i et al. , Oncogene 15:2803-2815, 1997)〇
[0015] 4种NRG基因，NRG-1，NRG-2, NRG-3,及NRG-4,定位于不同的染色体座位 (Pinkas-Kramarski et al. ,Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:9387-91, 1994 ；Carraway et al. , Nature 387:512-516, 1997 ；Chang et al. , Nature 387:509-511,1997 ；and Zhang et al. , Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:9562-9567, 1997)，及共同编码多种 NRG 蛋白。NRG-I 的基因产物，例如，包括一组大致15种不同的结构上-相关的异构体（Lemke, Mol. Cell. Neurosci.7:247_262，1996and Peles and Yarden，BioEssays 15:815-824,1993)。首先 鉴定的 NRG-I 的亚型包括 Neu 分化因子（NDF;Peles et al·，Cell 69, 205-216, 1992and Wen et al.，Cell 69, 559-572, 1992)，神经生长因子（HRG ;Holmes et al.，Science 256:1205-1210,1992)，乙酰胆碱受体诱导活性（ARIA ;Falls et al. ,Cell 72:801-815, 1993)，及神经胶质生长因子 GGF1，GGF2,及 GGF3(Marchionni et al.Nature 362:312-8, 1993)。
[0016] NRG-2 基因通过同源性克隆（Chang et al. ,Nature 387:509-512, 1997 ; Carraway et al. , Nature 387:512-516，1997;and Higashiyama et al. ,J. Biochem. 122:675-680, 1997)及通过基因组方法（Busfield et al.，Mol.Cell. Biol. 17:4007-4014, 1997)鉴定。NRG-2cDNA 也已知为 ErbB 激酶（NTAK ;Genbank 登录号 No. AB005060)的神经-及胸腺-来源的活化子，神经调节蛋白（Don-I)的趋异剂，及小 脑-来源的生长因子（CDGF ;PCT申请WO 97/09425)。实验证据显示，表达ErbB4或ErbB2/ ErbB4组合的细胞可能显示对NRG-2的特别稳健的应答（Pinkas-Kramarski et al.，Mol. CelhBioL 18:6090-6101，1998)。NRG-3 基因产物（Zhang 等人，supra)也已知结合及活化 ErbB4 受体（Hijazi et al.，Int. J. Oncol. 13:1061-1067, 1998)。
[0017] EGF-样结构域以全部形式的NRG的核心存在，及需要结合及活化ErbB受体。3种 基因中编码的EGF-样结构域的推断的氨基酸序列大致30~40%相同（比对）。而且，NRG-I 及NRG-2中似乎有至少2种亚型的EGF-样结构域，其可赋予不同的生物活性及组织-特异 性潜力。
[0018] 对NRG的细胞应答通过表皮生长因子受体家族的NRG受体酪氨酸激酶EGFR， ErbB2，ErbB3,及ErbB4介导。全部NRG的高-亲和力结合主要经ErbB3或ErbB4介导。NRG 配体的结合导致与其他ErbB亚基的二聚化，及通过对特异性酪氨酸残基的磷酸化的反式 激活。在某些实验环境中，ErbB受体的几乎全部组合似乎能响应NRG-I异构体的结合形成 二聚体。但是，看起来ErbB2是可在稳定配体-受体复合物中起重要的作用的优选的二聚 化偶体。ErbB2不结合其自身的配体，但必需与其他受体亚型之一异源配对。ErbB3不具有 酪氨酸激酶活性，但是其他受体的磷酸化的靶。NRG-l，ErbB2,及ErbB4的表达已知必要于 小鼠发育期间心室心肌小梁形成。
[0019] 【发明概述】
[0020] 本发明提供用于治疗哺乳动物神经损伤后的新方法。方法基于可通过给哺乳动物 施用治疗有效量的多肽来实现含表皮生长因子-样（EGF-样）结构域的多肽的治疗性益处 的观察；在某些实施方式中，在神经损伤后第1小时，第2小时，第8小时，第12小时，第24 小时，第30小时，第36小时、第42小时，第2天或更久时或后进行治疗。在本发明的一个实 施方式中在急性窗损伤后之后起始治疗。在本发明的个实施方式中在半 _急性窗损伤后 之后起始治疗。在本发明的个实施方式中期间及仍持续在急性窗损伤后之后起始治疗。 在本发明的一个实施方式中治疗在半-急性窗损伤后期间起始及在半-急性窗损伤后之后 仍持续。
[0021] 因此，本发明包括给哺乳动物施用含EGF-样结构域的多肽（或编码多肽的核酸）， 其在神经损伤后第1，2或3天甚至达及包括第4, 5,6,7,8,9,10,11，12,13,14天；在神经损 伤后一周或多于一周，2周或多于2周；在神经损伤后3周或多于3周；在神经损伤后4周 或多于4周；在神经损伤后1个月或多于一个月；在神经损伤后2个月或多于2个月；在神 经损伤后3个月或多于3个月；在神经损伤后4个月或多于4个月；在神经损伤后5个月或 多于5个月；在神经损伤后6个月或多于6个月起始。根据本发明，EGF-样结构域由神经 调节蛋白基因编码。根据本发明的施用包括以对于治疗哺乳动物的神经损伤后慢性期有效 的量施用包括EGF-样结构域的肽，或编码所述多肽的核酸分子。
[0022] 根据本发明的另一方面，提供哺乳动物缺血性事件后急性或半-急性期外期间促 进神经恢复的方法。本发明的治疗可在急性或半-急性时期内开始，但包括超过急性或 半-急性时期分别至少1次，2次，3次，4次，5次，6次或多于6次治疗。
[0023] 本发明的方法包括给所述哺乳动物施用包括表皮生长因子-样（EGF-样）结构域 的多肽，其中所述EGF-样结构域由神经调节蛋白（NRG)-I基因编码，及所述施用在缺血性 事件后进行至少2或3或4天，尽管治疗可在急性或半急性时间框架内开始，及以足以在所 述哺乳动物缺血性事件后慢性期期间促进神经恢复的有效量治疗。
[0024] 在本发明的特定实施方式中，神经调节蛋白基因可为NRG-I基因，NRG-2基因， NRG-3基因或NRG-4基因。本发明的神经调节蛋白多肽可，进而，由这4种神经调节蛋白基 因任之一编码；本发明的神经调节蛋白多肽可，进而，由这4种神经调节蛋白基因任之一的 变体或同系物编码。见图6A~6D是全长人GGF2 (NRG-1的亚型）的氨基酸及核酸序列。
[0025] 在本发明的一个方面，适宜哺乳动物包括但不限于，小鼠，大鼠，兔，狗，猴或猪。在 本发明的更特定的实施方式中，哺乳动物是人。
[0026] 【定义】
[0027] 本文中的术语'约"包括指定的值 ±1，2,3,4,5,6,7,8,9，10，11，12，13，14，15%的 指定的值。在一实施方式中"约"表不98~102%的指定的值。在一实施方式中"约"表不 95~105%的指定的值。
[0028] 损伤后，"急性期"跨神经损伤（例如，中风）起始时间到神经损伤后大致6小时。 急性期之后是"半-急性期"，其跨神经损伤后大致6小时~2天。在一实施方式中，"半-急 性期"跨神经损伤后大致6小时~3天。半-急性期之后时期称为神经损伤后"慢性期"。 后-急性期包括半-急性及慢性损伤后时期。
[0029] 通过〃表皮生长因子-样结构域〃或"EGF-样结构域〃是指结合及活化ErbB2， ErbB3, ErbB4,或其组合，及与如公开于 Holmes 等人，Science 256:1205 ~1210,1992 年； 美国专利 No. 5, 530, 109 ;美国专利 No. 5, 716, 930 ;美国专利 No.