用于预防和治疗静脉血栓状态的溶解纤维蛋白的组合物的制作方法
【专利说明】用于预防和治疗静脉血栓状态的溶解纤维蛋白的组合物
[0001]本发明涉及用于预防和治疗静脉血栓状态(phlebothrombotic state)的溶解纤维蛋白的(fibrinolytic)组合物。
[0002]发明背景
[0003]静脉血栓是以一个或多个静脉的腔中形成血栓为特征的疾病，与静脉炎不同，其具有非炎症原因。
[0004]多种原因可以诱发该疾病，且可以单个出现或者以不同的组合出现:静脉壁改变、血流迟滞或血液凝固性改变。这些现象在一般健康状况差的个体、糖尿病患者、心脏病患者和术后恢复期患者中更频繁地出现。
[0005]更频繁地，侵害下肢以及骨盆静脉、门静脉和硬脑膜窦。形成的血栓弱粘着在血管壁上，因此容易脱离并且变成栓塞物，其能阻塞其它远端血管。
[0006]血栓可以阻塞血管，从而完全停止血流。随后血管被结缔组织侵入，从而将血管转化成纤维性团块。小的新血管可以形成，使得血流完全或部分重建。与静脉血栓有关的障碍和衍生的临床形式根据所涉及的血管的部位和重要性而不同；面积越大，源于受损循环的效应越明显:血管静脉流-床的膨胀、周围组织区域的水肿、淡蓝色(bluish colour)以及或多或少的急性疼痛。如果血管小，则静脉血栓可能无症状且愈合，而在其它情况中，可能出现并发症，最严重的是肺栓塞。
[0007]静脉血栓的治疗包括四肢的固定术(immonilisat1n)。使用溶栓药也是适合的。
[0008]菠萝蛋白酶是提取自凤梨(pineapple)(菠萝(Ananas comosus))的果实和莖的半胱氨酸和蛋白酶的混合物，凤梨(菠萝(Ananas comosus))属于凤梨科(Bromeliaceae)植物家族。所述组分的分子量在8 - 28.5kDa范围内。
[0009]菠萝蛋白酶浓度用蛋白水解单位(⑶U单位或国际单位，IU)或重量单位表示。菠萝蛋白酶主要用作抗炎药和抗水肿药。
[0010]它在软组织的炎症状态中、甚至在创伤事件和术后组织反应后的炎症状态中特别有效。已经证实菠萝蛋白酶的抗炎活性归因于其增加抗炎前列腺素(即前列腺素E2)的生物合成和抑制促炎前列腺素的能力。
[0011]在其抗炎应用中，菠萝蛋白酶以40mg的剂量被施用，每天重复2 — 6次，但是已经测试了高得多剂量，没有任何可察觉到的副作用，唯一的例外是轻度的胃肠道障碍和罕见的超敏反应。菠萝蛋白酶的其它药理学活性包括抗血栓形成和促纤维蛋白溶解作用、降血压活性和增溶动脉粥样硬化斑块的能力。在抗生素和抗肿瘤疗法中的协同活性也已经有记载。菠萝蛋白酶还与胰液组合用于消化不良。
[0012]纳豆激酶(nattokinase)是提取自纳豆(natto)的蛋白水解酶，纳豆是一种以被特定的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis):纳豆枯草芽孢杆菌(B.subtilis natto)发酵的煮熟的大豆为基础的传统日本食品。
[0013]纳豆激酶是约30kDa的丝氨酸-蛋白酶，其属于枯草杆菌蛋白酶家族，具有强纤维蛋白溶解活性。由于这一原因，其被用作其它抗聚集药(ant1-aggregant drug)和抗凝血药例如乙酰水杨酸、噻氯匹定和华法林的替代物。
[0014]WO 200821987公开了用于预防和治疗血栓性静脉炎的制剂，其含有与草药衍生物(芸香苷和姜)和痕量元素(钙、镁、钾和其它元素)组合的各种酶(真菌蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠萝蛋白酶、真菌胰酶、淀粉酶、纳豆激酶、蛋白酶-S和脂酶)。
[0015]本发明的目的是仅两种酶(即菠萝蛋白酶和纳豆激酶)的特定比例的且被适宜配制的组合，其提供了特别有利的协同作用。
[0016]本发明的描述
[0017]本发明涉及用于预防和治疗静脉血栓状态的溶解纤维蛋白的组合物，其含有菠萝蛋白酶和纳豆激酶作为仅有的活性成分，鉴于它们的溶解纤维蛋白的性质，本发明还涉及菠萝蛋白酶和纳豆激酶的组合用途。
[0018]根据一个优选的方面，本发明的组合物含有如下范围内的活性成分:
[0019]a)菠萝蛋白酶:20 — 400mg、优选160mg/剂/天；和
[0020]b)纳豆激酶:以10 — 10mg的剂量使用。
[0021]根据一个更优选的方面，本发明的组合物含有如下剂量的活性成分:
[0022]a)菠萝蛋白酶:160mg/剂量/天；和
[0023]b)纳豆激酶:10mg/剂量/天。
[0024]根据一个优选的方面，本发明的组合物含有1.6:1的重量比的菠萝蛋白酶和纳豆激酶。
[0025]根据一个优选的方面，本发明的组合物被配制成双层片，每层具有一种酶。
[0026]临床试验
[0027]根据Astrupt模型(用于评估纤维蛋白溶剂额活性的纤维蛋白板方法(Thefibrin plate method for estimating fibrinolytic activity).Arch.B1chem.B1phys.；40:346-351, 1952)进行菠萝蛋白酶和纳豆激酶的制剂的溶血栓功效试验，每个试验均在存在24单位纤维蛋白溶酶原(plasminogen)的情况下用牛纤维蛋白一式三份地进行，分别证实了菠萝蛋白酶和纳豆激酶的溶解纤维蛋白作用，并且以不同重量比混合两种物质。在上述模型中，菠萝蛋白酶的作用为11.5±2.5FU/ml，而纳豆激酶的作用为18.9±3.3FU/ml。当以1:1的比例将两种酶混合在一起时，溶解纤维蛋白作用为97.8±13.3FU/ml，具有明显的协同作用，这已经通过将两种酶的剂量减少1/10并且重新测试1:1重量的两种化合物的混合物的溶解纤维蛋白作用被证实。按照这种方式操作，溶解纤维蛋白作用为12.7±2.9FU/ml，该值与使用高10倍的剂量的两种酶得到的值类似。
[0028]当进行另外的试验时，观察到通过以1.6:1的重量比混合菠萝蛋白酶和纳豆激酶得到了最佳结果。
[0029]还使用Astrupt模型通过与WO 2008/02198中所述的蛋白水解酶和其它成分的组合比较再次评价了菠萝蛋白酶和纳豆激酶的组合的功效。因此评价了各化合物、总混合物和仅每种酶(即无草药衍生物)的混合物的溶解纤维蛋白作用。我们观察到，大部分化合物(真菌蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰酶、淀粉酶和蛋白酶-s)各自的活性远远低于菠萝蛋白酶和纳豆激酶的活性。后两者的活性值分别为125±13.2FU/ml和139.5±34.7FU/ml，这证明了它们的活性比其它单一酶的活性高不小于100倍。然而，草药衍生物和痕量元素显示完全无活性。所有成分(酶、草药衍生物和痕量元素)的混合物导致纤维蛋白溶解活性，但低于由单独的菠萝蛋白酶和纳豆激酶混合物得到的活性。总混合物的溶解纤维蛋白作用为47.9±11.8FU/ml，所有酶的混合物的溶解纤维蛋白作用为52.7±8.4FU/ml，菠萝蛋白酶和纳豆激酶的组合的溶解纤维蛋白作用为1127.67± 119.6FU/ml。这些试验清楚地证明，菠萝蛋白酶和纳豆激酶的组合比W0200821987中要求保护的组合以及其中所述的单一酶的组合更有效。这种现象可能与通过下列操作所产生的可能拮抗作用相关:混合不同蛋白质结构和蛋白质结构与草药衍生分子(它们竞争纤维蛋白上的相同分子表位)，其使得溶解纤维蛋白过程无效或不很有效。
[0030]制剂
[0031 ] 本发明的组合物可以用适合于口服施用的方式配制，并且可以通过制药技术中公知的常规方法例如 “Remington，s Pharmaceutical Handbook”，Mack Publishing C0., N.Y.，USA中所述的那些方法使用对其最终应用而言可接受的赋形剂、稀释剂、填充剂、防结块剂、矫味剂和甜味剂制备。
[0032]如所提及的那样，根据一个优选的方面，将本发明的组合物配制成双层片，每层具有一种酶；两层都是防胃液的(gastroprotected)，具有持续约4_8小时的时间依赖性控制肠释放。这种类型的释放通过在每层的中心核中使用按照1:1的比例与艾维素(avicel)或microcel混合的具有不同聚合度的美多秀(methocel)或美洛斯(metholose)而成为可能，所述的艾维素或microcel按照1:1的比例与以1:0.5的比例预构建的甘露醇和磷酸二钙的混合物预混合。然后可使用虫胶直接在具有10 - 300kg、优选50kg容量的工业化包衣锅中得到防胃液的薄膜包衣。最后，可以通过在工业化包衣锅中的另一个步骤并且伴随使用1:0.5:0.5的碳酸铵、柠檬酸三乙酯和虫胶的混合物使薄膜包衣更坚固。
[0033]本发明的制剂实施例在下面给出。
[0034]实施例1)防胃液的控制释放片剂，其含有
[0035]-菠萝蛋白酶80mg
[0036]-纳豆激酶50mg
[0037]实施例2)防胃液的控制释放的双层片剂，其在每层含有:
[0038]-菠萝蛋白酶160mg
[0039]-纳豆激酶10mg
[0040]实施例3)用流化床获得的防胃液的颗粒，其含有:
[0041]-菠萝蛋白酶320mg
[0042]-纳豆激酶200mg
【主权项】
1.包含菠萝蛋白酶和纳豆激酶作为仅有的活性成分的组合物。2.权利要求1的组合物，其中菠萝蛋白酶与纳豆激酶的重量比是1.6:1。3.权利要求1或2的组合物，其包含如下范围内的活性成分: a)菠萝蛋白酶:20— 400mg ;和 b)纳豆激酶:10— 200mgo4.以上权利要求中一项或多项的组合物，其是适合于口服施用的形式。5.权利要求4的组合物，其是双层片剂的形式，其中每层含有单一酶，并且是防胃液的，具有持续约4-8小时的时间依赖性控制肠释放。6.用于治疗血栓性静脉炎的纳豆激酶和菠萝蛋白酶的组合。
【专利摘要】公开了包含菠萝蛋白酶和纳豆激酶作为其仅有的活性成分的组合物。
【IPC分类】A61K38/48, A61P29/00
【公开号】CN104955474
【申请号】CN201380060893
【发明人】皮耶罗 F·迪
【申请人】维勒加研发有限公司, 诺西斯有限公司
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2013年11月6日
【公告号】CA2892426A1, EP2922567A1, US20150297685, WO2014079689A1