超微破壁粉碎技术制成的三七活性药物及保健品及其制法
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及中药领域，具体涉及一种三七与三七花的活性药物组合物及其制备方 法。 技术背景：
[0002] 一、三七的化学成分和药理作用
[0003] 三七为五加科植物三七panaxnotoginseng (Burk.)F. H. Chen的干燥根，主产于广 西、云南，四川、广东、湖南等地亦有少量引种。本品性温，味甘、微苦，归肝、胃、心、大肠经， 具有止血散瘀、消肿定痛的功效，主治吐血、咳血、尿血、便血、血痢、崩漏、产后出血、外伤出 血、跌仆损伤、胸痹心痛、脘胁久痛、瘕积块、血瘀经闭、痛经、产后瘀滞腹痛、疮疡肿痛。与 三七散瘀止血、消肿定痛功效相关的药理作用十分广泛，包括止血、抗血栓、促进造血、扩血 管、降血压、抗心肌缺血、抗脑缺血、抗心律失常、抗动脉粥样硬化、抗炎、保肝、抗肿瘤、镇痛 等。
[0004] 1有效成分
[0005] 三七的主要成分为达玛烷型四环三萜类、三萜皂苷以及三萜类寡糖苷，还含有 三七素、(6-谷留醇、(6-谷留醇-3-0-P-D-吡喃葡萄糖苷、三七糖苷等。此外，三七根含 有多种挥发油，主要有a和y-依兰油烯、香附子烯、丁香烯等烯类，棕榈酸甲酯等酯类，辛 酸、乙酸等酸类，3-壬烯-2-酮等酮类和多种烷类。
[0006] 2药理学研究进展
[0007] 2. 1抗凝血作用体外试验与体内十二指肠给药试验表明，三七三醇皂苷可明显抑 制胶原、花生四烯酸诱导的大鼠及家兔血小板聚集。三七总皂苷与猪主动脉血管内皮细胞 共孵，可促进内皮细胞分泌组织型纤溶酶原激活物。
[0008] 2. 2对心血管系统的影响
[0009] 三七总皂苷对心血管系统具有多方面的作用，可降低不可逆性室颤的发生，改善 心脏舒缩功能，减少心肌缺血性损伤，对抗心肌肥大，抑制左心室重构；对内皮细胞的作用 主要为增加其内游离钙离子浓度，保护内皮；对于血管平滑肌细胞，三七总皂苷具有抑制和 促进细胞增生的双向作用。
[0010] 2. 3对脑组织和神经的影响
[0011] 采用改良的线栓法制备大鼠短暂大脑中动脉栓塞再灌注模型，检测缺血-再灌注 后不同恢复期（3, 7, 28d)大鼠神经功能恢复、脑梗死体积、Nogo-AmRNA及蛋白的表达。结 果表明，三七三醇皂苷可抑制脑缺血-再灌注后Nogo-A的表达，从而起到促进脑梗死后神 经功能恢复、脑功能重塑的作用。
[0012] 采用原代培养的大鼠大脑皮层神经细胞，经不同浓度的三七总皂苷预处理后，建 立氧糖剥夺（OGD)模型，2h后复氧复糖，模拟再灌注模型。通过MTT法比较神经元的存活 情况，并测定超氧化物歧化酶（SOD)、丙二醛（MDA)的活性变化，以及Bcl-2蛋白表达的变 化。结果表明，三七总皂苷对缺氧缺糖条件下的大鼠皮层神经细胞有保护作用，其保护作用 可能与其抑制神经细胞脂质过氧化反应、提尚Bcl_2蛋白表达有关。
[0013] 2. 4对脊髓损伤的保护作用
[0014] 将健康成年雌性SD大鼠63只，随机分为正常组、溶剂对照组、三七总皂苷组，大鼠 脊髓TlO右侧半横断损伤后15min，腹腔注射三七总皂苷，剂量为20mg/kg，以后每天给药1 次，溶剂对照组注射等量生理盐水。术后1，3, 7,14, 21，28d进行BBB评分行为学检测，并运 用免疫组织化学方法检测脊髓损伤远侧端胶质纤维酸性蛋白（GFAP)表达的变化。结果表 明，三七总皂苷能抑制脊髓半横断损伤后星形胶质细胞的活化，这可能是其促进脊髓损伤 后运动功能恢复的机制之一。
[0015] 将25只成年雌性大鼠在施行脊髓半横断术后，分为对照组、三七总皂苷低剂量 组、三七总皂苷中剂量组、三七总皂苷高剂量组和N-硝基-L-精氨酸组。三七总皂苷组每天 胃饲一定剂量的三七总皂苷，L-NNA组每天腹腔内注射L-NNA。术后30d取出脊髓和大脑行 冷冻切片，做尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸黄递酶（NADPH)组化染色和中性红染色。结果表明， 三七总皂苷能促进受损伤的背核神经元和红核神经元的存活，同时能抑制受损伤的背核神 经元表达一氧化氮合酶（NOS)。
[0016] 2. 5对肾组织的影响
[0017] 将大鼠随机分为假手术组、模型组和三七总皂苷治疗组，建立肾动脉狭窄肾缺血 大鼠模型，分别于造模后第7, 28,45,60d处死大鼠，观察肾间质病理形态学变化，应用免 疫组织化学法检测肾小管-间质a-平滑肌肌动蛋白（a-SMA)在不同时间点的表达，放 射免疫分析法检测血清白细胞介素2 (IL-2)的含量、ELISA检测血清血小板源性生长因子 O3DGF)的含量。结果表明，三七总皂苷可能通过抑制肾小管间质细胞表型转化，降低细胞因 子血小板源性生长因子的水平和早期白细胞介素2的水平，减轻和改善慢性肾缺血肾间质 纤维化。
[0018] 以四氧嘧啶复制糖尿病大鼠模型，动物分为正常组、模型组、三七总皂苷高剂量 治疗组、低剂量治疗组，生化检测空腹血糖、尿素氮、肌酐、总胆固醇、甘油三酯及尿蛋白 水平，HE及PAS染色、光镜观察肾组织形态学改变，RT-PCR法检测肾组织转化生长因子 0 I (TGFP 1)、纤溶酶原激活物抑制因子-I (PAI-I)mRNA表达。结果表明，三七皂苷可能通 过降低TGFP 1和PAI-ImRNA表达，进而保护糖尿病大鼠肾脏。
[0019] 2. 6其他作用
[0020] 三七对记忆获得障碍、记忆巩固障碍有一定改善作用，对家兔失血性休克有一定 疗效，三七皂苷A对犬有一定的利尿作用。三七皂苷腹腔注射，可提高小鼠痛阈，具有抗炎 及免疫调节作用，纳洛酮可部分阻断其效应。小鼠烫伤后腹腔注射三七皂苷液，对巨噬细胞 肌醇脂质信号系统IP3_CaM途径有调理作用。三七总皂苷腹腔注射能增加烫伤早期大鼠心 肌Gs a mRNA表达量、cAMP含量、腺苷酸环化酶活性。三七皂苷腹腔注射可使四氧嘧啶糖尿 病小鼠血糖降低。
[0021] 3 结论
[0022] 三七的有效成分种类很多，这些有效成分单用或联用的药理作用也很广泛。今后 不但要探明三七有效成分的结构、分离方法、药理作用，还要进一步探明其作用机制，以便 为临床治疗、预防保健及基础研究提供科学依据。
[0023] 二、三七花化学成分和药理作用
[0024] 1 引言
[0025] 三七花是传统名贵中药五加科植物三七的干燥花蕾[Flower buds of Panax Notoginseng(Burk)F. H. Chen]，三七花性味甘凉，具有清热、平肝、降压之功效，具有较好的 药用价值和保健作用。三七花作为药材已载入《云南中草药选》，"甘凉，清热平肝，降压。治 疗高血压，头昏，目眩，耳鸣，急性咽喉炎";同时《中华本草》记载三七花"性甘味凉。清热生 津，平肝降压。主治津伤口渴，咽痛音哑，高血压病"。本文对三七花的主要化学成分和药 理作用研究进行综述，为其深入研究与开发提供有益的参考。
[0026] 2化学成分
[0027] 从三七花蕾中分离得到人参皂甙F2, Rd，Rc，Rb2和Rbl。三七花皂甙元的研究， 通过提取精制得到了三七花粗皂甙沉淀物，再对粗皂甙进行水解和分离，分别得到三七花 甙元A、B、C、D和E。三七花蕾含有U-谷留醇、胡萝卜甙、三七皂甙Fe、绞股蓝皂甙IX、人参 皂甙Rc和人参皂甙Rb3等多种成分。从三七花挥发油中经气相层析得到16种成分，包括 萜烯类、烃类和酯。采用气质联用法从三七花挥发油中鉴定出包括烃类、单萜类、倍半萜类、 醇、醛、酮、酸、酯等化合物37种，其中单萜3种，倍半萜类16种，鉴定成分为总挥发油含量 的67%。上海中医药大学采用L 9 (34)正交试验设计，以洗脱物转移率及纯度为考察指标，用 AB-8树脂筛选出三七花总皂苷的最佳工艺条件为：上样浓度为0. 2g生药/mL，以3倍树脂 柱体积（BV)的70%乙醇溶液洗脱，吸附及洗脱流速均为2倍树脂柱体积每小时（BV *h 4， 洗脱液蒸干后即得纯化的三七花蕾总皂苷提取物，纯化后三七花蕾总皂苷含量为87. 60%。 云南文山不同产地、不同生长年限的三七花中总皂苷和单体皂苷的变化规律，发现产地和 生长年限不同，三七花所含总皂苷和人参皂苷Rbl、Rb3的含量有显著性差异。
[0028] 3药理作用
[0029] 3. 1抗炎作用
[0030] 三七总皂苷的作用机制可能与三七总皂苷阻止炎细胞内游离钙水平升高并抑制 灌流液中磷脂酶A2活性从而减少地诺前列酮得释放有关。而三七花总皂苷与三七总皂苷 在化学成分上有相似之处，发现50~IOOmg ? kg 1三七花皂苷能明显抑制多种致炎剂所 致大鼠足肿胀和小鼠耳廓炎症，有较强的抗炎活性；而利用三七花皂苷f?配制的溶液进行 抗炎实验，也发现其对急性炎症和慢性炎症均有抑制作用。以巴豆油等致炎剂建立的动物 炎症模型进行三七花总皂苷的抗炎症效果评价，发现三七花总皂苷对炎症反应均有抑制作 用，并能对抗由醋酸引起的小鼠腹腔毛细血管通透性亢进。广西医科大学附属肿瘤医院用 三七花冰块进行预防化疗性口腔炎的实验观察，观察组的口腔炎发生率为8%，而对照组的 发生率为24%，观察组显著低于对照组，也说明三七花具有消肿抗炎的功效。
[0031] 3. 2镇痛作用
[0032] 对三七花总皂苷进行镇痛实验，观察到三七花总皂苷能明显抑制由乙酸所致的小 鼠扭体反应，延长因热刺激引起的小鼠痛反应潜伏期，表明三七花总皂苷具有镇痛效能；小 鼠侧脑室注入（icv)微量三七花总皂苷后，仍能显著提高其痛闭值，提示其镇痛作用部位 可能在中枢。研究表明三七总皂苷对化学性和热刺激性引起的疼痛均有明显的镇痛作用， 且三七总皂苷是一种阿片肽样受体激动剂，不具成瘾的副作用。
[0033] 3. 3镇静作用
[0034] 三七地上部分对中枢神经有抑制作用，三七花总皂苷也能明显抑制小鼠的外观 行为活动和自发活动，三七花总皂苷能显著加强氯丙嗪对小鼠自发活动的抑制作用，同时 三七花总皂苷对戊四氮和士的宁惊厥无保护作用，表明三七花总皂苷对中枢神经系统具有 抑制效能。同样利用三七花水煎剂进行镇静实验，实验结果表明三七花可用于治疗头昏、目 眩和耳鸣。
[0035] 3. 4活血化瘀作用
[0036] 研究三七花总皂苷对大鼠血液流变学的影响，发现三七花中提取的总皂苷高、中、 低剂量组均能明显降低血瘀大鼠的全血比粘度，降低其红细胞压积，延长凝血酶原的时间， 降低纤维蛋白的数量，可以有效的预防血小板的聚集，防止血液粘度增加，从而起到预防血 栓的作用。说明三七花具有活血化瘀的临床功效。
[0037] 3. 5治疗心律失常作用
[0038] 三七总皂苷对几种实验性心律失常模型均有明显对抗作用，三七二醇皂苷也有类 似效应，提示其抗心律失常作用并不是通过竞争性阻断肾上腺素U-受体或兴奋M-胆碱受 体所致，而是与心肌的直接抑制有关；三七二醇皂苷能降低离体大鼠右心房的自发频率，对 大鼠和家兔心电图实验，证明三七二醇皂苷有负性频率作用，负性传导作用，其结果阐明了 三七二醇苷的抗心律失常作用。三七花治疗心律失常实验也验证了其对心悸胸闷等病症有 较好的疗效。
[0039] 3. 6清咽润喉作用
[0040] 利用三七花含片进行清咽润喉的人体试食试验，清咽功效的总有效率为80. 0%， 表明三七花含片对咽痛、咽痒、咽灼热、干咳、多言加重、咽部异物感、咽干涩和咳痰不爽等 症状均有改善作用，对咽部充血、水肿和咽后壁滤泡增生等症状也有一定疗效。
[0041] 3. 7护肝作用
[0042] 进行三七花含片对酒精性肝损伤保护作用的实验研究，研究结果显示，三七花含 片可显著降低酒精性肝损模型的大鼠肝组织中的丙二醛（MDA)及甘油三酯（TG)含量，提 高肝组织还原型谷胱甘肽（GSH)含量，可减轻酒精性肝损伤大鼠的肝组织脂肪变性，表明 三七花含片对酒精性肝损伤具有保护作用。
[0043] 3. 8抑制细胞增殖作用
[0044] 以去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖和钙超载为模型，发现三七 花总皂苷各剂量组均能够改善去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖的细胞 活力，这也提示了三七花总皂苷对血管平滑肌细胞增殖有抑制作用，这一作用可能与降低 细胞内钙离子浓度有关。
[0045] 4 结论
[0046] 三七花的化学成分和药理活性还在不断的探索研究中，对其分析方法还有待研 究。同时对于三七花的单体化合物制剂的研究，以及三七花代谢产物尤其是三七皂苷的代 谢研究都应给予高度的重视。三七花制品的研究应本着无农药残留、无重金属残留的原则， 这样才能将中药推向国际市场。
【发明内容】
：
[0047] 本发明的目的是提供一种三七花与三七的药物组合物。
[0048] 本发明的另一目的是提供该药物组合物的制备方法。
[0049] 本发明还提供了该药物组合物的质量检测方法。
[0050] 本发明还提供了该药物组合物的制药用途。
[0051] -种药物组合物是由以下重量份的原料制成的：三七花0. 5~10重量份，三七 0. 5~10重量份。
[0052] 该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：三七花0. 5重量份，三七10重 量份。
[0053] 该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：三七花10重量份，三七0. 5重 量份。
[0054] 该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：三七花5重量份，三七5重量 份。
[0055] 该药物组合物优选是由以下重量份的原料制成的：三七花3重量份，三七7重量 份。
[0056] 所述的药物组合物中三七花为三年生三七花，三七为三年生三七主根或三年生 三七剪口。
[0057] 所述的药物组合物中三年生三七花为超微粉碎后或破壁后的三年生三七花，三年 生三七主根为超微粉碎后或破壁后的三年生三七主根，三年生三七剪口为超微粉碎后或破 壁后的三年生三七剪口。
[0058] 所述的药物组合物中可以制备成片剂、丸剂、散剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂、 口服液。
[0059] 所述的药物组合物的制备方法如下：
[0060] (1)冷冻干燥：
[0061] ①三七冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液 在-30 °C~-40 °C下冷冻，维持5h~IOh后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-30 °C~-40 °C 下进行，时间为30h~120h ;将冷冻干燥后的三七粉碎，通过100目筛网过筛，得三七冷冻 干燥细粉；
[0062] ②三七花冷冻干燥细粉的制备：取鲜三七花，除杂，洗净，打碎匀浆，将匀浆液 在-30 °C~-40 °C下冷冻，维持5h~IOh后，进行冷冻干燥，冷冻干燥控制在-30 °C~-40 °C 下进行，时间为30h~120h ;将冷冻干燥后的三七花粉碎，通过100目筛网过筛，得三七花 冷冻干燥细粉；
[0063] (2)超微粉碎破壁：
[0064] ①三七破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1)得到的三七冷冻干燥细粉 进行超微粉碎，得粒径30 ym以下的三七破壁超微粉；
[0065] ②三七花破壁超微粉的制备：采用气流粉碎机对步骤（1)得到的三七花冷冻干燥 细粉进行超微粉碎，得粒径30 ym以下的三七花破壁超微粉；
[0066] (3)药物制剂的制备：将步骤⑵制备的三七破壁超微粉和三七花破壁超微粉混 合，采用中药学中的常规方法制剂成型。
[0067] 所述的药物组合物的制备方法中，步骤（1)中三七与三七花冷冻干燥的时间为 60h ~80h。
[0068] 所述的药物组合物的制备方法中，步骤（3)中将三七超微粉和三七花超微粉混 合，进行全粉末压片，制成片剂。
[0069] 所述的药物组合物的制备方法中，步骤（3)中将三七超微粉和三七花超微粉混 合，进行全粉末填充肠溶胶囊，制成肠溶硬胶囊剂。
[0070] 所述的药物组合物采用如下方法检测：采用高效液相色谱法测定：
[0071] (1)色谱条件：Kromasil(：18色谱柱；流动相为比例为70~90 :10~30乙腈-水； 检测波长200~210nm;流速0? 5~2.OmL?minS柱温20~40°C;进样量5~20yL。理 论塔板数按人参皂苷Rg^$计算应不低于4000 ;
[0072] (2)供试品溶液制备：取本发明药物粉末，精密称定，精密加入甲醇，称定重量，放 置过夜，置水浴上保持微沸，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤 液，即得；
[0073] (3)混合对照品溶液的制备：精密称取人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1，三七皂苷札对 照品和人参皂苷Re适量，加甲醇制成混合溶液，即得；
[0074] (4)测定：分别取对照品溶液和供试品溶液各5~20 y L进样，测定。
[0075] 所述的药物组合物优选采用如下方法检测：采用高效液相色谱法测定：
[0076] (1)色谱条件：Kromasil (：18色谱柱；流动相为比例为82 :18乙腈-水；检测波长 203nm ;流速ImL ? min %柱温30°C ;进样量10 y L。理论塔板数按人参阜苷Rg丨峰计算应不 低于4000 ;
[0077] (2)供试品溶液制备：取本发明药物粉末0. 5g，精密称定，精密加入甲醇50mL，称 定重量，放置过夜，置80°C水浴上保持微沸2h放冷，再