注射10%CCL4油溶剂（0.Iml/lOg)，禁食，自由饮水。24h后采血，分离 血清，测定ALT、AST。然后脱脊椎处死小鼠，打开腹腔取出肝脏，称重，取0. 5g肝脏加9倍 冰生理盐水，组织匀浆，制成10%的肝脏匀浆液，低溫离屯、35(K)r/min，离屯、15分钟，收集 上清液，测定SOD及MDA的含量。取部分肝脏右叶，置10%中性甲醒溶液中，常规脱水，石蜡 包埋，切片，作肥染色，光学显微镜下观察肝组织病理改变。
[0033] 实验发现，对CCL4造成的急性肝损伤小鼠模型，肝脏指数较正常组显著增高 (P<0. 05)，说明肝脏受到损伤。与模型组比较，环黄巧醇（CAG)低、高剂量组肝脏指数明显 降低（P<0. 05)，说明一定剂量的环黄巧醇对小鼠肝脏具有保护作用。肝脏指数=[肝脏重 量（g)/体重（g)]X100计算，结果见表1。对CCL4造成的急性肝损伤小鼠模型，环黄巧醇 低、高剂量均能降低血清中ALT、AST的活性（P<0. 05)(表1)，升高肝组织中SOD含量，降低 MDA表达；表明CAG对CCL4引起的急性肝损伤有一定的保护作用（表2)。
[0034] 表1CAG对急性肝损伤小鼠血清中ALT、AST活性的影响反±5)
[0036]n= 10, *p<0. 05,与空白对照组比较；邮<0. 05,与模型组比较
[0037] 表2 CAG对急性肝损伤小鼠组织中SOD活性和MDA含量的影响±.s)
[0039]n= 10, *p<0. 05,与空白对照组比较；邮<0. 05,与模型组比较
[0040] 病理组织切片（图4)分析发现，空白对照组小鼠的肝脏切片在光镜下观察无异常 变化，肝细胞排列整齐，结构清晰。模型组肝细胞明显肿胀，气球样变，肝细胞排列素乱，并 发生解离，炎性细胞浸润明显。与模型组相比较，环黄巧醇低、高剂量组肝细胞排列相对整 齐，结构较为清晰，水肿、坏死及气球样变明显较轻。可见，环黄巧醇对四氧化碳所造成的肝 细胞的损伤具有较好的改善和保护作用。
[0041] 实施例4 :环黄巧醇对药物性肝损伤的保护作用
[0042] 48只昆明种雄性小鼠，随机分为4组，分别为正常组、环黄巧醇（CAG)、扑热息痛 组、CAG高剂量+扑热息痛组、CAG低剂量+扑热息痛组，每组各12只。CAG低、高剂量组连 续灌胃10天，均1次/天，空白组和模型组给予相同体积的生理盐水。末次给药2.化后， 禁食，自由饮水，除正常组外，其余S组均腹腔注射扑热息痛溶液180mg/Kg，正常组注射同 体积的0.9%生理盐水。24h后采血，分离血清，测定ALT、AST。然后脱脊椎处死小鼠，打 开腹腔取出肝脏，称重，取0. 5g肝脏加9倍冰生理盐水，组织匀浆，制成10 %的肝脏匀浆液， 低溫离屯、3500r/min，离屯、15分钟，收集上清液，测定SOD及MDA的含量。
[0043] 实验结果表明，模型组与正常组比较P< 0. 05,说明用扑热息痛造成药物性肝损 伤模型成果。与模型组比较，环黄巧醇给药组均能显著降低扑热息痛造成所致药物性肝损 伤小鼠血清AST、ALT含量，升高肝组织中SOD含量，降低MDA含量（P<0.05);说明环黄巧 醇对药物性肝损伤的小鼠肝脏具有保护作用。结果见表3。
[0044] 表3CAG对药物性肝损伤小鼠血清和肝脏中ALT、AST活性的影响(I' ±.v)
[0046]n= 12, *p<0. 05,与空白对照组比较；邮<0. 05,与模型组比较
[0047] 实施例5 :环黄巧醇对酒精性肝损伤的保护作用
[0048]SD大鼠适应性饲养2周后，随机分为4组，每组12只，雌雄各半，分别为正常组、 模型组、环黄巧醇（CAG)低剂量（350mg/Kg)组、高剂量（700mg/Kg)组。给药方式为正常组 灌胃给予生理盐水1血/lOOg,其余各组按1血/100g灌胃给予55°白酒，基础饲料饲养，连 续20d。第21天开始，正常组灌胃给予生理盐水1血/lOOg,其余各组上午按1血/100g灌 胃给予55°白酒，CAG低剂量和高剂量组下午分别按350mg/Kg、700mg/Kg灌胃给予环黄巧 醇，模型组下午灌胃给予同体积的生理盐水，基础饲料饲养，连续lOd。末次给药后禁食不 禁水12h，眼眶取血，350化/min离屯、lOmin，分离血清，巧憶各大鼠血清AST、ALT的含量。 处死大鼠，迅速取出肝脏，用生理盐水洗净血溃，滤纸吸干，称取适量肝脏，按比例（肝脏重 量g:生理盐水体积血=1:9)加入生理盐水冰水浴条件下机械匀浆制成10%肝脏匀浆液； 35(K)r/min，离屯、lOmin，取上清液，测定肝脏组织中MDA、SOD的含量。
[0049] 实验发现，与模型组比较，环黄巧醇给药组均能显著降低白酒所致酒精性肝损伤 大鼠血清AST、ALT含量，升高肝组织中SOD含量，降低MDA含量（p< 0.05);说明环黄巧醇 对酒精性肝损伤的大鼠肝脏具有保护作用。结果见表4。
[0050] 表4CAG对酒精性性肝损伤小鼠血清和肝脏中ALT、AST活性的影响反±s)
[005引n= 12, *p<0. 05,与空白对照组比较；邮<0. 05,与模型组比较 [005引实施例6 :环黄巧醇对慢性肝纤维化的治疗作用
[0054] C57小鼠适应性喂养一周后，随机分组，除正常组小鼠外，其余各组每周两次给予 腹腔注射10 %CCL4造模（20y1/lOg)，正常对照组C57小鼠腹腔注射橄揽油。每次腹腔注 射前均测量小鼠体重，根据体重注射相应剂量的10%CCL4,并作详细记录。造模2周后，于 继续造模的同时，正常对照组、模型组每天生理盐水灌胃（200y1/只），CAG低、高剂量药物 组分别用50、lOOmg/kg/d的给药量配成0. 5%簇甲基纤维素钢混悬液灌胃。连续用药治疗 6周。各组小鼠灌胃期间每天观察精神活动、毛色、饮食、体重等一般状态；末次给药后禁食 不禁水12h，称重，采用摘眼球取血，35(K)r/min离屯、，取血清按试剂盒说明书测定血清中谷 丙转氨酶（ALT)和谷草转氨酶（AST)活性；取血后颈椎脱白处死小鼠，迅速取出肝脏称重 (计算肝指数=肝重/体重X100% )，用生理盐水洗净血溃，滤纸吸干，称取适量肝脏，按比 例（肝脏重量g:生理盐水体积血=1:9)加入生理盐水冰水浴条件下机械匀浆制成10% 肝脏匀浆液；35(K)r/min，离屯、lOmin，取上清液，测定肝脏组织中超氧化物歧化物（SOD)活 力、及径脯氨酸（Hyp)和丙二醒（MDA)的含量；取肝右叶用10%甲醒固定，石蜡包埋切片， 进行肥染色，观察其病理变化。
[005引实验发现CAG明显降低了（XL4所致肝纤维化小鼠体内的ALT、AST水平（P<0. 05) (见表5)，同时降低小鼠血清中MDA、Hyp的含量，升高SOD的活性（P<0. 05)，如表6所示。 实验结果表明CAG对CCL4所致的肝功能损伤有一定的改善和保护作用。
[0056] 表5CAG对CCL4致肝纤维化小鼠的影响（；±5'）
[0057]
[005引*p<0. 05,与正常组比较；邮<0. 05,与模型组比较
[0059]表6 CAG对小鼠组织中SOD、MDA和Hyp活性的影响（；+ ?)
[0061] *p<0. 05,与正常组比较；邮<0. 05,与模型组比较
[0062] 病理组织切片（图5)分析发现，肥染色可见正常组肝小叶与肝细胞排列整齐，结 构完整；模型组肝细胞肿大变圆，汇管区及小叶问纤维组织增生；而环黄巧醇CAG低、高剂 量组肝细胞排列相对整齐，水肿、坏死程度明显较轻，结构较为清晰，纤维间隔纤细不连续。 免疫组化的结果表明CAG抑制了肝组织中a-SMA和胶原的产生，提示其对慢性肝纤维化病 变有一定的保护作用。
[006引实施例7:环黄巧醇注射液的制备
[0064] 独方：环黄茂醇 1.;晦 玄醇 120ml TweenSO 自爲 注射用水 补足至溶液为500m1
[0065] 制备方法：称取环黄巧醇1.Og,于40°C溶解在60ml乙醇中，加入6.Og的Tween 80,揽拌使其充分溶解，其次，加入注射水至250ml，加入4.Og活性炭，充分揽拌30min，过滤 至滤液澄清度合格，并测得滤液pH为6. 0 ;量取60ml乙醇，边揽拌边加入注射用水至250ml 作为稀释液备用；补加稀释液使环黄巧醇浓度为2.Omg/ml;分别用0. 45ym的微孔滤膜和 0. 22ym的微孔滤膜过滤，灌封至2ml安飯瓶中，经120°C热压灭菌30min，冷却，即得环黄巧 醇注射液。
[0066] 实施例8 :环黄巧醇片剂的制备
[0067]将环黄巧醇乳糖淀粉分别过80目筛，混匀，加适量淀粉浆制软材，于20目筛下制 粒，置于80°C烘箱中干燥，于14目筛下整粒，加径甲淀粉钢和硬脂酸儀充分混匀后压片，其 中辅料配比为淀粉：乳糖：径甲淀粉钢：硬脂酸儀（3:8:0. 6:0. 4)，制成片重为300mg/片， 环黄巧醇的含量为IOOmg/片的片剂。
[0068] W上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用W限制本发明，凡在本发明的精 神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 环黄芪醇用于制备保肝药物或护肝药物或促进肝损伤修复药物的应用。2. 环黄芪醇用于制备药物性肝损伤修复药物的应用。3. 环黄芪醇用于制备促进酒精性肝损伤修复药物的应用。4. 环黄芪醇用于制备促进缺血再灌注肝损伤修复药物的应用。5. 环黄芪醇用于制备促进胆汁淤积性肝损伤修复药物的应用。6. 环黄芪醇用于制备治疗各种化学性肝损伤药物的应用。7. 环黄芪醇用于制备治疗慢性肝纤维化的药物的应用。8. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述环黄芪醇用于制备治疗四氯化碳所 致急性肝损伤药物的应用。9. 根据权利要求1-8任意权利要求所述的应用，其特征在于：所述药物为固体制剂或 溶液剂。10. 根据权利要求9所述的应用，其特征在于：所述固体制剂为胶囊剂、片剂或颗粒剂。
【专利摘要】本发明公开了环黄芪醇用于制备保肝药物或护肝药物或治疗肝损伤药物的应用。动物实验以及细胞实验表明环黄芪醇具有保肝，护肝，以及促进肝损伤修复的作用，故本发明具有很强的应用前景。
【IPC分类】A61P1/16, A61K31/58
【公开号】CN105343109
【申请号】CN201510817156
【发明人】顾正兵
【申请人】泰州永恒生物科技有限公司
【公开日】2016年2月24日
【申请日】2015年11月23日