一种伐诺司林二盐酸盐的药物新用图
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种伐诺司林二盐酸盐的药物新用途，尤其是通过抑制致癌因子CDK2，4，6的活性发挥抗肝癌的作用。
【背景技术】
[0002]原发性肝癌是危害人类健康的重要疾病之一，多次被我国政府列为研究和防治的重点。肝癌的治疗长期以来一种是一个世界性的难题。肝癌发病隐匿，患者就诊时多属中、晚期，而且肝癌是一种恶性程度高、浸润和转移性强以及极易耐药的恶性肿瘤，目前临床上治疗肝癌的化疗药物治疗效果都不是很理想，且外科手术治疗后存在70-90%的复发率，复发后的患者对化疗、放疗出现抵抗作用，因此寻找新型抗肝癌药物迫在眉睫。
[0003]细胞周期紊乱是恶性肿瘤形成的一个标志，细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)的激活与失活维持着细胞周期各时相有序进行。CDK2是G1过渡到S期的关键因子。抑制CDK2可以抑制肿瘤细胞的增生，为一个很好的肿瘤药物靶点。CDK4，6是G1前期的关键致癌因子，抑制CDK4，6可以抑制肿瘤细胞的增生，也为一个很好的肿瘤药物靶点，所以筛选出可抑制致癌因子CDK2，4，6活性的药物即可抑制抑制肿瘤细胞的增生，发挥抗肝癌的功效。
【发明内容】
[0004]本发明公开了将伐诺司林二盐酸盐作为抗肝癌药物的新用途，即将伐诺司林二盐酸盐作为抗肝癌的药物；
[0005]进一步的，所述的伐诺司林二盐酸盐为1-(2-[双(4-氟苯基)甲氧基]乙基)-4-(3-苯基丙基)呢嘆二盐酸盐(Vanoxerine dihydrochloride)。
[0006]进一步的，所述肝癌的致癌因子为CDK2，4，6。
[0007]进一步的，将1-(2-[双(4-氟苯基)甲氧基]乙基)-4-(3-苯基丙基)哌嗪二盐酸盐(Vanoxerine dihydrochloride)作为致癌因子CDK2，4，6的联合抑制剂。
[0008]为了更好的说明本发明的实质，下面结合实验例对本发明的研究做详细说明。
[0009]实验例1
[0010]本发明通过计算机药物开发软件idock针对致癌因子⑶K2，4，6从FDA注册过的药物数据库初筛出打分很高的9个化合物，然后通过实验室体内外实验验证其抗癌作用。实验室体内外实验包括如下几步:
[0011]1、idock软件筛选CDK2抑制剂的候选药物
[0012]从FDA认证的包括在dbap和fda目录下ZINC药物数据库中4，914个药物进行分析且依据绑定的亲和强度值进行排序。从中找出且购买到9个打分最高的化合物进行下一步的实验。它们分别是莫那匹尔、氟啶蜱脲、凯坦色林、酒石酸盐、他尼氟酯、度他雄胺、阿坦塞林、咪唑斯汀、伐诺司林二盐酸盐。
[0013]2、比较候选药物对应的IC50值
[0014]通过MTT实验首先检查了9个化合物的抗癌效果。这九个化合物分别都对肝癌细胞系QGY7703和Huh7有抗癌效果。用graphpad prime5软件计算出其IC50值，比较各化合物对应的IC50值，从而筛选出最有效的化合物伐诺司林二盐酸盐。伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞系QGY7703和Huh7及大肠癌细胞系LOVO和DLD1后，呈现时间(24，48，72小时)及剂量(3，10,30uM/L)依赖性抑制增加效果，图3。
[0015]3、观察伐诺司林二盐酸盐对肝癌细胞干扰效果
[0016]为了观察伐诺司林二盐酸盐对肝癌细胞的抑制效果，通过用流式细胞术检测在不同浓度伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞QGY7703和Huh7 6，12，24小时后细胞周期分布情况，与对照组相比较，伐诺司林二盐酸盐大大的增加了停滞在G1期的细胞，且呈现时间及剂量依赖性增加的趋势(P〈0.05)，同时结果显示随着G1期细胞数量的增加同时伴随着S期细胞数量的减少。
[0017]4、评估伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞后引起的细胞凋亡结果
[0018]通过流式细胞技术检测伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞Huh7和QGY7703后，与对照组相比较伐诺司林二盐酸盐大大的增加了细胞的凋亡数量，且呈现时间及剂量依赖性增加的趋势(P〈0.05)。
[0019]5、伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞QGY7703和Huh7细胞后，CDK2，4，6，Rb，cyclinE, cyclinD, pho-Q)k2, pho-Rb，cycl inB 的蛋白表达量的变化情况
[°02°] 通过Western blotting实验伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞后G1期及G1期至S期转换相关蛋白CDK2,4,6,cyclinD/B,cyclinE,Rb,pho_CDk2 and pho-Rb进行检测。结果显示伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞Huh7和QGY7703后其CDK2 ,4,6,cyclinD,cyclinE，Rb，pho-CDK2和pho-Rb蛋白表达量呈现剂量依赖性下降趋势，cycl in B蛋白表达量没有改变。
[0021]有益效果:
[0022]本发明通过体外试验验证，伐诺司林二盐酸盐可抑制致癌因子⑶K2，4，6活性，具有强烈的抗肝癌的效果，伐诺司林二盐酸盐作为一种新型抗肝癌药物，可用于减缓肿瘤病情的发展，降低患者的痛苦，本发明也为研制能用于肝癌，大肠癌及其它恶性肿瘤治疗的药物提供了新的思路和技术储备。
【附图说明】
[0023]下面结合附图和【具体实施方式】对本发明的技术方案作进一步具体说明。
[0024]图1伐诺司林二盐酸盐与其他8个化合物的干扰QGY7703和Huh7增殖率效果图；
[0025]图2伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞HepG2和Huh7呈现时间(6，12,24h)与浓度(3，10,30uM)依赖性抑制效果增加的趋势；
[0026]图3伐诺司林二盐酸盐对大肠癌细胞DLD1和L0V0呈现时间(6，12，24h)与浓度(3，10,30uM)抑制依赖性效果增加的趋势；
[0027]图4伐诺司林二盐酸盐的浓度(3，10，30uM)及作用时间(6，12，24h)与肝癌细胞QGY7703和Huh7Gl期细胞阻滞效果图；
[0028]图5伐诺司林二盐酸盐处理肝癌细胞QGY7703和Huh724小时后，细胞周期分布图；
[0029]图6伐诺司林二盐酸盐浓度(3，10，30uM)及作用时间(6，12，24h)与肝癌细胞Huh7
细胞凋亡数量关系图；
[0030]图7伐诺司林二盐酸盐的浓度(3，10，30uM)及作用时间(6，12，24h)与肝癌细胞QGY7703细胞凋亡数量关系图；
[0031 ] 图8伐诺司林二盐酸盐干扰肝癌细胞Huh7和QGY7703后，其CDK2，4，6，cycl inD，cyclinE, Rb, pho_CDK2，pho-Rb及cycl in D蛋白表达量呈现下降趋势，cycl in B没有变化。
【具体实施方式】
[0032]实施例1
[0033]本实施例为将伐诺司林二盐酸盐，S卩1-(2-[双(4-氟苯基)甲氧基]乙基)-4-(3-苯基丙基)呢嘆二盐酸盐(Vanoxerine dihydrochloride)与其他辅助药品结合作为抗肝癌的药物。
[0034]实施例2
[0035]本实施例为将伐诺司林二盐酸盐，S卩1-(2-[双(4-氟苯基)甲氧基]乙基)-4-(3-苯基丙基)呢嘆二盐酸盐(Vanoxerine dihydrochloride)与其他辅助药品结合作为抗大肠癌的药物。
[0036]最后应当说明的是，以上实施方案仅用以说明本发明的技术方案，尽管参照较佳实例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围中。
【主权项】
1.一种伐诺司林二盐酸盐的药物新用途，即将伐诺司林二盐酸盐作为抗肝癌的药物。2.根据权利要求1所述的一种伐诺司林二盐酸盐的药物新用途，其特征在于，所述的伐诺司林二盐酸盐为1-(2-[双(4-氟苯基)甲氧基]乙基)-4-(3-苯基丙基)哌嗪二盐酸盐。3.根据权利要求1所述的一种伐诺司林二盐酸盐的药物新用途，其特征在于，所述肝癌的致癌因子为CDK2，4，6。4.根据权利要求1所述的一种伐诺司林二盐酸盐的药物新用途，其特征在于，将伐诺司林二盐酸盐作为致癌因子CDK2，4，6的联合抑制剂。
【专利摘要】本发明公开了一种伐诺司林二盐酸盐的药物新用途，具体的为将伐诺司林二盐酸盐作为致癌因子CDK2,4,6的联合抑制剂，从而发挥抗肝癌的功效，所述伐诺司林二盐酸盐为1-(2-[双(4-氟苯基)甲氧基]乙基)-4-(3-苯基丙基)哌嗪二盐酸盐(Vanoxerine？dihydrochloride)，诺司林二盐酸盐作为一种新型抗肝癌药物，可用于减缓肿瘤病情的发展，降低患者的痛苦，本发明也为研制能用于肝癌,大肠癌及其它恶性肿瘤治疗的药物提供了新的思路和技术储备。
【IPC分类】A61P35/00, A61K31/495
【公开号】CN105434438
【申请号】CN201510905924
【发明人】石西南, 孔祥复, 梁广锡, 李宏健, 王文汉, 林李家宓, 刘旭, 陆地
【申请人】昆明医科大学, 香港中文大学
【公开日】2016年3月30日
【申请日】2015年12月9日