、Lck-488 (SEQ ID NO: 3)、SART2-93 (SEQ ID NO: 7)、 SART3-109 (SEQ ID NO: 8)、WHSC2-103 (SEQ ID NO: 12)、UBE-43 (SEQ ID NO: 13)、 HNRPL-501 (SEQ ID NO: 14)、CypB-129 (SEQ ID NO: 15)和 PAP-155 (SEQ ID NO: 26)。
[0017] 包含一种或多种选自以下肽的本发明组合物可以诱导HLA-A24和HLA-A3超型两 者的HLA限制性CTL，并可用于治疗或预防HLA-A24阳性癌症患者群和HLA-A3超型阳性癌 症患者群：EGFR-800 (SEQ ID NO: l)、SART2-93 (SEQ ID NO: 7)、SART3-109 (SEQ ID NO: 8)、WHSC2-103 (SEQ ID NO: 12)、UBE-43 (SEQ ID NO: 13)、HNRPL-501 (SEQ ID NO: 14)、 β-微管蛋白 5-154 (SEQ ID NO: 18)、Lck-90 (SEQ ID NO: 19)和 IEX1-47 (SEQ ID NO: 22)、PAP-155 (SEQ ID NO: 26)和 0-tubuline-3O9 (SEQ ID NO: 27)。
[0018] 包含一种或多种选自以下肽的本发明组合物可以诱导HLA-A2和HLA-A3超型两 者的HLA限制性CTL，并可用于治疗或预防HLA-A2阳性癌症患者群和HLA-A3超型阳性癌 症患者群：SART2-93 (SEQ ID NO: 7)、SART3-109 (SEQ ID NO: 8)、Lck-246 (SEQ ID NO: 10)、ppMAPkkk-432 (SEQ ID NO: 11)、WHSC2-103 (SEQ ID NO: 12)、UBE-43 (SEQ ID NO: 13) , HNRPL-501 (SEQ ID NO: 14), Lck-422 (SEQ ID NO: 16), Lck-90 (SEQ ID NO: 19) 和 SART3-511 (SEQ ID NO: 23)。
[0019] 包含一种或多种选自以下肽的本发明组合物可以诱导HLA-A2、HLA-A24和HLA-A3 超型的HLA限制性CTL，并可用于治疗或预防HLA-A2阳性癌症患者群、HLA-A24阳性癌症患 者群和 HLA-A3 超型阳性癌症患者群：SART2-93 (SEQ ID NO: 7)、SART3-109 (SEQ ID NO: 8)、WHSC2-103 (SEQ ID NO: 12)、UBE-43 (SEQ ID NO: 13)和 HNRPL-501 (SEQ ID NO: 14) 〇
[0020] 包含一种或多种选自以下肽的本发明组合物可以诱导HLA-A26的HLA限制性CTL， 并且除上述患者群以外，还可用于治疗或预防HLA-A26阳性癌症患者群：EGFR-800 (SEQ ID NO: l)、ppMAPkkk-432 (SEQ ID NO: 11)、HNRPL-501 (SEQ ID NO: 14)和 SART3-109 (SEQ ID NO: 8)。
[0021] 包含肽C35-44 (SEQ ID NO: 25)的本发明组合物可用于治疗或预防HLA-A24阳 性患者、HLA-A2阳性患者、HLA-A3超型阳性患者和HLA-A26阳性患者的丙型肝炎病毒相关 疾病，即治疗或预防患者群的与HCV感染有关的肝炎、肝硬化和肝癌。
[0022] 发明的效果 本发明CTL诱导剂组合物中包含的肽具有诱导多个HLA类型的HLA限制性CTL的能力， 因此可用于治疗或预防患者的癌症和丙型肝炎感染相关疾病，所述患者的HLA类型不是之 前已知的所述肽诱导HLA限制性CTL的HLA类型。本发明为具有相应HLA类型的患者提供 较大选择范围的肽，可供在特制的癌症疫苗疗法中进行更有效的治疗。
[0023] 另外，包含由C35-44 (SEQ ID NO: 25)表示的肽的CTL诱导剂组合物能够在 HLA-A24阳性患者、HLA-A2阳性患者、HLA-A3超型阳性患者和HLA-A26阳性患者中的任一 患者体内诱导CTL，并可用于治疗或预防丙型肝炎病毒相关疾病。
[0024] 附图简述 图1表示通过刺激得自具有HLA-A24-结合SART3-109的HLA-All阳性癌患者的PBMC 所得到的CTL的细胞毒活性。
[0025] 图2表示具有结合HLA-A26阳性细胞的不同结合特性的不同肽的结合活性。
[0026] 图3表示得自HLA-A3超型等位基因阳性前列腺癌患者的肽刺激的PBMC的细胞毒 活性。用肽刺激得自HLA-A3超型等位基因阳性前列腺癌患者的PBMC，通过6小时 51Cr释 放测定法（6-hour 51Cr release assay)测定PBMC针对多种革E细胞的细胞毒活性。得自 HLA-A3超型等位基因阳性健康志愿者的PHA刺激的幼稚T细胞母细胞（blast-forming T cell blast)用作对照。* p〈 0.05〇
[0027] 实现发明的最佳方式 所谓"与两种以上选自HLA-A24、HLA-A2、HLA-A3超型和HLA-A26的HLA分子结合"是 指肽可与两种以上选自HLA-A24、HLA-A2、HLA-A3超型和HLA-A26分子的HLA分子形成复合 物并可呈现在细胞表面。
[0028] 本发明中，通过用肽刺激外周血单核细胞（PBMC)，并通过ELISA法等测定肽刺激 的PBMC是否对经相应肽进行脉冲处理的抗原呈递细胞产生应答并产生细胞因子（例如 IFN-γ )，可检测诱导肽特异性CTL的能力。另外，经诱导的CTL的细胞毒活性可通过51Cr 释放测定法等予以证实。
[0029] 本发明的肽可通过常规肽合成法制备。用于此目的的方法包括例如以下文献披露 的方法：Peptide Synthesis, Interscience, New York, 1966; The Proteins,第 2 卷， Academic Press Inc.，New York, 1976 ;Peptide Synthesis [日文]，MARUZEN Co.， Ltd. , 1975; Basics And Experiments In Peptide Synthesis [日文]，MARUZEN Co., Ltd·, 1985;以及 Development Of Pharmaceuticals,第二系列，第 14 卷，Peptide Synthesis [日文]，Hirokawa Shoten Co. , 1991。
[0030] 本发明CTL诱导剂组合物中包含的肽通过使包含本发明肽的氨基酸序列的多肽 经胞内断裂而产生。本发明还包括在这类实施方案中使用本发明的肽。可按需要而无任何 限制地选择这类多肽的氨基酸残基数和氨基酸序列，只要所述多肽可以提供本发明的肽。
[0031] 本发明CTL诱导剂组合物中包含的肽可有效地诱导特异性杀死两种以上选自以 下患者群体内的癌细胞的CTL并使之扩增：HLA-A24、HLA-A2、HLA-A3超型和HLA-A26阳性 患者群，因此可用于治疗各种癌症患者。
[0032] 本发明提供用于治疗或预防癌症的药物组合物，所述组合物包含如上具体说明的 肽。本发明用于治疗或预防癌症的药物组合物可包含一种肽、或两种以上肽和/或其衍生 物的组合。由于得自癌症患者的CTL是识别不同癌-抗原肽的细胞亚型，因此还可有效地 使用多种癌-抗原肽和/或其衍生物的组合。本发明的肽还可与本发明以外的癌抗原肽合 用。
[0033] 本发明用于治疗或预防癌症的药物组合物可包含各含有多种肽（例如包括各本 发明的肽在内的8种肽）的药物制剂，使得该组合物可用于特定疗法。
[0034] 本发明的药物组合物除肽以外还可包含药学上可接受的载体等。所用载体可为纤 维素、聚合氨基酸、白蛋白等。本发明的药物组合物可包括脂质体制剂、与直径为几微米的 微珠粒子结合的制剂、与脂质结合的制剂等。还可与之前已知用于疫苗接种的佐剂联合给 予本发明的药物组合物，以使得有效地产生免疫应答。给药方法包括例如真皮内或皮下给 药等。
[0035] 本发明用于治疗或预防癌症的药物组合物可以用作癌症疫苗。可根据疾病状况、 个体患者的年龄和体重等，适当调整剂量。一般地讲，药物组合物中肽含量的范围通常为 0.0001-1000 mg，优选 0.001-100 mg，更优选 0.01-10 mg，甚至更优选 0.1-5 mg 或 0.5-3 mg，优选重复给药，每几天、几周或几个月一次。
[0036] 本发明还提供诱导癌反应性CTL的方法，该方法包括使采自HLA-A24、HLA-A2、 HLA-A26或HLA-A3超型呈阳性的癌症患者群的外周血单核细胞（PBMC)与本发明的肽接触。 本发明的肽可以从得自两种以上上述癌症患者群的PBMC中诱导CTL。有关CTL的"癌反应 性"是指CTL识别靶标癌细胞的癌抗原肽和HLA分子的复合物，并且能够杀死癌细胞。例 如，在本发明的肽存在下，将采自HLA-A24呈阳性的恶性脑肿瘤患者的PBMC在体外进行培 养，以进行CTL的诱导。本发明诱导CTL的方法可用于过继免疫疗法，其中将诱导后的CTL 输回到从中采集PBMC的患者体内以杀死癌细胞。
[0037] 本发明还提供用于诱导CTL的试剂盒，所述试剂盒用于实施所述诱导CTL的方法。 本发明的试剂盒包括一种或多种本发明的肽，并且还可包括合适的缓冲液、培养基等。
[0038] 本发明还提供用于制备抗原呈递细胞的方法，其中所述抗原呈递细胞可以诱导 针对选自以下的癌细胞具有细胞毒性的CTL :HLA-A24阳性癌细胞、HLA-A2阳性癌细胞、 HLA-A26阳性癌细胞和HLA-A3超型阳性癌细胞。例如，通过将衍生自HLA-A24阳性癌症患 者的具有抗原呈递能力的细胞与本发明的肽一起培养，使得该肽与HLA-A24分子结合并呈 递，以实施本发明用于制备抗原呈递细胞的方法。或者在替代方法中，可将能够表达这类肽 的载体导入衍生自HLA-A24阳性癌症患者的具有抗原呈递能力的细胞中以表达该肽。具有 抗原呈递能力的细胞包括例如树突细胞。可以获得衍生自患者的树突细胞，例如，从采自患 者的PBMC中分离出培养平板贴壁细胞后，将贴壁细胞在IL-4和GM-CSF存在下培养大约1 周。通过本发明方法制备的抗原呈递细胞可以诱导特异性识别呈递在两种以上选自以下细 胞的细胞表面上的肽与HLA分子的复合物的CTL :HLA-A24阳性癌细胞、HLA-A2阳性癌细胞 和HLA-A3超型阳性癌细胞，并且当给予癌症患者时，可在癌症患者体内促进癌反应性CTL 的诱导。即通过本发明方法制备的抗原呈递细胞可以作为药物用于治疗或预防癌症。
[0039] 本发明还提供用于制备抗原呈递细胞的试剂盒，该试剂盒用于实施所述用于制备 抗原呈递细胞的方法。本发明的试剂盒包括一种或多种本发明的肽和/或其衍生物，并且 还可包括合适的缓冲液、培养基等。
[0040] 本发明还提供包含肽C35-44 (SEQ ID NO: 25)的CTL诱导剂组合物，并用于治疗 或预防HLA-A24阳性患者、HLA-A2阳性患者和HLA-A3超型阳性患者的丙型肝炎病毒相关 疾病。本发明中，"丙型肝炎病毒相关疾病"往往不仅包括丙型肝炎，而且还包括由于HCV感 染引起的所有疾病，例如肝硬化和肝癌。
[0041] 下面参照下列实施例对本发明进行更详细说明，这并不意味着以任何方式将本发 明局限于此。
[0042] 本发明的发明人检测了已知能够诱导HLA-A24、HLA-A2、HLA-A26和HLA-A3超型任 一种的HLA限制性CTL的共34种肽结合其它HLA类型的能力（分别为13种、9种和12种 肽）。
[0043] 表1表示本发明的发明人检测的肽及其已知的HLA结合特性。
[0044] 肽 制备表1中列举的肽。
[0045] 所有这些肽的纯度均 >90% 并购自 Biologica Co. (Nagoya，Japan)。Gag77_85 (SLYNTVATL) (SEQIDNO: 35)用作结合 HLA-A2 型的对照肽，env-GP (RYLRDQQLL) (SEQ ID NO: 36)用作结合 HLA-A24 型的对照肽，HIV-Gagl67-175 (EVIPMFSAL) (SEQ