行洗脱除杂;再用体积比为80:20的氯仿：甲醇混合溶剂体系洗脱，收集洗脱部位，浓缩干燥 得神秘果树叶提取物。
[0022]经HPLC分析，该神秘果树叶提取物中β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的总含 量为80%。其中β-香树脂醇乙酸酯的含量为55%、羽扇豆醇乙酸酯的含量为35%。
[0023] 实施例3神秘果树叶提取物的制备 51. 称取2Kg干燥的神秘果树叶粉碎，过60目筛，然后用5L体积分数为70%的乙醇水溶 液加热回流提取，提取次数为2次，每次Ih，浓缩提取液得神秘果树叶乙醇提取物； 52. 向神秘果树叶乙醇提取物中加2L的水混合均匀，再加入氯仿萃取，萃取3次，每次 氯仿的用量为2L，减压浓缩除去氯仿，得氯仿萃取物； 53. 取氯仿萃取物40g，用甲醇溶解，然后用40g硅胶（100目）拌样，另取SOOg硅胶 (300目）干法装柱，将样品装入硅胶柱上，先用体积比为95:5的氯仿：甲醇混合溶剂体系进 行洗脱除杂;再用体积比为70:30的氯仿：甲醇混合溶剂体系洗脱，收集洗脱部位，浓缩干燥 得神秘果树叶提取物。
[0024]经HPLC分析，该神秘果树叶提取物中β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的总含 量为63%。其中β-香树脂醇乙酸酯的含量为24%、羽扇豆醇乙酸酯的含量为39%。
[0025] 实施例4神秘果树叶提取物的制备 51. 称取2Kg干燥的神秘果树叶粉碎，过60目筛，然后用5L体积分数为70%的乙醇水溶 液加热回流提取，提取次数为2次，每次Ih，浓缩提取液得神秘果树叶乙醇提取物； 52. 向神秘果树叶乙醇提取物中加2L的水混合均匀，再加入石油醚萃取，萃取3次，每 次石油醚的用量为2L，减压浓缩除去石油醚，得石油醚萃取物； 53. 取石油醚萃取物40g，用乙酸乙酯溶解，然后用40g硅胶（100目）拌样，另取SOOg 硅胶(200~300目）干法装柱，将样品装入硅胶柱上，先用体积比为95:5的石油醚：乙酸乙酯 混合溶剂洗脱除杂;再用体积比为70:30的石油醚：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集洗脱部位， 浓缩干燥得神秘果树叶提取物。
[0026] 经HPLC分析，该神秘果树叶提取物中β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的总含 量为41%。其中β-香树脂醇乙酸酯的含量为27%、羽扇豆醇乙酸酯的含量为14%。
[0027] 实施例5神秘果树叶提取物的制备 51. 称取2Kg干燥的神秘果树叶粉碎，过60目筛，然后用5L体积分数为70%的乙醇水溶 液加热回流提取，提取次数为2次，每次Ih，浓缩提取液得神秘果树叶乙醇提取物； 52. 向神秘果树叶乙醇提取物中加2L的水混合均匀，再加入环己烷萃取，萃取3次，每 次环己烷的用量为2L，减压浓缩除去环己烷，得环己烷萃取物； 53. 取环己烷萃取物40g，用乙酸乙酯溶解，然后用40g硅胶（100目）拌样，另取SOOg 硅胶(300目）干法装柱，将样品装入硅胶柱上，先用体积比为95:5的环己烷：乙酸乙酯混合 溶剂洗脱除杂;再用体积比为60:40的环己烷：乙酸乙酯混合溶剂洗脱，收集洗脱部位，浓缩 干燥得神秘果树叶提取物。
[0028]经HPLC分析，该神秘果树叶提取物中β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的总含 量为24%。其中β-香树脂醇乙酸酯的含量为11%、羽扇豆醇乙酸酯的含量为13%。
[0029] 上述β_香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的含量百分数为重量含量百分数，含量分析 的方法为HPLC法，HPLC的分析条件为:流动相为90体积％甲醇-10体积%水，波长为254 nm，色 谱柱为cosmosil 5C18-MS-II column, 4.6 x250nm，柱温为25摄氏度;分别以β-香树脂醇 乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯为标准品绘制峰面积-浓度标准曲线，然后用分析提取物中的β_ 香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯的峰面积，并根据标准曲线计算各自的含量。
[0030] 实施例6神秘果树叶提取物降血糖实验 将96只雄性SD大鼠（4周龄清洁级，体重150~180g，由广东省医学实验动物中心提供） 随机分为正常对照组12只和糖尿病模型组84只，正常组给予基础饲料，模型组给予高脂饲 料（猪油18%，蔗糖20%，蛋黄3%，基础饲料59% )。喂养4周后，禁食12h后，0.1mmol/L枸 橼酸钠缓冲液(pH=4.2)将STZ(链脲佐菌素）配成2重量％的溶液，按35mg/kg腹腔注射， 一周后测大鼠2h葡萄糖耐受量(禁食12h，灌胃给予2g/kg的葡萄糖，测灌胃后2h的血糖），筛 选血糖值大于11. lmm〇l/L的大鼠确定为DM大鼠。稳定一周后将成模的DM大鼠84只随机分为 8组(模型组和实验组）。实验组用药剂量为2mg/kg，每组各12只。各实验组的用药情况如下： 实验组1(单独用β-香树脂醇乙酸酯）、实验组2(单独用羽扇豆醇乙酸酯）、实验组3(实施例2 制备得到的神秘果树叶提取物）、实验组4(实施例3制备得到的神秘果树叶提取物）、实验组 5 (实施例4制备得到的神秘果树叶提取物）、实验组6 (实施例5制备得到的神秘果树叶提取 物）。每天灌胃给药1次，连续6周。每周末称量体重1次，根据体重调整给药剂量。于实验结束 前1天，大鼠禁食12h，取血测空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FIN)。试验结果见表1:
从表1的结果可以看出，与正常对照组比较，模型组空腹血糖水平显著升高(p<0.01)， 空腹胰岛素显著降低(P<〇.01)，说明建模成功。
[0031] 从实验组1和2中的空腹血糖及空腹胰岛素数据可以看出，从神秘果树叶中分离得 到的β-香树脂醇乙酸酯和羽扇豆醇乙酸酯均具有降血糖以及提升血液中胰岛素含量的作 用，尤其是β-香树脂醇乙酸酯的具有很好的降血糖作用。
[0032] 从实验组3~7可以看出，本发明制备得到的神秘果树叶提取物都具有很好的降血 糖以及提升血液中胰岛素含量的作用。这说明本发明所述的提取物可以作为治疗糖尿病的 药物或保健品使用。从其降血糖数据可以看出，提取物中有效成分含量越高，降血糖的作用 效果越好。
[0033] 实施例7降血脂实验 取SD大鼠50只，雌雄各半，分为正常组(喂普通饲料）、高脂饲料组、实验组1(实施例2制 备得到的提取物）、实验组2(实施例5制备得到的提取物）、阳性对照组(洛伐他汀)每组各为 10只，高脂饲料组、实验组、以及阳性对照组喂养高脂饲料，实验组1、2同时每天按3mg/kg的 量喂相应实施例制备得到的提取物，阳性对照组每天按3mg/kg的量喂洛伐他汀。
[0034] 按组别喂养各组大鼠，自由饮水，连续给药35天后，处死动物，腹腔静脉取血，测定 血脂。用酶法、沉淀法在全自动生化分析仪上测定血清总胆固醇（TC)、甘油三酯（TG)的含 量。实验结果如表2所示。
[0035] 从表2中可以看出，高脂饲料组大鼠血清的TC和TG浓度均显著高于正常饲料组(P 〈0.01)，说明建模成功。
[0036] 实验组1、2大鼠的血清TC，TG浓度均明显低于高脂饲料组(P〈0.05)，说明本发明 制备得到提取物具有降血脂作用和降胆固醇的作用，因此，本发明提取物可以作为治疗高 血脂症的药物使用。从表2中还可以看出，实验组1对大鼠的血清TC，TG浓度降低得更为明 显，且优于阳性对照药洛伐他汀，说明本发明提取物中的有效成分含量越高，其降血脂以及 降胆固醇的作用越好。
【主权项】
1. 一种神秘果树叶提取物，其特征在于，包含有效成分β-香树脂醇乙酸酯和/或羽扇豆 醇乙酸酯。2. 根据权利要求1所述的神秘果树叶提取物，其特征在于，所述的β_香树脂醇乙酸酯和 羽扇豆醇乙酸酯的重量之和占提取物总重量的20%~99%。3. 根据权利要求2所述的神秘果树叶提取物，其特征在于，所述的β-香树脂醇乙酸酯和 羽扇豆醇乙酸酯的重量之和占提取物总重量的50%~99%。4. 权利要求1~3任一项所述的神秘果树叶提取物的制备方法，其特征在于，包含如下步 骤：51. 首先将神秘果树叶用有机溶剂提取，得有机溶剂提取物；52. 将有机溶剂提取物经石油醚、二氯甲烷、氯仿和环己烷中的任意一种溶剂或任意 二种以上的混合溶剂萃取得萃取物；53. 将萃取物经硅胶柱层析富集有效成分即得;所述的硅胶柱层析的条件为：首先用 体积比为95: 5~85:15的溶剂A:溶剂Β组成的混合溶剂体系进行洗脱除杂;然后再用体积比 为80:20~60:40的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱并收集洗脱部位，浓缩干燥即 得所述的神秘果树叶提取物;所述的溶剂A选自石油醚、二氯甲烷、氯仿或环己烷，所述的溶 剂B选自乙酸乙酯、丙酮或甲醇。5. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述的有机溶剂为甲醇或乙 醇。6. 根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤S1中所述的有机溶剂为体积分数 为50%~70%的甲醇或乙醇。7. 根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中所述的硅胶柱层析的条件 为:首先用体积比为95:5~90:10的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱除杂;然后再 用体积比为80:20~60:40的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂体系进行洗脱并收集洗脱部位，浓 缩干燥即得所述的神秘果树叶提取物。8. 根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述的溶剂A:溶剂B组成的混合溶剂 体系为氯仿：甲醇组成的混合溶剂体系。9. 根据利要求8所述的制备方法，其特征在于，首先用体积比为95:5的氯仿：甲醇组成 的混合溶剂体系进行洗脱除杂;然后再用体积比为80:20的氯仿：甲醇组成的混合溶剂体系 进行洗脱并收集洗脱部位，浓缩干燥即得所述的神秘果树叶提取物。10. 权利要求1所述的神秘果树叶提取物在制备治疗糖尿病或高血脂症的药物或保健 品中的应用。
【专利摘要】本发明涉及中药及天然药物技术领域，具体公开了一种神秘果树叶提取物及其在制备治疗糖尿病或高血脂症的药物或保健品中的应用。所述的提取物包含有效成分β-香树脂醇乙酸酯和/或羽扇豆醇乙酸酯。所述的提取物具有很好的降血糖以及提升血液中胰岛素含量的作用，可以作为治疗糖尿病的药物或保健品使用；且所述的提取物有效成分明确，有利于控制药物质量以及用药安全。
【IPC分类】A61K31/56, A61P3/06, A61K36/185, A61P3/10, A23L33/105
【公开号】CN105434442
【申请号】CN201510918636
【发明人】王国才, 禤文生
【申请人】深圳市神秘果实业有限公司
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2015年12月14日