一种新温肾生精饮及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药制剂领域，具体涉及一种新温肾生精饮及其制备方法。
【背景技术】
[0002] 资料显示，从1940年到1990年50年间男性精子密度从1. 113亿/ml下降到6600 万/ml，生精障碍已成为男性不育的最常见病因之一。治疗男性不育常用的方法有药物治 疗、手术治疗和辅助生殖技术治疗等。药物治疗方面，目前还没有特效药，手术治疗也只能 解决一些由于解剖因素造成的不育，采用单精子显微注射技术治疗，费用高，技术难度大， 还不能被大多数患者所接受。近几年中药在临床治疗男性不育方面已有明显疗效，其主要 从修复性腺损伤、促进性腺发育和生殖细胞增殖、抑制生精细胞的凋亡、刺激间质细胞分 泌、提高性激素水平和促进副性腺发育等方面对男性的睾丸生精系统进行调理修复，达到 治愈的目的，为大多数患者所接受。
[0003] 但目前大多中药治疗机制多基于中医辨证理论，缺乏对药物作用机制研究。
【发明内容】
[0004] 为解决上述问题，本发明提供了一种新温肾生精饮及其制备方法。
[0005] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
[0006] -种新温肾生精饮，由以下组分制备而成：
[0007] 鹿茸lg、人参6g、锁阳9g、黄芪12g、潼蒺藜9g、山药15g、白术6g、川芎3g、白芍 6g、肉桂lg、木香1. 5g、小茴香3g、淫羊藿6g、当归6g、肉灰蓉9g。
[0008] 上述新温肾生精饮的制备方法，包括如下步骤：
[0009] S1、按上述配方称取各组分后，置于砂锅中，加入蒸馏水，以刚浸没药材为准，浸泡 半个小时，先大火加热，沸腾后，改为小火，煎煮30分钟后，将煎液与药渣分离；
[0010] S2、在步骤S1所得的药渣中加入80度的蒸馏水，以刚浸没药材为准，沸腾后，煎煮 30分钟，将煎液与药渣分离；
[0011] S3、在步骤S2所得的药渣中加入80度的蒸馏水，以刚浸没药材为准，沸腾后，煎煮 30分钟，将煎液与药渣分离；
[0012] S4、将3遍的煎液混合在一起，用4-5层纱布过滤，再将药渣整个包起来，把药液挤 出来，一起将收集的药液放在大烧杯中，80度水浴浓缩至94ml，即得，这是成人1天的量。
[0013] 本发明具有以下有益效果：
[0014] 本发明含有鹿茸、人参、锁阳、苁蓉、黄芪、蒺藜、山药、白术、白芍、川芎、肉桂、木 香、小茴香、淫羊藿和当归十五种药材成份，方中淫羊藿、苁蓉和锁阳是常用的补肾壮阳药， 可生精益精；鹿茸具有性激素样作用，可补精髓，助肾阳；黄芪可促进睾丸支持细胞增殖， 增加支持细胞的营养供给；人参和白术可补气、补脾，益气健脾；蒺藜、白芍和当归可调肝、 补血养血；川芎可活血化瘀；肉桂、山药、木香和小茴香可协助以上药物共同发挥其温阳补 肾生精，益气健脾、滋阴补血之功效，本发明的新温肾生精饮完全符合临床治疗生精障碍的 基本原则，且在临床上取得了显著的疗效。
【附图说明】
[0015] 图1为本发明实施例中温肾生精饮组和新温肾生精饮组小鼠血清睾酮和LH水平 与西药组的对比示意图。
[0016] 图中，Control表示对照组；DMS0表示溶剂组；CsA表示模型组；CC表示西药组； WSSJD表示温肾生精饮组；newWSSJD表示新温肾生精饮组。下同。
[0017] 图2为本发明实施例中模型组、西药组、温肾生精饮组和新温肾生精饮组小鼠睾 丸间质细胞中LHR水平对比示意图。
[0018] 图3为本发明实施例中模型组、西药组、温肾生精饮组和新温肾生精饮组小鼠睾 丸间质细胞中P450scc表达水平对比示意图。
[0019] 图4为本发明实施例中模型组、西药组、温肾生精饮组和新温肾生精饮组小鼠睾 生精细胞的凋亡数量柱形图。
[0020] 图5为本发明实施例中模型组、西药组、温肾生精饮组和新温肾生精饮组小鼠精 子存活率的柱形图。
[0021] 图6为本发明实施例中小鼠附睾精子的早期凋亡情况示意图；
[0022] 图中，A.对照组；B.溶剂组；C.模型组；D.西药组；E.温肾生精饮组组；F.新温肾 生精饮组。
[0023] 图7为本发明实施例中模型组、西药组、温肾生精饮组和新温肾生精饮组小鼠精 子的早期凋亡率柱形图。
【具体实施方式】
[0024] 为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步 详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发 明。
[0025] 实施例
[0026] 动物：清洁级8周龄的昆明种雄性小鼠，体重35~40g，由长春生物制品研究所提 供；动物许可证号：SCXK(吉）2006-0001。饲养条件为温度（21 ±3) °C，湿度55%~65%， 自由摄食和饮水，单笼饲养。
[0027] 药品和试剂：称取鹿茸lg、人参6g、锁阳9g、黄芪12g、潼蒺藜9g、山药15g、白术 6g、川；3g、白苟6g、肉桂lg、木香1. 5g、小茴香3g、淫羊藿6g、当归6g、肉灰蓉9g，置于砂 锅内，按照中药煎煮法煎煮，最后将药汤煎制为lmL汤药含2g生药材。4°C冷藏，待用。新 温肾生精饮是在温肾生精饮组方的基础上，对组方中的人参、锁阳、黄芪和淫羊藿等成分含 量进行了适当调整，其制作方法同温肾生精饮。
[0028] 注射用环孢霉素（山西普德药业有限公司生产）、克罗米芬（广州康和药业有限公 司生产）、TUNEL凋亡检测试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）、兔源的LHR和P45〇SCC 的一抗、Hoochst33342、FITC标记的二抗、睾酮和LH的ELISAkit。
[0029] 步骤一、选取8周龄的健康的昆明种雄性小鼠90只，随机分为对照组、溶剂组、模 型组、西药组、温肾生精饮组和新温肾生精饮组，每组各15只。
[0030] 步骤二、将模型组、西药组、温肾生精饮组和新温肾生精饮组的小鼠腹腔注射 15mg/kg·d环孢霉素，连续30天；对照组小鼠注射等体积的生理盐水；溶剂组小鼠注射等 体积的DMS0溶剂。在注射的同时，将西药组的小鼠灌胃21.6mgAkg.d)的克罗米芬，温肾 生精饮组和新温肾生精饮组小鼠按12g生药材/kg·(!灌胃温肾生精饮或新温肾生精饮，模 型组和对照组小鼠灌胃等体积的生理盐水，连续灌胃30天。
[0031] 步骤三、观测指标与方法
[0032] 睾丸组织HE染色
[0033] 取雄鼠睾丸立即用4 %多聚甲醛固定，酒精梯度脱水，二甲苯透明，常规石蜡包埋， 制成5μπι厚石蜡切片，HE染色，光镜下观察睾丸生精小管上皮的发育，且根据Johnsen评 分标准对睾丸组织生精小管的发育进行评分。
[0034] 血清睾酮和LH测定
[0035] 将各组的雄鼠处理30天后，利用水合氯醛麻醉雄鼠，摘眼球取血。第二天收集析 出的血清，-20°C保存。利用ELISA试剂盒，根据说明书操作，检测血清中睾酮和LH含量（上 海Elisa生物技术有限公司）。采用Bio-Rad酶标仪测定每组血清中睾酮和LH的光密度 值，绘制标准曲线，以计算出血清中睾酮和LH的含量。
[0036] 睾丸间质细胞中LHR和P450scc蛋白的表达检测
[0037] 对石蜡包埋的睾丸组织切片，二甲苯脱蜡，枸橼酸缓冲液进行抗原修复，在0. 1% TritonX-100的PBS溶液中作用15min，封闭液封闭，将组织在LHR或P450scc的一抗 (1 : 200稀释）中4°C孵育过夜。PBS充分洗涤后，用FITC标记的二抗（1 : 400稀释）作 用lh。利用ΙμΜHoechst33342对组织的细胞核DNA进行染色，甘油封片，激光扫描共聚 焦显微镜观察，所有图片均在相同强度的激光照射下拍摄。利用NIHImageJ专业图像分 析软件对所拍摄的每张图片随机选取10个视野，分别计算间质细胞中LHR和P45〇SCC蛋白 的平均荧光强度。
[0038] 睾丸组织TUNEL染色
[0039] 将常规石蜡包埋后的睾丸组织切片，利用TUNEL试剂盒检测睾丸组织中生精细胞 的凋亡情况，细胞核中有绿色荧光颗粒者为阳性细胞，即凋亡细胞。每张切片随机选择10 个视野，计算各个视野细胞中凋亡的生精细胞数。
[0040] 步骤四、制作附睾成