含灵芝和银杏叶的中药组合物用于中风后促进康复的应用_3

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累计电击次数来表示(给药第14d) ;24h 后(末次给药后lh),连续电击10次,以其中正确反应次数作为记忆成绩,接着用激光多谱 勒探头测定局部脑血流量。
[0151] 然后断头处死,取出损伤侧脑于10%甲醛溶液中固定,由病理专业人员制片,HE 染色,并阅片,观察大脑皮质海马区细胞形态学改变,根据病变程度分别记为
[0152] 表11对永性脑缺血大鼠死亡率的影响(=?±$)
[0154] 各组死亡率如上表所示。随银灵通剂量升高,大鼠死亡率呈逐渐降低趋势。
[0155] 表12对永久性脑缺血大鼠学习记忆功能的影响(1赵)
[0157] #p〈0. 05, ##p〈0. 01 模型对照组 vs.伪手术组;*p〈0. 05, #p〈0.0 lvs.模型对照组; ^〈0.05,31〈0.01银¥8.银杏叶片组;\〈0.05,%〈0.01¥8.阿司匹林组
[0158] 由表12可见,与伪手术组相比,模型组累计电击次数和正确反应次数均极显著性 增加(p〈0. 01),银灵通低剂量组累计电击次数极显著性增加(p〈0. 01);与模型组相比,阳 性药1银杏叶片、阳性药2阿司匹林、银灵通高剂量和中剂量组累计电击次数均显著性减少 (p〈0. 05),银杏叶片组、阿司匹林、银灵通中剂量组能显著性增加正确反应次数(p〈0. 05), 银灵通高剂量组能极显著性增加正确反应次数(P〈〇. 01),其他各组比较无显著性差异 (p>0. 05)。银灵通各剂量组与阳性药组比较均无显著性差异(p>0. 05)。
[0159] 表13对永性脑缺血大鼠局部脑血流量的影响?-知)
[0161] #p〈0. 05, ##p〈0. 01 模型对照组 vs.伪手术组;*p〈0. 05, #p〈0.0 lvs.模型对照组; ap〈0. 05, aap〈0.0 lvs.银杏叶片组;bp〈0. 05, bbp〈0.0 lvs.阿司匹林组
[0162] 由表13可见,模型对照组与伪手术组相比,模型对照组局部脑血流量极显著性降 低(P〈〇. 01)。与模型对照组相比,阿司匹林、复方银灵通高剂量组15d后局部脑血流量均极 显著性升高(P〈〇. 01);银杏叶片组和银灵通中剂量组局部脑血流量显著性升高(P〈〇. 05); 其他各组与模型组相比没有明显差别(P > 0. 05)。
[0163] 与阿司匹林组相比,银灵通低剂量组局部脑血流量极显著性降低(p〈0. 01);银灵 通其他各剂量组与阳性药组比较均无显著性差异(P>〇. 05)。
[0164] 对脑组织病理学的影响
[0165] 标本分为7组,分别为伪手术组、模型组、复方银灵通胶囊高、中和低剂量组、阳性 药1组和阳性药2组,每组8例。检测结果如下所述:
[0166] 伪手术组:大部分例大脑皮质层和海马区结构清楚,完整,神经细胞排列整齐,细 胞核膜清楚,核仁明显,染色质丰富,7号和8号大脑皮质浅层见局灶性的轻微的梗死,梗死 区嗜伊红淡染,细胞形态尚正常。
[0167] 模型组:右侧大脑皮质结构紊乱,见不同程度的梗死区,梗死区嗜伊红淡染,部分 梗死区中心神经元、神经胶质细胞和神经纤维坏死,结构破坏,组织结构疏松呈筛网状,部 分梗死区细胞形态尚完好,组织结构疏松呈筛网状,个别的梗死灶周边有炎性细胞浸润。个 别例动脉管壁坏死,管腔见血栓,管周见脑组织水肿,疏松,且有炎细胞浸润。
[0168] 阳性药1银杏叶片组:与模型组大脑病理特点相似,大部分例右侧大脑皮质,1例 右侧海马区脑组织结构紊乱,见不同程度的梗死区,梗死区嗜伊红淡染,部分梗死区中心神 经元、神经胶质细胞和神经纤维坏死,结构破坏,组织结构疏松呈筛网状,部分梗死区细胞 形态尚完好,组织结构疏松呈筛网状,个别的梗死灶周边有炎性细胞浸润。部分例动脉管 壁出血、坏死且炎细胞浸润,管腔见大的血栓,管周见脑组织水肿,疏松,且有炎细胞浸润。
[0169] 阳性药2阿司匹林组:阳性药2组大脑与模型组大脑病理特点相似,只是程度较 轻,4例右侧大脑皮质和1例海马区见程度较轻的梗死区,梗死区嗜伊红淡染,组织结构疏 松,个别的梗死灶周边有炎性细胞浸润。部分例动脉壁出血、坏死,管壁和管周炎细胞浸润, 2例管腔见血栓。
[0170] 复方银灵通胶囊高剂量组:高剂量组大脑与模型组大脑病理特点相似,6例右侧 大脑皮质和2例海马区见程度较轻的梗死区,梗死区嗜伊红淡染,组织结构疏松,个别的梗 死灶周边有炎性细胞浸润。部分例动脉管壁坏死,管周见脑组织水肿,疏松,且有炎细胞浸 润。
[0171] 复方银灵通胶囊中剂量组:低剂量组大脑与模型组大脑病理特点相似,大部分例 右侧大脑皮质和海马区见程度较轻的梗死区,梗死区嗜伊红淡染,组织结构疏松,个别的梗 死灶周边有炎性细胞浸润。部分例动脉壁出血、坏死,管壁和管周炎细胞浸润。
[0172] 复方银灵通胶囊低剂量组:大部分例右侧大脑皮质结构紊乱,见不同程度的梗死 区,梗死区嗜伊红淡染,部分梗死区中心神经元、神经胶质细胞和神经纤维坏死,结构破坏, 组织结构疏松呈筛网状,部分梗死区细胞形态尚完好,组织结构疏松呈筛网状,个别的梗死 灶周边有炎性细胞浸润。个别例动脉管壁及管周见出血,炎细胞浸润。
[0173] 脑切片病理学染色结果显示,与伪手术组比较,模型组大脑见明显的梗死区。各组 梗死病变均分由高到低如下:模型组〉低剂量组〉银杏叶片组〉中剂量组〉高剂量组〉阿 司匹林组〉伪手术组。
[0174] 3、复方银灵通胶囊对PAF、ADP诱导家兔血小板聚集功能的作用(体内实验)[9]
[0175] 3.1组别与剂量
[0176] 取雄性新西兰家兔48只,体重2~2. 5kg,按随机分为6组,每组8只。分别为复方 银灵通胶囊 3 个剂量组,分别为:0. 6g/kg (0. 6g/ml),0. 3g/kg (0. 3g/ml),0. 15g/kg (0. 15g/ ml)。阳性对照药I银杏叶片组2mg/kg(2mg/ml),阳性对照药2阿司匹林组15mg/kg(15mg/ 1111)和阴性对照组给予等容积的0.5%01(^^,给药容积为11111/1^。每天灌胃(18)给药一 次,连续给药7天,首次给药剂量为维持量的3倍,
[0177] 3. 2 取血
[0178] 末次给药后lh,将家兔仰卧位固定于家兔手术台上剪去颈部兔毛,皮下注射1% 盐酸普鲁卡因注射液局部浸润麻醉。剪开颈部皮肤约3cm,用止血钳进行钝性分离,暴露支 气管后分离出颈总动脉。细线结扎颈总动脉远心端,再用动脉夹夹闭近心端,进行血管插管 后固定。然后打开动脉夹,将血液放入含有3. 8%梓檬酸钠的试管中,使血液与3. 8%梓檬 酸钠容积之比为9:1。
[0179] 3. 3制备富血小板血浆(RPR)和贫血小板血浆(PPP)
[0180] 将上述制备的抗凝血液混勾后,500rpm离心10min后吸取上层血衆即得PRP ;将剩 余血液3500rpm离心10min后吸取上层血衆即得PPP。
[0181] 3. 4测定血小板聚集率[11]
[0182] 先取300 μ1 PPP加入测试杯中,然后放入测试孔,按"PPP"键进行定标。然后取 270 μ I PRP加入测试杯中,在37°C预温槽中预热3min后放入测试孔,按"开始"键时立即 加入诱导剂30 μ 1 (两种诱导剂的浓度分别为PAF7. 072 μ mol/L、ADP300mmol/L),以测定最 大聚集率。每次测定4个通道,以求得平均最大聚集率。
[0183] 按下列公式计算血小板聚集抑制率:
[0185] 3. 5 结果
[0186] 3. 5. 1复方银灵通胶囊对PAF诱导家兔体外血小板聚集率的影响
[0187] 表14体内给复方银灵通胶囊对PAF诱导家兔体外血小板聚集率的影响丨无
[0189] *ρ〈0· 05, **ρ〈0· Olvs.空白对照组;ap〈0. 05, aap〈0.0 lvs.银杏叶片组;bp〈0. 05, bbp〈0.01vs.阿司匹林组
[0190] 由表14可见,与空白对照组相比,银杏叶片组能显著性抑制家兔体外血小板聚 集(p〈0. 05),银灵通高、中、低三个剂量组对PAF诱导的家兔血小板聚集有抑制作用,并 随剂量升高,其聚集抑制率呈剂量依赖性升高,其中银灵通高剂量组最大血小板聚集率 与空白对照组比较有显著性差异(P〈〇. 05),阿司匹林组与空白对照组比较无显著性差异 (p>0. 05)。
[0191] 3. 5. 2复方银灵通胶囊对ADP诱导家兔体外血小板聚集率的影响
[0192] 表15体内给复方银灵通胶囊对ADP诱导家兔体外血小板聚集率的影响(Z±S)

[0195] *ρ〈0· 05, #ρ〈0· Olvs.空白对照组;ap〈0. 05, aap〈0.0 lvs.银杏叶片组;bp〈0. 05, bbp〈0.01vs.阿司匹林组
[0196] 由表15可见,与空白对照组相比,银杏叶片组和阿司匹林组均能显著性抑制ADP 诱导的家兔体外血小板聚集(P〈〇. 05),银灵通高、中、低三个剂量组对ADP诱导的家兔血小 板聚集有抑制作用,并随剂量升高,其聚集抑制率呈剂量依赖性升高,其中银灵通高剂量组 最大血小板聚集率与空白对照组比较有极显著性差异(P〈〇. 01),银灵通中剂量组与空白对 照组相比有显著性差异(P〈〇. 05)。
[0197] 与阿司匹林组相比,银灵通高剂量组能显著性抑制ADP诱导的家兔体外血小板聚 集(p〈0. 05);银灵通其他各剂量组与阳性药组比较均无显著性差异(p>0. 05)。
[0198] 4、复方银灵通胶囊对血栓形成的抑制作用
[0199] 4. 1对大鼠颈动-静脉旁路丝线上血栓形成的影响
[0200] 取雄性SD大鼠60只,体重250~280g,将动物随机分为6组,每组10只,复方银 灵通胶囊 3 个剂量组,分别为:1. 2g/kg(0. 24g/ml),0. 6g/kg(0. 12g/ml),0. 3g/kg(0. 06g/ ml)。阳性对照药银杏叶片组4mg/kg(0· 8mg/ml),阳性对照药2阿司匹林组30mg/kg(6mg/ ml)。阴性对照组(给以等容积的0. 5% CMC-Na)。各组大鼠每日灌胃给药1次,连续给药 7日,给药容积为0· 5ml/100g。
[0201] 末次给药后lh,大鼠用3 %水合氯醛溶液lml/lOOg ip麻醉,分离右颈总动脉及左 颈外静脉。在三段聚乙烯管中放入一根长约6cm的4号手术丝线。将生理盐水充满聚乙烯 管腔。先将管的一端插入左颈外静脉后,将管的另一端插入右颈总动脉。手术完成后开放 血流,则血液从右颈总动脉流经聚乙烯管,返回颈外静脉。开放血流15min后中断血流。迅 速取出带血块丝线称重得总重量,总重量减去丝线重即为血栓湿重。将丝线70°C烘干,取出 称重,总重量减去丝线重即为血栓干重。按下列公式计算抑制率 [12'13]:
[0204] 结果如下表所示。
[0205] 表16银灵通胶囊对大鼠颈动一静脉旁路丝线上血栓形成的影响(-Y ±S,n=10)
[0206]
[0207] *ρ〈0· 05**ρ〈0· 01 与空白对照组比较;ap〈0. 05,aap〈0.0 lvs.银杏叶片组;bp〈0. 05, bbp〈0.01vs.阿司匹林组
[0208] 由表16可见,与阴性对照组相比,银杏叶片、银灵通中、低剂量组能显著性降低 血栓湿重(P〈〇. 05),阿司匹林组、银灵通高剂量组能极显著性降低血栓湿重(p〈0. 01),银 灵通高、中、低剂量对血栓湿重抑制率呈逐渐降低的趋势;银杏叶片、阿司匹林、银灵通高 剂量组均能极显著性降低血栓干重(P〈〇. 01),银灵通中、低剂量能显著性降低血栓干重 (p〈0. 05),银灵通高、中、低剂量对血栓干重抑制率呈逐渐降低的趋势。
[0209] 与阿司匹林组相比,银灵通中、低剂量组血栓干重均显著性增加(p〈0. 05);银灵 通其他各剂量组与阳性药组比较均无显著性差异(P>〇. 05)。
[0210] 4. 2对ADP致小鼠肺血栓形成的影响[14'15]
[0211] 取健康ICR小鼠60只,雌雄各半,体重19~22g,随机均分为5组,每组10只: 复方银灵通胶囊 3 个剂量组,分别为:2. 4g/kg (0. 12g/ml),I. 2g/kg (0. 06g/ml),0. 6g/ kg(0. 03g/ml)。阳性对照药I银杏叶片组8mg/kg(0. 4mg/ml),阳性对照药2阿司匹林组 60mg/kg (3mg/ml)。阴性对照组(给以等容积的0· 5 % CMC-Na)。各组每日灌胃给药1次, 连续给药7日,给药容积为0. 4ml/20g。末次给药后lh,按200mg/kg尾静脉注射ADP,形成 急性肺血栓(小鼠呼吸喘促、不能自主活动),记录注射ADP后至小鼠恢复自主活动的时间。
[0212] 表17银灵通胶囊对ADP诱发小鼠急性肺血栓形成的影响(n=l〇)

[0215] *p〈0. 05#p〈0. 01与空白对照组比较;ap〈0. 05, aap〈0. 01银灵通组vs.银杏叶片 组;bp〈〇. 05, bbp〈0. 01银灵通组vs.阿司匹林组
[0216] 由表17可见,与阴性对照组相比,银杏叶片组能极显著性缩短ADP致小鼠肺栓塞 恢复自主活动时间(P〈〇. 01),银灵通高、中、低剂量均能显著性缩短ADP致小鼠肺栓塞恢复 自主活动时间(P〈〇. 05)。
[0217] 与银杏叶片组相比,银灵通高剂量组恢复自主活动时间显著性延长(p〈0. 05),银 灵通中、低剂量组恢复自主活动时间极显著性延长(P〈〇. 01);银灵通其他各剂量组与阳性 药组比较均无显著性差异(P>〇. 05)。
[0218] 5、复方银灵通胶囊对小鼠出血时间和凝血时间的影响
[0219] 5. 1对小鼠出血时间的影响
[0220] 取健康ICR小鼠60只,雌雄各半,体重19~22g,随机均分为6组,每组10只: 复方银灵通胶囊 3 个剂量组,分别为:2. 4g/kg (0. 12g/ml),I. 2g/kg (0. 06g/ml),0. 6g/ kg(0. 03g/ml)。阳性对照药I银杏叶片组8mg/kg(0. 4mg/ml),阳性对照药2阿司匹林组 60mg/kg(3mg/ml)。阴性对照组(给以等容积的0· 5% CMC-Na)。各组大鼠每日灌胃给药1 次,连续给药7日,给药容积为0. 4ml/20g。
[0221] 末次给药Ih后,将小鼠固定,以毫米尺测量鼠尾长度并标记,然后分别以利剪在 小鼠尾尖3mm处横断,待血液自行溢出,开始计时,每隔30s用滤纸吸去血滴1次,直至血液 自然停止(滤纸吸时无血)为止,即为出血时间 [16]。
[0222] 表18复方银灵通胶囊对小鼠断尾后出血时间的影响n=10)
[0224] *ρ〈0· 05#ρ〈0· Olvs.空
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