一种中风后促进康复的中药组合物及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于中药技术领域，具体涉及一种中风后促进康复的中药组合物及其制备 方法。
【背景技术】
[0002] 中风，中医病名，有外风和内风之分，外风因感受外邪（风邪）所致，在《伤寒论》名 曰中风（亦称桂枝汤证）；内风属内伤病证，又称类中风，脑卒中，卒中，风痱。现代一般称 中风多指内伤病证的类中风，多因气血逆乱、脑脉痹阻或血溢于脑所致。以突然昏仆、半身 不遂、肢体麻木、舌蹇不语，口舌歪斜，偏身麻木等为主要表现的脑神疾病，并具有起病急、 变化快，如风邪善行数变的特点。
[0003] 发明人经实验探索发现一种有效用于中风后促进康复的含灵芝和银杏叶的中药 组合物。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种中风后促进康复的中药组合物。
[0005] 本发明的另一目的是提供该中药组合物的制备方法。
[0006] 本发明的目的是通过以下方式实现的：
[0007] -种中风后促进康复的中药组合物，其特征在于该组合物由以下重量份的组分制 成：
[0008] 灵芝300-400重量份 银杏叶300-400重量份 淮牛膝200-290重量份
[0009] 玄参200-290重量份 石菖蒲150-190重量份 天麻100_140重量份
[0010] 上述组合物优选由以下组分制成：
[0011] 灵芝300-350重量份 银杏叶300-350重量份 淮牛膝250-290重量份
[0012] 玄参250-290重量份 石菖蒲150-180重量份 天麻110-140重量份
[0013] 上述组合物最优选由以下组分制成：
[0014] 灵芝333重量份 银杏叶333重量份 淮牛膝278重量份
[0015] 玄参278重量份 石菖蒲167重量份 天麻125重量份
[0016] 上述中风后促进康复的中药组合物可与药学上允许的辅料制成药学规定的剂型。
[0017] 所述的剂型优选为胶囊剂。
[0018] 中风后遗症表现为半身不遂，肢体无力，口舌歪斜，言语謇涩，智能减退，口角流 涎。
[0019] 所述的促进中风后功能恢复的中药组合物的制备方法包括以下步骤：
[0020] a、将石菖蒲粉碎成颗粒；
[0021] b、将石菖蒲颗粒采用CO2超临界萃取，萃取压力为22_30Mpa，萃取釜温度为 45-60°C，萃取时间为0. 5-1. 5小时，得挥发油和石菖蒲萃余物；
[0022] c、取挥发油用等体积的乙醇溶解，得挥发油乙醇溶液；另取挥发油重量4-8倍量 的β-环糊精，用β-环糊精3-5倍重量的水研匀，倒入胶体磨中，缓慢连续滴加上述挥发 油乙醇溶液，碾磨包合20-40分钟，倾出，0-4°C冷藏静置24小时以上，滤过，于40-80°C真空 干燥，即得挥发油包合物；包合最佳条件为：挥发油与β -环糊精的质量比1 :4、包合时间 20min，加水量为β -环糊精4倍重量。
[0023] d、灵芝、银杏叶、淮牛膝、玄参和天麻、以及石菖蒲萃余物加入处方总药材6-10倍 重量浓度为70-90%的乙醇，加热回流提取1-3次，每次1-2小时，提取液合并，静置，滤过， 滤液减压回收乙醇，浓缩至60°C条件下相对密度为1. 15~1. 30的清膏；醇提最佳条件为 浓度为90%的乙醇8倍量，提取2次，每次1. 5小时。
[0024] e、将清膏在60-80°C减压干燥，得干膏；
[0025] f、将干膏和挥发油包合物混合均匀。
[0026] 该方法优选具体包括以下步骤：
[0027] a、将石菖蒲粉碎成颗粒；
[0028] b、将石菖蒲颗粒于采用CO2超临界萃取,萃取压力为30Mpa,萃取藎温度为60°C, 萃取时间为1. 5小时，得挥发油和石菖蒲萃余物；
[0029] c、取挥发油用等体积的乙醇溶解，得挥发油乙醇溶液；另取挥发油重量4倍量的 β -环糊精，用β -环糊精4倍量的水研匀，倒入胶体磨中，缓慢连续滴加上述挥发油乙醇溶 液，碾磨包合20分钟，倾出，0-4°C冷藏静置24小时以上，滤过，于40°C真空干燥，即得挥发 油包合物；
[0030] d、灵芝、银杏叶、淮牛膝、玄参和天麻、以及石菖蒲萃余物加入总药材8倍量浓度 为90%的乙醇，回流提取两次，每次1. 5小时，提取液合并，静置，滤过，滤液减压回收乙醇， 浓缩至相对密度为1. 15~L 30 (60°C )的清膏；
[0031] e、将清膏在60-80°C减压干燥，得干膏；
[0032] f、将干膏和挥发油包合物粉碎成细粉，混合均匀。
[0033] 上述中风后促进康复的中药组合物胶囊剂的制备方法包括以下步骤：
[0034] a、将石菖蒲粉碎成颗粒；
[0035] b、将石菖蒲颗粒采用CO2超临界萃取，萃取压力为22_30Mpa，萃取釜温度为 45-60°C，萃取时间为0. 5-1. 5小时，得挥发油和石菖蒲萃余物；
[0036] c、取挥发油用等体积的乙醇溶解，得挥发油乙醇溶液；另取挥发油重量4-8倍量 的β-环糊精，用β-环糊精3-5倍量的水研匀，倒入胶体磨中，缓慢连续滴加上述挥发油 乙醇溶液，碾磨包合20-40分钟，倾出，0-4°C冷藏静置24小时以上，滤过，于40-80°C真空干 燥，即得挥发油包合物；
[0037] d、灵芝、银杏叶、淮牛膝、玄参和天麻、以及石菖蒲萃余物加入处方总药材6-10倍 重量浓度为70-90%的乙醇，加热回流提取1-3次，每次1-2小时，提取液合并，静置，滤过， 滤液减压回收乙醇，浓缩至60°C条件下相对密度为1. 15~1. 30的清膏；
[0038] e、将清膏与清膏重30-40%的微晶纤维素混合，置60°C -80°C条件下减压干燥，得 干膏；
[0039] f、将干膏和挥发油包合物粉碎成细粉，与清膏重5-55%的微晶纤维素和干膏重 〇. 5%硬脂酸镁混合均匀，得细粉，填充胶囊。
[0040] 本发明使用的药材石菖蒲为天南星科植物蒲（Acorus tatarinowii Schott)的 干燥根茎，其挥发油中成分主要为β-细辛醚、Ct-细辛醚、石竹烯、石菖醚、Y-细辛醚、 细辛醛，肉豆蘧酸，百里香酚等，还含有糖类、有机酸、氨基酸等成分。银杏叶为银杏科银 杏（Ginkgo biloba L.)的干燥叶。主要含黄酮类、廠类、生物碱、多糖、酸类及氨基酸等， 其中黄酮类和萜内酯是银杏叶发挥独特药理活性的有效成分。灵芝为多孔菌科真菌赤芝 (Ganoderma lucidum Karst.)或紫芝（Ganoderma sinense Zhao, Xu et Zhang)的干燥子 实体。主要含三萜类、生物碱类和核苷类、多糖、氨基酸和蛋白质类等。牛膝为苋科植物牛 膝（Achyranthese bidenuaa BI.)干燥根，主要含黄酮类、植物留酮类、阜苷类、糖类等。玄 参为玄参科植物玄参（Scrophularia ningpoensis Hemsl)的干燥根，主要含环烯醚廠类、 苯丙素苷类、留醇、有机酸类、黄酮类、三萜皂苷、挥发油、糖类、生物碱及微量的单萜和二萜 成分等。天麻为兰科植物天麻（Gastrodia elata BI.)的干燥块莖，主要含酸类及其苷类、 多糖类、留醇、有机酸类等成分。本发明将以上五味药材与石菖蒲超临界萃取后的萃余物一 起采用乙醇提取其有效成分。
[0041] 以下通过主要试验过程对本发明进行进一步说明：
[0042](一）石菖蒲超临界萃取工艺条件的优选
[0043] 1.萃取时间的单因素考察
[0044] 取300g石菖蒲粗粉，加入IL萃取釜中，以萃取压力30MPa、萃取温度60°C的条件 进行超临界萃取，用具塞锥形瓶每15min接取萃取物，直至萃取物的重量不再增加为止。
[0045] 实验测定了 0_105min超临界萃取的累积萃取物重，在75min时萃取物达到最大 值，90min以后萃取物增加不明显，结果见表1。
[0046] 表1.萃取时间对累积萃取物重的影响
[0048] 2.采用均匀设计试验筛选超临界萃取工艺条件
[0049] 石菖蒲其挥发油是主要活性成分，采选用CO2超临界萃取工艺进行萃取，在预试的 基础之上，以石菖蒲粗粉300g，对影响萃取效率的主要因素：萃取压力、萃取温度、萃取时 间等因素，以石菖蒲其挥发油油得率为指标，选用均匀设计表U 5(53)进行最佳萃取工艺的 筛选。因素水平与实验结果见表2-3。
[0050] 表2.均匀设计试验因素水平表
[0051]
[0052] 表3.试验安排与结果
[0054] 将以上结果输入均匀设计软件，进行逐步回归，得回归方程：y = b(0)+b(l)*X(l)+b(2)*X(3)，回归方程显著性检验：检验值Ft = 154. 2,临界值 F(0.10,2,2) = 9. 000, Ft > F (0.10, 2, 2)，回归方程显著。复相关系数 R = 0.9968,各因 素对试验结果影响的大小顺序为A > C > B,各因素对试验结果影响为正数，应选取最大值 即A因素萃取压力为30mpa，C因素萃取时间为90min，B因素萃取温度为负数，且对结果影 响最小，没有显著性，按照经验还是选择最大值60°C ;
[0055] 3.超临界萃取工艺条件验证试验
[0056] 为了验证上述结果，称取石菖蒲300g，选用萃取压力30MPa、萃取温度60°C、萃取 时间90min进行超临界萃取验证试验，其萃取物得率与筛选结果一致，结果见表4。
[0057] 表4.超临界萃取工艺验证试验结果
[0058]
[0059] (二）提取方法的确定及提取条件的优选
[0060] 1.醇提条件的优选研究
[0061] (1)采用正交试验设计筛选醇提条件
[0062] 天麻、牛膝、玄参、灵芝、银杏叶五味药材与石菖蒲超临界萃取后萃余物采用采醇 提的方法。现考察溶媒倍量、提取时间、乙醇浓度、提取次数四个因素对提取的影响。称取天 麻9g、牛膝20g、玄参20g、灵芝24g银杏叶24g以及石菖蒲超临界萃取后萃余物9. 7g，按 下述因素水平表提取，因素水平表见表5。
[0063] 表5.醇提条件的正交因素水平表
[0065] 我们选用天麻素（mg/g)、银杏总内酯mg/g)和浸膏量（g)为考察指标，对正交试验 进行了数据分析，正交安排表见表6。
[0066] 表6.以天麻素、银杏总内酯和浸膏量为指标的正交安排表
[0067]
[0069] (表中提供了 9个试验方案。如第6号试验是A2B3C1D2，即80%乙醇，10倍量回流 提取2次，每次1小时，依此类推。）
[0070] 以天麻素为指标，极差分析结果A>C>B>D即影响因素排列顺序为：乙醇浓度〉提取 时间〉溶媒倍量〉提取次数。各因素与水平之间的最佳组合为A 2B2C2D3。以D项作为误差 项，进一步进行方差分析，结果见表7。
[0071] 表7.以天麻素为指标的方差分析表
[0074] 查F检验临界值结果Fa(]5(2,2) = 19. 00，A因素和C因素对实验结果的影响显著， B因素对实验结果的影响均不显著。
[0075] 以银杏总内酯为指标，极差分析结果A>D>C>B即影响因素排列顺序为：乙醇浓度〉 提取次数〉溶媒倍量〉提取时间。各因素与水平之间的最佳组为A1B3C3D 3。以B项作为误 差项，进一步进行方差分析，结果见表8。
[0076] 表8.以银杏总内酯为指标的方差分析表
[0078] 查F检验临界值结果FQ.Q5(2, 2) = 19. 00,各因素对实验结果的影响均不显著。
[0079] 以浸膏量为含量为指标，极差分析结果A>D>B>C即影响因素排列顺序为：乙醇浓 度〉提取次数〉提取时间〉溶媒倍量。各因素与水平之间的最佳合为A3B2C1D 2。以C项作 为误差项，进一步进行方差分析，结果见表9。
[0080] 表9.以浸膏量为指标的方差分析表
[0082] 查F检验临界值结果Fi1id5(2, 2) = 19. 00,各因素对实验结果的影响均不显著。
[0083] 从三个指标极差分析可看出：乙醇浓度大于其他因素；方差分析结果：以天麻素 为指标F检验临界值结果乙醇浓度（A因素）和溶媒倍量（C因素）具有显著性，提取时间（B 因素）没有显著性；以银杏总内酯和浸膏量为指标F检验临界值结果各因素均无显著性。 [0084] 为了更加客观地评价，用综合评分寻找最佳工艺，在醇提工艺研究的三个指标中， 分别选取结果最好的作为100分，然后对三个指标赋与不同的权重，考虑到制剂的服用 量、生产成本等因素，将银杏总内酯的权重定为0. 5,天麻素权重定为0. 3和浸膏量的权重 定为0. 2。按计算公式：综合得分为Y =权重X (100-最高值+yi)[27]，结果表明：极差分析 结果A>D>B>C即影响因素排列顺序为：乙醇浓度〉提取次数〉提取时间〉溶媒倍量。各因 素与水平之间的最佳组合为A 3B2C2D2。以C项作为误差项，进一步进行方差分析，结果见表 10。
[0085] 表10.以综合评分为指标的方差分析表
[0087] 查F检验临界值结果Fa(]5 (2, 2) = 19. 00,各因素对实验结果的影响均不显著。醇 提最佳因素组合为90%乙醇8倍量，提取2次，每次1. 5小时。
[0088] 2.醇提验证试验
[0089] 称取天麻9g、牛膝20g、玄参20g、灵芝24g、银杏叶24g和石菖蒲超临界萃取后萃 余物9. 7g，选用90%乙醇8倍量，每次1. 5小时，提取2次，进行三批醇提验证试验，看看选 定条件与试验结果是否一致，结果见表11。
[0090] 表1L醇提验证试验结果
[0092] 结论：三次验证试验结果证实：A1B2C2D 2醇提条件与正交试验结果相符，故将 A1B2C2D2即90%乙醇8倍量，提取2次，每次L 5小时，确定为最佳醇提工艺条件。
[0093] 3.考察工艺实验指标的方法：
[0094] ①天麻素测定方法
[0095] 仪器：Agilent 1200 HPLC 色谱条件：色谱柱：Phenomenex 4. 6mm 250mm, 5m ODS, 柱温35摄氏度，流动相：乙腈：0. 05%磷酸溶液（3 :97)，流速lml/min，紫外检测器，检测波 长 220nm〇
[0096] 对照品溶液的制备：取天麻素对照品适量，精密称定，加流动相制成每1ml含50 g的溶液，即得。
[0097] 供试品溶液的制备：取浸膏约0. 3g，精密称定，置IOml量瓶中，加乙腈：水（3 :97) 混合溶剂定容，超声（功率300W，频率50kHz) 15分钟，取出，冷却置室温，0. 45 m滤膜过 滤，取续滤液，即得。
[0098] 测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10 1，注入液相色谱仪，测定， 即得。
[0099] ②杏总内酯测定方法：
[0100] 仪器：LC-10AT VP泵（日本岛津），PL-ELS2100蒸发光散射检测器（Polymer Laboratory，UK)，JZH TC-100柱温箱（天津市金洲科学仪器有限公司）
[0101] 色谱条件：
[0102] 色谱柱：Phenomenex 4.6mm 250mm，5 m 0DS，柱温 35 摄氏度
[0103] 流动相：甲醇：四氢呋喃：水（25 :10 :65)，流速lml/min
[0104] 蒸发光散射检测器条件：Evp 90 C，Neb 80 C，Gas I. 2psi，
[0105] Pmt I, Smth I, LedlOO
[0106] 对照品：
[0107] 对照品溶液的制备：
[0108] 取银杏内醋A对照品、银杏内醋B对照品、银杏内醋C对照品、白果内醋对照品适 量，精密称定，加50%甲醇分别制成每ml各含银杏内酯A 0. 18mg、银杏内酯B 0.08mg、银杏 内酯C 0· 10mg、白果内酯0· 20mg的混合溶液，即得。
[0109] 供试品溶液的制备：
[0110] 取浸膏约lg，精密称定，置IOrnl容量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理（功率300W， 频率50kHz)30分钟，取出，放冷，摇匀，过滤，精密量取续滤液5ml，加入酸性氧化铝柱 (200~300目，3g，内径为lcm，用甲醇湿法装柱）上，用甲醇25ml洗脱，收集洗脱液，回收 溶剂至干，残渣用甲醇5ml分次转移至IOml量瓶中，加水约4. 5ml，超声处理（功率300W， 频率50kHz)30分钟，取出，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，0.4? m滤膜滤过，g卩得。
[0111] 测定法：
[0112] 精密吸取对照品溶液10 1、20 1，供试品溶液20 1，注入液相色谱仪，测定，用 外标法对数方程计算银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C和白果内酯的含量，即得。
[0113] ③得膏率的计算：按正交因素水平表进行实验所得的提取液，浓缩至清膏，60°C真 空干燥，所得干膏称重。
[0114] (三）挥发油环糊精包合条件的优选研究
[0115] 1.采用正交试验设计筛选β -环糊精包合条件
[0116] 目前文献报道的挥发油包合多采用饱和水溶液、超声法和胶体磨碾磨法，相比较 胶体磨碾磨法具有包合温度低、时间短、包合率高等优点。故选择胶体磨碾磨法进行石菖蒲 挥发油包合工艺研究，为包合顺利进行，需要用乙醇将挥发油先行溶解，通过试验得知乙醇 用量与挥发油1 :1时，挥发油即可完全溶解，故在挥发油与乙醇用量固定条件下，采用正交 设计L9 (34)，以挥发油与β -CD的质量比、包合时间、加水量三因素设计3水平，因素水平见 表12。
[0117] 表12.包合条件的因素水平表
[0119] 我们选用挥发油利用率和包合物含油率为评价指标，对正交试验进行了数据分 析，结果见表13。
[0120] 表13.以挥发油利用率和包合物含油率为指标的综合评分正交安排表
[0123] (表中提供了 9个试验方案。如第6号试验是A2B3C1，即挥发油：β -环糊精1 :6， 包合20min，加水5倍量，依此类推。）
[0124] 以挥发油利用率为指标，极差分析结