环黄芪醇在制备保肝及促进肝损伤修复药物中的应用

环黄芪醇在制备保肝及促进肝损伤修复药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及医药技术领域，具体设及一种=祗皂巧类化合物环黄巧醇的医药新用 途，环黄巧醇有较强的促进肝细胞增殖活性，抑制调亡相关蛋白的表达，降低肝损伤时血清 或组织中ALT、AST、MDA活性和升高SOD活性（p<0. 05)，对化学性肝损伤有较好的保护和治 疗作用，因此可用于制备保肝护肝W及治疗化学性肝损伤的药物。
【背景技术】
[0002] 黄巧甲巧（AstragalosideIV)为黄巧的主要皂巧类成分，现代药理学研究证明， 黄巧及其皂巧类成分具有显著的免疫调节、抗炎、抗氧化、抗缺血性脑损伤、和抗衰老等广 泛作用（Clement-KruzelS,etal.Immunemodulationofmacrophagepro-inflammatory responsebygoldensealandAstragalusextracts.JMedFood2008, 11:493-498;Mao XQ,etal.HypoglycemiceffectofpolysaccharideenrichedextractofAstragalus membranaceusindietinducedinsulinresistantC57BL/6Jmiceanditspotential mechanism.Phytomedicine2009, 16:416-425;ShenP,etal.Differentialeffects ofisoflavones,fromAstragalusmembranaceusandPuerariathomsonii,onthe activationofPPA民alpha,PPA民gamma,andadipocytedifferentiationinvitro. JNutr.2006, 136:899-905;XuXL,etal.Modificationofalterationsincardiac functionandsarcoplasmicreticulumbyastragalosideIVinmyocardialinjury invivo.EurJPharmacol2007 :568:203-212),相关研究在分子水平上阐明了黄博 及其相关成分对衰老基因调控、细胞稠亡、DNA损伤修复及端粒长度影响方面有明显作 用。环黄博醇（cycloastragenol，CAG)为黄博甲骨的骨元，是黄博甲骨在肠道内的主 要水解代谢产物（加Yongchuan,etal.^ansportandbioavailabilityS化diesof astragalosodeIV，anactiveingredientinRadixAstragali.BasicClinPhamacol Toxicol，2004,95(6) :297;JingZhu，etal.Invitrointestinalabsorptionand first-passintestinalandhepaticmetabolismofcyeloastragenol，apotentsmall moleculetelomeraseactivator.DrugMetaPharmacokinet, 2010, 25(5) :479) 〇 石开究 表明，由于黄博甲骨的相对分子质量较大、亲水性较强等原因使其在体内的相对生物利用 度很化，不足3%，而骨元环黄博醇具有相对较小的分子质量和较强的亲脂性，其在生物膜 渗透和胃肠道吸收方面具有优势。进一步的研究表明，环黄博醇是现今唯一发现的端粒 酶激活剂，通过增加端粒酶从而延缓端粒变短化runoBernardesdeJesus,etal.The telomeraseactivatorTA-65eIongatesshorttelomeresandincreaseshealth spanofadult/oldmicewithoutincreasingcancerincidence.AgingCell2011; 10(4) :604-621),却没有引发肿瘤的危险。
[0003] 肝损伤是临床上的常见病，各种物理和化学因素均可导致急、慢性肝损伤，严重或 持续的肝损伤最终可导致急性肝功能衰竭，危及患者生命。因此，急、慢性肝损伤及其修复 一直是肝脏疾病研究的前沿热点问题。不同程度的肝损伤其修复方式有所不同。有研究认 为，在修复损伤的肝组织过程中设及不同来源的细胞，如：轻度肝损伤，肝细胞的缺失由成 熟肝细胞的增殖来代替；而更严重的肝损伤，可诱导肝内胆道树分支终端的卵圆细胞的激 活，从而分化为肝细胞和胆管上皮细胞；更深层次的替代细胞可能来源于骨髓。此外还有肝 非实质细胞的参与。肝损伤的修复过程是多种因素的综合作用，整体性的组织恢复要求肝 内不同细胞（如肝细胞、星状细胞、胆管上皮细胞、内皮细胞、巨隧细胞和淋己细胞）平衡的 重建和肝脏基质提供框架W及多种细胞因子的共同参与。
[0004] 肝损伤发生之后，肝脏经历创伤修复的过程，恢复组织构架和维护体内平衡。其 中，肝细胞的再生与增殖起到了至关重要的作用。化学性或药物性导致的急性肝损伤发 生后，对肝细胞的保护也体现在抑制细胞调亡相关蛋白的表达和激活。半脫天冬蛋白酶即 Caspase酶家族在调亡过程中起着必不可少的作用，它们切断细胞与周围的联系，拆散细胞 骨架，阻断细胞DNA复制和修复，干扰mRNA剪切，损伤DNA与核结构，诱导细胞表达可被其 他的细胞吞隧的信号，并进一步使之降解为调亡小体。其中，较常用作对调亡相关蛋白进行 检测的指标为caspase-3/9。caspase-3是细胞调亡过程中最主要的终末剪切酶，也是CTL 细胞杀伤机制的重要组成部分。Caspase-9是调亡的引发剂，即开始调亡过程。运些调亡相 关蛋白在细胞调亡过程中有非常重要的作用。
[0005] 化学性或药物性导致的急性肝损伤发生后，肝功能受到很大影响，谷丙转氨酶 (ALT)、谷草转氨酶（AST)酶活性升高，超氧化物歧化酶（SOD)含量降低，丙二醒（MDA)含量 增多，严重的可导致急性肝功能衰竭。有促进肝损伤修复作用的药物可改善肝功能，对化学 性或药物性导致的急性肝损伤有较好的防护和治疗作用。
[0006]目前，在临床上使用最多的黄巧注射液或者黄巧甲巧注射液，主要用于治疗屯、脑 血管疾病，市场上尚没有从单味黄巧药材中制得的保肝护肝新药，黄巧药材在我国使用多 年，具有保肝之功效，但是目前的研究并不能明确黄巧作为保肝药物的主要具有药理活性 的物质基础。

【发明内容】

[0007] 发明目的：本发明的目的是为了解决W上现有技术的不足，提供一种=祗皂巧类 化合物环黄巧醇用于制备促进肝损伤修复药物的新用途
[0008] 技术方案：本发明所述的环黄巧醇用于制备保肝药物或护肝药物或促进肝损伤修 复药物的应用。
[0009] 为了进一步解决上述问题，环黄巧醇用于制备药物性肝损伤修复药物的应用。
[0010] 为了进一步解决上述问题，环黄巧醇用于制备促进酒精性肝损伤修复药物的应 用。
[0011] 为了进一步解决上述问题，环黄巧醇用于制备促进缺血再灌注肝损伤修复药物的 应用。
[0012] 为了进一步解决上述问题，环黄巧醇用于制备促进胆汁渺积性肝损伤修复药物的 应用。
[0013] 为了进一步解决上述问题，环黄巧醇用于制备治疗各种化学性肝损伤药物的应 用。
[0014] 为了进一步解决上述问题，环黄巧醇用于制备治疗慢性肝纤维化的药物的应用。
[0015] 为了进一步解决上述问题，所述环黄巧醇用于为了进一步解决上述问题，制备治 疗四氯化碳所致急性肝损伤药物的应用。
[0016] 为了进一步解决上述问题，所述药物为固体制剂或溶液剂。
[0017] 为了进一步解决上述问题，所述固体制剂为胶囊剂、片剂或颗粒剂。
[0018] 有益效果：本发明提供了一种已知化合物环黄巧醇用于制备保肝药物或护肝药物 或治疗急慢性肝损伤药物的新应用，环黄巧醇能显著促进肝细胞增殖，抑制调亡相关蛋白 的表达，降低肝损伤时血清或组织中ALT、AST、MDA活性和升高SOD活性（p<0. 05)，对急性 肝损伤有较好的保护和治疗作用，可用于制备治疗急慢性肝损伤药物。
【附图说明】
[0019] 图1是本发明实施例1中正常大鼠肝细胞株B化-3A在环黄巧醇的作用下增值结 果；
[0020] 图2是本发明实施例1中正常人肝细胞株L02细胞在环黄巧醇的作用下增值结 果；
[0021] 图3是本发明实施例2中环黄巧醇对憐酸化P53蛋白和化spase家族的3、9蛋白 活性分子抑制作用；
[0022] 图4是本发明中实施例3中环黄巧醇（CAG)对化学性急性肝损伤的保护作用，其 中A是正常组，B是模型组，C是CAG低剂量组，D是CAG高剂量组。
[0023] 图5是本实施例5中环黄巧醇（CAG)对慢性肝纤维化的治疗作用。
【具体实施方式】
[0024] 为了加深对本发明的理解，下面将结合实施例和附图对本发明作进一步详述，该 实施例仅用于解释本发明，并不构成对本发明保护范围的限定。
[00巧]实施例1 :环黄巧醇对正常肝细胞的促进增殖作用
[0026] 将大鼠肝细胞株B化-3A细胞和人肝细胞株L02细胞W每孔3X103铺于96孔板 中，每组3复孔，细胞贴壁后，加入环黄巧醇至终浓度分别为5、10、20yM，等量DMSO为对照 组，7化后，加入CCK8,解育1小时，酶标仪450nm检测，并通过OD值计算细胞的增殖效率。
[0027] 实验发现，环黄巧醇对正常肝细胞有促进增殖的作用，其效应在一定浓度范围内 呈剂量依赖性。
[0028] 实施例2:环黄巧醇抑制肝细胞调亡相关蛋白表达
[0029] 人肝细胞株L02细胞W每孔5X105铺于6孔板中，在37°C，5%C〇2条件下培养过 夜，分组加入环黄巧醇至终浓度分别为5、10、20yM，等量DMSO为对照组，24h后提取细胞总 蛋白，用Western-blot检测环黄巧醇对相关调亡蛋白表达的影响。
[0030] 实验结果如图2所示，环黄巧醇对憐酸化P53蛋白和化spase家族的3、9蛋白活 性分子的含量有明显抑制作用，并在一定范围内呈浓度依赖性，表明环黄巧醇对正常肝细 胞有抑制调亡的作用。
[0031] 实施例3:环黄巧醇对化学性急性肝损伤的保护作用
[003引40只C57雄性小鼠随机分为4组，即空白对照组、(XL4急性肝损伤模型组、环黄巧 醇（CAG)低剂量巧Omg/Kg)组、高剂量（lOOmg/Kg)组。实验过程如下：CAG低、高剂量组连 续灌胃12天，空白组和模型组给予相同体积的生理盐水。第12天给药化后，除空白组W外其余各组均腹腔