FN-a、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-10、IL-12、 IL-13、IL-17、TNF-a、TGF-0或可以由CD4-阳性T细胞产生的其它细胞因子。3.抗体的 诱导，如通过蛋白印记、ELISA以及等同或相关方法可检测的。4.未由如1和2中所述的 CD8-阳性或CD4-阳性T细胞介导的任何种类的细胞免疫响应的诱导。
[0022] pl6INK4a的片段由以下组成：
[0023] (a)下述氨基酸序列中的任一个：
[0024] (B1) MEPAAGSSMEPSADffLATAAARGRV ；
[0025] (a2) TAAARGRVEEVRALLEAGALPNAPNSY ；
[0026] (a3) LPNAPNSYGRRPIQVMMMGSARVAELL ；
[0027] (a4) VMMMGSARVAELLLLHGAEPNCADPATLTR ；
[0028] (a5) ADPATLTRPVHDAAREGFLDTLffLHRAGARL ；
[0029] (a6)HRAGARLDVRDAffGRLPVDLAEELGHRDVAR ；
[0030] (a7)GHRDVARYLRAAAGGTRGSNHARIDAAEGPSDIPD
[0031] (b)的片段的功能等同物，其仍能够诱导针对pl6Iffi4a的免疫响应；或
[0032] (c) (a)和/或（b)的片段的组合。
[0033] 例如，本文使用的术语"功能等同物"涉及，（a)的变体或片段，其仍能够诱导针对 pl6INK4a的免疫响应，因此，仍可用作有效的疫苗。变体的特征在于氨基酸缺失、取代和/或 添加。优选地，氨基酸差异是由于一种或多种保守氨基酸取代。术语"保守氨基酸取代"涉 及脂族或疏水性氨基酸Ala、Val、Leu和Ile的替换；羟基残基Ser和Thr的替换；酸性残 基Asp和Glu的替换；酰胺残基Asn和Gln的替换，碱性残基Lys、Arg和His的替换；芳族 残基Phe、Tyr和Trp的替换以及小型氨基酸Ala、Ser、Thr、Met和Gly的替换。
[0034] 对于示出特定程度的同一性的肽的制备，如，基因工程可用于在克隆的DNA序列 的特定位置处引入氨基酸变化以鉴定对于肽功能重要的区域。例如，可使用定点诱变或丙 氨酸扫描诱变（在分子的每个残基处引入单个丙氨酸突变）（Cunningham和Wells，1989)。 然后，使用实施例中的测定，所得的突变分子可用于测试免疫原性。
[0035] 优选地，变体的特征在于不超过8个氨基酸，更优选为不超过6个氨基酸，甚至更 优选地，不超过4个氨基酸取代、缺失和/或添加。
[0036] 在原始的pl6Ink4a-片段的片段中，特定氨基酸序列的至少5个连续氨基酸、优选至 少10个连续氨基酸、更优选至少15个连续氨基酸、甚至更优选至少20个连续氨基酸被剩 下。此类片段仍能够诱导针对pl6 INK4a的免疫响应，并且因此，仍可用作有效的疫苗。
[0037] 本发明还提供了编码本发明的片段的核酸或含有此类核酸的载体。将遗传物质直 接注入活的宿主引起其少量的细胞产生引入的基因产物。宿主内的不适当的基因表达具有 重要的免疫学影响，从而导致针对基因递送的抗原的宿主的特定的免疫活化。裸质粒DNA 的直接注入引起对基因疫苗编码的抗原强的免疫响应。一旦注入质粒DNA构建体，宿主细 胞摄取外源DNA，从而在细胞内部表达病毒基因并产生pl6 Iffi4a。这种形式的抗原呈递和处 理诱导MHC以及I类和II类限制的细胞和体液免疫响应。DNA疫苗由通常含有两个单元的 载体组成：抗原表达单元，其由启动子/增强子序列，随后编码抗原（FSP)和多腺苷酸化序 列组成以及由对于载体扩增和选择必需的序列组成的制备单元。具有疫苗插入物的载体的 构建使用重组DNA技术来实现并且本领域技术人员知道可用于该方法的载体。DNA免疫的 效率可通过使DNA对降解保持稳定以及提高DNA至抗原呈递细胞递送的效率来改善。这已 经通过用DNA包覆生物可降解的阳离子微粒（诸如用十六烷基三甲基溴化铵配制的聚（丙 交酯-共-乙交酯））来证明。此类DNA包覆的微粒在升高CTL上与重组牛痘病毒一样有 效率，特别是当与明矾混合时。直径为300nm的粒子对于通过抗原呈递细胞的摄取看起来 为最有效的。
[0038] 可以利用多种表达载体，如，质粒或病毒载体以含有且表达编码本发明的片段的 核酸序列。
[0039] 优选的病毒载体为痘病毒、腺病毒、逆转录病毒、疱瘆病毒或腺相关病毒（AAV)。特 别优选的痘病毒为牛痘病毒、NYVAC、鸟痘病毒、金丝雀痘病毒、ALVAC、ALVAC(2)禽痘病毒或 TROVACo
[0040] 重组的基于甲病毒属的载体已经用于改善DNA接种效率。将编码本发明的片段的 基因插入甲病毒属复制子，替换结构基因，而保持非结构复制酶基因完整。辛德毕斯病毒 (Sindbis virus)和塞姆利基森林病毒（Semliki Forest virus)已经用于构造重组甲病 毒属复制子。然而，不像常规的DNA接种，甲病毒属载体仅瞬时表达。由于由该载体表达的 高水平的蛋白、复制子诱导的细胞因子响应或复制子诱导的凋亡导致树突细胞增强抗原摄 取，所以甲病毒属复制子提高免疫响应。
[0041] 本发明还提供了含有适合于个体免疫的量的本发明的片段、核酸序列或载体以及 优选一种或多种常见助剂的药物组合物。此类片段、核酸序列或载体本身可存在或与载体 的组合存在。个体中的载体非免疫原性的是有利的。此类载体可以为个体自己的蛋白或外 源蛋白或其片段。载体，诸如血清白蛋白、纤维蛋白原或转铁蛋白或其片段为优选的。片段 含有表位，所述表位被细胞毒性T细胞，如CD8+T细胞或CD4T细胞识别，并且可以诱导免疫 响应。细胞循环调控蛋白的此类表位可通过本领域技术人员熟悉的方法确定。各种片段同 时存在也可以为有利的。对于以上片段的重组制备，参见，如，Sambrook等人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual，第2版，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约（1989)。
[0042] 本发明还涉及本发明的片段、核酸序列或载体用于制备预防或治疗表达Pie1ffi4a的 瘤形成前、瘤形成或癌（包括晚期癌）的疫苗的用途。
[0043] 例如，这些可以为HPV诱导的、表达pl6INK4a的阴肛部癌，特别是宫颈癌或头颈癌以 及非HPV诱导的表达pl6 Iffi4a的肿瘤。同样，良性修饰诸如乳头瘤、腺瘤、增生或类似的上皮 增殖、间质或造血增殖也计数在当中。
[0044] 采用的术语"个体"包括任何种类的并且能够患上癌的个体。此类个体的实例为 人和动物以及其细胞。
[0045] 采用的术语"适合于个体免疫的量"包含以上解释相应地应用于并且可使个体免 疫的本发明的片段的任何量。例如，所述量取决于免疫是否旨在预防性或治疗性治疗。另 外，个体的年龄、性别和体重对于确定所述量起作用。通过注射给予个体100 μ g至Ig的 P16片段是有利的。可以在个体的各个位置进行肌内、皮下、皮内或以任何其它施用形式注 射。进行一种或多种具有约等量的"加强注射"也可为有利的。在这种情况下，使用个体注 射的各自细胞循环调控蛋白的不同片段可为特别有利的。
[0046] 采用的术语"常见助剂"包括适合于免疫个体的药物组合物的任何助剂。此类助剂 为，如，免疫佐剂，诸如GM-CSF或弗氏佐剂（Freund's adjuvant)、缓冲的常见盐溶液、水、 乳剂诸如油/水乳剂、润湿剂、无菌溶液等。
[0047] 通过本发明来使个体免疫，特别是人和动物是可能的。免疫通过抗体的诱导以及 T细胞的刺激两者而发生。因此，采取针对瘤形成前、瘤形成和癌的预防性和治疗性步骤是 可能的。
[0048] 本发明通过以下实施例来解释。
[0049] 实施例1
[0050] 在具有HPV-相关的瘤形成的患者中针对？16°"^肽的T细胞反应性
[0051] 为了评价具有HPV-相关的肿瘤的患者是否提高强烈过表达的pl6Iffi4a的T细胞以 及针对强烈过表达的pl6 INK41^T细胞响应至何种程度，应用