Cyanogramide在制备抗结核菌药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化合物Cyanogramide的新用途，尤其涉及Cyanogramide在制备抗结 核菌药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 近年来全球结核病的发病呈增高趋势，据世界卫生组织（WHO)估计，目前全球受 结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis，MTB)感染的人口占世界人口的三分之一，其 中5~10%的感染者成为结核病患者。我国每年出现活动性肺结核病人130万例，其中传 染性肺结核约60万例，其中传染性肺结核约60万例，是全球结核病高负担国家之一。
[0003]自抗结核药物相继问世，使结核病的治疗起到划时代的变化。然而由于结核病患 者的治疗管理尚不十分规范，不规则化疗，滥用抗结核药物，使结核病耐药情况日益严重， 且耐药性的变化更趋向于多种药物同时耐药，这给结核病的防治工作造成极大困难。因此 寻找新的抗结核药物，尤其是抗多药耐药性的抗结核药物对保护人民身体健康，具有重要 意义。
[0004] 本发明涉及的化合物Cyanogramide是一个2014年发表（PengFu,et al.,CyanogramidewithaNewSpiro[indolinone-pyrroloimidazole]Skeletonfrom Actinoalloteichuscyanogriseus.OrganicLetters，2014, 16,3708-3711·)的新化合 物，该化合物拥有全新的骨架类型，涉及到抗肿瘤作用（PengFu,etal.,Cyanogramide withaNewSpiro[indolinone-pyrroloimidazole]SkeletonfromActinoalloteichus cyanogriseus.OrganicLetters, 2014, 16, 3708-3711.)，对于本发明涉及的Cyanogramide 在制备抗结核菌药物中的用途属于首次公开，由于属于全新的结构类型，而且其对于抗结 核菌活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特 点，同时用于抗结核菌显然具有显著的进步。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于根据现有Cyanogramide研究中未发现其具有抗结核菌活性的 报道的现状，提供了Cyanogramide在制备抗结核菌药物中的应用。
[0006] 所述化合物Cyanogramide,结构如式（I)所示：
[0007]
[0008] 本发明目的通过以下技术方案予以实现：
[0009] 发明人先用卡介苗做应试菌株，采用纸片扩散法对Cyanogramide的抗结核菌活 性进行初步试验，根据初步试验的结果，本发明再用固体培养基稀释法测定了该化合物对 卡介苗、结核分枝杆菌标准株H37Rv株和耐多药结核分枝杆菌（MDRMTB)三种结核菌的最 小抑菌浓度，实验结果证实Cyanogramide具有很强的抗结核菌和抗耐药性结核菌活性，可 作为治疗结核菌感染疾病的先导化合物，也可用于制备治疗结核病药物。
[0010] 与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
[0011] 1.本发明提供了一种可用于抗结核病治疗的Cyanogramide，从而扩大了抗结核 菌药物的种类；
[0012] 2.针对目前结核病发病率高、结核杆菌多重耐药菌株及人体免疫缺陷病毒双重 感染的出现，使结核病发病率和死亡率呈上升趋势的现状，本发明发现Cyanogramide具有 抗结核菌和耐药性结核菌活性的特点，可用于抗结核药物的制备，具有非常广阔的应用前 景；
[0013] 3.本发明涉及的Cyanogramide在制备治疗抗结核菌药物中的用途属于首次公 开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于结核菌抑制活性强得意想不到，不存在 由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于结核菌感染的防治 显然具有显著的进步。
【具体实施方式】
[0014] 本发明所涉及化合物Cyanogramide的制备方法参见文献（PengFu,et al.,CyanogramidewithaNewSpiro[indolinone-pyrroloimidazole]Skeletonfrom Actinoalloteichuscyanogriseus.OrganicLetters, 2014, 16, 3708-3711.)
[0015] 以下通过实施例对本发明作进一步详细的说明，但本发明的保护范围不受具体实 施例的任何限制，而是由权利要求加以限定。
[0016] 实施例1 :本发明所涉及化合物Cyanogramide片剂的制备：
[0017] 取20克化合物Cyanogramide,加入制备片剂的常规辅料180克，混匀，常规压片 机制成1000片。
[0018] 实施例2 :本发明所涉及化合物Cyanogramide胶囊剂的制备：
[0019] 取20克化合物Cyanogramide，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉180克，混勾，装 胶囊制成1〇〇〇粒。
[0020] 下面通过药效学实验来进一步说明其药物活性。
[0021] 实验例1固体培养基稀释法测定Cyanogramide抗卡介苗（BCG)绝对浓度
[0022] 从斜面上刮取卡介苗培养物，加入到3mlMiddlebrook7H9肉汤培养基中， 加入少量玻璃珠，旋紧试管盖，于漩涡振荡器上剧烈振动研磨，与标准麦氏比浊管 (MacFarlandNo. 1)比池，即配成lmg/ml的卡介苗（BCG)菌悬液。将Cyanogramide用DMS0 配成高浓度的原液，用含5 %的吐温-80无菌超纯水稀释原液至所需浓度，将稀释好的 Cyanogramide按所需剂量加入到4mlMiddlebrook7Hll琼脂培养基（该培养基已经121°C 高压蒸汽灭菌15分钟、冷却至50~55°C)，混勾，制成含Cyanogramide，浓度分别为6.Oug/ ml，4. 0ug/ml，3. 0ug/ml，2. 0ug/ml，1. 5ug/ml，1. 0ug/ml，0· 75ug/ml，0· 5ug/ml等浓度的斜 面培养基。
[0023] 将浓度为lmg/ml的卡介苗（BCG)菌悬液用接种环蘸取数环，分别接种于含 Cyanogramide系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上，置于37°C培养4~8周，观察 实验结果，结果如表1所示。
[0024] 本实施例中所用Middlebrook7H9肉汤培养基和Middlebrook7Hll琼脂培养基为 本领域技术人员进行结核菌培养时的常用培养基，其配方采用常规配方即可。
[0025] 实验例2固体培养基稀释法测定Cyanogramide抗结核分枝杆菌标准株H37Rv株 绝对浓度
[0026] 从斜面上刮取结核分枝杆菌标准株H37Rv株培养物，加入到3mlMiddlebrook7H9 肉汤培养基中，加入少量玻璃珠，旋紧试管盖，于漩涡振荡器上剧烈振动研磨，与标准麦氏 比池管（MacFarlandNo. 1)比池，即配成lmg/ml的H37Rv株菌悬液。
[0027] 将Cyanogramide分别用DMS0配成高浓度的原液，用含5%的吐温-80无菌超纯水 稀释原液至所需浓度，将稀释好的Cyanogramide按所需剂量加入到4mlMiddlebrook7Hll 琼脂培养基（该培养基已经121°C高压蒸汽灭菌15分钟、冷却至50~55°C)，混匀，制成含 Cyanogramide，浓度分别为 6. 0ug/ml，4. 0ug/ml，3. 0ug/ml，2. 0ug/ml，1. 5ug/ml，1. 0ug/ml， 0. 75ug/ml，0. 5ug/ml等浓度的斜面培养基。
[0028] 将浓度为lmg/ml的H37Rv株菌悬液用接种环蘸取数环，分别接种于含 Cyanogramide系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上，置于37°C培养4~8周，观察 实验结果，结果如表1所示。
[0029] 实验例3固体培养基稀释法测定Cyanogramide抗结核分支杆菌临床分离耐ISRE MTB株绝对浓度
[0030] 从斜面上刮取结核分枝杆菌临床分离耐ISREMTB株（耐异烟肼、链霉素、利福 平、乙胺丁醇结核分枝杆菌临床分离柱）培养物，加入到3mlMiddlebrook7H9肉汤培养 基中，加入少量玻璃珠，旋紧试管盖，于漩涡振荡器上剧烈振动研磨，与标准麦氏比浊管 (MacFarlandNo. 1)比池，即配成lmg/ml的菌悬液。
[0031] 将Cyanogramide分别用DMS0配成高浓度的原液，用含5%的吐温-80无菌超纯水 稀释原液至所需浓度，将稀释好的Cyanogramide按所需剂量加入到4mlMiddlebrook7Hll 琼脂培养基（该培养基已经121°C高压蒸汽灭菌15分钟、冷却至50~55°C)，混匀，制成含 Cyanogramide，浓度分别为 6. 0ug/ml，4. 0ug/ml，3. 0ug/ml，2. 0ug/ml，1. 5ug/ml，1. 0ug/ml， 0. 75ug/ml，0. 5ug/ml等浓度的斜面培养基。
[0032] 将浓度为lmg/ml的结核分枝杆菌临床分离耐ISREMTB株菌悬液用接种环蘸取数 环，分别接种于含Cyanogramide系列浓度的培养基和空白对照培养基斜面上，置于37°C培 养4~8周，观察实验结果，结果如表1所不。
[0033] 表1固体培养基稀释法测定Cyanogramide抗结核菌绝对浓度结果
[0034]
[0035] 结论：Cyanogramide具有很强的抗结核菌和抗耐药性结核菌活性，可作为治疗结 核菌感染疾病的先导化合物，也可用于制备治疗结核病药物。
【主权项】
1.Cyanogramide在制备抗结核菌药物中的应用，所述化合物Cyanogramide结构如式 (I)所示： 式:（I)。 1.Cyanogramide在制备抗结核菌药物中的应用，所述化合物Cyanogramide结构如式(I)所示：
【专利摘要】本发明公开了Cyanogramide在制备抗结核菌药物中的应用。本发明针对当前结核病发病率高、结核杆菌多重耐药菌株的出现，使结核病发病率和死亡率呈上升趋势的现状，发现Cyanogramide具有显著抑制结核菌的活性，具有很好的应用前景。本发明涉及的Cyanogramide在制备治疗抗结核菌药物中的用途属于首次公开，由于骨架类型属于全新的骨架类型，而且其对于结核菌抑制活性强得意想不到，不存在由其他化合物给出任何启示的可能，具备突出的实质性特点，同时用于结核菌感染的防治显然具有显著的进步。
【IPC分类】A61P31/06, A61K31/4188
【公开号】CN105250270
【申请号】CN201510761826
【发明人】田丽华
【申请人】淄博齐鼎立专利信息咨询有限公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月11日