒毛萎缩，肠道表面积减少，从而导致小肠消 化不良、吸收不良等机能障碍，诱发仔猪发生腹泻并脱水。
[0003] PEDV最早在英国发现，并流行于欧洲从上世纪八十年代以后，中国、日本、韩国也 开始有所报导。2010年至今，该病已广泛流行于中国、韩国、泰国、美国等国。该病对产房仔 猪极高的发病率和致死率、较高的治疗成本及防控成本，以及病毒基因发生变异造成强毒 株的出现，对世界养猪业造成了巨大的损失。
[0004] 随着PEDV分子生物学研宄的深入，PEDV免疫机理基本清楚，属于典型的局部黏膜 免疫为主，存在于血清中PEDV IgG不能提供有效保护，而肠道黏膜免疫所产生的分泌型抗 体（SIgA)才能抵抗PEDV感染，仔猪通过初乳来获得母源SIgA，从而产生对流行性腹泻的被 动免疫保护。
[0005] 目前大多都是传统型灭活苗和弱毒苗，但是它存在毒力返强及散毒的风险，需要 改进。为了研制出更为安全、高效、成本低廉、保存和使用方法简易的猪流行性腹泻疫苗，人 们开始利用基因工程手段开发黏膜免疫疫苗，以期达到进一步预防和控制该病的目的。如， 徐丽丽等构建了可表达PEDV S蛋白COE区域、SD区域的减毒沙门氏菌重组疫苗，其包含的 抗原基因长，菌株稳定性越差，同时其包含crp毒力基因，安全性难以保证。
【发明内容】
[0006] 为了解决上述问题，本发明提供了一种新的疫苗。
[0007] 本发明提供了包含SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的重组沙门氏菌在制备预防猪流 行性腹泻疾病的药物中的用途。
[0008] PEDV S499.的核苷酸序列（SEQ ID NO :1):
[0009]
[0010]
【主权项】
1. 包含SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的重组沙门氏菌在制备预防猪流行性腹泻疾病 的药物中的用途。
2. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述重组沙门氏菌包含携带有SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列的重组pVAXl质粒。
3. 根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物包含致免疫有效量的重组沙门 氏菌。
4. 一种疫苗，其特征在于：它是由包含SEQ ID NO :1所示核苷酸序列的重组沙门氏菌 和药学上可接受的辅料或者载体制备而成。
5. 根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于：所述重组沙门氏菌包含携带有SEQ ID NO :1所示的核苷酸序列的重组pVAXl质粒。
6. 根据权利要求4所述的疫苗，其特征在于：所述的辅料或者载体为免疫佐剂和/或 防腐剂。
7. 根据权利要求6所述的疫苗，其特征在于：所述佐剂为霍乱毒素、大肠杆菌不耐热肠 毒素或大肠杆菌不耐热肠毒素 B单位。
8. 根据权利要求6所述的疫苗，其特征在于：所述防腐剂为硫柳汞。
9. 权利要求4-8任意一项所述的疫苗在制备预防猪流行性腹泻疾病的药物中的用途。
10. 根据权利要求9所述的用途，其特征在于：所述的防猪流行性腹泻疾病的药物是口 服制剂。
【专利摘要】本发明公开了包含SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的重组沙门氏菌在制备预防猪流行性腹泻疾病的药物中的用途，还公开了一种由包含SEQ ID NO：1所示核苷酸序列的重组沙门氏菌和药学上可接受的辅料或者载体制备而成的预防猪流行性腹泻疾病的疫苗。本发明疫苗可产生的针对猪流行性腹泻病毒的特异性抗体水平高，对猪流行性腹泻疾病有良好的保护作用，临床应用前景优良。
【IPC分类】A61K39-215, A61P31-14, A61K48-00, A61P1-12, C12N1-21, C12R1-42
【公开号】CN104645326
【申请号】CN201510058568
【发明人】文翼平, 黄小波, 梁恩涛, 文心田, 曹三杰, 伍锐, 陈杰, 张雨迪, 段素芬, 朱书权
【申请人】四川农业大学
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年2月4日