素被化学处理以使得所述毒素被目的性地解毒以用于该免疫原的人 类使用的衍生物。纯化的类毒素的MW与所述毒素的MW是高度可比较的，其是1. 51xl05,包 含1375个氨基酸。然而，除其它特性以外，类毒素和毒素之间的显著差异在于在化学解毒 后类毒素结构中保留的来自赖氨酸残基的剩余初始氨基的量。在类毒素中将检测到平均50 个活性氨基或原始存在于毒素的结构中的活性氨基的约50%，所述活性氨基用作与活化的 细菌Ps的偶联反应中的亲核基团。当将TT的结构与CRM197的结构在于偶联反应中竞争 作为亲核试剂的能力方面进行比较，可测定TT具有约50个氨基/摩尔（对于1375个aa MW = 1. 51xl05)而CRM197具有40个氨基/摩尔（对于535个aa MW = 58. 5xl04)，因此其 摩尔密度（本文定义为"摩尔亲核活性"）为TT中的3.6%和CRM197中的7. 5%，这显示出 后一蛋白在给定偶联反应中用作亲核试剂的远更高的能力。然而，考虑到两种蛋白的MW的 显著差异（基本上偏向TT的因子=2. 6)，当希望限制多价制剂中载体蛋白/剂量的量时， 蛋白载体对于分子构建体中选择的所携带的糖抗原的每一种的摩尔比率可导致TT为有利 的。事实上，在两种载体蛋白的可比较的重量剂量下，在摩尔基础上CRM197是TT的2. 6倍。 相比之下，必需注意的事实是，其丽可限制获得具有值多1. 0的TT/型特异性Ps摩尔比率 的可能性以用于T辅助依赖性在宿主免疫系统中的最佳诱导。
[0315] 在下文中，本申请人报告了这样的使用TT作为载体蛋白的分子构建体的物理化 学特性，所述分子构建体根据上文针对基于CRM197的分子构建体所使用的方法利用允许 载体蛋白的完全糖基化的试剂化学计量学来合成。这样的分子构建体可被认为是基于TT 载体蛋白的多价制剂的基本组分：
[0316]表 10
[0318] 在脑膜炎奈瑟菌Ps和流感嗜血杆菌Ps的多价结合物的情况下（作为另外的例 子），下文是载体蛋白CRM197和TT之间的比较，其凸显了载体蛋白在不同构建体（根据如 上述一般化学方程所允许的不同化学计量合成）中的相关性，如相关于其在摩尔比率（蛋 白/Ps)定义中的丽，当考虑蛋白和Ps在上述表8-9中丽值时：
[0319] 表 11
[0321] 参考文献
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【主权项】
1. 由基本单元组成的抗原性多价分子构建体，所述基本单元包括共价结合至最少三种 具有不同血清学特异性的糖结构的辅助-T依赖性载体蛋白，其中每种糖结构包括至少一 个由通过分子量测定和NMR光谱学评估的最少五至十二个单糖残基组成的重复基本表位， 所述重复基本表位经由测定其各自在抑制其同源多糖-抗体参照系统中的MIC 5tl值通过与 型特异性或群特异性多克隆或单克隆抗体的反应性来抗原性评价。2. 根据权利要求1的抗原性多价分子构建体，其中所述糖结构是寡糖或多糖。3. 根据权利要求1-2中任一项的抗原性多价分子构建体，其中所述重复基本表位由最 少八至十二个单糖残基组成。4. 根据权利要求1-3中任一项的抗原性多价分子构建体，其中所述辅助-T依赖性载体 蛋白选自天然白喉突变体蛋白CRM197、白喉类毒素、破伤风类毒素、流感嗜血杆菌蛋白D、 肺炎球菌表面蛋白、肺炎球菌毒素、以及它们的变体或衍生物，例如通过己二酸二酰肼间隔 剂化学衍生的破伤风类毒素。5. 根据前述权利要求1-4中任一项的抗原性多价分子构建体，其中所携带的具有不同 血清学特异性的糖抗原选自肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、金 黄色葡萄球菌、结核分支杆菌、伤寒沙门氏菌、大肠杆菌、霍乱弧菌、白色念珠菌、牛分枝杆 菌的糖抗原或其组合。6. 根据权利要求5的抗原性多价分子构建体，其中所携带的糖抗原是选自下列的至 少 3 种荚膜多糖：肺炎链球菌的 1、2、3、4、5、6A、6B、6C、6D、7F、8、9N、9V、10A、11A、11B、11C、 11F、12F、14、15A、15B、15C、17F、18C、19A、19F、20、22F、23A、23F、33F、35B 型和 / 或脑膜炎奈 瑟菌的A、C、W135和Y群多糖和/或流感嗜血杆菌的b型多糖、和/或肺炎克雷伯菌的K多 糖抗原和/或金黄色葡萄球菌的多糖抗原和/或结核分枝杆菌的多糖抗原和/或伤寒沙门 氏菌的多糖抗原和/或大肠杆菌的多糖抗原和/或霍乱弧菌的多糖抗原和/或白色念珠菌 和/或牛分枝杆菌的多糖抗原、或其组合。7. 根据权利要求6的抗原性多价分子构建体，其中所述构建体包含载体蛋白CRM197和 肺炎链球菌的三种荚膜多糖，所述三种荚膜多糖选自下列三元组：3、6A、7F ;4、5、9V ;1、6B、 14 ;18C、19A、23F ;6C、19F、22F ;12F、15B、33F ;5、9V、19F ;1、14、19A ;22F、23F、33F ;4、6B、 18C〇8. 根据权利要求6的抗原性多价分子构建体，其中所述构建体包含载体蛋白CRM197 和肺炎链球菌的三种荚膜多糖，其选自下列三元组：CRM197-3、6A、7F ;CRM197-5、9V、19F ; CRM197-1、14、19A ;CRM197-22F、23F、33F ;CRM197-4、6B、18C。9. 根据前述权利要求中任一项的抗原性多价分子构建体，其是单体或多聚体形式。10. 根据前述权利要求中任一项的抗原性多价分子构建体，其用于保护受试者免受至 少一种病原体感染的疫苗，所述至少一种病原体选自：肺炎链球菌，脑膜炎奈瑟菌，流感嗜 血杆菌，肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌，伤寒沙门氏菌，大肠杆菌，霍乱弧菌，结核分枝杆 菌，牛分枝杆菌和白色念珠菌。11. 疫苗制剂，其包含生理上可接受的媒介物中的至少一种根据权利要求1-9中任一 项所定义的抗原性多价分子构建体，和任选药学上可接受的佐剂或赋形剂。12. 根据权利要求11的疫苗制剂，其中所携带的每种型或群特异性糖抗原的剂量范围 介于0? 1至10 y g之间，优选为I. 0 y g。13. 根据权利要求11或12的疫苗制剂，其中所述佐剂在下列佐剂之间选择：选自磷酸 铝，氢氧化铝的矿物佐剂；选自基于角鲨烯的佐剂例如MF59, QF21，Addavax的有机佐剂以 及选自单磷酰-脂质A和二霉菌酸海藻糖酯的生物佐剂。14. 根据任何权利要求11-13中任一项的疫苗制剂，其中所述佐剂的量介于0.1 -Img/ 剂量之间，优选为〇. 5mg/剂量。15. 根据权利要求11-14中任一项的疫苗制剂，所述制剂适合用于通过皮下、肌内、皮 内或经皮途径的施用。16. 根据前述权利要求11-15中任一项的广谱多价疫苗制剂，其在人类医疗或兽医领 域中用于保护受试者免受至少一种细菌病原体的感染，所述至少一种细菌病原体选自：肺 炎链球菌，脑膜炎奈瑟菌，流感嗜血杆菌，肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌，结核分枝杆菌， 伤寒沙门氏菌，大肠杆菌，霍乱弧菌，白色念珠菌和牛分枝杆菌或其组合。17. 根据权利要求16的广谱多价疫苗制剂，其中所述受试者属于儿科群体。18. 根据权利要求16-17的广谱多价疫苗制剂，其用于预防由肺炎链球菌引起的侵 袭性肺炎球菌病，所述制剂包含选自CRM197-3、6A、7F ;CRM197-4、5、9V ;CRM197-1、6B、14 ; 〇冊197-18(：、19六、23卩；0^197-6(：、19卩、22卩；0^197-12卩、158、33卩或选自0^197-3、6六、7卩； CRM197-5、9V、19F ;CRM197-1、14、19A ;CRM197-22F、23F、33F ;CRM197-4、6B、18C 的一种或多 种抗原性多价分子构建体。19. 根据权利要求16-17的广谱疫苗制剂，其用于预防由脑膜炎奈瑟菌引起的感染，所 述制剂包含含有群特异性糖结构A、C、W135和Y的抗原性多价分子构建体。20. 根据权利要求16-19的广谱疫苗制剂，其用于预防由选自肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟 菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、结核分枝杆菌的多于一种感染原引起 的全身性和肺部感染，所述制剂包含多于一种含有所述感染原特异性的糖结构的抗原性多 价分子构建体。21. 根据权利要求16-19的广谱疫苗制剂，其用于预防由选自伤寒沙门氏菌、大肠杆菌 和霍乱弧菌的多于一种感染原引起的肠道感染，所述制剂包含多于一种含有所述感染原特 异性的糖结构的抗原性多价分子构建体。22. 根据权利要求16-19的广谱疫苗制剂，其用于预防由白色念珠菌和大肠杆菌引起 的全身性和泌尿生殖感染，所述制剂包含多于一种含有感染原特异性的糖结构的抗原性多 价分子构建体。23. 根据权利要求11-22中任一项的疫苗制剂，其用于与革兰氏阴性细菌的类内毒素 单独、同时或相继地施用，所述类内毒素选自B群脑膜炎奈瑟菌、大肠杆菌、伤寒沙门氏菌、 霍乱弧菌、肠炎沙门氏菌、百日咳杆菌的类内毒素。24. 用于制备根据权利要求1-9中任一项的抗原性多价分子构建体的结合方法，其包 括以下步骤： a) 通过经由氧化的O-脱氢解偶联和利用烷基二胺间隔剂形成亚胺还原键的还原性胺 化将至少三种抗原性不同的糖结构化学活化至单官能性或多官能性，随后衍生至活性酯； b) 将所述至少三种酯-衍生的糖结构与多官能性载体蛋白的氨基通过形成酰胺键来 同时偶联或逐步偶联。25. 根据权利要求24的方法，其中所述糖结构在其相应的二胺丁酸衍生物中进行化学 活化并且所述活性酯是琥珀酰亚胺酯。26. 根据权利要求24-25中任一项的结合方法，其中所述多官能性载体蛋白是CRM197。27. 根据权利要求23-26中任一项的结合方法，其中所述至少三种糖结构选自来自肺 炎链球菌的下列多糖三元组：3、6A，7F ;4、5、9V ;1、6B、14 ;18C、19A、23F ;6C、19F、22F ;12F、 15B、33F ;5、9V、19F ;1、14、19A ;22F、23F、33F ;4、6B、18C。28. 用于制备根据权利要求1-9中任一项的抗原性多价分子构建体的结合方法，其包 括将多官能性载体蛋白的氨基与至少三种抗原性不同的糖结构同时偶联或逐步偶联，经由 形成亚胺还原键的还原性胺化，这样的糖结构通过经由氧化的O-脱氢解偶联在使用或不 使用间隔剂的情况下被预先活化至单官能性或多官能性。29. 可通过根据权利要求24-28中任一项的结合方法获得的抗原性多价分子构建体。
【专利摘要】本发明涉及表达内置的多个表位的结合抗原和包含其的多价糖结合疫苗和制剂。此外，本发明涉及这些疫苗特别地用于保护人类群体和特别地用于保护儿科群体免受下列感染的用途：因肺炎链球菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌、结核分枝杆菌、金黄色葡萄球菌引起的肺部和全身性感染，或由伤寒沙门氏菌、霍乱弧菌和大肠杆菌引起的肠道感染。本发明还涉及用于保护免受白色念珠菌和大肠杆菌全身性和泌尿生殖感染或用于保护免受兽医医学中的牛分枝杆菌感染的多价糖结合疫苗。
【IPC分类】A61K39/09, A61K39/095
【公开号】CN104955476
【申请号】CN201480006904
【发明人】M·保罗
【申请人】碧奥辛斯有限责任公司
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2014年1月29日
【公告号】CA2897272A1, EP2950815A1, WO2014118201A1