基）乙基衍生物（IV)的合成
[0026] 将化合物II(209mg，0. 5mmol)溶于20mL乙腈当中，向其中加入无水碳酸钾 (345mg，2. 5mmol)，鹏化钾（84mg，0. 5mmol)和 1，2, 3-三氮挫（2760mg，40mmol)，混合物加热 回流4h。反应结束后将反应液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有机相。 依次用水和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂 得到产物粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮=100:0.5,v/v)， 收集黄色集中洗脱带即得到化合物IV的黄色粉末（134. 3mg，66% )。
[0027]NMR(500MHz,Chloroform-dl)δ8. 37 (s, 1Η), 7. 95 (s, 1H), 6. 35 (s, 1H), 6. 14 (s, 1H), 5. 35 (s, 1H), 4. 13 (s, 1H), 4. 42 (d,J= 16. 4Hz, 3H), 3. 71 (s, 1H), 2. 13 (s, 1H), 2. 05 (s, 1H) ,1-81 (s, 1H), 1. 63 (s, 1H), 1. 30 (s, 3H), 1. 08 (s, 6H), 0. 97 (s, 6H).
[0028]13CNMR(125MHz,DMS0-d6)δ188. 09 (s)，183. 61 (s)，154. 18 (s)，147. 26 (s)，139. 7 2 (s), 136. 40 (s), 136. 32 (s), 134. 52 (s), 130. 95 (s), 127. 99 (s), 120. 16 (s), 118. 62 (s), 67 .14 (s), 46. 27 (s), 45. 18 (s), 37. 69 (s), 33. 32 (s), 26. 14 (s), 25. 01 (s), 24. 41 (s), 23. 23(s ),23. 06(s), 22. 47 (s).
[0029]HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdforC24H30N303:408. 2287 ;found:408. 2282。
[0030]
[0031] 实施例5组合物对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的影响
[0032] 1. 1 材料
[0033] 贝那普利，北京诺华制药有限公司生产；羟脯氨酸（HYP)试剂盒，南京建成生物公 司；纤维连结蛋白（FN)试剂盒购自上海生物制品所。
[0034] 组合物的制备：将研磨之后过200目网的85mg化合物III的粉末和研磨之后过 200目网的15mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用涡轮搅拌仪混合即得到100mg组 合物，使用时用水溶解这l〇〇mg的组合物即得到组合物的溶液。
[0035] 实验动物：普通级Wistar大鼠，雄性，体重150-200g，SD大鼠。
[0036] 1. 2试验方法与结果
[0037] 大鼠60只，随机分6组，即假手术组、模型组、苯那普利灌胃10mg/kg组、组合物 灌胃lOmg/kg组、化合物III灌胃10mg/kg组、化合物IV灌胃10mg/kg组，动物喂养1周， 各大鼠以10%水合氯醛3.OmL/kg腹腔注射麻醉后，将大鼠右侧卧位固定与手术台上，剪毛 后用碘酒、75%酒精消毒手术区，行左侧腹切口，逐层切开皮肤、肌肉及腹壁各层，暴露并分 离左侧输尿管，假手术组仅切开腹腔并游离左侧输尿管，但不结扎和剪断，其他各组大鼠用 4-0丝线结扎两道，上一道结扎点位于左肾下极水平，然后在两道结扎点剪断输尿管，逐层 缝合，术后10天10%水合氯醛麻醉后处死各组动物，取血，按纤维连结蛋白测定说明测定 说明纤维联接蛋白（FN)。生理盐水反复灌洗后留取左侧肾脏，肾组织经4%的多聚甲醛缓 冲液固定。切取适量肾组织，按羟脯氨酸试剂盒测定说明测定羟脯氨酸。
[0038] 常规病理学检①肉眼观察：假手术组肾脏颜色鲜红，表明光滑，包膜光泽，无粘连。 模型对照组肾脏体积增大，颜色苍白，表明呈颗粒状，类似人体大白肾，少数区域肾包膜粘 连。②光镜检查：假手术组肾单位结果清晰，肾小球囊无扩张或炎细胞浸润。模型对照组大 片肾小管坏死，肾间质纤维细胞增生，肾小管扩张，内有大量棕黄色遮光物质或坏死脱落的 上皮细胞，肾小球数目减少，部分肾小球纤维化并与包曼氏囊壁粘连，囊腔消失。组合物给 药组病变与模型对照组类似，但均有不同程度的形态学改善，与模型对照组比较有明显差 异。而化合物III给药组和化合物IV给药组与模型对照组无显著性差异。
[0039] 表1组合物对单侧输尿管结扎大鼠肾间质纤维化的影响
[0040]
[0041] *ρ〈0· 05,与模型组相比较
[0042] 对各组FN、HYP进行Τ检验。结果见表1，组合物灌胃10mg/kg显著降低FN、HYP 水平（与模型对照组比较，P〈〇.〇5);而化合物III和化合物IV灌胃10mg/kg未能显著降低 FN、HYP水平。
[0043] 结论：组合物能够显著降低肾间质纤维化FN、HYP水平的升高，抑制肾间质纤维 化，可以用来制备抗肾纤维化药物。化合物III和化合物IV不能够显著降低肾间质纤维化 FN、HYP水平的升高，不能抑制肾间质纤维化，不可以用来制备抗肾纤维化药物。
[0044] 实施例6本发明所涉及组合物片剂的制备
[0045] 取2克组合物，加入制备片剂的常规辅料18克，混匀，常规压片机制成100片。
[0046] 实施例7本发明所涉及组合物胶囊的制备
[0047] 取2克组合物，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉18克，混匀，装胶囊制成100 粒。
【主权项】
1. 一种组合物，其特征为该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合物中化合物 III和化合物IV的质量百分数分别为85%和15%，2. 如权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征为：将化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照质量百分数分别为85%和15%充分混合。3. -种如权利要求1所述的组合物在治疗肾纤维化药物中的应用。4. 如权利要求3所述的组合物在治疗肾纤维化药物中的应用，其特征为：所述肾纤维 化为肾间质纤维化。5. 如权利要求4所述的组合物在治疗肾纤维化药物中的应用，其特征为：所述肾间质 纤维化为单侧输尿管阻塞形成的肾间质纤维化。6. 如权利要求3所述的组合物在治疗肾纤维化药物中的应用，其特征为：所述组合物 降低肾纤维化引起的纤维连结蛋白FN的升高。
【专利摘要】本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物、制备方法及其在制备预防或治疗肾纤维化药物上的用途。本发明公开了一种组合物及其制备方法。药理学实验表明，本发明的组合物具有预防或治疗肾纤维化的作用，具有开发预防或治疗肾纤维化药物的价值。
【IPC分类】A61K31/4166, A61P13/12, A61K31/4192
【公开号】CN105250272
【申请号】CN201510761679
【发明人】王卓婷
【申请人】南京赋海澳赛医药科技有限公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月10日