中混合预混合的制 剂，而将未预混合的制剂悬浮于〇. 05M的柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液（pH 3. 5)并与0. 2M的 碳酸氢盐缓冲液（pH 9. 0)混合。表11提供了沉淀的平均胶凝时间和均匀性。
[0148] 5. 10 实施例 10
[0149] 用每μ L组合物8 μ g冻干ABT-308或冷冻的抗-MMP 13的负载的100 μ 1 20% 8-臂交联的组合物评估胶凝时间。在0.2Μ的磷酸盐缓冲液（pH 7.5)中混合预混合的制 剂，而将未预混合的制剂悬浮于〇. 05M的柠檬酸盐-磷酸盐缓冲液（pH 3. 5)并与0. 2M的 碳酸氢盐缓冲液（pH 9.0)混合。对于预混合的溶液，mAb在缓冲液中预混合并利用交联与 PEG固体组合或在交联前在PEG固体中预混合。表12提供了平均的胶凝时间。
[0150] 5. 11 实施例 11
[0151 ] 表4A和表4B提供了在大鼠中进行MMT手术之后，在关节内施用配制的mAb或静 脉内施用未配制的mAb的实验性全身和滑液浓度数据。在0天对三组（A-C)路易斯大鼠进 行MMT手术以作为骨关节炎病理的模型。在5天时，将配制的抗MMP13或ABT-308mAb注射 到大鼠后肢的关节内空间中，在所述后肢中进行了手术或静脉注射施用700mg/kg(按体重 计）的抗-MMP13。制剂是预混合的或未预混合的。在7天时，收集血清和滑液灌洗样品。 用抗IL-13MSD分析来分析抗体浓度，以确定ABT-308的浓度，或用抗MMP13MSD分析，以确 定抗MMP 13的浓度。表12A (对于未预混合的制剂）和表12B (对于预混合的制剂）提供 了实验结果。
[0152] 5. 12 实施例 12
[0153] 在无菌离心管中形成具有1 :1比例的PEG-Acr :PEG-SH、4. 84%的总PEG固体和 50%的mAb负载的10000丽的4-臂PEG的制剂以研究体外的mAb (阿达木单抗）释放。通 过在凝胶形成后1小时添加释放介质（具有0. lwt%的吐温80和0. 05wt%的叠氮化钠的 PBS(pH 7.4))并在指定时间间隔取出600 yL样品来测量释放后随时间变化的抗体完整 性。通过目测在37摄氏度不到10秒内形成凝胶。图29和表13示出了在所释放的单克隆 抗体上进行的尺寸排阻色谱的结果。从交联的组合物中释放的抗体相对于片段和聚集体， 显示出高比例的单体，这表明再溶解时的结构保留。使用96孔石英板在SpectraMax 96孔 板读取器上通过280nm处的吸光度来测定所释放的mAb的浓度。将各个样品的吸光度与每 个时间点的标准mAb曲线相比较，并用空白释放介质的吸光度进行调整。图30示出了所释 放的mAb随时间变化的平均浓度，而图31示出了释放的所施用的初始mAb随时间变化的平 均百分比。
[0154] 交联具有1 :25的抗-MMP13抗体：聚合物负载比例的20%的8-臂PEG-SH/Acr的 制剂并监测体外累积的mAb释放的百分比。收集所释放的单克隆抗体并通过尺寸排阻色谱 来检测其完整性。图32示出了 mAb随时间变化的累积释放。图33描述了尺寸排阻色谱结 果，这一结果示出了相对于聚集体和片段高比例的单体。
[0155] 5. 13 实施例 13
[0156] 由0、5、10、15、20、25或30%的PEG固体（按重量计）和0mg、0·16mg或0·32mg的 mAb (ABT-308)组成的8-臂PEG-SH/Acr的制剂。制剂的总体积是20 μ 1。目测在干净的小 瓶中形成交联的形成物。不含mAb的所有制剂是澄清的。在含有0. 16mg总mAb的制剂中， 20% PEG和更低的制剂是澄清的，而25%和30%的制剂目测表现出沉降的沉淀物。在含有 0. 32mg mAb的制剂中，20%的PEG制剂表现出悬浮的沉淀物，含有小于20%的PEG的制剂 是澄清的，含有25%的PEG或30%的PEG(按重量计）的制剂显示出浮动的和沉降的沉淀 物。这些实验示于图5。
[0157] 5. 14 实施例 14
[0158] 制备具有1:1比例的PEG-Acr =PEG-SH的1000 OMff的8-臂的制剂用于眼内注射。 制备具有示于表14的组成的12%重量的PEG(按体积计）和20%重量的PEG(按体积计） 的制剂。在任一的制剂都不包括生物治疗剂。
[0159] 通过在两个预负载的装有合适的母对母鲁尔锁（luer lock)的Ι-ml注射器（其 中一个注射器包含8-臂PEG-SH的溶液，另一个包含8-臂PEG-Acr的溶液）之间手动前后 冲排预混合各个制剂，5-10秒之后吸入到Ι-ml的具有30Gauge的眼科针和停在5mm深度 的简易针（improvised needle)的Becton Dickinson注射器中，以确保50 μ 1的均勾注射 体积。预混合和吸入后，将50 μ 1的12%的PEG(重量体积比）制剂或20%的PEG(重量体 积比）制剂注入6只新西兰白兔眼睛的每一只的玻璃体内空间。每次注射定时为持续约5 秒。在胶凝期间和胶凝之后观察眼部，并随后解剖以观察晶状体和视网膜并提取所形成的 水凝胶。
[0160] 各个制剂可通过30Gauge眼科针注射。注射后未观察到眼部有显著的凸出，并且 各个制剂在玻璃体内空间原位交联以形成凝胶。凝胶保持光学透明，并且有足够的刚性以 被镊子抓握和操作。观察到20%的PEG(按重量计）制剂凝胶比12%的PEG(按重量计）制 剂凝胶更硬（rigid)。在凝胶的提取中未观察到眼组织粘连，并且在解剖的眼部的检查中没 有晶状体穿刺或视网膜损伤。通过目视观察并计时持续时间直到如上所述的混合制剂不再 在测试微型管内流动来体外实验性地评估水凝胶制剂的胶凝时间。12%的制剂在约45秒 内胶凝，而20%的制剂在约23秒内胶凝。
[0161]表 1
[0179]表 8
【主权项】
1. 一种制剂，其包括： (a) 生物治疗剂；和 (b) 多个包括能够进行聚合物间交联的官能团的亲水性聚合物链； 其中所述制剂在交联时表现出生物治疗剂可逆沉淀成直径约50nm至约IOym大小的 沉淀物。2. 如权利要求1所述的制剂，其中生物治疗剂是蛋白质。3. 如权利要求2所述的制剂，其中生物治疗剂是抗体。4. 如权利要求2所述的制剂，其中生物治疗剂是双重可变结构域抗体。5. 如权利要求2所述的制剂，其中抗体选自：曲妥珠单抗（Herceptin ?)、贝伐单抗 (Avastin?)、阿达木单抗（Humira?)、兰尼单抗（Lucentis?)、阿柏西普（Eylea?)、依那西普 (Enbrel?)、利妥昔单抗（Rituxan?)、培非司亭（Neulasta?)、干扰素 0 _la(Avonex?)、干扰 素0 l_a(Rebif?)和英夫利昔单抗（Remicade?)。6. 如权利要求4所述的制剂，其中抗体是阿达木单抗。7. 如权利要求1所述的制剂，其中多个亲水性聚合物链选自：聚乙二醇（PEG)、葡聚糖、 透明质酸、果胶、胶原蛋白、纤维蛋白原、褐藻胶、PLLA-PEG-PLLA共聚物、PLDA-PEG-PLDA共 聚物、PLGA-PEG-PLGA共聚物、PEG-PLLA共聚物、PEG-PLDA共聚物和PEG-PLGA共聚物。8. 如权利要求7所述的制剂，其中多个亲水性聚合物链包括选自丙烯酸酯基团、硫醇 基团、乙烯基、氨基、羟基、-CO-NH-NH 2、醛基团、乙烯砜基团、琥珀酰亚胺基、硝基苯酚基团 和羟基琥珀酰亚胺基的官能团。9. 如权利要求8所述的制剂，其中所述多个亲水性聚合物链中的每个亲水性聚合物链 具有选自线性、分支、星形和梳状的结构。10. 如权利要求9所述的制剂，其中亲水性聚合物链的结构是分支、星形或梳状，且具 有2至16个臂。11. 如权利要求10所述的制剂，其中各个亲水性聚合物链的分子量是在约2和30kDa 之间。12. 如权利要求11所述的制剂，其中多个亲水性聚合物链包含第一类型的亲水性聚合 物和第二类型的亲水性聚合物。13. 如权利要求12所述的制剂，其中第一类型的亲水性聚合物链是PEG-丙烯酸酯，第 二类型的亲水性聚合物链是PEG-硫醇。14. 如权利要求13所述的制剂，其中第一类型的亲水性聚合物链具有4或8或16个 臂，第二类型的亲水性聚合物链具有4或8或16个臂。15. 如权利要求14所述的制剂，其中亲水性聚合物链的每个臂包括官能团。16. 如权利要求15所述的制剂，其中第一类型的亲水性聚合物链和第二类型的亲水性 聚合物链的比率是在9 :10至约10 :9之间。17. 如权利要求15所述的制剂，其中第一类型的亲水性聚合物链具有8个臂，第二类型 的亲水性聚合物链具有8个臂。18. 如权利要求15所述的制剂，其中第一类型的亲水性聚合物链具有16个臂，第二类 型的亲水性聚合物链具有16个臂。19. 如权利要求15所述的制剂，其中第一类型的亲水性聚合物链具有8个臂，第二类型 的亲水性聚合物链具有8个臂，并且其中多个亲水性聚合物进一步包括第三类型的亲水性 聚合物链，其是具有4个臂的PEG-丙烯酸酯，以及第四类型的亲水性聚合物链，其是具有4 个臂的PEG-硫醇。20. 如权利要求19所述的制剂，其中第一和第二亲水性聚合物链与第三和第四亲水性 聚合物链的比例是在1 :99和99 :1之间。21. 如权利要求20所述的制剂，其中第一和第二亲水性聚合物链与第三和第四亲水性 聚合物的比例是75 :25、50 :50或25 :75。22. 如权利要求15所述的制剂，其中以冻干形式提供制剂。23. 如权利要求22所述的制剂，其进一步包含缓冲液。24. 如权利要求23所述的制剂，其中所述缓冲液具有约3. 5至约6的pH值。25. 如权利要求24所述的制剂，其中PEG-丙烯酸酯和PEG-硫醇与缓冲液的重量体积 比是在约5%至约30%之间。26. 如权利要求25所述的制剂，其中生物治疗剂与总亲水性聚合物的重量比是在约1 : 1至约1 :125之间。27. -种试剂盒，其包括： (a) 包含生物治疗剂和多个亲水性聚合物链的制剂；和 (b) 诱导交联的激活缓冲液； 其中所述制剂在交联时显示出： (i) 在施用至患者体内空间后24小时小于5%的累积生物治疗剂释放的突释效应； (ii) 在施用至患者体内空间后7天小于10%的累积生物治疗剂释放的初始释放； (iii) 三相释放曲线，其中施用至患者体内空间后的释放速率对于约0-30天的第一期 间、约0-30天的第二期间和约0-30天的第三期间是大致恒定的； (iv) 施用至患者体内空间后1-3个月的释放持续时间，以完全释放生物治疗剂。28. 如权利要求27所述的试剂盒，其进一步包括用于递送与激活缓冲液混合的制剂的 递送装置，其中递送装置选自单内径注射器、双内径注射器或含有混合头的多通道递送装 置。29. -种试剂盒，其包括： (a) 包含生物治疗剂和多个亲水性聚合物链的制剂； (b) 诱导交联的激活缓冲液； 其中所述制剂在交联时表现出生物治疗剂可逆沉淀成直径约50nm至约IOym大小的 沉淀物。30. 如权利要求29所述的试剂盒，其进一步包括用于递送与激活缓冲液混合的制剂的 递送装置，其中递送装置选自单内径注射器、双内径注射器或含有混合头的多通道递送装 置。
【专利摘要】公开了制剂和方法，其提供了生物治疗剂向体内空间受控地、持续地释放。更具体地说，公开了包括多个亲水性聚合物链的制剂和制备以及施用此类制剂的方法。在一些实施方式中，制剂表现出生物治疗剂的突释、初始释放、三相释放和在30至90天内的释放。在一些实施方式中，制剂表现出生物治疗剂可逆沉淀成直径约50nm至约10μm的沉淀物。
【IPC分类】A61K38/19, A61K38/21, A61K47/48, A61K9/08, A61K39/00, A61K38/00, A61K47/10, C07K16/18, A61K9/00, A61K9/14
【公开号】CN105007896
【申请号】CN201380068796
【发明人】M·特罗尔萨斯, J·斯坦库斯, 詹姆斯·苏, 赛义德·霍萨尼, 约书亚·T·史密斯, 沙地德·阿斯卡
【申请人】雅培心血管系统公司
【公开日】2015年10月28日
【申请日】2013年12月27日
【公告号】EP2938323A2, US20140186446, WO2014106116A2, WO2014106116A3, WO2014106116A8