06] 分光光度计（Jenway UV/VIS MOD:6715, BS-6715B0)
[0207] pH 计 827pH 实验室（Metrhom)
[0208]
[0209] 试剂 A (磷酸钾缓冲剂，50mM，pH 6. 5, 25°C ):
[0210] 用 KOH 1M 调节 pH (约 4. 5)到 pH 6. 5 ;
[0211] 在4°C下储存直到使用。
[0212] 试剂B (L-酪氨酸溶液ImM):
[0213] 在4°C下储存直到使用。
[0214] 试剂C(酪氨酸酶溶液）：
[0215] 仅在使用前：
[0216] 酶具有xxxx单位/mg固体的体积（在瓶子上标明，所以每次使用不同的瓶子时是 不同的）。
[0217] 计算相应的液体=xxxx单位/mL液体
[0218] = xxxx 单位 /mL 液体 /xxxx 单位 /mg 固体=x mg/mL
[0219] 准备约lmL的份量且在-20°C下保存在铝纸中直到使用。
[0220] 如以下描述准备溶液A+B
[0221] 9mL去离子水
[0222] 10mL试剂A (磷酸钾缓冲剂50mM)
[0223] 10mL 试剂 B (L-酪氨酸 ImM)
[0224] 使溶液旋流，并且如果必要的话，使用HC1 1M或NaOH在25°C下恢复pH 6. 5。
[0225] 准备具有不同浓度的待测试的化合物的溶液，并保存在4°C下直到使用。
[0226] 解冻酪氨酸酶溶液并在暗处保存在冰上直到使用。
[0227] 在环境温度下混合磷酸钾缓冲剂的溶液（50mM，pH 6. 5)、上述溶液A+B以及包括 待测试的式（I)的化合物的溶液。
[0228] 开始用分光光度计进行校准。
[0229] 使用以下参数：
[0230] 读数：280nm ;
[0231] 测定模式：吸光度；
[0232] 执行设置：700秒；
[0233] 其余部分按照默认程序。
[0234] 当仅有L-酪氨酸来证实实际的酶/mL单位时，首先读取酪氨酸酶的酶活性，并且 对后续评估被检测酶活性的化合物的作用有基本参考。
[0235] 1.重复空白试验（对待测试的每个浓度进行一次空白试验）；
[0236] 2.重复试验（对待测试的每个浓度进行一次试验）。
[0237] 进行对仪器的空白试验读数（无比色皿）一校准（Cal.)
[0238] 在单独的比色皿中准备混合物，如下所述：
[0239]
[0241] 按照以下说明，测试被检测的具有式（II)、（III)、（IV)和（V)的化合物：
[0242] 1.重复空白试验（对待测试的每个浓度进行一次空白试验）；
[0243] 2.重复试验（对待测试的每个浓度进行一次试验）。
[0244] 在单独的比色皿中准备混合物，如下所述：
[0245]
[0246] 计筧酶活件的抑制或诱导
[0247]
[0248] df =稀释因子（30,因为0? lmL/3mL总计）
[0249] 0? 001=在3mL反应混合物中，在25°C下pH6. 5时每单位的L-酪氨酸A2SQnn/分 钟的变化
[0250] 0? 1 =使用的酶的体积（mL)
[0251] 单位/mg固体=单位/mL的酶：mg固体/mL的酶
[0252] 单位/mg蛋白质=单位/mL的酶：mg蛋白质/mL的酶
[0253] 单位的定义=在包含L-酪氨酸的3mL反应体积中，在25°C下pH6. 5时，等于 0. 001的A2SQnni/分钟的增量。
[0254] 对于每个待测试的化合物计算其相比于没有活性化合物的存在的酶的活性 (100 %酶活性）的酶活性的百分比。
[0255] 后续计算酶活性的增量百分比（％酶活性-100)。
[0256]
[0257] 以上表中报告的数据被总结在图3和图4的图中。
[0258] 图3显示了酶活性（％ )的绝对数据。
[0259] 图4显示了相比于对照，由此测定的各自的酶活性（％ )的增量。
[0260] 所有测试的式（I)的化合物显示了酪氨酸酶的酶活性的明显增加，并且因此，本 发明所关注的黑素原生成活性也明显增加。
【主权项】
1. 具有式（I)的化合物R-N L亚精胺或1，4- 丁二胺，N- (3-氨丙基）-N1-R或其药学 上可接受的盐的用途， (I) H2N - (CH2) 3 - N1 (R) - (CH2) 4 - NH2 其中R是连接到亚精胺的仲胺基团上的取代基，选自由1到6个碳原子形成的饱和或 不饱和、线性或支链烷基，其中一个或更多个碳原子任选地被氟取代，即甲基、乙基、三氟甲 基、三氟乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、亚乙基、乙烯基、亚丙基、亚丁基； 芳基或芳基-烷基，诸如苯基、萘基、苄基、甲苯基，其中一个或更多个碳原子任选地被 氟取代，并且其中所述芳基-烷基包括由1到6个碳原子形成的饱和或不饱和、线性或支链 烷基，其中一个或更多个碳原子任选地被氟取代，即甲基、乙基、三氟甲基、三氟乙基、丙基、 异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、亚乙基、乙烯基、亚丙基、亚丁基； 由3到8个碳原子形成的饱和或不饱和环烷基，所述饱和或不饱和环烷基任选地被由 1到6个碳原子形成的饱和或不饱和、线性或支链烷基取代，其中一个或更多个碳原子任选 地被氟取代，即甲基、乙基、三氟甲基、三氟乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、亚 乙基、乙烯基、亚丙基、亚丁基； 所述用途是在毛发中产生黑素原生成作用并且促进毛发的着色，特别是毛干的着色。2. 根据权利要求1所述的用途，其中所述式（I)被局部施用到头皮上。3. 根据权利要求1所述的用途，其中所述具有式（I)的化合物是具有下式的N L乙 基-亚精胺或N- (3-氨丙基）-N1-甲基-1，4- 丁二胺： (II) H2N - (CH2) 3 - N1 (CH3) - (CH2) 4 - NH2。4. 根据权利要求1所述的用途，其中所述具有式（I)的化合物是具有下式的N L环己 基-亚精胺或N-(3-氨丙基）-N1-环己基-1，4- 丁二胺： (IiI)H2N-(CH2)3-N1(C 6H11)-(CH2)4-NHp5. 根据权利要求1所述的用途，其中所述具有式（I)的化合物是具有下式的N L乙 基-亚精胺或N- (3-氨丙基）-N1-乙基-1，4- 丁二胺： (IV) H2N - (CH2) 3 - N1 (C2H5) - (CH2) 4 - NH2。6. 根据权利要求1所述的用途，其中所述具有式（I)的化合物是具有下式的N L丙 基-亚精胺或N- (3-氨丙基）-N1-丙基-1，4- 丁二胺： (V) H2N - (CH2) 3 - N1 (C3H7) - (CH2) 4 - NH2。7. 根据权利要求1所述的用途，其中所述具有式（I)的化合物的所述药学上可接受的 盐是关于马来酸的盐，诸如三马来酸盐。8. 根据权利要求1所述的用途，其中所述具有式（I)的化合物的所述药学上可接受的 盐是关于盐酸的盐，诸如三盐酸盐。9. 促进毛发的着色的化妆品组合物，包含至少一种具有式（I)的化合物R-N L亚精胺 或1，4- 丁二胺，N- (3-氨丙基）-N1-R或其药学上可接受的盐， (I) H2N - (CH2) 3 - N1 (R) - (CH2) 4 - NH2 其中R是连接到亚精胺的仲胺基团上的取代基，选自由1到6个碳原子形成的饱和或 不饱和、线性或支链烷基，其中一个或更多个碳原子任选地被氟取代，即甲基、乙基、三氟甲 基、三氟乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、亚乙基、乙烯基、亚丙基、亚丁基； 芳基或芳基-烷基，诸如苯基、萘基、苄基、甲苯基，其中一个或更多个碳原子任选地被 氟取代，并且其中所述芳基-烷基包括由1到6个碳原子形成的饱和或不饱和、线性或支链 烷基，其中一个或更多个碳原子任选地被氟取代，即甲基、乙基、三氟甲基、三氟乙基、丙基、 异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、亚乙基、乙烯基、亚丙基、亚丁基； 由3到8个碳原子形成的饱和或不饱和环烷基，所述饱和或不饱和环烷基任选地被由 1到6个碳原子形成的饱和或不饱和、线性或支链烷基取代，其中一个或更多个碳原子任选 地被氟取代，即甲基、乙基、三氟甲基、三氟乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基、亚 乙基、乙烯基、亚丙基、亚丁基； 所述化妆品组合物作为有效成分与合适的赋形剂被配制用于局部施用到头皮上。10. 根据权利要求9所述的组合物，其中所述具有式（I)的化合物是具有下式的N L甲 基-亚精胺或N- (3-氨丙基）-N1-甲基-1，4- 丁二胺： (II) H2N - (CH2) 3 - N1 (CH3) - (CH2) 4 - NH2。11. 根据权利要求9所述的组合物，其中所述具有式（I)的化合物是具有下式的N1-环 己基-亚精胺或N-(3-氨丙基）-N 1-环己基-1，4- 丁二胺： (IiI)H2N-(CH2)3-N1(C 6H11)-(CH2)4-NHp12. 根据权利要求9所述的组合物，其中所述具有式（I)的化合物是具有下式的N L乙 基-亚精胺或N- (3-氨丙基）-N1-乙基-1，4- 丁二胺： (IV) H2N - (CH2) 3 - N1 (C2H5) - (CH2) 4 - NH2。13. 根据权利要求9所述的组合物，其中所述具有式（I)的化合物是具有下式的N L丙 基-亚精胺或N- (3-氨丙基）-N1-丙基-1，4- 丁二胺： (V) H2N - (CH2) 3 - N1 (C3H7) - (CH2) 4 - NH2。14. 根据权利要求9所述的组合物，其中所述式（I)以0. 5 y M的浓度存在。15. 根据权利要求9所述的组合物，其中所述式（I)以I. 5 y M的浓度存在。16. 根据权利要求9所述的组合物，其中所述具有式（I)的化合物以被包括在以下区间 中的以重量每溶液体积的百分比表示的浓度存在： -从 0.01 到 0.30g/100mL -从 0.001 到 0.30g/100mL -从 0? 00010 到 0? 15g/100mL -从 0? 005 到 0? 30g/100mL -从 0.05 到 0.210g/100mL。17. 根据权利要求9所述的组合物，其中所述具有式（I)的化合物的所述药学上可接受 的盐是关于马来酸的盐，诸如三马来酸盐。18. 根据权利要求9所述的组合物，其中所述具有式（I)的化合物的所述药学上可接受 的盐是关于盐酸的盐，诸如三盐酸盐。
【专利摘要】本发明涉及用于局部施用的、具有式(I)的化合物R-N1-亚精胺或1,4-丁二胺,N-(3-氨丙基)–N1-R的用途，所述化合物以原样的形式或者以药学上可接受的衍生物的形式，诸如化妆品组合物中被设计为促进毛发着色，尤其是毛干的着色的活性成分；以及一种组合物，其适于实现所述着色效果并且包含所述活性成分，所述活性成分以原样的形式或者以药学上可接受的衍生物的形式，诸如盐。(I)H2N–(CH2)3–N1(R)–(CH2)4–NH2。
【IPC分类】A61K8/41, A61Q5/00, A61Q5/10, A61K8/69
【公开号】CN105073088
【申请号】CN201480008615
【发明人】G·朱利亚尼, 拉尔夫·保斯, A·贝内杜斯, 芭芭拉·马扎尼, S·巴罗尼
【申请人】朱利亚尼股份公司
【公开日】2015年11月18日
【申请日】2014年2月17日
【公告号】CA2899626A1, EP2956117A1, WO2014125452A1