利用了hmgb1片段的针对脊髄损伤的新型治疗方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及包含HMGB1片段的针对脊髄损伤的新型治疗用药物组合物及其用途。
【背景技术】
[0002] 骨髄间充质干细胞是具有多能性的生物体内干细胞，已知能够分化为成骨细胞、 脂肪细胞、软骨等。近年来已开始报告，通过对具有脑梗塞等组织损伤的患者施用自体骨髄 间充质干细胞，能够促进组织损伤的痊愈。但是，骨髄间充质干细胞由于是存在于骨髄中的 稀少的细胞，因此能够从患者采集的量存在限制。因此，难以确保宽范围的组织损伤的治疗 所需要量的骨髄间充质干细胞。因此，现在发展了通过将骨髄间充质干细胞临时培养、使其 增殖来确保治疗所需的细胞数的方法。但是，将骨髄间充质干细胞维持未分化状态地进行 培养是极其困难的。另外，还存在很多病毒、细菌的污染、细胞的癌化等这样附随的需要解 决的课题。另外，用于培养安全性、品质得到保证的细胞的费用极其可观。
[0003] 另一方面，已知骨髄间充质干细胞对脊髄损伤具有痊愈促进效果。该效果推测是 由于具有多能性的骨髄间充质干细胞分化成神经细胞、或者聚集于损伤组织的骨髄间充质 干细胞供给生长因子等具有组织损伤改善效果的成分。
[0004] 现有技术文献
[0005] 专利文献
[0006] 专利文献 1 :W02008/053892
[0007] 专利文献 2 :TO2007/015546
[0008] 专利文献 3 :TO2009/133939
[0009] 专利文献 4 :W02009/133943
[0010] 专利文献 5 :W02009/133940
[0011] 专利文献 6 :W02004/004763
[0012] 非专利文献
[0013] 非专利文献 1 :Bustin 等、Mol Cell Biol、19 :5237-5246、1999 年
[0014] 非专利文献 2 :Hori 等、J. Biol. Chem.、270、25752-25761、1995 年
[0015] 非专利文献 3 :Wang 等、Science、285 :248-251、1999 年
[0016] 非专利文献 4 :Muller 等、EMBO J、20 :4337-4340、2001 年
[0017] 非专利文献 5 :Wang 等、Science、285 :248-251、1999 年
[0018] 非专利文献 6 :Germani 等、J Leukoc Biol.、81 (1) :41-5、2007 年
[0019] 非专利文献 7 :Palumbo 等、J. Cell Biol.、164 :441 ~449、2004 年
[0020] 非专利文献 8 :Merenmies 等、J. Biol. Chem.、266 :16722-16729、1991 年
[0021] 非专利文献 9 :Wu Y 等、Stem cells、25 :2648-2659、2007 年
[0022] 非专利文献 10 :Tamai 等、Proc Natl Acad Sci USA.、108(16) :6609-6614、2011 年
[0023] 非专利文献 11 :Yang 等、J Leukoc Biol. 81 (1) :59-66、2007 年
[0024] 非专利文献 12 :Basso 等、J Neurotrauma.、23 (5) :635-659、2006 年
[0025] 非专利文献 13 :Rahimi-Movaghar 等、Int J Neurosci.、118(10) : 1359-1373、 2008 年
[0026] 非专利文献 14 :Quertainmont R 等、PloS One.、7(6) :e39500、2012 年
【发明内容】
[0027] 发明所要解决的课题
[0028] 脊髄损伤虽然是下半身的麻痹所导致的歩行困难等对患者而言生活品质极大丧 失的疾病，但是却无望自然痊愈，甚至尚没有建立有效的治疗方法。如上所述，目前细胞治 疗等再生医疗在脊髄损伤治疗中的应用受到期待，但尚在开发中。另外，即使得以实用化， 也还没有解决高额的治疗费用等课题。
[0029] 但是，若能够通过施用具有将骨髄间充质干细胞动员到损伤部位的活性的药物来 促进脊髄损伤的痊愈，则可期待能够对目前几乎没有有效治疗方法的脊髄损伤的患者提供 廉价且安全的治疗方法。
[0030] 用于解决课题的手段
[0031] 迄今为止，发明者们已清楚了，HMGB1 (高迀移率族蛋白-1，High mobility group box 1)是具有刺激骨髄中的间充质干细胞游走、动员到血中的活性的蛋白。一直以来，已 知HMGB1是非组蛋白核蛋白的主要成分，其分子内具有BoxA和BoxB这2个DNA结合区域。 另外还已知，核内的HMGB1的功能在于使核小体结构松弛并构建最适合转录反应的结构。 但是，近年来清楚了，核蛋白HMGB1虽然不具有分泌信号，但却被分泌到细胞外而发挥各种 活性。最深入的研宄是作为炎症的中介物（mediator)的功能。例如弄清楚了，在小鼠的败 血症模型（LPS施用模型）中，在TNFa刺激下从吞噬细胞分泌的HMGB1是败血症的中介物 (Wang et al. :Sciencel999;285:248-251)，并作为候补受体而已知 TLR4。另外，HMGB1 的 最有名的受体为RAGE，已报告该受体与HMGB1的结合影响细胞的游走活性和炎症性的信号 传递。
[0032] 本发明中，公开了含有HMGB1片段的针对脊髄损伤的新型治疗用药物组合物及其 用途。
[0033] 具体而言，本发明者们通过肽合成制作了由HMGB1蛋白的第1~44个氨基酸构成 的肽（序列号5)、由第11~44个氨基酸构成的HMGB1片段（序列号4)。将制作的各HMGB1 片段施用给能够评价脊髄损伤的治疗效果的小鼠疾病模型，确认了该片段对脊髄损伤的治 疗效果。
[0034] 本申请基于该认识，提供以下发明。
[0035] [1] 一种用于治疗脊髄损伤的药物组合物，其含有HMGB1片段肽。
[0036] [2]根据[1]的药物组合物，其中，所述HMGB1片段肽为包含选自序列号3、序列号 4和序列号5中的氨基酸序列的肽。
[0037] [3]根据[1]的药物组合物，其中，所述HMGB1片段肽为由选自序列号3、序列号4 和序列号5中的氨基酸序列构成的肽。
[0038] [4] 一种脊髄损伤的治疗方法，其包含施用HMGB1片段肽的工序。
[0039] [5]根据[4]的方法，其中，所述HMGB1片段肽为包含选自序列号3、序列号4和序 列号5中的氨基酸序列的肽。
[0040] [6]根据[4]的方法，其中，所述HMGB1片段肽为由选自序列号3、序列号4和序列 号5中的氨基酸序列构成的肽。
[0041] [7] -种用于治疗脊髄损伤的HMGB1片段肽。
[0042] [8]根据[7]的HMGB1片段肽，其中，所述HMGB1片段肽为包含选自序列号3、序列 号4和序列号5中的氨基酸序列的肽。
[0043] [9]根据[7]的HMGB1片段肽，其中，所述HMGB1片段肽为由选自序列号3、序列号 4和序列号5中的氨基酸序列构成的肽。
[0044] [10]HMGB1片段肽在制造用于治疗脊髄损伤的药物中的用途。
[0045] [11]根据[10]的用途，其中，所述HMGB1片段肽为包含选自序列号3、序列号4和 序列号5中的氨基酸序列的肽。
[0046] [12]根据[10]的用途，其中，所述HMGB1片段肽为由选自序列号3、序列号4和序 列号5中的氨基酸序列构成的肽。
【附图说明】
[0047] 图1A为表示各种合成肽的TOGFRa阳性株化骨髄间充质干细胞的游走刺激活性 的照片。包含最小片段即HMGB1片段肽（17~25)的所有片段肽显示细胞游走刺激活性。
[0048] 图1B为表示不同长度的HMGB1片段肽所具有的TOGFRa阳性株化骨髄间充质干 细胞的游走刺激活性的照片。各肽通过肽合成制作。附随的图是对各片段肽的细胞游走刺 激活性进行定量化而得到的。通过该实验，显示HMGB1片段肽（17-25)为具有游走刺激活 性的最小片段。
[0049] 图2A中，与阴性对照组（PBS施用）相比，HMGB1片段（11-44)施用组中可见显著 性的神经症状的改善效果。（相对于PBS :*p〈0.