一种制备抗大肠癌复方制剂中的水提物的方法
【技术领域】
[0001] 本发明属医药技术领域，涉及复方制剂中的水提物的制备方法，具体涉及抗大肠 癌复方制剂-芋菇颗粒剂中水提物的制备方法。
【背景技术】
[0002] 据报道，大肠癌是目前威胁人类健康的重大疾病之一，新制订的《中国癌症预防与 控制规划纲要（2004 - 2010年)》已将大肠癌与其它7类肿瘤列为我国现阶段重点防治的 8大癌症。
[0003] 近年来的研究发现，多糖抗肿瘤活性显著，并且对人体的毒副作用相对较小，对多 糖的生物活性研究在医学领域已经成为国内外专家学者研究的热点，现已应用于临床的有 关多糖有香菇多糖、猪苓多糖、灵芝多糖、云芝多糖、黄芪多糖等。
[0004] 芋菇颗粒（中药复方制剂）是复旦大学附属肿瘤医院经验方，临床用于治疗大肠 癌并取得效果，其中的]蛇六谷，又名魔芋（Amorphophallus Konjac),已广泛用于治疗各 种癌肿，在复方中，起软坚散结，清热解毒抑癌作用，当癌肿发生转移时，往往更重用蛇 六谷；蛇六谷的块茎中含葡甘露聚糖（Konjae Glucomannan，KGM) 50%~60%，KGM是由含 D-葡萄糖和D-甘露糖结合的复合多糖]，现代研究表明KGM具有抗衰老、调节胃肠道、降血 月旨、减肥、降血糖、抗肿瘤和调节免疫等诸多功效；蛇六谷的石油醚萃取物及乙酸乙酯萃取 物具有抗肿瘤活性，Mizutzni Takeo早在1982年报道了 KGM对C3H/He雄性小鼠自发肝脏 肿瘤有抑制作用，在1983年发表研究报告指出KGM可抑制1，2_二甲肼（DMH)诱发的大鼠 大肠癌，包素珍等报道蛇六谷水煎液对S180荷瘤小鼠的抑瘤率为51. 08%，将大量癌细胞 阻滞在S期。
[0005] 山慈菇为兰科植物杜鹃兰、独蒜兰或云南独蒜兰的干燥假鳞茎，味甘、微辛，寒，有 小毒，是中医常用的抗癌中药，目前对于山慈菇药理作用的研究报道大多数是针对于杜鹃 兰中提取出的单体成分，临床上主要以复方入药用于食道癌、乳腺癌、宫颈癌、直肠癌等肿 瘤的治疗；田昌海等报道了山慈菇中多糖的含量测定方法，结果表明，独蒜兰的多糖含量 较高，安顺的独蒜兰含量甚至达到19. 9%，有研究发现，水提物中含有大量的山慈菇多糖，现 有技术中山慈菇水提物得率为24. 37%。然而，传统中药复方由于成分复杂，使其的可控性、 稳定性存在一定的困扰，这也是中医药国际化的难题之一；因此如何对"去粗取精"而又保 持中医复方配伍治疗复杂疾病的优势，是一大难题，也是中医药研究的突破方向之一。
[0006] 本申请的发明人拟提供一种制备抗大肠癌制剂中的水提物的方法，尤其是在医院 经验方的基础上，以多糖提取率为指标，提供一种可行的提取传统复方制剂中的水提物的 方法。
[0007] 与本发明有关的参考文献有：
[0008] [1]林俊等。近5年多糖抗肿瘤活性研究进展中国中药杂志，第38卷第8期2013 年 4 月：1116-1125
[0009] [2]马俊，等.魔芋的功能及应用.中国食品与营养，2006, 12 (5) :48 - 49。
[0010] [3]Mizutani T, Mitsuoka Τ. Effect of Konjac mannan on spontaneous liver tumor i gene s i s and fecal flora in C3H/He male mice.Cancer Lett.19820ct;17(1):27-32.
[0011] [4]Mizutzni Takeo. Effect of Konjac mannan onl, 2-dimethylhydrazine-induced intestinal carcinogenesis in Fischer344rats. Cancer Lett. 1983May;19 (I):1-6.
[0012] [5]包素珍，中药蛇六谷对荷瘤小鼠 S180抑瘤及细胞周期的影响.浙江中西医结 合杂志，1999, 9 (3) :162-163
[0013] [6]田昌海，高晨曦，王世清.黔产山慈菇多糖的含量测定.中国民族民间医 药，2009, 6-7
[0014] [7]朱晓燕，刘加葳，吴洪斌，孟志强.芋菇颗粒对S180荷瘤小鼠抑瘤作用的研 究·中华中医药杂志，2013, 28 (12) :3720-3723.。
【发明内容】
[0015] 本申请的目的是提供一种制备抗大肠癌制剂中的水提物的方法，具体涉及一种以 多糖提取率为指标的可行的提取传统复方制剂中的水提物的方法。
[0016] 本发明中，在医院经验方抗大肠癌复方制剂-芋菇颗粒的基础上，建立苯酚硫酸 法测定多糖的含量，以多糖提取得率为指标，采用L9 (34)正交实验设计对芋菇颗粒进行水 提取的方法。
[0017] 本发明方法确定了苯酚硫酸法测定多糖含量的实验参数，多糖提取率稳定，在本 方法制备水提物过程中，通过控制沸腾时间、加水量和提取次数这3个因素，能有效控制实 验误差，获得稳定的提取效果，本提取方法简便易行、稳定可靠。
[0018] 本发明的一个实施例中，优选确定苯酚硫酸法测定多糖含量的方法为B2H2T1，即 加入苯酚溶液〇. 8ml，浓硫酸5. 0ml，沸水浴加热显色5min ;提取条件为，以20倍量水，提取 2次，每次沸腾I. 5h，多糖提取率稳定达到14. 4%。
[0019] 具体而言，本发明的制备抗大肠癌制剂中的水提物的方法，其特征在于，其包括步 骤，
[0020] 1)测定多糖的含量
[0021] 采用苯酚硫酸法测定芋菇颗粒提取物中多糖的含量，通过单因素考察确定多糖含 量测定中显色反应的主要影响因素，以正交实验设计确定显色条件：
[0022] ( 1)筛选苯酚用量
[0023] 确定加入苯酚量为0. 8ml时，吸光度达到0. 536为优选苯酚用量；
[0024] (2)筛选浓硫酸用量
[0025] 确定加入硫酸量为5. Oml时，吸光度稳定在0. 506附近为优选浓硫酸用量，
[0026] (3)筛选显色时间
[0027] 确定加热时间为IOmin,获得最大吸光度；
[0028] (4)筛选显色温度
[0029] (5)显色反应条件的正交实验设计采用4因素3水平正交试验设计，以吸光度为指 标，确定苯酚硫酸法的显色条件；
[0030] (7)建立标准曲线：y=0. 0174χ-0· 0163R2=0. 9985,线性范围 5ug/ml ~45ug/ml ;
[0031] (8 )精密度考察，RSD 为 0· 36% ;
[0032] (9)稳定性考察RSD值为0· 91% ;
[0033] (10)重现性考察，测定在490nm处的吸光度，RSD为L 56% ;
[0034] (11)加样回收率考察，加样回收率在94%~102.28%中间，平均加样回收率为 98. 25%，符合含量测定要求。