一种具有协同抗肿瘤功效的药物组合物及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药技术领域，具体涉及一种具有协同抗肿瘤功效的药物组合物及其 应用。
【背景技术】
[0002] 肿瘤目前已成为严重威胁人类健康的第二大杀手，其发病率和死亡率在全世界呈 逐年上升的趋势。尤其是随着人类生存环境的变化，肺癌发病率和死亡率增长最快，成为对 人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。在中国，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶 性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。肺癌的病因至今尚不完全明确， 大量资料表明，长期大量吸烟与肺癌的发生有非常密切的关系，同时城市居民肺癌的发病 率比农村高，这可能与城市大气污染和烟尘中含有致癌物质有关。因此预防与控制肿瘤，尤 其是肺癌面临着更大的挑战。从植物中寻找药物，在世界范围内已成为抗肿瘤药物研究的 一个重要的组成来源，目前研究表明很多天然植物的提取物具有良好的抗肿瘤的活性，很 多天然产物或其结构改性化合物已进入临床研究范围。
[0003] 目前组合药物研究是防治疾病的主要手段。近年来，联合用药已经成为抗肿瘤疗 法的重要手段，通过选择不同作用机制抗肿瘤药物或者不同治疗方法，协同作用使疗效得 以最大化，降低肿瘤细胞的抵抗阈值，因此联合应用可以成为肿瘤治疗中单一治疗障碍时 有效地应对策略，为新药开发奠定基础。
[0004] 小檗碱(Berberine)是从黄连等传统中药材中提取分离得到的一种异喹啉类生物 碱，口服安全性高，长期大量服用无血液、心血管及肝肾毒性。但对黄连中二氢小檗碱的研 究相对较少，尤其对二氢小檗碱(Dihydroberberine，Dih)抗肿瘤研究及其协同作用研究未 见报道。苏尼替尼(Sunitinib，Sun)小分子多祀点受体酪氨酸激酶抑制剂，具有抑制肿瘤血 管生成和抗肿瘤细胞生长的多重作用。但是由于舒尼替尼针对许多不同受体，它也带来很 多副作用，例如手足综合征、口腔炎和其它皮肤和皮下组织异常。目前，未见有将二氢小檗 碱和苏尼替尼联合用药以治疗肿瘤的相关报道。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种具有协同抗肿瘤功效的药物组合物及其应用，该药物 组合物的有效组分由苏尼替尼和二氢小檗碱组成，具有良好的协同抗肿瘤功效，能够在制 备抗肿瘤药物中应用。
[0006] 为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：
[0007] -种具有协同抗肿瘤功效的药物组合物，按摩尔份数计，该药物组合物的有效组 分由1~3份苏尼替尼和10~20份二氢小檗碱组成。
[0008] 该药物组合物由有效组分和药用辅料混合而成，其剂型为胶囊或片剂。
[0009] 所述的具有协同抗肿瘤功效的药物组合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0010] 所述的抗肿瘤药物为治疗肺癌、乳腺癌、肝癌和/或结肠癌的药物。
[0011] 所述的抗肿瘤药物为能够抑制肿瘤细胞增殖和转移的药物。
[0012] 所述的抗肿瘤药物为能够抑制肿瘤细胞NCI-H460、A549、NCI-H1299增殖的药物。
[0013] 所述的抗肿瘤药物为能够降低肿瘤体积和重量的药物。
[0014] 所述的抗肿瘤药物为能够抑制肿瘤细胞血管生成，抑制肿瘤细胞内信号通路分子 表达，并抑制肿瘤细胞中炎症分子表达的药物。
[0015] 所述的抗肿瘤药物为能够抑制肿瘤细胞和肿瘤组织内MAPK信号通路中p38和JNK 磷酸化表达的药物。
[0016] 所述的抗肿瘤药物为能够抑制肿瘤细胞和肿瘤组织中炎症相关蛋白C0X-2、IKBa 和NF-kB的表达并降低肿瘤组织中炎症因子IL1含量的药物。
[0017] 相对于现有技术，本发明的有益效果为：
[0018] 本发明提供的具有协同抗肿瘤功效的药物组合物，其有效组分由苏尼替尼和二氢 小檗碱组成，可用于制备抗肿瘤药物。本发明发现了二氢小檗碱和苏尼替尼联合应用后具 有良好的抗肿瘤效果，通过两者的药物协同作用能够使抗肿瘤的疗效得以最大化，具有很 高的科研价值和良好的应用前景。
[0019] 进一步的，本发明分别采用MTT法和药物联合作用指数研究了苏尼替尼和二氢小 檗碱对肺癌细胞的抑制作用，得到适合的二氢小檗碱和苏尼替尼的混合比例，进而考察了 药物组合物单独以及联合作用时对NCI-H460细胞裸鼠移植瘤增殖的抑制作用，同时考察了 药物组合物对细胞和裸鼠移植瘤增殖相关信号通路分子和炎症分子的影响。结果证实本发 明提供的药物组合物具有明显的抑制肺癌以及肝癌和结肠癌等肿瘤的增殖、转移作用，可 用于肺癌以及肝癌和结肠癌等肿瘤的治疗，而且该药物组合物能够抑制肿瘤细胞血管生成 及其信号通路分子作用，同对肿瘤细胞内炎症分子具有明显的抑制作用，并具有安全、高 效、低毒的优点，为制备抑制肿瘤生长的苏尼替尼和二氢小檗碱组方制剂提供了实验依据。
【附图说明】
[0020] 图1是苏尼替尼和二氢小檗碱单独给药和联合给药时对肺癌细胞增殖的抑制作 用，其中a为苏尼替尼单独给药时对肺癌细胞增殖的抑制作用，b为二氢小檗碱单独给药时 对肺癌细胞增殖的抑制作用，c为苏尼替尼和二氢小檗碱联合给药时对肺癌细胞增殖的抑 制作用。
[0021] 图2是苏尼替尼和二氢小檗碱单独给药和联合给药时对肺癌细胞NCI-H460裸鼠移 植瘤增殖的抑制作用，其中a为对裸鼠移植瘤体积的抑制作用，b为对裸鼠移植瘤重量的抑 制作用。
[0022]图3是苏尼替尼和二氢小檗碱单独给药和联合给药时对肺癌细胞NCI-H460细胞及 其裸鼠移植瘤MAPK信号通路的调控作用，其中a为苏尼替尼和二氢小檗碱单独给药和联合 给药时对NCI-H460细胞和裸鼠移植瘤MAPK信号通路中ERK、p38和JNK磷酸化水平的调控，b 为a中NCI-H460细胞中ERK、p38和JNK的蛋白定量图，c为a中（肿瘤组织)移植瘤中ERK、p38和 JNK的蛋白定量图。
[0023]图4是苏尼替尼和二氢小檗碱单独给药和联合给药时对肺癌细胞NCI-H460细胞及 其裸鼠移植瘤PI3K/AKT/mT0R信号通路的调控作用，其中a为苏尼替尼和二氢小檗碱单独给 药和联合给药时对NCI-H460细胞PI3K/Akt/mT0R信号通路中PI3K亚型的调控，b为a中NCI- H460细胞PI3K亚型的蛋白定量图，c为a中NCI-H460细胞PI3K亚型PI3Kp85的蛋白定量图，d 为苏尼替尼和二氢小檗碱单独给药和联合给药时对NCI-H460细胞和裸鼠移植瘤PI3K/Akt/ mTOR信号通路中Akt和mTOR磷酸化水平的调控，e为d中NCI-H460细胞Akt和mTOR的蛋白定量 图，f为d中肿瘤组织(移植瘤）中Akt和mTOR的蛋白定量图。
[0024]图5是苏尼替尼和二氢小檗碱单独给药和联合给药时对肺癌细胞NCI-H460细胞及 其裸鼠移植瘤炎症分子的调控作用，其中a为苏尼替尼和二氢小檗碱单独给药和联合给药 时对NCI-H460细胞和裸鼠移植瘤中炎症相关蛋白的调控，b为a中NCI-H460细胞PTGES2， C0X-2和IKBa的蛋白定量图，c为a中NCI-H460细胞NF-κΒ的蛋白定量图，d为a中肿瘤组织(移 植瘤)PTGES2，C0X_2和IKBa的蛋白定量图，eSa中肿瘤组织NF-kB的蛋白定量图，f为苏尼替 尼和二氢小檗碱单独给药和联合给药时对裸鼠移植瘤中IL-Ια炎症因子的调控，g为苏尼替 尼和二氢小檗碱单独给药和联合给药时对裸鼠移植瘤中IL-6炎症因子的调控，h为苏尼替 尼和二氢小檗碱单独给药和联合给药时对裸鼠移植瘤中TNF-α炎症因子的调控。
【具体实施方式】
[0025] 下面结合本发明的具体实验过程及结果对本发明做进一步详细说明。
[0026] -、本发明提供的药物组合物的细胞活力实验及联合作用指数分析
[0027] 1.仪器与材料
[0028] SW-CJ-IF型超净工作台（苏州市安泰空气技术有限公司）；Ti-U型倒置显微镜 (Nikon) ;MAC 15AC型二氧化碳恒温培养箱(SANYO);80-2型台式电动离心机(上海市分析器 械厂）；GH隔水式恒温培养箱（北京市科伟永兴仪器有限公司）；移液器(Eppendorf) ;UPT-IV-5T超纯水制备机(成都市超纯科技有限公司）；BP211D电子天平(上海光正医疗仪器有限 公司）；细胞计数板(上海求精生化试剂有限公司）；培养板(Costar)。
[0029] 实验用人肺癌细胞NCI-H460、A549、NCI-H1299购自中国科学院典型培养物保藏委 员会细胞库，在含10%胎牛血清的培养基(含?οου/ml青霉素和链霉素）中，放置于37°C，5% C〇2培养箱中进行培养，每隔2-3d传代一次。
[0030] 2.实验方法
[0031 ]苏尼替尼（Sunit inib，Sun) 1 ~3份，二氢小檗喊（Dihydroberber ine，Dih) 10~20 份按照摩尔份数组成，按照比例混合后待用。
[0032] 通过MTT实验的方法，检测测试药物对人肺癌细胞NCI-H460、A549、NCI-H1299增殖 的影响。将处于指数级增长期的NCI-H460、A549、NCI-H1299细胞，用胰酶消化，吹散成单细 胞悬液，计数，接种到96孔培养板中。在培养箱中培养24h，待细胞贴壁后，加入不同浓度的 测试药物，分别作用48h后终止培养，每孔加入20μ1 MTT(5mg/mL)，37°C避光孵育4h。然后将 各个孔内液体弃去，加入150此DMSO，震荡15min，使结晶物充分溶解，在酶标仪490nm波长 下测定细胞光密度值。
[0033]采用上述MTT方法检测联合用药的细胞抑制作用，用金正均法判断两药合用是否 有协同作用。药物作用关系计算方法：
[0034] 药物相互作用指数(CI):Q = EAB/(EA+EB-EAEB)。其中，E A，EB为两种药物单独作用抑 制率，Eab为联合抑制率，Q大于1.15协同，小于0.85拮抗，在0.85与1.15之间为相加作用。实 验数据采用平均值土标准误(Mean土SEM)来表示，用SPSS 19.0统计学软件进行分析，P〈 0.05表不具有显著性差异。
[0035] 3.实验结果
[0036] 分别用MTT法考察Sun和Dih单独对NC