以包含生长因子及氨基酸为特征的功能性化妆品组合物的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及包含生长因子(Growth factors)及氨基酸(Amino acids)的功能性化妆品组合物，尤其涉及作为生长因子包含表皮生长因子(Epidermal growth factor)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor)及血管内皮细胞生长因子(Vascularendothelial growth factor)和作为氨基酸包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及丝氨酸(Serine)的具有优秀的改善皮肤皱纹、改善皮肤弹力、皮肤保湿、皮肤再生及皮肤防老化效果的功能性化妆品组合物。
【背景技术】
[0002]—般而言，人的皮肤随着年龄的增加，因承担皮肤屏障功能的脂质层的脂质组成和含量的变化，其功能急剧降低，从而降低皮肤的水分含量，导致皮肤干燥，而且，引起各种皮肤病变。
[0003]现代人的过度的疲劳和压力或因环境污染导致的紫外线量的增加和大气污染等生成反应性高的活性氧、自由基及过氧化物，而皮肤受上述物质的影响导致人体成分(蛋白质、核酸、细胞膜脂质等)的氧化或变性，而这成为皮肤老化的主要原因。
[0004]尤其是，构成皮肤结合组织的胶原蛋白(collagen)成分等被氧化而丧失其功能，从而使皮肤失去弹力，过度形成皮肤的皱纹，变成老人状皮肤。
[0005]因此，为防止及改善皮肤老化，叫元旦被成分的补充是非常重要的，而人们以此为目的进行含有胶原蛋白成分的改善皮肤老化用功能性材料的研究。
[0006]另外，生长因子(growth factor)是结合于位于细胞表面的受体(receptor)而刺激细胞的增殖和分化的蛋白质，因其功能非常多，所以刺激各种细胞的分裂，但在有些时候只作用于特异的细胞类型。生长因子是为细胞增殖的刺激的必需的成分，20年之前已展开研究，而结果表明可调节细胞分化、转移、增殖过程。
[0007]在上述生长因子中，表皮生长因子(Epidermal growth factor)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor)及血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelialgrowth factor)等作为改善皮肤老化的功能性材料得到广泛研究。
【发明内容】
[0008]技术课题
[0009]本发明的目的在于提供一种包含为皮肤细胞的再生的三种生长因子及胶原蛋白生物合成的氨基酸前驱体的具有优秀的改善皮肤皱纹、改善皮肤弹力、皮肤保湿、皮肤再生及皮肤防老化效果的功能性化妆品组合物及利用上述组合物的功能性化妆品。
[0010]技术方案
[0011]为达到上述目的，本发明提供一种功能性化妆品组合物，其特征在于:作为生长因子(Growth factors)包含表皮生长因子(Epidermal growth factor)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor)及血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelialgrowth factor)和作为氨基酸(Amino acids)包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及丝氨酸(Serine)。
[0012]较佳地，上述生长因子为人类生长因子。
[0013]较佳地，上述表皮生长因子、成纤维细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子在组合物中各以0.01?1.0ppm的浓度被包含。
[0014]较佳地，上述生长因子被30?200nm大小的纳米微脂囊捕集。
[0015]较佳地，上述脯氨酸、甘氨酸及丝氨酸在组合物中各以I?300ppm的浓度被包含。
[0016]较佳地，上述功能性从改善皮肤皱纹、改善皮肤弹力、皮肤保湿、皮肤再生及皮肤防老化构成的组中选择。
[0017]另外，本发明提供利用本发明的上述化妆品组合物的功能性化妆品。
[0018]较佳地，上述化妆品从柔软化妆水、收敛化妆水、营养化妆水、发毛营养剂、眼霜、营养霜、按摩膏、洁面霜、洁面泡沫、洁面水、粉、精华、精华露及面膜构成的组中选择。
[0019]有益效果
[0020]本发明的包含三种生长因子及胶原蛋白生物合成氨基酸前驱体的功能性化妆品组合物及包含该组合物的功能性化妆品具有优秀的改善皮肤皱纹、改善皮肤弹力、皮肤保湿、皮肤再生及皮肤防老化效果。
【附图说明】
[0021]图1a为在DMEM培养液中人类成纤维细胞之后的相差倒置显微镜照片(100倍率)；
[0022]图1b为在DMEM培养液中培养发育人类成纤维细胞的相差倒置显微镜照片(100倍率)；
[0023]图1c为在各添加人表皮生长因子、成纤维细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子的DMEM培养液中培养发育人类成纤维细胞的相差倒置显微镜照片(100倍率)；
[0024]图2为在各添加本发明的实施例1的人表皮生长因子、成纤维细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子的DMEM培养液中培养成纤维细胞并比较调查细胞增殖效果的结果曲线图；
[0025]图3为利用ELISA分析法调查在含有人表皮生长因子、成纤维细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子和作为胶原蛋白前驱物质的脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及丝氨酸(Serine)的DMEM培养液中人类成纤维细胞的胶原蛋白的合成量的结果曲线图。
【具体实施方式】
[0026]下面，对本发明的进行详细说明。
[0027]本发明的发明人在进行关于包含对皮肤细胞再生有积极意义的三种生长因子的化妆品组合物的研究的过程中发现，若在上述组合物中添加作为胶原蛋白生物合成的前驱物质的脯氨酸、甘氨酸及丝氨酸，则成纤维细胞的增殖和胶原蛋白的合成明显增加，以此完成了将其用作功能性化妆品组合物的发明。
[0028]因此，本发明提供一种功能性化妆品组合物，其特征在于:作为生长因子(Growth factors)包含表皮生长因子(Epidermal growth factor)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor)及血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growthfactor)和作为氨基酸(Amino acids)包含脯氨酸(proline)、甘氨酸(glycine)及丝氨酸(Serine)。
[0029]较佳地，上述三种生长因子为人类生长因子。较佳的具体示例为，上述生长因子可使用从利用加密人类表皮生长因子(Epidermal growth factor)、成纤维细胞生长因子(fibroblast growth factor)及血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growthfactor)的基因进行转型的大肠菌分离及提纯的生长因子。
[0030]较佳地，上述表皮生长因子、成纤维细胞生长因子及血管内皮细胞生长因子在组合物中各以0.01?1.0ppm的浓度被包含。若上述含量低于0.0lppm，则难以获得所希望的效果，而若上述含量高于1.0ppm,则将引起费用问题及因过量使用生长因子导致的人体安全性问题等。
[0031]较佳地，上述生长因子被30?200nm大小的纳米微脂囊捕集。本发明的生长因子成分存在皮肤渗透问题及长期放置于室温下是因失活而降低稳定性的问题，而这可通过被纳米微脂囊捕集来解决。较佳的具体示例为，上述纳米微脂囊可以卵磷脂为原料并利用微射流机制造，而本发明的生长因子可各自或一同捕集于卵磷脂粒子内。纳米微脂囊的制造方法是公知的，可采用任意方法。上述纳米微脂囊粒子为30?200nm为宜，若小于30nm，贝Ij因皮肤渗透过快而有可能引起皮肤副作用，而若大于200nm，则因难以渗透于皮肤而无法获得使用纳米微脂囊的效果。
[0032]较佳地，上述脯氨酸、甘氨酸及丝氨酸在组合物中各以I?300ppm的浓度被包含。本发明的上述脯氨酸、甘氨酸及丝氨酸是用于合成作为细胞外基质成分的胶原蛋白的氨基酸前驱体，与一同包含于组合物中的生长因子一同产生作用而用于细胞的胶原蛋白的合成。
[0033]上述功能性是指能改善皮肤状态的功能，例如有改善皮肤皱纹、改善皮肤弹力、皮肤保湿、皮肤再生及皮肤防老化等，但非限制。
[0034]如在下述实施例中所记载的那样，本发明的上述功能化妆品组合物对成纤维细胞的增殖及胶原蛋白的合成具有显著的效果，因此，可用于改善皮肤状态的功能性化妆品中。
[0035]因此，本发明提供利用本发明的上述化妆品组合物的功能性化妆品。
[0036]上述化妆品从柔软化妆水、收敛化妆水、营养化妆水、发毛营养剂、眼霜、营养霜、按摩膏、洁面霜、洁面泡沫、洁面水、粉、精华、精华露及面膜构成的组中选择，但非限制。
[0037]较佳的具体示例为，本发明的化妆品组合物可制作成本发明所属技术领域熟知的化妆品，而包含于上述换装品的成分除作为有效成分的三种生长因子和胶原蛋白前驱物质之外，还可包括化妆品中通常使用的成分。例如，可包含其他有效成分、稳定剂、溶解剂、维生素、颜料、香料等通常的辅助剂及载体。
[0038]较佳的具体示例为，本发明的化妆品可制作成本领域通常制作的任何剂型，例如溶液、混悬液、乳池液、膏、凝胶、霜、乳液、粉、香阜、洁面霜、油、粉末粉底、乳池液粉底、蜡状粉底、喷雾剂等。例如，在本发明的剂型为霜、乳液或凝胶时，可混合适当的油等油状成分、表面活性剂、水、增粘剂、稳定剂等制作成W/0或0/W形式的乳剂完成制作，而这样的制造方法是本领域技术人员熟知的。
[0039]下面，通过实验例对本发明进行更详细的说明。
[0040][实施例]
[0041]实施例1
[0042]在本实施例1中，在细胞培养液中添加人类生长因子(EGF、FGF、VEGF)之后，观察对皮肤成纤维细胞的增殖促进效果。
[0043](I)从人体组织分离成纤维细胞
[0044]取人腹部皮肤组织放入经灭菌的1cm beaker中，并利用相同皮肤(I:1)的磷酸化缓冲溶液(D-PBS)清洗。在Clean bench中投入20ml的D-PBS，用一只手利用forces抓住组织并利用手术刀将皮肤组织切割成2_以下的大小。回收切割的组织和溶液并以20ml为一份放入多个50ml离心分离用conical tubes。添加相同量的0.15% collagenasetype-Ι溶液(Invitrogen)并在37°C下反应1-2小时。用D-PBS清洗之后，在400xg下离心分离5分钟